Ćwiczenie nr 3/4

III-IV. Sterylizacja i dezynfekcja część II i III - praktyczna
Ćwiczenie 1. Ocena skuteczności działania wybranych środków dezynfekcyjnych na
bakterie Escherichia coli i Bacillus subtilis
środki dezynfekcyjne: 3% woda utleniona, 70% alkohol, 96 % alkohol, 2% sterinol,
..................
1. Za pomocą pipety pobrać 1 ml zawiesiny bakteryjnej Escherichia coli i rozprowadzić
po szalce z Agarem odżywczym, nadmiar usunąć. Podobnie przygotować drugą
szalkę ze szczepem Bacillus subtilis
2. Dwa krążki bibułowe nasączyć jednym z badanych środków dezynfekcyjnych, a
następnie za pomocą jałowej pensety umieścić je po jednym na każdej szalce. Na
każdej płytce umieścić tylko 5 różnych krążków
3. Płytki inkubować 24 godziny w temperaturze 37°C
4. Po inkubacji określić w mm strefy zahamowania wzrostu bakterii wokół krążków i
porównać wrażliwość badanych szczepów na różne środki dezynfekcyjne.
Środek dezynfekcyjny
1.
2.
3.
4.
5.
Escherichia coli
Bacillus subtilis
Ćwiczenie 2. Badanie skuteczności działania wybranych środków dezynfekcyjnych
1. Podzielić pisakiem do szkła denko szalki Petriego z agarem odżywczym na 5
sektorów i opisać je następująco: K, -OH, H2O2, NaCl, M, co oznacza odpowiednio:
kontrolę – palec nie dezynfekowany, dezynfekcję alkoholem, wodą utlenioną,
przetarcie roztworem soli fizjologicznej i mycie mydłem. Na wieczku szalki napisać
swoje inicjały, datę i godzinę.
2. Uchylić wieczko szalki i delikatnie przyłożyć opuszkę jednego z palców do
powierzchni agaru w sektorze kontrolnym K. Szybko zamknąć szalkę.
3. Sterylną pęsetą pobrać watę, namoczyć ją w alkoholu uważając, aby nie była zbyt
nasiąknięta, a następnie przetrzeć nią opuszkę innego palca.
4. Przetarty palec przyłożyć do sektora –OH jak w pkt. 2. Zużytą watę wyrzucić.
5. W podobny sposób przetrzeć palce: wodą utlenioną i roztworem soli, oraz wykonać
odciski w odpowiednich sektorach (za każdym razem użyć inny palec).
6. Wymyć ręce mydłem i wytrzeć ręcznikiem, a następnie nieużywany dotąd palec
przyłożyć do sektora M.
7. Szalkę inkubować w 37C przez 18-24 godziny.
Po okresie inkubacji porównać wzrost w poszczególnych sektorach, uwzględniając
liczbę kolonii i ich zróżnicowanie morfologiczne, a nie powierzchnię wzrostu (dlaczego?).
O czym świadczą stwierdzone różnice? Czy mycie mydłem radykalnie usunęło
drobnoustroje z powierzchni palca? Jeśli nie, to jakie znaczenie higieniczne ma mycie
rąk?
Ćwiczenie 3. Badania aktywności środków dezynfekcyjnych
Rozlać w warunkach jałowych 5 probówek z bulionem odżywczym.
1. Z przygotowanych rozcieńczeń wybranych środków dezynfekcyjnych rozlać po 5ml
do sterylnych probówek. Równolegle ustawić taką samą ilość opisanych probówek z
podłożem bulionowym
2. W odstępach co 30 sek. zaszczepiać kolejne rozcieńczenia związków dezynfekcyjnych
inoculum (E. coli) o objętości 0,5 ml i wymieszać na wstrząsarce.
3. Po 15 minutach inkubacji (czas kontaktu ze związkiem) przenosić ezą co 30 sek.
materiał z zaszczepionych rozcieńczeń do probówek z bulionem odżywczym.
4. Wszystkie zaszczepione podłoża bulionowe inkubować 48 godzin w 37o C.
5. Wyniki zestawić w tabeli określając wzrost obserwowany jako zmętnienie bulionu
znakiem „+ „ i brak wzrostu znakiem „ – „
Stężenie środka
wynik
dezynfekcyjnego
………………..
Stężenie środka
wynik
dezynfekcyjnego
………………..
Stężenie środka
wynik
dezynfekcyjnego
………………..
Ćwiczenie 4. Badanie czystości mikrobiologicznej rąk za pomocą płytek typu RODAC.
Rozpakować płytki, doprowadzić do temperatury pokojowej i opisać.
Próbki pobierać z suchej powierzchni. Otworzyć płytkę nie dotykając palcami podłoża. Do
badanej dłoni przyłożyć płytkę i przytrzymać przez 10 sekund. Następnie płytkę zamknąć i
wstawić do cieplarki do temp 370C i inkubować 48 godzin.
Odczytu dokonać licząc liczbę otrzymanych
kolonii. Wynik podać w przeliczeniu na
powierzchnię 100cm2.
……………………………………………
……………………………………………
……………………………………………
……………………………………………
……………………………………………
Ćwiczenie 5 – Zasady prawidłowego mycia i dezynfekcji rąk wg. Ayliffe