ZAGADNIENIA EGZAMINACYJNE ZAGADNIENIA

ZAGADNIENIA EGZAMINACYJNE z tematu: LABORATORYJNA GENETYKA MEDYCZNOMEDYCZNO-SĄDOWA:
SĄDOWA:
I.
II.
III.
IV.
V.
VI.
Sekwencja genomu ludzkiego
1. Część kodująca i niekodująca
2. Budowa makrocząsteczki
3. Lokalizacja w komórce
a) jądro komórkowe
-autosomy
-chromosomy płci
b) mitochondria
Polimorfizm genetyczny
1. Definicja
2. Historia odkryć
3. Źródła zmienności osobniczej
4. Rodzaje polimorfizmu genetycznego:
a) repetytywny - tandemowych powtórzeń (VNTR)
-minisatelitarny
-mikrosatelitarny (STR)
b) pojedynczych nukleotydów (SNP)
c) zmiennej liczby kopii (CNV)
-insercyjno-delecyjny (DIP)
5. Heterozygotyczność/homozygotyczność
Obszary zastosowań badań genetyczno-sądowych
1. Ustalanie tożsamości zwłok
2. Analiza śladów biologicznych
3. Analiza porównawcza materiałów
4. Badania pokrewieństwa (ojcostwa)
5. Identyfikacja osób zaginionych
6. Identyfikacja osób w katastrofach
Markery w genetyce medyczno-sądowej
1. Kryminalistyczne bazy danych
2. Populacyjne bazy danych
3. Standardowe zakresy markerów
4. Markery autosomalne i rodowodowe
5. Genotyp, haplotyp
6. Markery chromosomu Y
7. Markery mtDNA
a) pętla D (sekwencje HV1, HV2)
b) cytochrom B
8. Identyfikacja płci
a) sekwencja AMG
b) sekwencje chromosomu Y (SRY, STR-Y, SNP-Y)
Przydatność markerów do badań
1. Markery a czas analizy
2. Markery a stopień degradacji DNA
3. Markery a współczynnik mutacji
4. Markery a stopień zmienności
Metody analizy polimorfizmu DNA
1. Analiza restrykcyjna (RFLP)
a) sondy SLP
b) sondy MLP (DNA fingrerprint)
2. Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR)
a) multiplex PCR
b) real-time PCR
c) digital PCR
3. Elektroforeza kapilarna
4. Mikromacierze
5. Analiza sekwencji
1
VII. Standardy badań w laboratorium genetycznym
1.
Wyposażenie
2.
Organizacja laboratorium
3.
Jałowość pracy
4.
Atestacja, akredytacja
VIII. Zabezpieczanie materiałów dowodowych i śladów biologicznych
1.
Warunki i metody zabezpieczania materiałów biologicznych
2.
Czynniki sprzyjające degradacji DNA
3.
Najczęstsze błędy podczas zabezpieczania materiału
4.
Zasady prawidłowego zabezpieczania materiału
IX. Testy jakościowe
1.
Wykrywanie substancji biologicznych
a)
wykrywanie krwi
b)
wykrywanie śliny
c)
wykrywanie spermy
2.
Testy niespecyficzne i testy specyficzne
X. Charakterystyka poszczególnych etapów analizy DNA
1.
Izolacja
a)
metoda organiczna
b)
metoda magnetyczna
c)
metoda kolumienkowa
2.
Oznaczenie ilościowe
a)
metoda fluorymetryczna
b)
metoda real-time PCR
- znakowanie Sybir Green
- znakowanie sondami TaqMan
3.
Amplifikacja z zastosowaniem reakcji multipleks-PCR
a)
metoda– charakterystyka i zasada reakcji
b)
zestawy markerów – autosomalne i poza autosomalne
c)
degradacja DNA – zestawy miniSTR, DIP
4.
Detekcja produktów PCR w oparciu o elektroforezę kapilarną
a)
analizatory genetyczne – zasada działania
b)
detekcja fluorescencyjna w systemie wielokolorowym
5.
analiza sekwencji DNA – polimorfizm SNP, mtDNA, mutacje
a)
pirosekwencjonowanie
b)
minisekwencjonowanie
c)
sekwencjonowanie wielkoskalowe
XI. Parametry przydatności do analizy genetyczno-sądowej
1. Siła wyłączenia
2. Siła dyskryminacji
3. Szansa i prawdopodobieństwo ojcostwa
4. Częstość występowania profilu DNA
5. Prawdopodobieństwo powtórzenia profilu DNA
XII. Ocena wartości dowodowej analizy
a)
analiza ojcostwa
– obliczenia szansy ojcostwa
– obliczenia prawdopodobieństwa ojcostwa
– zasada obliczeń statystycznych, reguła mnożenia
– zasada wykluczania ojcostwa, reguła 4 niezgodności
b)
identyfikacja osobnicza
– analiza porównawcza uzyskanego profilu DNA człowieka
– obliczenia częstości genotypu homo- i heterozygotycznego
– obliczenia częstości profilu jako iloczynu częstości genotypów
– obliczenia prawdopodobieństwa przypadkowej zgodności.
XIII. Analiza chimeryzmu poprzeszczepowego
1. Zasada oznaczania
2. Zakresy i standardy
3. Metodyka oznaczeń.
2