Nr kat. IR505
Transkrypt
Nr kat. IR505
FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Antitrypsin Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR505 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciała FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Antiptrypsin, Ready-to-Use, (Link), są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji alfa-1-antytrypsyny np. w hepatocytach w niedoborze alfa-1-antytrypsyny (1). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Streszczenie i informacje ogólne Alfa-1-antytrypsyna (AAT) to glikoproteina o masie 51 kDa syntezowana głównie w wątrobie. Jest to białko reakcji fazy ostrej. Pełni funkcję głównego inhibitora proteazy serynowej, w tym elastazy neutrofili, kolagenazy i chymotrypsyny. Osoby, które genetycznie mają uwarunkowane niskie poziomy AAT w surowicy są w grupie ryzyka rozwinięcia się rozedmy płuc, przewlekłej choroby wątroby i raka z komórek wątrobowych. Klasyczna forma niedoboru AAT jest związana ze wstrzymaniem polimerycznego AAT w retikulum endoplazmatycznym komórek wątroby (2, 3). AAT występuje w prawidłowych komórkach wątroby, histiocytach i monocytach oraz w wielu rodzajach guzów róŜnicowanych pochodzenia nabłonkowego i mezenchymalnego (2). Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Gotowe do uŜycia królicze przeciwciała poliklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i roztwór NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L. Immunogen Alfa-1-antytrypsyna wyizolowana z osocza ludzkiego. Swoistość Przeciwciało reaguje z ludzką alfa-1-antytrypsyną. Ślady zanieczyszczeń przeciwciałami usunięto przez absorpcję w fazie stałej z innymi białkami ludzkiego osocza. Immunoelektroforeza krzyŜowa: Przy uŜyciu 12,5 µL roztworu Dako nr kat. A0012 na cm2 Ŝelu i 2 µL ludzkiego osocza pojawia się wyłącznie osad. Barwnik: Coomassie Brilliant Blue. Środki ostroŜności 1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, uŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone (115692-002) Dako Denmark A/S IR505/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/2 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki i wątrobę, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Rabbit (Link) (nr kat. IR600). Interpretacja odczynu Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny. Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: Przeciwciała znakują prawidłowe komórki wątroby (1) oraz granulocyty, monocyty i ich prekursory. Limfocyty, rozetki-E, limfocyty aktywowane ConA, naturalne komórki cytotoksyczne, krwinki czerwone, erytroblasty i megakariocyty nie wykazują odczynu dodatniego (4). Tkanki nieprawidłowe: U 13 pacjentów z róŜnymi rodzajami chorób wątroby przeciwciało znakowało komórki wątroby z i bez cząsteczek AAT. W przypadkach zawierających cząsteczki moŜliwe było znaczne rozcieńczenie przeciwciał wskazujące wyŜsze stęŜenie AAT (1). Piśmiennictwo 1. Clausen PP. Immunohistochemical demonstration of alpha-1-antitrypsin in liver tissue. A methodological investigation. Acta path microbiol scand Sect A 1980;88:299-306. 2. Leong ASY, Cooper K, Leong FJWM. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford University Press;1999.p. 7-8. 3. Perlmutter DH. Liver injury in α1-antitrypsin deficiency: an aggregated protein induces mitochondrial injury. J Clin Invest 2002;110:1579-83. 4. Hau J, Nilsson M, Skovgaard-Jensen H-J, de Souza A, Eriksen E, Wandall LT. Analysis of animal serum proteins using antisera against human analogous proteins. Scand J Lab Anim Sci 1990;17:3-7. Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania ZuŜyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na <n> testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii (115692-002) Dako Denmark A/S IR505/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/2 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17