Monoclonal Mouse Anti-Human Desmin Klon D33 Nr kat. M

Monoclonal Mouse
Anti-Human Desmin
Klon D33
Nr kat. M 0760
Wydanie z 19.12.02
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Desmin, Klon D33, jest przeznaczone do badań
immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich i mięśni prążkowanych oraz komórki
mezotelialne i stanowi użyteczne narzędzie w identyfikacji mięsaka prążkowanokomórkowego (1, 2),
mięśniaków gładkich (3, 4) i międzybłoniaków (5). Identyfikacja różnicująca jest wspomagana przez wyniki
panelu przeciwciał. Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby
pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Wstęp
Desmina należy do klasy III filamentów pośrednich tworzących część cytoszkieletu i jest charakterystycznym
filamentem pośrednim wszystkich trzech typów komórek mięśni (mięśni szkieletowych, mięśnia sercowego i mięśni
gładkich). Desmina jest białkiem o ciężarze cząsteczkowym 53 kDa kodowanym przez dziewięć eksonów
umiejscowionych w 2q35. Desmina tworzy sieć cytoszkieletową w poprzek włókna mięśniowego granicząc w
plazmie i błonie jądrowej i szczególnie znajduje się w regionie sub-plazmolemy i pasma Z (6). 
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
dializowany wobec 0,05 mol/L Tris/HCl o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: D33. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiej IgG: zob. informacja podana na etykiecie fiolki.
Immunogen
Desmina oczyszczona z ludzkich mięśni.
Swoistość
W analizie Western blot preparaty cytoszkieletowe komórek MCF-7, komórek SCC-4 komórek RT-112,
naskórka, pierwotnej hodowli komórek raka nerek, mięśniaka gładkiego, serca płodu oraz nieoczyszczonego
wyciągu z istoty białej ludzkiego mózgu przeciwciało znakuje jedynie pasmo w preparatach mięśniaka
gładkiego i serca płodu o ciężarze cząsteczkowym ~53 kDa, potwierdzając reaktywność z desminą oraz
wykazując brak reaktywności z innymi badanymi filamentami pośrednimi (7).
Jak wykazano w badaniu immunocytochemicznym, przeciwciało reaguje krzyżowo z białkowym równoważnikiem
desminy u myszy i szczura.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na etykiecie fiolki.
Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z
badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór
barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że
przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy
Technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować dla znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie
lub B5, zatopionych w parafinie (1). Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą podwyższonej
temperatury podczas odzyskiwania epitopu. Dla tkanek utrwalanych w formalinie optymalne wyniki uzyskuje się
przy użyciu Dako Target Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308 lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA
o pH 9,0. Gorsze wyniki daje stosowanie Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, lub 10 mmol/L buforu
cytrynianowego o pH 6,0. Wstępne przygotowanie tkanek proteinazą K okazało się nieskuteczne. Nie wolno
dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki podczas przygotowania lub następującej po nim procedury barwienia
immunocytochemicznego.
Skrawki zamrożone i przygotowanie komórek: Przeciwciało można użyć do znakowania mrożonych skrawków (7)
oraz utrwalonych rozmazów komórek (1, 5).
Procedura barwienia
(107857-002)
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Desmin,nr kat. M 0760, można rozcieńczać w
zakresie 1:50-1:100 w przypadku stosowania na skrawkach parafinowych ludzkiej okrężnicy utrwalonych w
formalinie, stosując podwyższoną temperaturę podczas odzyskiwania epitopu w Dako Target Retrieval Solution
o wysokim pH, nr kat. S 3308, przez 20 minut oraz inkubację w temperaturze pokojowej z pierwszym
M 0760/PL/HEW/19.12.02 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od próbki i metody
przygotowania i powinny być określone przez każde z poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą ujemną
jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczona do takiego samego stężenia mysiej IgG jak pierwsze
przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona podczas
rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed użyciem lub
rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrolę dodatnią i ujemną należy
wykonać jednocześnie z testem próbki pacjenta.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 oraz K 4006. Zestaw Dako APAAP, nr kat. K 0670, stanowi dobrą alternatywę
dla zamrożonych skrawków i przygotowywania komórek, jeśli pod uwagę brane jest barwienie peroksydazy
endogennej. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunocytochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia. Barwienie może wykazywać
charakter włókienkowy (7).
Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich naczyń i komórki mięśni gładkich przełyku (3).
W 8/10 przypadków utrwalonych tkanek przeciwciało znakowało komórki mezotelialne (5). Z wyjątkiem
komórek pochodzących z mięśni, normalny szpik kostny, nerki, piersi, gruczoł prostaty, mózg (istota szara),
jelito czcze, gruczoł tarczycy, płuca, okrężnica, żołądek, moczowód i migdałki są ujemne (1). W zamrożonych
tkankach płodowych przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich naczyń krwionośnych i jelita cienkiego,
komórki mięśni szkieletowych w języku, komórki mięśnia sercowego, komórki zrębu rdzenia nerek, błonę
doczesną, kosmki łożyska i pępowinę, komórki zrębu sub-mezotelialnego osierdzia oraz komórki mezotelialne
(7).
Tkanki patologiczne: Spośród ludzkich mięsaków prążkowanokomórkowych przeciwciało znakowało 4/4 guzy
(1). W próbkach ludzkiego przełyku przeciwciało znakowało 35/35 mięśniaków gładkich, 1/3 mięsaków
gładkokomórkowych i 3/17 guzów zrębu (3). Ponadto przeciwciało znakowało 33/33 gęsto komórkowe
mięśniaki gładkie macicy (4). Ponadto przeciwciało znakowało 8/16 złośliwych rozlanych międzybłoniaków (5).
W polipach ludzkiej pochwy i kanału szyjki macicy przeciwciało znakowało zarówno komórki zrębu tła jak i
atypowe komórki zrębu w strefie podnabłonkowej (8). Przeciwciało nie wykazywało żadnego znakowania w 10
przypadkach każdego z przypadków nerwiaka niedojrzałego, chłoniaka, guza Wilmsa, pierwotnego guza
neuroektodermalnego i glejaka siatkówki (2), ani też nie znakowało 4 przypadków drobnokomórkowego raka
płuc, 3 przypadków mięsaka Ewinga (1), i 6 przypadków guzków zrębu błony śluzowej macicy (4).
Piśmiennictwo
1. Chang TK, Li CY, Smithson WA. Immunocytochemical study of small round cell tumors in routinely
processed specimens. Arch Pathol Lab Med 1989;113:1343-8.
2. Pollock L, Rampling D, Greenwald SE, Malone M. Desmin expression in rhabdomyosarcoma: influence of
the desmin clone and immunohistochemical method. J Clin Pathol 1995;48:535-8.
3. Miettinen M, Sarlomo-Rikala M, Sobin LH, Lasota J. Esophageal stromal tumors. A clinicopathologic,
immunohistochemical, and molecular genetic study of 17 cases and comparison with esophageal
leiomyomas and leiomyosarcomas. Am J Surg Pathol 2000;24:211-22.
4. Oliva E, Young RH, Clement PB, Bhan AK, Scully RE. Cellular benign mesenchymal tumors of the uterus.
A comparative morphologic and immunohistochemical analysis of 33 highly cellular leiomyomas and six
endometrial stromal nodules, two frequently confused tumors. Am J Surg Pathol 1995;19:757-68.
5. Hurlimann J. Desmin and neural marker expression in mesothelial cells and mesotheliomas. Hum Pathol
1994;25:753-7.
6. Goebel HH, Warlo IAP. Progress in desmin-related myopathies (review). J Child Neurol 2000;15:565-72.
7. Van Muijen GNP, Ruiter DJ, Warnaar SO. Coexpression of intermediate filament polypeptides in human
fetal and adult tissues. Lab Invest 1987;57:359-69.
8. Pitt MA, Roberts ISD, Agbamu DA, Eyden BP. The nature of atypical multinucleated stromal cells: a study
of 37 cases from different sites. Histopathol 1993;23:137-45.
Objaśnienia symboli
(107857-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 0760/PL/HEW/19.12.02 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17