cobas cfDNA Sample Preparation Kit

cobas® cfDNA Sample Preparation Kit
Do stosowania w diagnostyce in vitro
cobas® cfDNA Sample Preparation Kit
24 Tests
P/N: 07247737190
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
SPIS TRE CI
Zastosowanie
Zasady procedury
Przygotowanie próbek ......................................................................................................................... 3
Materia y i odczynniki
Dostarczone materia y i odczynniki...................................................................................................... 4
Przechowywanie i u ytkowanie odczynników ...................................................................................... 5
Wymagane materia y dodatkowe ......................................................................................................... 5
Wymagania dotycz ce rodków ostro no ci i u ytkowania
Ostrze enia i rodki ostro no ci .......................................................................................................... 6
Dobra praktyka laboratoryjna ............................................................................................................... 6
Zanieczyszczenie ................................................................................................................................. 7
Integralno
.......................................................................................................................................... 7
Utylizacja .............................................................................................................................................. 7
Pobieranie, transport i przechowywanie próbek .................................................................................. 8
Pobieranie próbek i praca z próbkami ........................................................................................ 8
Transport, przechowywanie i stabilno
Przechowywanie i stabilno
próbek ......................................................................... 8
próbki przetworzonej .................................................................... 8
Procedura testowa
Wykonywanie oznaczenia .................................................................................................................... 9
Instrukcja u ytkowania ................................................................................................................ 9
Dodatkowe informacje
Oznaczenia ........................................................................................................................................ 12
Wytwórca i dystrybutorzy ................................................................................................................... 13
Znaki towarowe i patenty ................................................................................................................... 13
Copyright ............................................................................................................................................ 13
Pi miennictwo .................................................................................................................................... 14
Wersja dokumentu ............................................................................................................................. 15
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
2
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Zastosowanie
Zestaw cobas® cfDNA Sample Preparation Kit s y do r cznego przygotowywania próbek w celu izolowania
kr
cego pozakomórkowego DNA (ang. cell-free DNA, cfDNA) z próbek osocza.
Zasady procedury
Przygotowanie próbek
Próbki osocza s przetwarzane w celu izolowania cfDNA przy u yciu zestawu cobas® cfDNA Sample
Preparation Kit, ogólnego r cznego przygotowywania próbek opartego na wi zaniu kwasu nukleinowego do
ókien szklanych. Dwa mililitry (ml) osocza s przetwarzane za pomoc proteazy i chaotropowego buforu
wi
cego, który chroni DNA przed DNazami. W dalszej kolejno ci do mieszaniny, w której dokonano
wi zania, dodaje si izopropanol, po czym mieszanin wiruje si i przepuszcza przez kolumn z wk adem
filtruj cym, zawieraj cym w ókna szklane. W trakcie wirowania cfDNA ulega zwi zaniu na powierzchni w ókien
szklanych filtra. Substancje niezwi zane, takie jak sole, bia ka i inne zanieczyszczenia, zostaj usuni te
w wyniku wirowania. Zaadsorbowane kwasy nukleinowe s przemywane i poddane elucji roztworem wodnym.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
3
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Materia y i odczynniki
Dostarczone materia y i odczynniki
Zestaw/kasety
®
cobas cfDNA Sample
Preparation Kit
24 testy
(P/N: 07247737190)
Elementy i sk adniki odczynników Ilo
PK
(Proteinaza K)
(P/N: 05860695102)
Proteinaza K, liofilizowana
DNA PBB
b
(DNA Bufor wi
cy parafin )
(P/N: 05517621001)
Bufor Tris-HCl
49,6% chlorowodorku guanidyny
0,05% mocznika
17,3% Triton X-100
WB I
(DNA Bufor p ucz cy I)
(P/N: 05517656001)
Bufor Tris-HCl
64% chlorowodorku guanidyny
WB II
(DNA Bufor p ucz cy II)
(P/N: 05517664001)
Bufor Tris-HCl
Chlorek sodu
DNA EB
(DNA bufor do elucji)
(P/N: 05517630001)
Bufor Tris-HCl
0,09% azydku sodu
HPEA FT
(Modu jednostki przed aj cej
o wysokiej czysto ci)
(P/N: 07323204102)
Probówki z filtrem i z zatyczkami
CT
(Probówki zbiorcze)
(P/N: 05880513001)
a
na test Symbol bezpiecze stwa i ostrze enie
2 x 100 mg
8 x 10 ml
1 x 25 ml
1 x 12,5 ml
1 x 6 ml
5 x 5 sztuk
3 x 25 sztuk
Niebezpiecze stwo
H302 + H332: Dzia a szkodliwie po po kni ciu
i w nast pstwie wdychania.
H315: Dzia a dra ni co na skór .
H317: Mo e powodowa reakcj alergiczn
skóry.
H318: Powoduje powa ne uszkodzenie oczu.
H334: Mo e powodowa objawy alergii lub astmy
lub trudno ci w oddychaniu w nast pstwie
wdychania.
H335: Mo e powodowa podra nienie dróg
oddechowych.
P261: Unika wdychania py u/dymu/gazu/mg y/
par/rozpylonej cieczy.
P264: Dok adnie umy skór po u yciu.
P270: Nie je , nie pi i nie pali podczas
ywania produktu.
P271: Stosowa wy cznie na zewn trz lub
w dobrze wentylowanym pomieszczeniu.
P272: Zanieczyszczonej odzie y ochronnej nie
wynosi poza miejsce pracy.
P280: Stosowa r kawice ochronne/
ochron oczu/ochron twarzy.
P285: W przypadku niedostatecznej wentylacji
stosowa indywidualne rodki ochrony dróg
oddechowych.
P301 + P312: W PRZYPADKU PO KNI CIA:
W przypadku z ego samopoczucia skontaktowa
si z O RODKIEM ZATRU lub z lekarzem.
P302 + P352: W PRZYPADKU KONTAKTU ZE
SKÓR : Umy du ilo ci wody z myd em.
P304 + P340: W PRZYPADKU DOSTANIA SI
DO DRÓG ODDECHOWYCH: Wyprowadzi lub
wynie poszkodowanego na wie e powietrze i
zapewni mu warunki do swobodnego oddychania.
P305 + P351 + P338: W PRZYPADKU
DOSTANIA SI DO OCZU: Ostro nie p uka wod
przez kilka minut. Wyj soczewki kontaktowe,
je eli s i mo na je atwo usun . Nadal p uka .
P310: Natychmiast skontaktowa si
z O RODKIEM ZATRU lub lekarzem.
P330: Wyp uka usta.
P333 + P313: W przypadku wyst pienia
podra nienia skóry lub wysypki: Zasi gn
porady/zg osi si pod opiek lekarza.
P362: Zanieczyszczon odzie zdj i wypra
przed ponownym u yciem.
P403 + P233: Przechowywa w dobrze
wentylowanym miejscu. Przechowywa pojemnik
szczelnie zamkni ty.
P405: Przechowywa pod zamkni ciem.
a
Oznakowanie bezpiecze stwa produktu jest zasadniczo zgodne z wytycznymi GHS UE.
b
Bufor wi
cy parafin jest stosowany do próbek osocza.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
4
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Przechowywanie i u ytkowanie odczynników
Odczynnik
®
Zestaw cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Uwaga: Nie wolno zamra
Temperatura
przechowywania
15–30°C
Czas przechowywania
Po otwarciu i rozpuszczeniu odczynnik PK
jest stabilny przez maksymalnie 30 dni lub
do up ywu daty wa no ci, w zale no ci od
tego, co nast pi wcze niej. Po otwarciu
i rozpuszczeniu pozosta e odczynniki
zestawu cfDNA Sample Preparation Kit s
stabilne przez maksymalnie 90 dni lub do
up ywu daty wa no ci, w zale no ci od tego,
co nast pi wcze niej.
odczynników z wyj tkiem odczynnika PK.
Wymagane materia y dodatkowe
Materia y
P/N
Etanol odwodniony (200 proof, do biologii molekularnej)
Sigma, nr kat. E7023 lub Fisher Scientific, nr kat. BP2818-500
albo odpowiednik
Izopropanol (ACS, >99,5%)
Sigma, nr kat. 190764 lub Fisher Scientific, nr kat. A451-1
albo odpowiednik
Ja owa woda wolna od nukleazy (o czysto ci do biologii
molekularnej)
Applied Biosystems (Ambion) AM9937 lub GE Healthcare
TM
Hyclone SH3053801 albo odpowiednik
Wybielacz
Dowolny dostawca
70% etanol
Dowolny dostawca
Ja owe, jednorazowe, serologiczne pipety 5 i 25 ml
Dowolny dostawca
Pipetory regulowane* (mog ce pipetowa 5–1000 µl)
Dowolny dostawca
Wolne od DNaz ko cówki z os on aerozolow lub
wyrzutnikiem
Dowolny dostawca
TM
Pipet-Aid *
Drummond 4-000-100 albo odpowiednik
Wirówka laboratoryjna* (umo liwiaj ca wirowanie przy
6000 x g dla probówek sto kowych o pojemno ci 50 ml
w rotorze wychylnym)
Eppendorf model 5810 albo odpowiednik
Mikrowirówka laboratoryjna* (umo liwiaj ca wirowanie przy
Eppendorf 5430 lub 5430R albo odpowiednik
20 000 x g)
Ja owe plastikowe probówki sto kowe o pojemno ci 15 ml
Dowolny dostawca
Probówki do mikrowirówek (wolne od RNaz/DNaz, 1,5 ml/
o czysto ci do PCR)
Life Technologies AM12400 lub Eppendorf 022364120 albo
odpowiednik
Statywy na wirówki sto kowe i do mikrowirówki
Dowolny dostawca
kawiczki jednorazowe bezpudrowe
Dowolny dostawca
* Ca e wyposa enie powinno by odpowiednio konserwowane zgodnie z instrukcjami producenta.
W celu uzyskania dodatkowych informacji dotycz cych materia ów sprzedawanych oddzielnie prosimy o kontakt
z miejscowym przedstawicielstwem firmy Roche.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
5
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Wymagania dotycz ce rodków ostro no ci i u ytkowania
Ostrze enia i rodki ostro no ci
Podobnie jak w przypadku ka dej procedury testowej, dla prawid owego przeprowadzenia badania kluczowe
znaczenie ma zachowanie zasad dobrej praktyki laboratoryjnej.
Do stosowania wy cznie w diagnostyce in vitro.
Karty charakterystyki (Safety Data Sheet, SDS) s dost pne na
przedstawicielstwie firmy Roche.
danie w miejscowym
Z wszystkimi próbkami nale y obchodzi si tak jak z materia em zaka nym, stosuj c laboratoryjne
procedury bezpiecze stwa, takie jak okre lone w dokumentach Biosafety in Microbiological
Laboratories1 oraz CLSI Document M29-A42.
Odczynnik DNA PBB zawiera Triton X-100, rodek dra ni cy b ony luzowe. Nale y unika kontaktu
tych odczynników z oczami, skór i b onami luzowymi.
Odczynniki DNA PBB i WB I zawieraj chlorowodorek guanidyny. Je li p yn zawieraj cy wspomniany
bufor ulegnie rozlaniu, do czyszczenia nale y u ywa odpowiedniego detergentu laboratoryjnego
i wody. W przypadku rozlania p ynu zawieraj cego potencjalne czynniki zaka ne do czyszczenia
nale y u ywa najpierw detergentu laboratoryjnego i wody, a nast pnie 0,5% roztworu podchlorynu
sodu.
Uwaga: Dost pny w handlu p ynny wybielacz przeznaczony do zastosowa domowych zazwyczaj
zawiera podchloryn sodu o st eniu 5,25%. Rozcie czenie domowego wybielacza w stosunku
1:10 daje 0,5% roztwór podchlorynu sodu.
Odczynnik DNA EB zawiera azydek sodu. Azydek sodu mo e reagowa z instalacjami wodnokanalizacyjnymi wykonanymi z o owiu lub miedzi, tworz c silnie wybuchowe azydki metali. Usuwaj c
roztwory zawieraj ce azydek sodu do zlewów laboratoryjnych, nale y sp uka rury du ilo ci
zimnej wody, aby zapobiec nagromadzeniu azydków.
kawiczki nale y cz sto zmienia , aby ograniczy mo liwo
zanieczyszczenia.
Zaleca si u ywanie ja owych jednorazowych pipet oraz ko cówek pipet niezawieraj cych DNazy.
Dobra praktyka laboratoryjna
Nie nale y pipetowa za pomoc ust.
Nie wolno je
, pi ani pali w obszarach roboczych laboratorium.
Po zako czeniu pracy z próbkami i odczynnikami testowymi nale y dok adnie umy r ce.
Podczas pracy z jakimikolwiek odczynnikami nale y u ywa os on na oczy oraz fartuchów
laboratoryjnych i r kawic jednorazowych. Nale y unika kontaktu wymienionych materia ów ze skór ,
oczami i b onami luzowymi. Je eli dojdzie do kontaktu, miejsce jego wyst pienia nale y natychmiast
sp uka du ilo ci wody. Je eli nie zostan podj te odpowiednie dzia ania lecznicze, mo e doj
do oparze . W razie rozlania przed wytarciem nale y rozcie czy wod .
Dok adnie oczy ci i odkazi wszystkie laboratoryjne powierzchnie robocze wie o przygotowanym
roztworem 0,5% podchlorynu sodu w wodzie destylowanej lub dejonizowanej (rozcie czy domowy
wybielacz w stosunku 1:10). Nast pnie nale y przetrze powierzchni 70% etanolem.
Uwaga: Dost pny w handlu p ynny wybielacz przeznaczony do zastosowa domowych zazwyczaj
zawiera podchloryn sodu o st eniu 5,25%. Rozcie czenie domowego wybielacza w stosunku
1:10 daje 0,5% roztwór podchlorynu sodu.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
6
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Zanieczyszczenie
Aby zapobiec zanieczyszczeniu próbek, nale y nak ada r kawiczki i zmienia je przed wznowieniem
pracy z tymi materia ami. Podczas pracy z próbkami nale y unika zanieczyszczenia r kawiczek.
kawiczki nale y cz sto zmienia , aby ograniczy mo liwo
zanieczyszczenia.
kawiczki nale y zmienia przed opuszczeniem obszarów izolacji DNA lub w przypadku
podejrzenia kontaktu z roztworami lub próbk .
Nale y unika zanieczyszczenia odczynników przez rybonukleazy i mikrobiologicznego.
Integralno
Nie wolno u ywa zestawów po up ywie daty wa no ci.
Nie nale y zlewa odczynników pochodz cych z ró nych zestawów lub serii.
Nie wolno u ywa przedmiotów jednorazowego u ytku po up ywie daty wa no ci.
Wszystkie przedmioty jednorazowego u ytku s przeznaczone do jednokrotnego u ycia. Nie
wykorzystywa ponownie.
Ca e wyposa enie powinno by odpowiednio konserwowane, zgodnie z instrukcjami producenta.
Utylizacja
Odczynnik DNA EB zawiera azydek sodu. Azydek sodu mo e reagowa z instalacjami wodnokanalizacyjnymi wykonanymi z o owiu lub miedzi, tworz c silnie wybuchowe azydki metali. Usuwaj c
roztwory zawieraj ce azydek sodu do zlewów laboratoryjnych, nale y sp uka rury du ilo ci
zimnej wody, aby zapobiec nagromadzeniu azydków.
Nale y wyrzuci wszystkie nieu yte odczynniki, post puj c zgodnie z przepisami krajowymi,
federalnymi, stanowymi i lokalnymi.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
7
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Pobieranie, transport i przechowywanie próbek
Uwaga: Ze wszystkimi próbkami nale y obchodzi si jak z materia em potencjalnie zaka nym.
Pobieranie próbek i praca z próbkami
Zestaw cobas® cfDNA Sample Preparation Kit zosta opracowany do stosowania z próbkami osocza
pobranego na K2-EDTA.
Osocze powinno by oddzielane od krwi w ci gu 4 godzin od pobrania i przechowywane do momentu badania
w temperaturze -70°C.
Transport, przechowywanie i stabilno
próbek
Próbki osocza mog by transportowane w stanie zamro enia. Próbki osocza musz by transportowane
zgodnie z przepisami krajowymi, federalnymi, stanowymi i lokalnymi, dotycz cymi transportu czynników
etiologicznych.3
Temperatura przechowywania
próbek osocza
-70°C
od 2°C do 8°C
Czas przechowywania
Do 12 miesi cy
Do 3 dni
Przechowywanie i stabilno
próbki przetworzonej
Próbka przetworzona (wyizolowany DNA) jest stabilna przez:
Temperatura przechowywania
wyizolowanego DNA
od -15°C do -25°C
od 2°C do 8°C
od 15°C do 30°C
Czas przechowywania
Do 1 cyklu rozmra ania
przez 60 dni
Do 7 dni
Do 1 dnia
Wyizolowany DNA powinien by u ywany w zalecanych okresach przechowywania lub przed up ywem daty
wa no ci zestawu cobas® cfDNA Sample Preparation Kit u ytego do izolacji DNA, w zale no ci od tego, co
nast pi wcze niej.
Przed u yciem izolowanych, przechowywanych roztworów podstawowych DNA, szybko wytrz sa i odwirowa
probówk do elucji zawieraj
roztwór podstawowy.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
8
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Procedura testowa
Wykonywanie oznaczenia
Ryc. 1
®
Proces przygotowania próbki cobas cfDNA
1
Uzyska próbk osocza
2
3
Przygotowa próbk do wi zania na kolumnie
Przeprowadzi izolacj DNA
4
Elucja DNA
Instrukcja u ytkowania
Uwaga:
®
Z zestawem cobas cfDNA Sample Preparation Kit nale y stosowa wy cznie próbki osocza
pobranego na K2 EDTA.
Przygotowanie i przechowywanie odczynników
Przed u yciem zestawu po raz pierwszy przygotowa odczynniki robocze zgodnie z tabel poni ej. Do
dozowania wody u
pipety serologicznej 5 ml. Do dozowania etanolu u
pipet serologicznych 25 ml.
Je li proteinaza K zosta a ju rozpuszczona i zamro ona, rozmrozi liczb równych obj to ci odczynnika,
wystarczaj
do przetworzenia liczby próbek przeznaczonych do danego przebiegu testowego.
Odczynniki
Rozpuszczenie / Przygotowanie
Proteinaza K
(PK)
Rozpu ci proteinaz PK przez dodanie do fiolki 4,5 ml ja owej wody za pomoc ja owej,
jednorazowej pipety serologicznej o pojemno ci 5 ml. Wymiesza zawarto , odwracaj c fiolk do
góry dnem od 5 do 10 razy. Przenie porcje po 1,1 ml rozpuszczonej PK do probówek do
mikrowirówki o pojemno ci 1,5 ml i przechowywa w temperaturze -20°C przez maksymalnie 30 dni
lub do daty wa no ci, w zale no ci od tego, co nast pi wcze niej. Je li PK zosta a ju
rozpuszczona i zamro ona, rozmrozi liczb równych obj to ci odczynnika, wystarczaj
do
przetworzenia liczby próbek przeznaczonych do danego przebiegu testowego (ka da próbka
wymaga 250 µl rozpuszczonego odczynnika PK).
Bufor p ucz cy I
(WB I)
Przygotowa roboczy odczynnik WB I dodaj c 15 ml alkoholu bezwodnego do butelki WB I.
Wymiesza odwracaj c butelk od 5 do 10 razy. Zapisa na butelce, e dodano etanol, i wpisa
dat . Przechowywa odczynnik WB I w temperaturze od 15°C do 30°C przez maksymalnie 90 dni
lub do daty wa no ci, w zale no ci od tego, co nast pi wcze niej.
Bufor p ucz cy II
(WB II)
Przygotowa roboczy odczynnik WB II przez dodanie do butelki z odczynnikiem WB II 50 ml etanolu
bezwodnego. Wymiesza zawarto , odwracaj c butelk do góry dnem od 5 do 10 razy. Zapisa na
butelce, e dodano etanol, i wpisa dat . Przechowywa odczynnik WB II w temperaturze od 15°C
do 30°C przez maksymalnie 90 dni lub do daty wa no ci, w zale no ci od tego, co nast pi
wcze niej.
Wszystkie roztwory przechowywane w temperaturze 15–30°C powinny by klarowne. Je eli w którymkolwiek
odczynniku obecny jest osad, nale y ogrza roztwór do temperatury 37°C a do rozpuszczenia si osadu. Nie
wolno u ywa odczynnika do czasu rozpuszczenia si ca ego osadu.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
9
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Procedura izolacji DNA
1. Opisa probówk sto kow o pojemno ci 15 ml dla ka dej próbki osocza i kontroli ujemnej. Ja owa woda
mo e s
jako kontrola ujemna i mo e by przetwarzana w taki sam sposób jak próbki.
2. Zamiesza w mieszadle wibracyjnym, a nast pnie przenie 2 ml ka dej próbki osocza lub kontroli ujemnej
(woda ja owa) do oddzielnej probówki o pojemno ci 15 ml.
Uwaga: Do przetwarzania próbki za pomoc zestawu cobas® cfDNA Sample Preparation Kit potrzebne
przynajmniej 2 ml osocza.
3. Doda 250 µl PK do ka dej probówki.
4. Doda 2 ml odczynnika DNA PBB do ka dej probówki.
5. Wymiesza probówki z próbk zawieraj ce odczynniki DNA PBB/PK odwracaj c je od 3 do 5 razy.
6. Inkubowa ka
probówk w temperaturze pokojowej (od 15°C do 30°C) przez 30 minut.
Uwaga: Podczas inkubacji przygotowa wymagan liczb probówek filtruj cych HPEA FT opisuj c
ka
probówk filtruj
HPEA FT odpowiednimi danymi na korku ka dej probówki filtruj cej
HPEA FT.
Uwaga: Na ka
próbk b dzie potrzebna jedna probówka filtruj ca FT HPEA, trzy probówki
zbiorcze (CT) i dwie probówki do elucji (probówki do mikrowirówki o pojemno ci 1,5 ml).
Uwaga:
Podczas inkubacji nale y oznakowa wymagan liczb probówek do elucji (probówek do
mikrowirówki o pojemno ci 1,5 ml) informacjami identyfikuj cymi próbk .
7. Doda 500 µl izopropanolu i wymiesza lizat odwracaj c 3 do 5 razy.
8. Przenie ca
lizatu do w ciwie oznakowanej probówki filtruj cej HPEA FT.
9. U ywaj c wirówki laboratoryjnej z rotorem wychylnym, odwirowa probówk filtruj
HPEA FT przy
4000 x g przez 5 minut.
10. Po odwirowaniu wyj probówk filtruj
HPEA FT ze sto kowej probówki zbiorczej o pojemno ci 50 ml.
Umie ci probówk filtruj
HPEA FT na probówce CT. Zdj wi kszy zacisk blokuj cy odkr caj c
i odci gaj c go od zespo u.
11. Zdj mniejszy zacisk blokuj cy spod korka probówki filtruj cej (FT) popychaj c go do góry, a uszczelka
dzie p kni ta po obu stronach korkach, a nast pnie odci gaj c go od zespo u.
12. Zdj probówk filtruj
HPEA z probówki FT pochylaj c przed enie z dala od strony korka probówki FT.
13. Wyrzuci zawarto ze starej probówki filtruj cej HPEA FT do odpadów chemicznych i w odpowiedni
sposób usun zu yt jednostk .
14. Opisa odpowiednio korek filtra.
15. Doda 500 µl roboczego odczynnika WB I do ka dej probówki filtruj cej FT.
Uwaga: Przygotowanie roboczego odczynnika WB I opisano w tabeli w rozdziale „Przygotowanie
odczynników”.
16. Do pozosta ej cz ci protoko u u
mikrowirówki laboratoryjnej.
17. Odwirowa jednostki FT/CT przy 8000 x g przez 1 minut .
18. Umie ci ka
probówk FT na nowej probówce CT. Wyrzuci zawarto z ka dej probówki CT do
odpadów chemicznych i odpowiednio utylizowa star probówk CT.
19. Doda 500 µl roboczego odczynnika WB II do ka dej probówki FT.
Uwaga: Przygotowanie roboczego odczynnika WB II opisano w tabeli w rozdziale „Przygotowanie
odczynników”.
20. Odwirowa jednostki FT/CT przy 8000 x g przez 1 minut .
21. Umie ci ka
probówk FT na nowej probówce CT. Wyrzuci zawarto ze starej probówki CT do
odpadów chemicznych i w odpowiedni sposób usun zu yt probówk CT.
22. Odwirowa jednostki FT/CT przy 16 000 x g do 20 000 x g przez 1 minut , aby osuszy membran filtra.
23. Umie ci probówk FT na probówce do elucji (wolnej od RNazy/DNazy probówce do mikrowirówki
o pojemno ci 1,5 ml) oznakowanej uprzednio informacjami identyfikuj cymi próbk i na ka dej probówce
umie ci znak orientacyjny. Wyrzuci zawarto z ka dej probówki CT do odpadów chemicznych
i odpowiednio zutylizowa star probówk CT.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
10
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
24. Doda 100 µl odczynnika DNA EB na rodek membrany probówki FT bez dotykania membrany probówki FT.
25. Inkubowa probówk FT z probówk do elucji w temperaturze pokojowej (od 15°C do 30°C) przez 5 minut.
26. Umie ci probówki w wirówce ze znakami orientacyjnymi skierowanymi na zewn trz. Wirowa probówk
FT z probówk do elucji z przyspieszeniem 8000 x g przez 1 minut , aby zebra eluat do probówki do
elucji (uprzednio oznakowanej wolnej od RNaz/DNaz probówki do mikrowirówki o pojemno ci 1,5 ml).
Eluat stanowi roztwór podstawowy DNA.
27. Odrzuci probówk FT.
28. Powoli usun 80 µl roztworu podstawowego DNA zwracaj c uwag , aby nie naruszy peletki (która mo e
nie by widoczna). Przenie roztwór podstawowy DNA do drugiej probówki do elucji (wolnej od
RNazy/DNazy probówki do mikrowirówki o pojemno ci 1,5 ml) oznakowanej uprzednio informacjami
identyfikuj cymi próbk . Zamkn zatyczki na probówkach do elucji. Roztwór podstawowy DNA jest
gotowy do testów PCR. Przechowywa roztwór podstawowy DNA zgodnie z instrukcjami w cz ci
Transport, przechowywanie i stabilno próbek.
Uwaga: Pipetowanie ze spodu probówki do elucji mo e spowodowa
zniszczenie peletki
i niekorzystnie wp yn na wyniki testu.
Uwaga: Je eli peletka jest zniszczona, zwróci roztwór podstawowy DNA do pierwotnej probówki do
elucji, zamkn
probówk , nast pnie szybko wytrz sa
probówk
i, ze znakiem
orientacyjnym skierowanym na zewn trz, odwirowa probówk przy 8000 x g przez 1 minut ,
aby zebra eluat i powtórzy etap 28 w celu usuni cia 80 µl roztworu podstawowego DNA.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
11
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Dodatkowe informacje
Oznaczenia
Na etykietach produktów diagnostycznych Roche PCR stosuje si nast puj ce oznaczenia.
Tabela 1
Oznaczenia stosowane na etykietach produktów diagnostycznych Roche PCR
Oprogramowanie pomocnicze
Wyrób do diagnostyki in vitro
Autoryzowany Przedstawiciel we
Wspólnocie Europejskiej
Dolna granica przypisanego zakresu
Arkusz kodów kreskowych
Wytwórca
Kod partii
Przechowywa z dala od wiat a
Zagro enie biologiczne
Zawarto
Numer katalogowy
Przestrzega zakresu temperatury
Sprawd w instrukcji obs ugi
Plik definicji testów
Zawarto
Górna granica przypisanego zakresu
zestawu
wystarczaj ca na <n> testów
Dystrybucja
Termin wa no ci
Wy cznie do oceny dzia ania
w badaniach IVD
Numer pozycji handlu globalnego
Ten produkt spe nia wymogi dyrektywy Wspólnoty Europejskiej 98/79/WE dotycz cej
diagnostycznych urz dze medycznych do stosowania in vitro.
Linia pomocy technicznej dla klientów w Stanach Zjednoczonych 1-800-526-1247
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
12
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Wytwórca i dystrybutorzy
Tabela 2
Wytwórca i dystrybutorzy
Wyprodukowano w Stanach Zjednoczonych
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
68305 Mannheim, Germany
Roche Diagnostics (Schweiz) AG
Roche Diagnostics
Industriestrasse 7
201, boulevard Armand-Frappier
6343 Rotkreuz, Switzerland
H7V 4A2 Laval, Québec, Canada
Pour toute assistance technique,
Roche Diagnostics GmbH
appeler le: 1-877-273-3433)
Sandhofer Strasse 116
68305 Mannheim, Germany
Roche Diagnostics
2, Avenue du Vercors
Roche Diagnostics, SL
38240 Meylan, France
Avda. Generalitat, 171-173
E-08174 Sant Cugat del Vallès
Distributore in Italia:
Barcelona, Spain
Roche Diagnostics S.p.A.
Viale G. B. Stucchi 110
Roche Diagnostica Brasil Ltda.
20052 Monza, Milano, Italy
Av. Engenheiro Billings, 1729
Jaguaré, Building 10
Distribuidor em Portugal:
05321-010 São Paulo, SP Brazil
Roche Sistemas de Diagnósticos Lda.
Estrada Nacional, 249-1
Roche Diagnostics
2720-413 Amadora, Portugal
9115 Hague Road
Indianapolis, IN 46250-0457 USA
(For Technical Assistance call the
Roche Response Center
toll-free: 1-800-526-1247)
Znaki towarowe i patenty
Patrz http://www.roche-diagnostics.us/patents
Copyright
©2016 Roche Molecular Systems, Inc.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
13
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Pi miennictwo
1. Chosewood LC, Wilson DE. Biosafety and microbiological and biomedical laboratories-Fifth Edition. US
Department of Health and Human Services Publication. (CDC). 2009;21-1112.
2. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of laboratory workers from occupationally
acquired infections. Approved Guideline-Fourth Edition. CLSI Document M29-A4:Wayne, PA;CLSI, 2014.
3. International Air Transport Association. Dangerous Goods Regulations, 52nd Edition. 2011.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
14
®
cobas cfDNA Sample Preparation Kit
Wersja dokumentu
Informacje dotycz ce wersji dokumentu
Doc. Rev. 1.0
05/2015
Pierwsza publikacja.
Doc. Rev. 2.0
04/2016
Dodano wyja nienie dotycz ce post powania z roztworem podstawowym
DNA/eluatem, b bna wirówki oraz adowania próbki na p ytk AD.
W razie jakichkolwiek pyta prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem
firmy Roche.
Doc. Rev. 2.0
01/2017
W cz
ci Wymagane materia y dodatkowe poprawiono b d t umaczeniowy.
W cz
ci Procedura izolacji DNA poprawiono b d t umaczeniowy.
W razie jakichkolwiek pyta prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem
firmy Roche.
07573758001-03PL
Doc. Rev. 2.0
15