KSZTAŁTOWANIE PROCESU BIOTECHNOLOGICZNEGO

PODSTAWY BIOTECHNOLOGII PRZEMYSŁOWEJ
KSZTAŁTOWANIE PROCESU BIOTECHNOLOGICZNEGO
I.
WPŁYW STĘŻENIA ALKOHOLU NA WZROST DROŻDŻY
1. Rozlać jałowo podłoże GYEP (2% glukozy, 1% ekstraktu drożdżowego, 1%
peptonu) po 10 cm3 do 3 kolb stożkowych
2. Sporządzić, zachowując warunki jałowości, rozcieńczenia alkoholu
etylowego wg następującego schematu:
Końcowe stężenie alkoholu (%)
Podłoże GYEP (cm3)
Woda jałowa (cm3)
Etanol (cm3)
0
10
10
0,0
5
10
9,0
1,0
15
10
7,0
3,0
3. Zaszczepić przygotowane podłoża zawiesiną drożdży piekarskich (0,1 cm3),
dokładnie wymieszać zaczepione podłoże.
4. Zważyć kolby i umieścić w cieplarce (hodowla stacjonarna).
5. Obliczyć liczbę komórek drożdży zawartą w 1 cm3 założonej hodowli.
II.
WPŁYW pH PODŁOŻA HODOWLANEGO NA WZROST DROŻDŻY
1.
2.
3.
4.
5.
6.
III.
W trzech zlewkach umieścić po 20 cm3 przygotowanych wcześniej buforów
fosforanowych.
Dodać do każdej ze zlewek po 0,4 g sacharozy, 0,2 g ekstraktu drożdżowego i
0,2 g peptonu. Dokładnie wymieszać podłoże.
Wyjałowić podłoże przy użyciu jałowego filtru strzykawkowego
CHROMAFIL do jałowych kolb stożkowych na 100 cm3.
Zaszczepić przygotowane podłoża zawiesiną drożdży piekarskich (0,1 cm3),
dokładnie wymieszać.
Zważyć kolby i umieścić w cieplarce.
Obliczyć liczbę komórek drożdży zawartą w 1 cm3 założonej hodowli.
WPŁYW SKŁADU
DROŻDŻY
PODŁOŻA
HODOWLANEGO
NA
WZROST
1. Rozlać po 20 cm3 podłoża bazowego (0,25g (NH4)2HPO4 i 0,25g (NH4)2SO4
na 100 cm3 wody) do 3 zlewek.
2. Następnie dodać do zlewki nr 1 - 1,4 g laktozy (I próba), do zlewki nr 2 – 0,7 g
fruktozy (II próba) oraz do zlewki nr 3 - 1,4 g sacharozy (III próba).
3. Dokładnie wymieszać roztwory (do całkowitego rozpuszczenia się cukrów).
4. Wyjałowić podłoża przy użyciu jałowego filtru strzykawkowego
CHROMAFIL do kolb stożkowych na 100 cm3.
5. Zaszczepić pożywki zawiesiną drożdży piekarskich (0,1 cm3), ponownie
dokładnie wymieszać.
6. Zważyć kolby i umieścić w cieplarce.
7. Obliczyć liczbę komórek drożdży zawartą w 1 cm3 założonej hodowli.
IV.
WPŁYW ZAWARTOSCI GLUKOZY NA WZROST DROŻDŻY
1. Rozlać po 20 cm3 podłoża bazowego (0,25g (NH4)2HPO4 i 0,25g (NH4)2SO4
na 100 cm3 wody) do 3 zlewek.
2. Następnie dodać do zlewki nr 1 – 1,0 g glukozy (I próba), do zlewki nr 2 – 2,0
g glukozy (II próba) oraz do zlewki nr 3 – 3,0 g glukozy (III próba).
3. Dokładnie wymieszać roztwory (do całkowitego rozpuszczenia się cukru).
4. Wyjałowić podłoża przy użyciu jałowego filtru strzykawkowego
CHROMAFIL do kolb stożkowych na 100 cm3.
5. Zaszczepić pożywki zawiesiną drożdży piekarskich (0,1 cm3), ponownie
dokładnie wymieszać.
6. Zważyć kolby i umieścić w cieplarce.
7. Obliczyć liczbę komórek drożdży zawartą w 1 cm3 założonej hodowli.
PO TYGODNIU W OTRZYMANYCH HODOWLACH OZNACZYĆ:
1. Masę kolbek
2. Żywotność drożdży
- preparat barwiony wodnym roztworem błękitu metylenowego, komórki
martwe barwią się na niebiesko, żywe pozostają bezbarwne.
3. Odżywienie komórek
- preparat barwiony płynem Lugola, komórki zawierające glikogen barwią się na
ciemnobrunatny (brązowy kolor), pozostałe na jasnożółty.
4. Liczbę komórek w 1 cm3 gęstwy drożdżowej w komorze Thoma.
Obserwacje, wyniki i wnioski należy przedstawić w formie sprawozdania