Monoclonal Mouse Anti-Human Plasma Cell klon VS38c Nr

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Plasma Cell
klon VS38c
Nr kat. M 7077
Wydanie z 16.12.02
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Plasma Cell, klon VS38c, jest przeznaczone do badań
immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje normalne i nowotworowe komórki plazmatyczne i może być
użytecznym narzędziem w identyfikacji szpiczaków w tkankach szpiku kostnego lub innych. Ponadto
przeciwciało jest pomocne w rozróżnianiu pomiędzy chłoniakiem limfoplazmatycznym a limfatycznym i
chłoniakiem grudkowym (1). Identyfikacja różnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu przeciwciał.
Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne
testy diagnostyczne.
Synonim antygenu
Białko p63 (1).
Wstęp
Ludzkie białko p63 o ciężarze cząsteczkowym 63 kDa jest nie-glikozylowanym, odwracalnie palmitonylowanym
białkiem przezbłonowym typu II wykrytym w komórkach plazmatycznych i nabłonka. Obecnie nie jest znana funkcja
białka p63, jednak w związku z jego powinowactwem zarówno z białkami szczura i świni, jego liczebnością w
komórkach wydzielniczych oraz umiejscowieniem w chropowatej siateczce endoplazmatycznej sugeruje się, że
pełni ono rolę zachowawczą w przetwarzaniu lub wydzielaniu białek (1).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
dializowany wobec 0,05 mol/L Tris/HCL o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: VS38c (2). Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiej IgG: zob. informacja podana na etykiecie fiolki.
Immunogen
Preparat błony komórkowej komórek MCF-7 AdR (linia komórek raka gruczołu sutkowego) (2).
Swoistość
Przeciwciało Anti-Human Plasma Cell, VS38c zostało zaliczone jako przeciwciało anty-p63 białko podczas
Szóstych Międzynarodowych Warsztatów i Konferencji: Ludzkie antygeny różnicowania leukocytów (the Sixth
International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens), które odbyły się w Kobe w
1996 r.. Epitop zlokalizowano do C-terminalu 419 reszt (1).
Podczas techniki Western blotting lizatów komórkowych z osocza i linii komórek nabłonka w warunkach
redukujących przeciwciało znakuje pasmo o ciężarze cząsteczkowym 64kDa, odpowiadające białku p63 (1, 2).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na etykiecie fiolki.
Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z
badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór
barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że
przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy
Technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą podwyższonej temperatury
podczas odzyskiwania epitopu. Optymalne wyniki uzyskuje się przy użyciu Dako Target Retrieval Solution o
wysokim pH, nr kat. S 3308 lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA o pH 9,0. Natomiast Dako Target
Retrieval Solution, nr kat. S 1700 lub bufor cytrynianowy 10 mmol/L o pH 6.0 oraz przygotowanie tkanki z
proteinazą K okazały się nieskuteczne. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki podczas
przygotowania lub następującej po nim procedury barwienia immunocytochemicznego.
Skrawki zamrożone i przygotowanie komórek: Przeciwciało można stosować do znakowania zamrożonych
skrawków (1, 2)
Procedura barwienia
(108112-002)
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Plasma Cellnr kat. M 7077, można używać w
rozcieńczeniu w stosunku 1:50-1:100 podczas stosowania na skrawkach ludzkiego migdałka utrwalonych w
M 7077/PL/CE/16.12.02 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
formalinie i zatopionych w parafinie, stosując podwyższona temperaturę do odzyskiwania epitopu w Dako
Target Retrieval Solution, o wysokim pH, nr kat. S 3308 przez 20 minut oraz inkubację w temperaturze
pokojowej z pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od
próbki i metody przygotowania i powinny być określone przez każde z poszczególnych laboratoriów. Zalecaną
kontrolą ujemną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczona do takiego samego stężenia mysiej IgG jak
pierwsze przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona podczas
rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed użyciem lub
rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrolę dodatnią i ujemną należy wykonać
jednocześnie z testem próbki pacjenta.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 oraz K 4006. Zestaw Dako APAAP, nr kat. K 0670, stanowi dobrą alternatywę
dla zamrożonych skrawków i przygotowywania komórek, jeśli pod uwagę brane jest barwienie peroksydazą
endogenną. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu wizualizacji.
Ograniczenia specyficzne
dla produktu
Białko p63 nie jest swoiste dla komórek osocza i wykazano, że przeciwciało znakuje
zmienną część zarówno łagodnych znamion jak i złośliwych czerniaków (3). Ponadto przeciwciało znakowało
36/50 guzów neuroendokrynowych z różnych organów (4). W skrawkach zamrożonych można sporadycznie
zauważyć słabe znakowanie śródbłonkowe (2).
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują barwienie błony komórkowej i(lub) cytoplazmy.
Tkanki normalne: W tkankach zamrożonych i utrwalonych w formalinie komórki osocza są silnie znakowane
natomiast limfocyty krwi obwodowej dają wynik ujemny, chociaż sporadycznie można wykryć znakowanie
monocytów i neutrofili w zamrożonych skrawkach. Znakowanie komórek nabłonka obserwowane w zamrożonych
skrawkach jest znacznie ograniczone lub nieobecne w tkankach utrwalonych w formalinie. Ponadto obserwowano
niezidentyfikowane, silnie znakowane komórki wrzecionowate w obrębie zrębu niektórych tkanek (2).
Tkanki patologiczne: W tkankach utrwalonych w formalinie przeciwciało znakowało 7/7 szpiczaków, 4/4
szpiczaków (plasmocytoma), 7/7 chłoniaków limfoplazmatycznych i słabo 12/38 nieziarniczych chłoniaków
złośliwych olbrzymiokomórkowych linii B. Przeciwciało nie znakowało żadnego z 12 przypadków przewlekłej
białaczki limfatycznej, 6 chłoniaków centroblastycznych ośrodków rozmnażania, 4 białaczek
kosmatokomórkowych i 9 nieziarniczych chłoniaków złośliwych linii T (2).
Piśmiennictwo
1. Turley H, Banham A, Pulford K, Gatter K. BC28.11. B-cell blind panel: antibodies, recognizing the human
p63 protein. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al.,
editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International
Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.;
1997. p. 245-8.
2. Turley H, Jones M, Erber W, Mayne K, de Waele M, Gatter K. VS38: a new monoclonal antibody for
detecting plasma cell differentiation in routine sections. J Clin Pathol 1994;47:418-22.
3. Shanks JH, Banerjee SS. VS38 immunostaining in melanocytic lesions. J Clin Pathol 1996;49:205-7.
4. Banerjee SS, Shanks JH, Hasleton PS. VS38 immunostaining in neuroendocrine tumours. Histopathology
1997;30:256-9.
Objaśnienia symboli
(108112-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 7077/PL/CE/16.12.02 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17