Monoclonal Mouse Anti-Human CD5, klon DK23

Monoclonal Mouse Anti-Human CD5, klon DK23
Nr kat. C 7242 APC-Conjugated
Nr kat. F 0795 FITC-Conjugated
Nr kat. R 0842 RPE-Conjugated
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Produkty o nr kat. C 7242, F 0795 i R 0842 są przeznaczone do stosowania w cytometrii przepływowej. Uważa
się, że przeciwciało anty-CD5 wraz z panelem innych przeciwciał w badaniach cytometrii przepływowej pełni
zasadniczą rolę we wstępnej ocenie chronicznych zaburzeń limfoproliferacyjnych. Ponadto przeciwciało antyCD5 może być użyteczne w fenotypowaniu ostrej białaczki (1). Interpretację wyników powinien przeprowadzić
wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Synonimy antygenu
T1, Tp67 (2).
Wstęp
CD5 jest monomerem przezbłonowej glikoproteiny o masie cząsteczkowej 67 000 z dużą domeną
cytoplazmatyczną odpowiednią do transdukcji sygnału (3).
CD5 pojawia się we wczesnej fazie rozwoju tymocytów (3), przy słabej ekspresji na tymocytach i wysokiej ekspresji
na wszystkich dojrzałych limfocytach T (2). Ekspresję CD5 wykazuje większość nowotworów T-komórkowych
(76%) i prawie 85% ostrych białaczek limfoblastycznych jest CD5 dodatnich (4).
Ponadto ekspresja CD5 występuje na niskim poziomie na małym podzestawie dojrzałych limfocytów B (komórki
B1a), co ulega rozszerzeniu podczas życia płodowego i w szeregu zaburzeń autoimmunologicznych oraz w
niektórych zaburzenia limfoproliferacyjnych pochodzenia B-komórkowego, zwłaszcza w przewlekłej białaczce
limfatycznej (CLL) (2) i białaczce ośrodków rozmnażania (5).
Odczynnik dostarczony
Koniugaty anty-CD5, C 7242, F 0795 i R 0842 zostały wyprodukowane z oczyszczonego mysiego przeciwciała
monoklonalnego. Koniugaty są dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% albuminę surowicy
bydlęcej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3 o pH 7,2. Każda fiolka zawiera 100 testów (10 µL koniugatu
przeznaczone jest dla maksymalnie 106 leukocytów z normalnej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: zob. informacja podana na etykiecie fiolki.
Swoistość
Przeciwcia
ło nr kat.
Fluorochrom
Kontrola
negatywna nr kat.
F 0795
FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1)
X 0927
R 0842
RPE (R-Phycoerythrin)
X 0928
C 7242
APC (Allophycocyanin)
X 0968
Swoistość przeciwciała Anti-CD5, DK23, stanowi równoważnik wobec przeciwciał grupy CD5 Leu-1 (5).
Wykazano, że przeciwciało Anti-CD5, DK23, w przewlekłych białaczkach i szpiczakach znakuje 4/4 (100%)
przypadki przewlekłych białaczek limfatycznych B-komórkowych, 2/2 (100%) przypadki białaczek
prolimfocytarnych T-komórkowych, 36/39 (92%) przypadków przewlekłych białaczek limfatycznych Bkomórkowych, 5/6 (83%) przypadków białaczek prolimfocytarnych B-komórkowych, 0/14 (0%) przypadków
białaczek kosmatokomórkowych i 0/25 (0%) przypadków szpiczaka (6).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w ciemnym miejscu w temp. 2-8 C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na
etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi
zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego
jednocześnie z badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi
nieoczekiwany wzór barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje
podejrzenie, że przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem
Pomocy Technicznej naszej firmy.
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do probówki z antykoagulantem.
2.
Wyizolować komórki jednojądrzaste przez odwirowanie na podłożu rozdzielającym. Alternatywnie po
wykonaniu czynności opisanych w punkcie 6 zhemolizować krwinki czerwone.
(107824-002)
C 7242/F 0795/R 0842/PL/OKJ/01.07.02 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR Nr 33 21 13 17
3.
Dwukrotnie przepłukać komórki jednojądrzaste roztworem RPMI 1640 lub PBS o pH 7,2-7,4.
4.
Wymieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L przeciwciała anty- CD5 skoniugowanego z fluorochromem.
5.
Jako kontrolę ujemną zastosować niereaktywne przeciwciało monoklonalne tego samego izotopu,
skoniugowane z tym samym fluorochromem (patrz: tabela).
6.
Inkubować w ciemności w temp. 4 C przez 30 minut.
7.
Dwukrotnie przepłukać roztworem PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie zawiesić komórki w płynie
odpowiednim dla analizy cytometrycznej, np. w 0,3 mL 1% paraformaldehydu (utrwalacz) w 0,01 mol/L PBS
o pH 7,4.
8.
Analizować na cytometrze przepływowym.
Dla zapewnienia kontroli odczynników i przygotowania próbek zalecane jest stosowanie podczas każdego testu
odpowiednich próbek kontroli dodatniej i ujemnej. Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromu są wrażliwe na
działanie światła, dlatego podczas procedury barwienia i do chwili wykonania analizy należy chronić próbki
przed działaniem światła.
Piśmiennictwo
1.
Braylan RC, Orfao A, Borowitz MJ, Davis BH. Optimal number of reagents required to evaluate
hematolymphoid neoplasias: results of an international consensus meeting. Cytometry 2001;46:23-7.
2.
Lozano F, Simarro M, Calvo J. CD Guide. CD5. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert
SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New
York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 1112-3.
3.
Lozano F, Calvo J, Roca A, Places L, Simarro M. TC6. CD5 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani
H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14;
Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 56-8.
4.
Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London:
Oxford University Press; 1999. p. 51-2.
5.
Stein H, Lennert K, Feller AC, Mason DY. Immunohistological analysis of human lymphoma: correlation
of histological and immunological categories. Adv Cancer Res 1984;42:67-147.
6.
Erber WN, Mynheer LC, Mason DY. APAAP labelling of blood and bone-marrow samples for phenotyping
leukaemia. Lancet 1986;i:761-5.
Objaśnienia symboli
(107824-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
C 7242/F 0795/R 0842/PL/OKJ/01.07.02 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR Nr 33 21 13 17