Nr kat. IR615

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Cytokeratin 19
Klon RCK108
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR615
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 19, klon RCK108, Ready-to-Use, (Link), jest
przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało barwi komórki
nabłonkowe zawierające cytokeratynę 19, jest uŜyteczne w identyfikowaniu raków nabłonkowych, a ponadto moŜe
być uŜywane w identyfikowaniu nowotworów komórek dróg Ŝółciowych (1). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub
braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób
kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby
pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Cytokeratyny 19 (CK19), naleŜą do filamentów pośrednich, tworzących cytoszkielet w prawie wszystkich komórkach.
W przeciwieństwie do innych filamentów pośrednich, cytokeratyny (CK) naleŜą do rodziny wysoce złoŜonych białek
wielogenowych, o masach cząsteczkowych w zakresie od 40 do 68 kDa. W róŜnych ludzkich komórkach
nabłonkowych wyróŜniono juŜ dwadzieścia osobnych polipeptydów CK (2, 3) (4). MoŜna je podzielić na odmiany
kwaśną (typ I) i obojętno-zasadową (typ II). CK19 naleŜy do odmiany kwaśnej — jest to cytokeratyna o niskiej masie
cząsteczkowej (40 kDa), która występuje zwykle w nabłonku prostym; komórkach powierzchniowych, pośrednich i
podstawnych nabłonka przejściowego, a takŜe w komórkach kanalików, komórkach podstawnych i mioepitelialnych
kilku nabłonków złoŜonych. CK19 zwykle nie występuje w warstwowym nabłonku płaskim, ale moŜe występować w
zmodyfikowanym nabłonku płaskim po inwazji limfocytów, a takŜe w komórkach podstawnych niekeratynizowanego
wielowarstwowego nabłonka płaskiego (2, 4, 5).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: RCK108. Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Preparaty cytoszkieletu sporządzone z linii komórek T24 raka ludzkiego pęcherza (1).
Swoistość
W teście Western blot preparatów z cytoszkieletu z linii komórkowych T24 i RT4, a takŜe z linii komórkowych HaCaT
ludzkiego raka płaskonabłonkowego, przeciwciało barwi pojedynczy prąŜek odpowiadający CK19 (1).
Badania immunohistochemiczne innych tkanek ludzkich wykazały, Ŝe przeciwciało barwi tylko nabłonek, a komórki,
które nie zawierają CK19, np. hepatocyty, nie są barwione (1).
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
(117445-003)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego
względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
IR615/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek i materiały
dodatkowe
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanej
platformie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobów jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie
wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision
FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy
skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe
hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link)
(nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować wątrobę i migdałki,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało barwi warstwę podstawną naskórka (odczyn z pojedynczymi komórkami); komórki
Merkla; gruczoły łojowe; zewnętrzną otoczkę pnia mieszków włosowych; komórki zwojów i kanalików wydzielniczych
ekrynowych gruczołów potowych; niekeratynizowany nabłonek płaski krtani; międzybłonek; nabłonek walcowaty
urzęsiony i komórki podstawne oskrzeli; komórki wyściełające pęcherzyki płucne; sześcienne i podstawne komórki
ślinianki przyusznej; komórki przewodzików, zrazików i komórki podstawne mniejszych ślinianek; komórki podstawne
przełyku; komórki wydzielnicze i neuroendokrynne Ŝołądka; kosmki i nabłonek mieszka jelita cienkiego; nabłonek
okręŜnicy; nabłonek przewodzików i zrazików trzustki; nabłonek przewodu Ŝółciowego; nabłonek pęcherzyka
Ŝółciowego; komórki walcowate płacików i przewodzików sutka; komórki walcowate i rezerwowe śluzówki kanału
szyjki macicy; komórki podstawne śluzówki kanału szyjki macicy; nabłonek gruczołowy śluzówki macicy;
cytotrofoblast łoŜyska; nabłonek przewodowy; komórki podstawne i pęcherzyki nasienne gruczołu krokowego; sieć
jądra; nabłonek torebki Bowmana; kanaliki proksymalne/dystalne i pętlę Henlego; nabłonek przejściowy pęcherza
oraz nabłonek grudkowy tarczycy (1). W wątrobie komórki nabłonkowe przewodów Ŝółciowych wykazują
umiarkowany lub silny odczyn cytoplazmatyczny, a komórki wątroby nie dają odczynu. W migdałkach komórki
nabłonka płaskiego wykazują ogniskowy odczyn z zakresu od słabego do umiarkowanego — najsilniejszy odczyn
występuje w warstwie podstawnej.
Tkanki nieprawidłowe: W przypadku ludzkich tkanek zmienionych nowotworowo przeciwciało dało odczyn w
następujących przypadkach: komórki podstawne (4/4) i dobrze zróŜnicowane komórki rogowaciejące raka
płaskonabłonkowego naskórka (3/3); rogowiak kolczystokomórkowy (1/1); dobrze zróŜnicowane komórki
nierogowaciejące raka płaskonabłonkowego warg i języka (1/3 i 1/2); umiarkowanie (1/5) i słabo (1/1) zróŜnicowane
raki płaskonabłonkowe języka; brodawczak (1/1) i brodawczak odwrócony (3/3) części nosowej gardła; dobrze (1/3),
umiarkowanie (3/4) i słabo (1/1) zróŜnicowane raki płaskonabłonowe krtani; raki płaskonabłonkowe (7/7), raki
gruczołowe (4/4), rak gruczołowo-nabłonkowy (1/1) i raki drobnokomórkowe płuc (5/5) w układzie oddechowym;
gruczolaki pleomorficzne (5/5), raki błony śluzowej i naskórka (3/3) oraz rak zrazikowo-komórkowy (1/1) ślinianki
przyusznej; raki płaskonabłonkowe przełyku (6/6); raki gruczołowe (4/4), rakowiaki (2/2) i przerzuty z węzłów
chłonnych (1/1) w Ŝołądku; rak gruczołowy jelita cienkiego (1/1); rakowiak wyrostka robaczkowego (1/1); raki
gruczołowe 11/11, przerzuty z węzłów chłonnych (2/2) i rakowiak 1/1 okręŜnicy; raki gruczołowe trzustki (7/7),
rakowiaki z komórek dróg Ŝółciowych (6/6); raki przewodowe (12/12), raki zrazikowe (4/4), przerzuty z węzłów
chłonnych (2/2) i raki przewodowo-zrazikowe 4/4 sutka; choroba Pageta (2/2); torbielakogruczolaki (11/11), raki
jasnokomórkowe (2/2) i raki śluzówki (7/7) jajnika; złośliwy guz Brennera (1/1); raki płaskonabłonkowe (4/4), raki
gruczołowe (12/12), raki gruczołowo-nabłonkowe (8/8) i raki jasnokomórkowe (2/2) szyjki macicy; guzy gruczoliste
(13/13) i raki gruczołowo-nabłonkowe (3/3) śluzówki macicy; dobrze (5/5) i umiarkowanie (1/4) zróŜnicowane raki
płaskonabłonkowe sromu; raki gruczołowe gruczołu krokowego (8/8); potworniaki złośliwe (3/3); nabłoniaki
kosmówkowe (2/2); raki z komórek nerek (6/6); raki pęcherza moczowego (9/9); raki tarczycy (8/8); barwnikooporny
(1/1) i kwasochłonny (1/1) gruczolak przysadki mózgowej; gwiaździaki (4/4); oponiaki (4/4) i mięśniakomięsaki
gładkokomórkowe (5/13) (1). W innym badaniu przeciwciało zabarwiło rdzeniowe (5/8), inwazyjne przewodowe
(117445-003)
Dako Denmark A/S
IR615/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
(26/28), inwazyjne zrazikowe (4/4), śluzowe (5/5) i złośliwe przewodów (2/2) raki sutka, a takŜe gruczolakowłókniaki
(12/14), guzy liściaste (5/5), gruczolaki przewodowe (3/3), hamartoma (1/1), brodawczaki wewnątrzprzewodowe
(3/4), ginekomastie (8/8) i torbiele w tkance włóknistej (5/5) sutka (6).
Piśmiennictwo
1.
Kwaspen FHL, Smedts FMM, Broos A, Bulten H, Debie WMH et al. Reproducible and highly sensitive
detection of the broad spectrum epithelial marker keratin 19 in routine cancer diagnosis. Histopathol 1997;
31:503–16.
2.
Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: patterns of
expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982; 31:11–24.
3.
Moll R, Löwe A, Laufer J, Franke WW. Cytokeratin 20 in human carcinomas. A new histodiagnostic marker
detected by monoclonal antibodies. Am J Pathol 1992; 140:427–47.
4.
Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. Subcell Biochem 1998;
31: 205–62.
5.
Lane EB, Alexander CM. Use of keratin antibodies in tumor diagnosis. In: Osborn M, ed. Seminars in Cancer
Biology. Antibodies in Diagnosis and Therapy. Philadelphia: Saunders, 1990:165–79.
6.
Dalal P, Shousha S. keratin 19 in paraffin sections of medullary carcinoma and other benign and malignant
breast lesions. Mod Pathol 1995; 8:413–6.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(117445-003)
Dako Denmark A/S
IR615/PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17