Monoclonal Mouse Anti-Thyroid Transcription Factor, TTF-1
Transkrypt
Monoclonal Mouse Anti-Thyroid Transcription Factor, TTF-1
Monoclonal Mouse Anti-Thyroid Transcription Factor, TTF-1 1 Clone 8G7G3/1 Nr kat. M3575 Cel uŜycia Tylko dla diagnostyki in vitro. Przeciwciało to słuŜy do immunohistochemicznej, jakościowej identyfikacji, w mikroskopie świetlnym tarczycowego czynnika transkrypcyjnego-1(ang. thyroid transcription factor-1TTF), zarówno w tkankach prawidłowych jak i patologicznych. Ekspresja dodatnia pomaga klasyfikować guzy płuc oraz tarczycy. W diagnostyce róŜnicowej zalecane jest zastosowania panelu przeciwciał. Interpretację kliniczną kaŜdego wybarwienia dodatniego lub jego braku naleŜy uzupełnić badaniami morfologicznymi i histologicznymi z uŜyciem stosownych kontroli. Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog, w oparciu o historię kliniczną pacjenta oraz inne testy diagnostyczne. Krótki opis produktu Tarczycowy czynnik transkrypcyjny-1 (ang. thyroid transcription factor-1- TTF-1) naleŜy do rodziny homeodomenowych czynników transkrypcyjnych i jest wybiórczo wydzielany w tarczycy, płucu oraz międzymózgowiu. TTF-1 przypisuje się rolę regulatora transkrypcji genów swoistych dla tarczycy oraz zaobserwowano, Ŝe jest on waŜnym aktywatorem róŜnicowania się genów swoistych dla płuc.2,3 Zobacz dokument „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Odczynniki dostarczone Mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci nadsączu hodowli tkankowej w buforze Tris-HCl o stęŜeniu 0,05 mol/l i pH 7,2, zawierającym azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/l. Produkt zawiera białko stabilizujące. Klon: 8G7G3/11 Podklasa: IgG1, kappa StęŜenie białka g/L: Patrz ulotka na fiolce. W przypadku metody LSAB+, HRP (nr kat. K0679) stosowanej do diagnostyki immunohistochemicznej zaleca się rozcieńczenie M3575 w stosunku 1:200. W przypadku metody LSAB2, HRP, Liquid DAB (nr kat. K0673) stosowanej do diagnostyki immunohistochemicznej zaleca się rozcieńczenie M3575 w stosunku 1:50. Informacje te są jedynie wytycznymi, gdyŜ optymalne stęŜenie przeciwciał powinno zostać ustalone doświadczalnie w kaŜdym laboratorium uŜywającym danego produktu. StęŜenie białka w poszczególnych partiach moŜe być róŜne, co nie wpływa na optymalne rozcieńczenie. Miana poszczególnych partii są porównywane i korygowane względem partii referencyjnej w celu zapewnienia powtarzalnej charakterystyki barwienia immunohistochemicznego we wszystkich partiach. Antygen Rekombinowany, szczurzy TTF-11 Charakterystyka Wykazano reaktywność monoklonalnych przeciwciał skierowanych przeciwko antygenom szczurzym, klon 8G7G3/1 (anty-TTF-1), z czynnikiem TTF-1 pochodzącym od szczurów, ludzi i myszy. Przy pomocy techniki Western blotting zauwaŜono wyraźną ekspresję anti-TTF1 na prąŜku o masie 40 kD w immunoblotach z jądrowych ekstraktów oraz całych lizatach komórkowych wykazujących pozytywną ekspresje linii komórórkowych MLE 15 ( mysi nabłonek płucny), H441-4 (ludzki gruczolakorak płuca), H 345 (ludzki rak drobnokomórkowy) i szczurzych pneumocytach II rzędu. Nie obserwuje się ekspresji w liniach komórkowych nie mających mRNA TTF-1, takich jak HeLa i 3T3. Przeciwciało anti-TTF-1 jest takŜe przydatne do diagnostyki z wykorzystaniem metody ELISA oraz rekombinowanego TTF-1.1 Materiały wymagane, lecz niedostarczone w zestawie Zobacz „Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako i/lub instrukcje do systemu detekcji. Zaleca się Antibody Diluent (nr kat. S0809) jako rozcieńczalnik dla metod barwienia immunohistochemicznego. Zaleca się Mouse IgG1 (nr kat. X0931) jako kontrola negatywna dla metod barwienia immunohistochemicznych. (113218-003) 303355PL_002 s. 1/3 Środki ostroŜności 1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.4 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystane odczynniki naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować.6 Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek Skrawki parafinowe Przeciwciało anti-TTF-1 moŜna stosować na skrawkach tkankowych utrwalonych w formalinie, a później zatopionych w parafinie. Przed procedurą barwienia immunohistochemicznego naleŜy odparafinować skrawki tkankowe, a następnie poddać procesowi odkrywania epitopów. Dla lepszego przylegania skrawków do szkiełka podstawnego zaleca się stosowanie szkiełek silanizowanych Silanized Slides (nr kat. S3003). Zaleca się Target Retrieval Solution (nr kat. S1700) oraz podgrzewanie w kuchence mikrofalowej przez 40 minut, aby odsłonić epitopy pod wpływem temperatury. MroŜone skrawki tkankowe oraz rozmazy komórkowe Przeciwciało anti-TTF-1 moŜna stosować na mroŜonych skrawkach utrwalanych w acetonie oraz w rozmazach komórek, które następnie utrwalono Sposób barwienia Stosować się do instrukcji zawartych w opisach wybranych metod barwienia. Interpretacja barwienia Ekspresję przeciwciała anti-TTF-1 obserwuje się w jądrze komórkowym. Charakterystyczne ograniczenia produktu 1. Zaleca się stosowanie chromogenu DAB z metodami wizualizacji LSAB2, HRP (Liquid DAB) oraz LSAB+, HRP (Liquid DAB+) do otrzymania najlepszego efektu barwienia. 2. Zaobserwowano ogniskową ekspresje poliklonalnego przeciwciała TTF-1 w 1/66 przypadku gruczolakoraka Ŝołądka oraz 1/8 gruczolakoraka endometrium. 11 Charakterystyka występowania Tkanki prawidłowe Ekspresje anti-TTF-1 obserwuje się w pneumocytach typu II i komórkach Clara płuc oraz komórkach pęcherzykowych tarczycy. Nie zaobserwowano ekspresji TTF-1 w następujących tkankach: przysadka, jądra, nadnercza, skóra, gruczoł sutkowy, nerki, jelito grube, wątroba, trzustka, jelito cienkie, mózg oraz Ŝołądek.1,7,8 Tkanki patologiczne Wykazano immunohistochemicznie ekspresję TTF-1 w nowotworowych komórkach pochodzących z nowotworów płuca oraz tarczycy. Ekspresję anti-TTF-1 obserwowano w większości raków drobnokomórkowych płuca, pierwotnych jak i przerzutowych gruczolakorakach płuca, podczas gdy nie obserwowano ekspresji w niewielkim odsetku przypadków niezróŜnicowanych raków wielkokomórkowych płuca.1,8 Ekspresje oberwano równieŜ w płaskonabłonkowym raku płuca (14%).9 Ekspresję TTF-1 obserwowano w większości atypowych rakowiaków, przy czym nie obserwowano jej w typowych. 10 Ekspresję TTF-1 obserwowano takŜe w raku brodawkowatym tarczycy.1Ekspresji nie obserwowano w większości badanych nowotworów w tym: pierwotne raki gruczołu piersiowego, przerzuty raka piersi do płuc, raki z komórek nerkowych, pierwotne i przerzutowe gruczolakoraki jelita grubego i gruczołu krokowego oraz złośliwe międzybłoniaki.1,7,8,11,12Zaobserwowano ogniskową ekspresje poliklonalnego przeciwciała TTF-1 w 1/66 przypadku gruczolakoraka Ŝołądka oraz 1/8 gruczolakoraka endometrium. 11 Piśmiennictwo 1. Holzinger A, Dingle S, Bejarano PA, Miller M-A, Weaver TE, Di Lauro R, Whitsett JA. Monoclonal antibody to thyroid transcription factor-1: Production, characterization and usefulness in tumor diagnosis. Hybridoma 1996;15(1):49-53 2. Lazzaro D, Price M, De Felice M, Di Lauro R. The transcription factor TTF-1 is expressed at the onset of thyroid and lung morphogenesis and in restricted regions of the fetal brain. Development 1991;113(4):1093-104 3. Bohinski RJ, Di Lauro R, Whitsett JA. The lung-specific surfactant protein B gene promoter is a target for thyroid transcription factor-1 and hepatocyte nuclear factor-3, indicating common factors for organ-specific gene expression along the foregut axis. Mol Cell Biol 1994;14(9):5671-81 4. Department of Health, Education and Welfare, National Institute for Occupational Safety and Health, Rockville, MD. “Procedures for the decontamination of plumbing systems containing copper and/or lead azides.” 1976 5. Center for Disease Control Manual Guide - Safety Management, No. CDC-22, Atlanta, GA. “Decontamination of laboratory sink drains to remove azide salts.” April 30, 1976 6. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988: Final Rule, 57CFR7163. February 28, 1992 7. Bohinski RJ, Bejarano PA, Balko G, Warnick RE and Whitsett JA. Determination of lung as the primary site of cerebral metastatic adenocarcinomas using monoclonal antibody to thyroid transcription factor-1. J Neuro-Oncol 1998;40(3):227-31 (113218-003) 303355PL_002 s. 2/3 8. Khoor A, Whitsett JA, Stahlman MT, Stephenson M, Olson SJ, Cagle PT. Utility of surfactant protein B precursor and thyroid transcription factor 1 in differentiating adenocarcinoma of the lung from malignant mesothelioma. Hum Pathol 1999;30(6):695-700 9. Haque AK, Syed S, Lele SM, Freeman DH, Adegboyega PA. Immunohistochemical study of thyroid transcription factor-1 and HER2/neu in non-small cell lung cancer: strong thyroid transcription factor-1 expression predicts better survival. Appl Immunohistochem Mol Morph 2002 June;10(2):103-9 10. Folpe AL, Hansen D, Gown AM, Schmidt RA. Expression of thyroid transcription factor-1 (TTF-1) is common in pulmonary atypical carcinoids and small cell carcinomas, but not typical carcinoids. Lab Invest 1998;78(1):174A 11. Bejarano PA, Baughman RP, Biddinger PW, Miller MA, Fenoglio-Preiser C, Al-Kafaji B, Di Lauro R, Whitsett JA. Surfactant proteins and thyroid transcription factor-1 in pulmonary and breast carcinomas. Mod Pathol 1996;9(4):445-52 12. Harlamert HA, Mira J, Yassin R, Bejarano PA, Baughman R, Miller MA, Whitsett J. Distinguishing primary lung adenocarcinomas from metastatic breast adenocarcinomas in cytology specimens using TTF-1 and cytokeratins 7 and 20. Mod Pathol 1997;10(1):A185 Edition 01/09 (113218-003) 303355PL_002 s. 3/3