FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Terminal Deoxynucleotidyl

FLEX
Monoclonal Rabbit
Anti-Human Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
Clone EP266
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR093
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciała FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, Clone EP266, Ready-toUse (Link), są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w urządzeniach Autostainer Link. Przeciwciała
przeciwko terminalnej transferazie deoksynukleotydowej (TdT) mogą być pomocne w klasyfikacji chłoniaka
limfoblastycznego/ostrej białaczki limfoblastycznej z komórek B i T (WSZYSTKIE) i grasiczaka (1-5). Interpretacja
kliniczna wystąpienia barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem
odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem
historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Przeciwciała te przeznaczone są do stosowania po
pierwotnym rozpoznaniu guza w konwencjonalnym badaniu histopatologicznym z zastosowaniem barwników do
nieimmunologicznych barwień histochemicznych.
Synonimy antygenu
TdT (3), nukleotydyloegzotransferaza DNA, DNTT (6).
Streszczenie
i informacje ogólne
TdT to enzym jądrowy, który katalizuje niezaleŜną od matrycy polimeryzację trifosforanów deoksynukleotydów do końca
3' OH jednoniciowego DNA. Enzym TdT uczestniczy w wytwarzaniu receptorów komórek T i róŜnicowaniu przeciwciał
(7). NajwyŜszą aktywność enzym wykazuje we wczesnych komórkach B i T podczas fazy reorganizacji genów
kodujących immunoglobuliny i receptory komórek T, co najczęściej ma miejsce w prawidłowych tkankach komórek
T grasicy. TdT występuje głównie w tymocytach korowych, niezróŜnicowanych komórkach szpiku kostnego oraz w
niektórych postaciach białaczki. Najbardziej znamiennym przykładem ekspresji TdT w guzach ludzkich jest chłoniak
limfoblastyczny/białaczka limfoblastyczna, jednakŜe opisano równieŜ nieczęstą ekspresję jądrową w przypadkach ostrej
białaczki szpikowej, niektórych przypadkach rdzeniaka oraz w rzadkich przypadkach mięśniakomięsaka
prąŜkowanokomórkowego i mięsaka Ewinga u dzieci (3, 4, 8-10).
Patrz dokument General Instructions for Immunohistochemical Staining (Ogólne instrukcje wykonywania odczynów
immunohistochemicznych) firmy Dako lub instrukcje do systemu detekcji IHC.
Dostarczony odczynnik
Gotowe do uŜycia królicze przeciwciało monoklonalne dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące z dodatkiem 0,015 mol/L azydku sodu.
Immunogen
Fragment białka rekombinowanego zawierający aminokwasy 10–124 ludzkiego TdT.
Swoistość
W badaniach metodą Western blot lizatów komórkowych Jurkat, przeciwciało przeciwko TdT, klon EP266, znakuje
prąŜek o masie 58 kDa odpowiadający oczekiwanej masie cząsteczkowej TdT.
Środki ostroŜności
1.
Do stosowania przez wyszkolony personel.
2
Opisywany produkt zawiera azydek sodu (NaN3), związek silnie toksyczny w czystej postaci. Azydek sodu
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metali w kanalizacji.
3.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
Klon: EP266, znany równieŜ jako EPR9732.
Przechowywanie
(124477-002)
Izotyp: królicze IgG
4.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5.
Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na
fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik powinien zweryfikować
te warunki. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole pozytywne i negatywne. W przypadku uzyskania
nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, i gdy
podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
P02830PL_02_IR093/2014.03 s. 1/4
Skrócona instrukcja
uŜytkownika*
Krok
Utrwalanie
Obróbka wstępna
Formalina
EnVision FLEX™, High pH (nr kat.
K8004)
Komentarze
ND
20 min HIER, 3 w 1 z uŜyciem PT Link i PT Link
Rinse Station
Produkt gotowy do uŜycia
Produkt rozcieńczony fabrycznie
Inkubacja 20 min
ND
FLEX Negative Control, Rabbit (nr kat.
IR600)
EnVision™ FLEX, High pH (nr kat.
K8000)
EnVision™ FLEX Hematoxylin (nr kat.
K8008)
Grasica
Inkubacja 20 min
Inkubacja 20 min, inkubacja w odczynniku DAB+
2x5 min
Inkubacja 5 min
Szkiełka
FLEX IHC Microscope Slides (nr kat.
K8020)
Zalecane w celu uzyskania lepszego przylegania
skrawków tkankowych do szkiełek
Zatapianie
preparatu
Wymagane niewodne, trwałe
zatapianie preparatów
Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą
zostać odwodnione, oczyszczone i zatopione w
środku do trwałego zatapiania.
Oprzyrządowanie
Autostainer Link 48
NaleŜy stosować fiolki dostosowane do aparatu
(nr kat. SK201-SK203)
Rozcieńczenie
Bufor do
rozcieńczania
Kontrola ujemna
Wizualizacja
Barwnik
kontrastowy
Tkanka kontrolna
Odczyn jądrowy
*UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje
przeprowadzania procedury barwienia i postępowania z produktem.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków tkanek ludzkich utrwalonych w
formalinie i zatopionych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości około 4 µm.
Obróbka wstępna: wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych
cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki HIER tkanek
przy uŜyciu roztworu EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8004). Odparafinowanie,
nawodnienie i cieplne odmaskowanie determinanty antygenowej (HIER) moŜna przeprowadzić z uŜyciem aparatu Dako
PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe informacje zawiera instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link (PT Link User
Guide). W aparacie PT Link naleŜy ustawić następujące parametry pomiarowe: temperatura wstępnego ogrzewania:
65°C; temperatura i czas odmaskowania determinanty antygenowej: 97°C przez 20 minut (±1 min); schłodze nie do
65°C. Usun ąć statyw z preparatami ze zbiornika PT i natychmiast zanurzyć preparaty w naczyniu/zbiorniku (np. PT Link
Rinse Station, nr kat. PT109) zawierającym rozcieńczony bufor EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (nr kat. K8007) o
temperaturze pokojowej. Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1–5 minut.
Procedura barwienia
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą zostać
odwodnione, oczyszczone i zatopione w środku do trwałego zatapiania.
Wizualizacja: zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000).
Program: w systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość
uŜytego odczynnika to 1 x 200 µl lub 2 x 150 µl na szkiełko z preparatem. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania
szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w podręczniku uŜytkownika urządzenia Autostainer Link. Jeśli
protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer Link, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia
technicznego firmy Dako. Instalator oprogramowania Autostainer Link jest dostępny do pobrania ze strony internetowej
www.dako.com\Installer. Ten program instalacyjny uzupełni oprogramowanie DakoLink o dane protokołu i odczynnika
Anti-TdT, Clone EP266. Skrócona nazwa protokołu dla tego przeciwciała to „TdT EP266”. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Barwienie kontrastowe: zalecanym barwnikiem kontrastowym jest EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (nr kat. K8008).
W celu uzyskania optymalnych wyników zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Próby kontrolne: równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać kontrole
pozytywne i negatywne z uŜyciem identycznego protokołu. Tkankowa kontrola pozytywna powinna obejmować łagodne
zmiany grasicy, a komórki/struktury powinny wykazywać odczyn taki, jak opisany dla tej tkanki w części
„Charakterystyka pracy”. Zalecana kontrola negatywna to FLEX Negative Control, Rabbit (Link) (nr kat. IR600).
Interpretacja
wybarwienia
Charakterystyka
działania
(124477-002)
Odczyn komórkowy ma charakter głównie jądrowy.
Tkanki prawidłowe: Tymocyty korowe i podtorebkowe grasicy powinny wykazywać odczyn wyraźnie jądrowy o nasileniu
od umiarkowanego do silnego, natomiast tymocyty rdzeniowe powinny wykazywać odczyn ujemny (11). W strefie
międzygrudkowej migdałków niektóre komórki okołozatokowe mogą wykazywać odczyn wyraźnie jądrowy. Wszystkie
pozostałe komórki migdałków powinny wykazywać odczyn ujemny (12). Dodatni odczyn cytoplazmatyczny
zaobserwowano w przypadku komórek śródbłonkowych wielu typów tkanek, co nie zostało zawarte w poniŜszej tabeli.
Immunoreaktywność w postaci rozlanego odczynu cytoplazmatycznego zaobserwowano równieŜ w przypadku
zrazików trzustkowych i mięśni szkieletowych (13).
P02830PL_02_IR093/2014.03 s. 2/4
Mózgowie (3)
Jelito grube (3)
Przełyk (3)
Nerki (3)
Wątroba (2)
Płuca (3)
Komórki
międzybłonka (2)
Mięsień sercowy (3)
0/3
0/3
0/3
0/3
0/2
0/3
0/2
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Trzustka (3)
Przytarczyce (3)
Przysadka
mózgowa (2)
Gruczoł krokowy (3)
Ślinianki (3)
Skóra (3)
Jelito cienkie (2)
Śledziona (3)
śołądek (3)
Jądra (8)
0/3
Grasica (5)
Mięśnie szkieletowe
(3)
Nerwy obwodowe
(2)
0/3
Tarczyca (3)
0/2
Migdałki (3)
Rodzaj tkanki
(liczba badanych
przypadków)
Nadnercza (3)
Szpik kostny (3)
MóŜdŜek (3)
Składniki tkankowe
wykazujące odczyn dodatni
0/3
0/3
0/3
Składniki tkankowe
wykazujące odczyn dodatni
0/3
0/3
0/2
0/3
0/3
0/3
0/2
0/3
0/3
1/8 Komórki Leydiga (90%),
jądrowy
5/5 Tymocyty podtorebkowe i
korowe (100%), jądrowy
0/3
3/3 Komórki okołozatokowe
(<1%), jądrowy
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało znakowało jądra komórek nowotworowych w 5/5 przypadków ostrej białaczki
limfoblastycznej, 1/5 przypadków ostrej białaczki szpikowej, 0/6 przypadków przewlekłej białaczki limfocytowej, 0/5
przypadków przewlekłej białaczki szpikowej, 0/5 przypadków mięsaka Ewinga, 1/1 przypadek raka z komórek Merkla,
0/2 przypadki nerwiaka płodowego (węchowego), 0/1 przypadek mięśniakomięsaka prąŜkowanokomórkowego, 0/5
przypadków raka drobnokomórkowego, 5/5 przypadków grasiczaka, 2/2 przypadki nasieniaka, 1/1 przypadek
rozrodczaka oraz 2/2 przypadki raka zarodkowego (14). Podczas oceny guzów nieznanego pochodzenia naleŜy
zachować ostroŜność z uwagi na to, Ŝe nowotwory pochodzące z komórek zarodkowych mogą wykazywać
umiarkowany odczyn jądrowy.
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
Arber DA, Jenkins KA. Paraffin section immunophenotyping of acute leukemias in bone marrow specimens. Am J
Clin Pathol 1996; 4:462-68.
Soslow RA, Bhargava V, Warnke RA. MIC2, TdT, bcl-2, and CD34 expression in paraffin-embedded high-grade
lymphoma/acute lymphoblastic leukemia distinguishes between distinct clinicopathologic entities. Hum Pathol
1997; 28:1158-65.
Orazi A, Cattoretti G, John K, Neiman RS. Terminal deoxynucleotidyl transferase staining of malignant lymphomas
in paraffin sections. Mod Pathol 1994; 7:582-86.
Orazi A, Cotton J, Cattoretti G, Kotylo PK, John K, Manning JT et al. Terminal deoxynucleotidyl transferase
staining in acute leukemia and normal bone marrow in routinely processed paraffin sections. Am J Clin Pathol.
1994; 102:640-45.
Yamada Y, Tomaru U, Ishizu A, Kiuchi T, Kasahara M, Matsuno Y. Expression of thymoproteasome subunit β5t in
type AB thymoma. J Clin Pathol 2013; Dec 10; 1-3 (epub ahead of print).
Isobe M, Huebner K, Erikson J, Peterson R, Bollum FJ, Chang LMS et al. Chromosome localization of the gene for
human terminal deoxynucleotidyltransferase to region 10q23-q25. Proc Natl Acad Sci USA 1985; 82:5836-40.
Kunkel TA, Gopinathan KP, Dube DK, Snow ET, Loeb LA. Rearrangements of DNA mediated by terminal
transferase. Proc Natl Acad Sci USA 1986; 83:1867-71.
Braziel RM, Keneklis T, Donolon JA, et al. Terminal deoxynucleotidyl transferase in non-Hodgkin’s lymphoma. Am
J Clin Pathol. 1983; 80:655-59.
Suzumiya J, Ohshima K, Kikuchi M, Takeshita M, Akamatsu M, Tashiro K. Terminal deoxynucleotidyl transferase
staining of malignant lymphomas in paraffin sections: a useful method for the diagnosis of lymphoblastic
lymphoma. J Pathol. 1997; 182:86-91.
Mathewson RC, Kjeldsberg CR, Perkins SL. Detection of terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) in
nonhematopoietic small round cell tumors in children. Pediatr Pathol Lab Med. 1997; 17:835-44.
Bradstock KF, Janossy G, Pizzolo G, Hoffbrand AV, McMichael A, Pilch JR et al. Subpopulations of normal and
leukemic human thymocytes: An analysis with the use of monoclonal antibodies. J Natl Cancer Inst 1980; 65:33-42.
Strauchen JA, Miller LK. Lymphoid progenitor cells in human tonsils. In J Surg Pathol 2003; 11:21-4.
Report of Normal Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Terminal
Deoxynucleotidyl Transferase (TdT), Clone EP266; In-house document D20933.
Report of Abnormal Tissue Immunohistochemical Testing Using Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human Terminal
Deoxynucleotidyl Transferase (TdT), Clone EP266; In-house document D19755.
Przeciwciała Monoclonal Rabbit Anti-Human Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT), Clone EP266, są
produkowane przez firmę Epitomics Inc. przy uŜyciu własnej technologii produkcji króliczych przeciwciał
monoklonalnych, chronionej patentami nr 5,675,063 i 7,402,409.
(124477-002)
P02830PL_02_IR093/2014.03 s. 3/4
Wydanie 03/2014
(124477-002)
P02830PL_02_IR093/2014.03 s. 4/4