Alu Positive Control Probe
Transkrypt
Alu Positive Control Probe
Alu Positive Control Probe Blue Signal Enhancer BCIP NBT 800-2845 05278694001 50 Streptavidin Alkaline Phosphatase (SA-AP) Biotinylated Goat anti-Mouse Antibody PRZEZNACZENIE Alu Positive Control Probe firmy Ventana Medical Systems, Inc. (Ventana) to koktajl sond oligonukleotydowych znakowanych fluoresceiną przeznaczony do użytku w charakterze kontroli dodatniej potwierdzającej zachowanie DNA w trakcie pobierania, przetwarzania i obróbki próbek. Sonda Alu Positive Control Probe jest przeznaczona do użycia z zestawem ISH iVIEWBlue Detection Kit oraz innymi odczynnikami pomocniczymi do barwienia skrawków tkankowych utrwalonych w obojętnej zbuforowanej formalinie i zatopionych w parafinie lub preparatów cytologicznych w automatach BenchMark, BenchMark XT i BenchMark ULTRA. Wystąpienie reakcji barwnej lub jej brak stwierdza się pod mikroskopem świetlnym. Dodatni wynik ułatwia klasyfikację próbek prawidłowych i zmienionych chorobowo, służąc jako metoda uzupełniająca konwencjonalne badanie histopatologiczne lub cytopatologiczne. Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego patologa w połączeniu z badaniem histologicznym, odnośnymi danymi klinicznymi i właściwymi badaniami kontrolnymi. Ten produkt jest przeznaczony do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). Mouse antiFluorescein Antibody HO Fluorescein hapten O O COOH Fluorescein-labeled Probe Target Sequence Region ISH iVIEWBlue Detection PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA Sekwencja wykrywana przez sondę Alu Positive Control Probe to powtarzalna sekwencja Alu DNA występująca w jądrach komórek wszystkich tkanek. Sonda Alu Positive Control Probe jest przydatna do potwierdzania zachowania DNA w trakcie pobierania, przetwarzania, utrwalania i obróbki próbek. ZASADY PROCEDURY Alu Positive Control Probe jest produktem przeznaczonym do użycia z zestawem VENTANA ISH iVIEWBlue Detection Kit oraz odczynnikami pomocniczymi w aparatach do barwienia BenchMark, BenchMark XT i BenchMark ULTRA. Zestaw do wykrywania zawiera przeciwciało pierwotne oraz przeciwciało wtórne sprzężone z biotyną, które z kolei sprzężone są z peroksydazą chrzanową (HRP) lub fosfatazą alkaliczną (AP) stosowaną w charakterze enzymu chromogenicznego. W procesie barwienia błękitem ISH następuje hybrydyzacja sond znakowanych fluoresceiną ze swoistymi sekwencjami DNA wykrywanymi w komórkach lub tkankach. Kolejny etap stanowi dodanie koniugatu streptawidyna–enzym AP (fosfataza alkaliczna), który wiąże się z biotyną obecną na przeciwciałach wtórnych. Sonda znakowana fluoresceiną jest następnie uwidaczniana za pomocą fosforanu 5-bromo-4-chloro-3-indolilu (BCIP) oraz błękitu tetrazolowego (NBT) — w postaci niebieskiego osadu łatwego do wykrycia pod mikroskopem świetlnym. Protokół barwienia obejmuje wiele kroków, w których odczynniki są inkubowane przez odpowiedni czas i w konkretnych temperaturach. Po zakończeniu każdego kroku inkubacji automat BenchMark, BenchMark XT lub BenchMark ULTRA do barwienia preparatów płucze skrawki w celu usunięcia niezwiązanego materiału, a następnie nakłada roztwór nakrywający, który minimalizuje parowanie odczynników na bazie wody z powierzchni szkiełka zawierającego preparat. Interpretacji wyników dokonuje się przy użyciu mikroskopu świetlnego. Wyniki pomagają w diagnostyce różnicowej procesów patofizjologicznych, które mogą, ale nie muszą mieć związku z dodatnim odczynem wywoływanym przez sondę. Rysunek 1 przedstawia reakcję błękitnej ISH. 2012-08-10 FT0403-004c 1/4 Rysunek 1. Reakcja błękitnej ISH DOSTARCZANY ODCZYNNIK Alu Positive Control Probe zawiera odczynnik w ilości wystarczającej do przeprowadzenia 50 badań. Jeden dyspenser 5 ml odczynnika Alu Positive Control Probe zawiera około 500 ng/ml sond znakowanych fluoresceiną w buforze hybrydyzacyjnym na bazie formamidu. Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy VENTANA dołączonej do opakowania, aby uzyskać szczegółowy opis następujących kwestii: (1) Zasady przeprowadzania procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone do zestawu, (3) Pobranie próbki i przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości, (5) Rozwiązywanie problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne ograniczenia. MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE Razem z zestawem nie są dostarczane takie odczynniki, jak zestawy detekcyjne VENTANA i składniki pomocnicze. PRZECHOWYWANIE Przechowywać w temperaturze 2-8°C. Nie zamrażać. W celu zapewnienia właściwego podawania i stabilności sondy, po każdym użyciu należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dyspenser w lodówce w pozycji pionowej. Na każdym dyspenserze sondy podana jest data ważności. Prawidłowo przechowywany odczynnik pozostaje stabilny do daty określonej na etykiecie. Nie należy stosować odczynnika po upływie terminu ważności. PRZYGOTOWANIE PREPARATU Do stosowania z tą sondą nadają się rutynowo przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem stosowania automatu do barwienia BenchMark, BenchMark XT lub BenchMark ULTRA. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek jest 10% obojętna zbuforowana formalina (NBF).2 Tabela 1 zawiera listę zalecanych środków utrwalających oraz środków utrwalających niekompatybilnych z tą sondą. Z pytaniami dotyczącymi zalecanych środków utrwalających należy zwracać się do lokalnego przedstawiciela serwisu. 16273PL Rev E Zalecane środki utrwalające Niekompatybilne środki utrwalające Obojętna zbuforowana formalina (NBF) Formalina z cynkiem Alkoholowy roztwór formaliny PREFER Bouin’s Mieszanina alkoholu, kwasu octowego i formaliny (AFA) 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Tabela 1. Zalecane i niekompatybilne środki utrwalające Preparaty należy niezwłocznie wybarwić, ponieważ reaktywność sekwencji kwasów nukleinowych w ciętych skrawkach tkanek może z czasem ulegać osłabieniu. Skrawki grubsze niż 4 µm mogą wymagać silniejszego traktowania proteazą niż w warunkach zalecanych i mogą przejawiać większe pęcherzenie jądrowe niż skrawki cieńsze ze względu na nadmiar parafiny w tkance. Pęcherzyki jądrowe mają postać dużych lub małych pęcherzyków lub wakuole w jądrze. Zwykle artefakt ten nie wpływa na zliczanie sygnałów. Jednak w przypadkach nasilonego występowania pęcherzyków jądrowych może dojść do takiego zniekształcenia obrazu jąder lub sygnałów, że ich zliczenie będzie niemożliwe. Próbki takie mogą wymagać odparafinowania w łaźniach ksylenowych i alkoholowych, a następnie powtórzenia odczynu w urządzeniu, bądź też użytkownik może wybrać opcję przedłużonego odparafinowania w procedurze barwienia (patrz Rozwiązywanie problemów). OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). Ostrzeżenie, produkt zawiera formamid. Formamid jest toksyczny drogą wziewną i umiarkowanie toksyczny w przypadku połknięcia. Jest drażniący dla skóry, oczu i błon śluzowych oraz jest wchłaniany przez skórę. Może być szkodliwy dla płodu. Podczas pracy z odczynnikami należy zachować środki ostrożności. Postępując z materiałami podejrzewanymi o karcynogenność lub toksycznymi, należy nosić jednorazowe rękawice i odpowiednią odzież ochronną. Przed rozpoczęciem barwienia w aparacie należy się upewnić, że pojemnik na zlewki jest pusty. Nieprzestrzeganie tej instrukcji może spowodować przepełnienie pojemnika na zlewki, co może doprowadzić do pośliźnięcia i upadku. Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały potencjalnie niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych środków ostrożności. Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu z wrażliwymi miejscami obficie spłukiwać wodą. Unikać wdychania oparów odczynników. Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników, ponieważ mogłoby to doprowadzić do uzyskania błędnych wyników. Aby uzyskać informacje na temat zalecanej metody utylizacji produktu, należy skontaktować się z odpowiednimi instytucjami lokalnymi lub krajowymi. Dodatkowe informacje znaleźć można w karcie charakterystyki bezpieczeństwa produktu. PROCEDURA BARWIENIA Sondy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania w automatach do barwienia BenchMark, BenchMark XT i BenchMark ULTRA razem z zestawami do detekcji i akcesoriami firmy VENTANA. Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat procedury hybrydyzacji in situ (ISH) znajduje się w ulotce dołączonej do opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA. Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, a także ze względu na warunki środowiskowe i ogólne wyposażenie laboratoryjne, konieczne może być zwiększenie lub zmniejszenie hybrydyzacji sondy i kondycjonowania komórek lub wstępna obróbka proteazą dla poszczególnych próbek, w zależności od zastosowanej metody detekcji i preferencji badacza. Odwodnienie iVIEWBlue Assay Firma Ventana zaleca następującą procedurę. 1. Aby usunąć roztwór nakrywający, opłukać szkiełka w 2 zmianach łagodnego roztworu detergentu do mycia naczyń (nie używać detergentów przeznaczonych do zmywarek automatycznych). 2. Dokładnie przepłukać preparaty wodą destylowaną. Płukać przez około 1 minutę. Strząsnąć nadmiar wody. 2012-08-10 FT0403-004c 2/4 Przenieść preparaty do kąpieli etanolowej (80%) na około 1 minutę. Przenieść preparaty do kąpieli etanolowej (90%) na około 1 minutę. Przenieść preparaty do kąpieli etanolowej (100%) na około 1 minutę. Przenieść preparaty do drugiej kąpieli etanolowej (100%) na około 1 minutę. Przenieść preparaty do kąpieli acetonowej i zanurzyć kolejno 10 razy. Przenieść preparaty do pierwszej kąpieli ksylenowej na około 30 sekund. Przenieść preparaty do drugiej kąpieli ksylenowej na około 30 sekund. Umieścić szkiełka nakrywkowe na preparatach. Uwaga: Aby zagwarantować całkowite odwodnienie, należy często zmieniać kąpiele etanolowe. Można także dodać trzecią kąpiel w 100% etanolu. Procedury kontroli jakości Dodatnie preparaty kontrolne Każda wykonywana procedura barwienia musi uwzględniać badanie dodatnich preparatów kontrolnych. Kontrole potwierdzają, że sonda została faktycznie zastosowana i że aparat działał prawidłowo. Preparat powinien zawierać zarówno komórki bądź składniki tkankowe dające dodatnią, jak i ujemną reakcję barwną. W charakterze preparatów kontrolnych należy używać materiału cytologicznego, biopsyjnego, pobranego chirurgicznie lub świeżego materiału z autopsji, jak najszybciej przygotowanego i utrwalonego w identyczny sposób, jak próbki pochodzące od pacjenta. Kontrolom takim powinny być równolegle poddawane wszystkie etapy procedury, od przygotowania do barwienia. Użycie próbek utrwalonych lub przetworzonych inaczej niż próbki pochodzące od pacjenta umożliwia wyłącznie potwierdzenie prawidłowego działania odczynników i aparatu. Do optymalnej kontroli jakości i wykrywania nieznacznego pogorszenia jakości odczynników lepiej nadają się preparaty dające słaby, a nie silny odczyn dodatni. Jeżeli za pomocą dodatnich kontroli nie udaje się potwierdzić dodatniego wyniku barwienia, należy uznać, że wyniki preparatów testowych są nieważne. Ujemne preparaty kontrolne Każda wykonywana procedura barwienia musi uwzględniać badanie ujemnych preparatów kontrolnych. Ma to na celu monitorowanie niepożądanej reaktywności krzyżowej sond i przeciwciał ze składnikami komórkowymi. W charakterze ujemnego i dodatniego preparatu kontrolnego można używać tego samego preparatu. W charakterze wewnętrznej kontroli ujemnej można wykorzystywać różne próbki pochodzące z większości tkanek. Preparaty do kontroli ujemnej powinny zostać zweryfikowane przez Użytkownika. Składniki z założenia niepodlegające barwieniu powinny wykazywać brak odczynu swoistego i dostarczać informacji o odczynie tła. Jeżeli w badaniu preparatów stanowiących ujemną próbę kontrolną uzyskuje się niepożądane wybarwienie, wyniki uzyskane dla próbek pochodzących od pacjenta należy uznać za nieważne. Odczynnik do kontroli dodatniej Do weryfikacji testu i przy rozwiązywaniu problemów powinien być używany dodatni odczynnik kontrolny, ponieważ dostępność DNA i RNA może zależeć od metody utrwalania i sposobu obróbki wstępnej preparatu. Odczynnik do kontroli ujemnej Dla każdego barwionego preparatu należy zastąpić sondę ISH odczynnikiem do kontroli ujemnej. Kontrola ujemna pomoże w interpretacji wyników badań materiału pochodzącego od pacjentów. Dostarcza ona informacji o nieswoistym wybarwieniu tła w każdym preparacie. Zamiast sondy ISH należy do barwienia użyć kontroli ujemnej VENTANA ISH Negative Control lub Negative Control Probe. Okres inkubacji powinien być taki sam, jak dla sondy. Kontrola ujemna jest szczególnie ważna wobec faktu, że jelitowa postać fosfatazy zasadowej może występować w komórkach innych, niż komórki nabłonkowe rąbka szczoteczkowego jelit. Ponadto w procesie utrwalania mogą zachować się enzymy zdolne do rozkładu błękitu tetrazolowego. Niewyjaśnione rozbieżności Niewyjaśnione rozbieżności w wynikach kontroli należy niezwłocznie zgłaszać do lokalnego przedstawiciela odpowiedzialnego za wsparcie techniczne. Jeśli jakość wyników kontrolnych nie jest zgodna ze specyfikacją, wyniki uzyskane dla preparatów z próbek pochodzących od pacjentów są nieważne. Zob. sekcja Rozwiązywanie problemów w niniejszej ulotce. Należy zidentyfikować i wyeliminować problem, a następnie powtórzyć badanie próbek pochodzących od pacjenta. Weryfikacja barwienia Przed pierwszym użyciem odczynnika w procedurze diagnostycznej należy zweryfikować jego działanie w drodze testów na szeregu dodatnich i ujemnych preparatów kontrolnych o znanej charakterystyce w badaniach ISH (zob. Procedury kontroli jakości opisane wcześniej w tej sekcji ulotki oraz zalecenia Amerykańskiego Programu Akredytacji Pracowni Patologicznych College of American Pathologists Laboratory Accreditation Program, Anatomic Pathology Checklist,4 oraz NCCLS Approved Guideline5). Procedury 16273PL Rev E kontroli jakości należy powtarzać dla każdej nowej partii odczynników lub każdorazowo po zmianie parametrów testu. Interpretacja wyników CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA 1. Zautomatyzowana procedura barwienia preparatów w aparatach VENTANA powoduje wytrącanie się niebieskiego produktu reakcji w miejscach występowania wykrywanych fragmentów DNA lub RNA związanych z oznakowaną sondą. Przed przystąpieniem do 2. interpretacji wyników wykwalifikowany patolog z doświadczeniem w badaniach ISH musi ocenić dodatnie i ujemne preparaty kontrolne. Kontrole W pierwszej kolejności należy zbadać kontrolę dodatnią, aby upewnić się, że wszystkie odczynniki działają prawidłowo. Obecność niebieskiego produktu reakcji w komórkach zawierających wykrywane fragmenty świadczy o zajściu reakcji dodatniej. Kontrolę ujemną należy przeanalizować po kontroli dodatniej, w celu zweryfikowania swoistości reakcji. W kontroli ujemnej nie powinien występować odczyn swoisty. Występowanie zabarwienia może świadczyć o nieswoistej reaktywności krzyżowej z komórkami lub składnikami komórkowymi. Do interpretacji odczynu należy wybierać jedynie komórki nienaruszone, gdyż w komórkach martwiczych lub zdegenerowanych często występują odczyny nieswoiste. 3. Jeżeli w kontrolach dodatnich lub ujemnych nie uda się otrzymać prawidłowej reakcji barwnej, należy uznać, że wyniki preparatów testowych są nieważne. Próbki pochodzące od pacjenta Próbki pochodzące od pacjenta należy zbadać jako ostatnie. Intensywność odczynu dodatniego należy oceniać w kontekście barwienia tła występującego w próbce z odczynnikiem kontroli ujemnej. Wynik ujemny oznacza, że nie wykryto poszukiwanej sekwencji DNA lub RNA, a nie że sekwencja taka nie występuje w badanych komórkach. 4. Dokonując interpretacji wyników ISH, należy także ocenić morfologię każdej próbki na podstawie skrawka wybarwionego hematoksyliną i eozyną. Wyniki badań morfologii pacjenta oraz istotne dane kliniczne powinny być interpretowane przez wykwalifikowanego patologa. OGRANICZENIA Ograniczenia ogólne 1. 2. 3. 4. Wybarwienie tkanek zależy od sposobu postępowania i przygotowania tkanek przed barwieniem. Nieprawidłowe utrwalanie, zamrażanie, rozmrażanie, przemywanie, suszenie, ogrzewanie, wykonywanie skrawków lub ich zanieczyszczenie domieszką innych tkanek lub płynów może powodować artefakty, wychwytywanie przeciwciał lub wyniki fałszywie ujemne. Przyczyną sprzecznych wyników może być stosowanie zmiennych metod utrwalania i zatapiania lub właściwości zależne od tkanek. Nadmierne lub niecałkowite barwienie kontrastowe może utrudniać prawidłową interpretację wyników. Ze względu na różnice w metodach obróbki materiału może zajść konieczność wydłużenia lub skrócenia czasu trawienia proteazą ISH albo użycia innej proteazy ISH w poszczególnych preparatach. Każda taka zmiana musi być zweryfikowana przez użytkownika. Użytkownicy stosujący procedury odbiegające od zalecanych są odpowiedzialni za interpretację wyników pacjenta w zmienionych warunkach badania. W tkankach, które nie zostały uprzednio przetestowane, odczynniki mogą wykazywać nieoczekiwane reakcje. Nie można wykluczyć wystąpienia nieoczekiwanych reakcji w przetestowanych tkankach z uwagi na zmienność biologiczną tkanek. Udokumentowane nieoczekiwane reakcje należy zgłaszać lokalnemu przedstawicielowi odpowiedzialnemu za wsparcie techniczne. Ograniczenia swoiste 1. 2. 3. 4. Wykazano, że środek utrwalający Bouin’s jest niekompatybilny z sondami ISH. W próbkach utrwalonych środkiem Bouin’s nie powiodła się detekcja ani jednej kopii genu. Nie zaleca się stosowania z tym testem środka utrwalającego AFA. Tkanki utrwalane w formalinie cynkowej nie są barwione równie niezawodnie, jak tkanki utrwalone w roztworze 10% NBF lub formalinie alkoholowej. W przypadku stosowania sond znakowanych fluoresceiną razem z zestawem ISH iVIEWBlue Detection Kit może wystąpić odczyn cytoplazmatyczny i/lub jądrowy w komórkach tkanek przewodu pokarmowego. Do wykrycia takiego odczynu niezbędne jest zastosowanie sondy kontrolnej Negative Control Probe. 2012-08-10 FT0403-004c 3/4 VENTANA Sonda Alu Positive Control Probe, ISH iVIEWBlue Detection Kit i odczynniki pomocnicze stosowane w automacie do barwienia preparatów VENTANA powodują wytrącanie niebieskiego osadu w miejscach występowania wykrywanych sekwencji zlokalizowanych przez sondy ISH. W firmie Ventana zoptymalizowano i przetestowano swoistość i czułość detekcji sekwencji. Swoistość wykazano na podstawie obecności sygnału w prawidłowej (niepoddanej obróbce) tkance ludzkiej śledziony i braku sygnału w tkance ludzkiej śledziony poddanej działaniu DNase1. Swoistość sondy testowano, wykonując barwienie szeregu różnych tkanek prawidłowych. Przebadano po jednej próbce następujących tkanek: przytarczyc, jajnika, jąder, nadnerczy, przysadki, tarczycy, trzustki, przełyku, jelita cienkiego, ślinianek, jelita grubego, żołądka, wątroby, śledziony, migdałków, szpiku kostnego, mózgu, móżdżku, gruczołu krokowego, szyjki macicy, macicy, nerek, sutka, płuc, międzybłonka, skóry, mięśni, serca i nerwów obwodowych. W 29 próbkach tkankowych obserwowano bardzo słabe tło. Dla wszystkich tkanek odnotowano prawidłowe barwienie. Jednak w celu zapewnienia prawidłowego barwienia każda sonda ISH musi być zweryfikowana przez użytkownika. Powtarzalność barwienia za pomocą sondy Alu Positive Control Probe w ramach jednej serii określono, wykonując barwienie zbioru dziesięciu preparatów na pięciu automatach do barwienia BenchMark. We wszystkich preparatach uzyskano wybarwienie o porównywalnym nasileniu. Użytkownicy powinni zweryfikować powtarzalność w ramach jednej serii, wykonując w jednej serii barwienie dla kilku zestawów skrawków seryjnych z małą, średnią i dużą ilością sekwencji wykrywanych. Powtarzalność barwienia za pomocą sondy Alu Positive Control Probe między różnymi seriami określono, wykonując barwienie zbioru dziesięciu preparatów na pięciu automatach w trzech różnych dniach. We wszystkich preparatach uzyskano wybarwienie o porównywalnym nasileniu. Użytkownicy powinni zweryfikować powtarzalność między różnymi seriami, wykonując w różnych dniach barwienie dla kilku zestawów skrawków seryjnych z małą, średnią i dużą ilością sekwencji wykrywanych. ROZWIĄZYWANIE PROBLEMÓW Problem Rozwiązanie Kontrola dodatnia daje wynik ujemny. Sprawdzić, czy na szkiełku znajduje się odpowiednia etykieta z kodem kreskowym. Tkanka jest zmywana ze szkiełek. Stosować tylko szkiełka naładowane dodatnio. PIŚMIENNICTWO 1. 2. 3. College of American Pathologists Laboratory Accreditation Program, Anatomic Pathology Checklist, 2001. NCCLS. Quality Assurance for Immunocytochemistry: Approved Guideline. NCCLS document MM4-A- (ISBN 1-56238-396-5). NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087-1898 USA, 1999. Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009. WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA VENTANA, BENCHMARK, ultraView oraz logo VENTANA są znakami towarowymi firmy Roche. Pozostałe znaki towarowe stanowią własność odpowiednich właścicieli. Ventana Medical Systems, Inc. udziela nabywcy licencji na jednorazowe wykorzystanie rozwiązań objętych patentami USA nr 6045759, 6945128 i 7378058 oraz ich odpowiednikami w innych krajach. © 2012 Ventana Medical Systems, Inc. 16273PL Rev E DANE TELEADRESOWE Ventana Medical Systems, Inc. 1910 E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona 85755 USA +1 520 887 2155 +1 800 227 2155 (USA www.ventana.com Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D-68305 Mannheim Germany 2012-08-10 FT0403-004c 4/4 16273PL Rev E