CONFIRM anti-Cytokeratin 20 (SP33) Rabbit Monoclonal

CONFIRM anti-Cytokeratin 20 (SP33) Rabbit Monoclonal
Primary Antibody
przeprowadzania procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone do zestawu,
(3) Pobieranie próbek i przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości,
(5) Rozwiązywanie problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne ograniczenia.
MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE
790-4431
Nie dołączono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy VENTANA,
ani elementów pomocniczych, takich jak dodatnie i ujemne kontrolne preparaty tkankowe.
Nie wszystkie produkty przedstawione w ulotce dołączonej do opakowania są dostępne
we wszystkich rejonach geograficznych. Odpowiednich informacji udzieli lokalny
przedstawiciel odpowiedzialny za wsparcie techniczne.
05587760001
50
PRZECHOWYWANIE
PRZEZNACZENIE
To przeciwciało jest przeznaczone do
stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
Przeciwciało CONFIRM anti-Cytokeratin
20 (SP33) Rabbit Monoclonal Primary
Antibody (CONFIRM anti-Cytokeratin 20
antibody) firmy Ventana Medical
Systems (Ventana) jest skierowane
przeciwko cytokeratynie typu I
dojrzałych enterocytów i komórek
Rysunek 1. Odczyn cytoplazmatyczny
kubkowych żołądka i błony śluzowej
gruczolakoraka okrężnicy po barwieniu
jelit. Przeciwciało to wytwarza
odczynnikiem CONFIRM anti-Cytokeratin
cytoplazmatyczny wzór barwienia
20 (SP33) Rabbit Monoclonal Primary
i może być używane do identyfikacji
Antibody.
komórek wykazujących ekspresję
cytokeratyny 20 i komórek nowotworowych z linii nabłonka jelita grubego. Przeciwciało to
jest przeznaczone do jakościowego barwienia skrawków utrwalonych w formalinie i
zatopionych w parafinie.
Interpretacja kliniczna każdego wybarwienia lub jego braku musi zostać uzupełniona
badaniami histologicznymi oraz oceną odpowiednich próbek kontrolnych. Ocena wyniku
powinna być dokonywana przez wykwalifikowanego patologa, z uwzględnieniem
kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych.
PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA
Przeciwciało CONFIRM anti-Cytokeratin 20 (SP33) Rabbit Monoclonal Primary Antibody
barwi nabłonek żołądka, jelit i dróg moczowych oraz komórki Merkla naskórka1–4. Guzy
pochodzące z nabłonka wykazującego ekspresję cytokeratyny 20 są zwykle dodatnie3,5;
dotyczy to większości raków okrężnicy i odbytnicy, niektórych gruczolakoraków żołądka,
a także gruczolakoraków woreczka żółciowego, przewodu żółciowego i przewodów
trzustkowych. Gruczolakoraki śluzowe jajnika, raki komórek przejściowonabłonkowych
i raki komórek Merkla też są zwykle dodatnie4,6. Przeciwciało to rozpoznaje filamenty
pośrednie w cytoplazmie komórek dodatnich1.
CONFIRM anti-Cytokeratin 20 antibody to monoklonalne przeciwciało królicze skierowane
przeciwko końcowi karboksylowemu ludzkiej cytokeratyny 20. Przeciwciało to można
zwizualizować za pomocą produktu ultraView Universal DAB Detection Kit
(nr kat. 760-500; nr do zamawiania 05269806001). Dodatkowe informacje można znaleźć
w ulotkach dołączonych do opakowania produktu ultraView Universal DAB Detection Kit.
DOSTARCZANY ODCZYNNIK
Produkt CONFIRM anti-Cytokeratin 20 (SP33) Rabbit Monoclonal Primary Antibody
zawiera odczynnik w ilości wystarczającej do wybarwienia 50 preparatów.
Jeden dozownik produktu CONFIRM anti-Cytokeratin 20 antibody o pojemności 5 ml
zawiera około 9,5 µg króliczego przeciwciała monoklonalnego (SP33).
Przeciwciała są rozcieńczone w 0,05 M buforze Tris-HCl z dodatkiem 0,3% białka
nośnikowego i środka ProClin 300 w stężeniu 0,10% będącego konserwantem.
Całkowite stężenie białek w odczynniku wynosi około 3 mg/ml. Stężenie swoistego
przeciwciała wynosi około 1,9 μg/ml. Nie jest znana żadna nieswoista reaktywność
przeciwciał zawartych w tym produkcie.
CONFIRM anti-Cytokeratin 20 antibody jest rekombinowanym króliczym przeciwciałem
monoklonalnym, otrzymywanym jako oczyszczony supernatant z hodowli komórkowej.
Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki dołączonej do opakowania zestawu do detekcji
firmy VENTANA, aby uzyskać szczegółowy opis następujących kwestii: (1) Zasady
FT0700-410l
PRZYGOTOWANIE PRÓBKI
Do stosowania z tym pierwszorzędowym przeciwciałem nadają się rutynowo
przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem
stosowania zestawu do detekcji firmy Ventana i automatu do barwienia VENTANA
BenchMark XT lub BenchMark ULTRA. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek jest
10% obojętna zbuforowana formalina7. Preparaty należy niezwłocznie wybarwić,
ponieważ antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem ulegać osłabieniu.
Przy badaniu nieznanych preparatów zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli
dodatniej i ujemnej.
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
3.
4.
5.
6.
ZASADY POSTĘPOWANIA
2016-04-08
Po otrzymaniu i gdy odczynnik nie jest używany, należy go przechowywać w temperaturze
2–8°C. Nie zamrażać.
W celu zapewnienia właściwego dostarczenia odczynnika i stabilności przeciwciała po
każdym użyciu należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce
w pozycji pionowej.
Na każdym dozowniku przeciwciała podana jest data ważności. Prawidłowo
przechowywany odczynnik zachowuje trwałość do daty określonej na etykiecie.
Nie wolno stosować odczynnika po upływie daty ważności.
1/3
7.
8.
9.
Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego.
W tym odczynniku zastosowano środek ProClin 300 jako konserwant. Został on
uznany za środek drażniący i jego kontakt ze skórą może powodować uczulenie.
Podczas pracy z produktem należy stosować uzasadnione środki ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. Stosować
odpowiednią odzież i rękawice ochronne.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak
niebezpieczne materiały biologiczne i utylizować z zachowaniem właściwych
środków ostrożności.
Produkt ten zawiera nie więcej niż 1% surowicy bydlęcej, stosowanej do
wytwarzania przeciwciał.
Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu
odczynników z wrażliwymi miejscami spłukiwać obfitą ilością wody.
Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników ze względu na możliwość
otrzymania nieprawidłowych wyników.
W celu uzyskania informacji na temat zalecanej metody utylizacji produktu należy
skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub krajowymi.
Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie
charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach dotyczących
zagrożeń na stronie www.ventana.com.
PROCEDURA BARWIENIA
Przeciwciała pierwszorzędowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania
w automatach do barwienia VENTANA BenchMark XT lub BenchMark ULTRA wraz
z zestawami do detekcji i akcesoriami firmy VENTANA. Zalecane protokoły barwienia –
patrz Tabela 1.
Niniejsze przeciwciało zostało zoptymalizowane pod kątem określonego czasu inkubacji,
jednakże użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem
tego odczynnika.
Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane
zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat
procedury barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej do
opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji VENTANA.
1002585PL Rev B
Tabela 1. Zalecany protokół barwienia dla przeciwciała CONFIRM anti-Cytokeratin 20
z zestawem detekcyjnym ultraView Universal DAB Detection Kit w aparacie BenchMark
XT i w aparacie BenchMark ULTRA.
Typ procedury
Metoda
Odparafinowanie
Wybrana
Kondycjonowanie preparatu
komórkowego
(odsłanianie antygenu)
Cell Conditioning 1, standardowe
Enzym (proteaza)
Niewymagane
Przeciwciała (pierwszorzędowe)
Aparat BenchMark XT
16 minut, 37˚C
Aparat BenchMark ULTRA:
16 minut, 36˚C
Barwienie kontrastowe
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, a także różne warunki
środowiskowe i ogólne wyposażenie laboratoryjne, konieczne może być wydłużenie lub
skrócenie inkubacji przeciwciała pierwszorzędowego, kondycjonowania komórek albo
wstępnej obróbki proteazą dla poszczególnych próbek, w zależności od zastosowanej
metody detekcji i preferencji badacza. Więcej informacji na temat zmiennych związanych
z utrwalaniem zawiera pozycja „Immunohistochemistry Principles and Advances”8.
DODATNIA KONTROLA TKANKOWA
Przykładową tkankową kontrolą dodatnią dla tego przeciwciała są gruczolakoraki jelita
grubego albo tkanki zawierające komórki kubkowe i/lub enterocyty.
INTERPRETACJA WYBARWIENIA / OCZEKIWANE WYNIKI
Odczynnik CONFIRM anti-Cytokeratin 20 Rabbit Monoclonal Primary Antibody
charakteryzuje się cytoplazmatycznym schematem barwienia komórek.
SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA
Produkt CONFIRM anti-Cytokeratin 20 antibody został zoptymalizowany dla aparatów
Ventana BenchMark XT i BenchMark ULTRA w połączeniu z zestawem do detekcji
ultraView Universal DAB Detection Kit (REF 760-500) z 16-minutowym czasem inkubacji
przeciwciał pierwszorzędowych. Jednakże użytkownik jest zobowiązany do walidacji
poszczególnych wyników uzyskanych z zastosowaniem tego odczynnika. Niektóre tkanki
wykazały rozproszone zabarwienie tła makrofagów, ale wzór otrzymany w przypadku
makrofagów nie jest podobny do swoistego wzorca barwienia cytokeratyny 20 w tkankach
dodatnich.
CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA
Przeprowadzono badania barwienia odczynnikiem pod kątem jego swoistości, czułości
i powtarzalności, a wyniki zostały zamieszczone w Tabeli 2, Tabeli 3 oraz w sekcji
Powtarzalność.
Swoistość
Tabela 2. Swoistość odczynnika CONFIRM anti-Cytokeratin 20 antibody oceniano na
podstawie badania próbek tkanek zdrowych, utrwalonych w formalinie i zatopionych
w parafinie.
Liczba dodatnich/
wszystkich
przypadków
Tkanka
Liczba dodatnich/
wszystkich
przypadków
Jądro
0/3
Ślinianka
0/3
Tarczyca
0/3
Nerka
0/3
Sutek
0/3
Gruczoł krokowy
0/3
Śledziona
0/3
Endometrium
0/3
Migdałek
0/3
Szyjka macicy
0/3
Grasica
0/3
Mięśnie
szkieletowe
0/3
Szpik kostny
0/3
Skóra
1/3
Serce
0/3
Nerwy (nieliczne)
0/3
Mezotelium
i płuco
0/3
Płuco
0/3
Tkanka
a.
Ta kategoria tkanek obejmuje nienowotworowe przypadki zapalne lub
chorobowe.
Czułość
Tabela 3. Czułość preparatu CONFIRM anti-Cytokeratin 20 antibody określono poprzez
badanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie próbek tkanek
nowotworowych.
Nowotwór
Liczba
dodatnich/wszyst
kich przypadków
Glejak
0/1
Oponiak atypowy
0/1
Wyściółczak złośliwy
0/1
Skąpodrzewiak złośliwy
0/1
Surowiczy brodawkowaty gruczolakorak jajnika
0/1
Śluzowy gruczolakorak brodawczakowaty jajnika
0/1
Rak komórek wysp trzustkowych
0/1
Gruczolakorak trzustki
0/1
Nasieniak
0/1
Rak zarodkowy
0/1
Rak rdzeniowy tarczycy
0/1
Rak brodawkowaty tarczycy
0/1
Rak wewnątrzprzewodowy sutka
0/1
Inwazyjny przewodowy rak sutka
0/1
Rak zrazikowy sutka in situ9
1/1
Liczba dodatnich/
wszystkich
przypadków
Tkanka
Liczba dodatnich/
wszystkich
przypadków
Mózg
0/2
Przełyk
0/3
Rak płaskonabłonkowy płuca
0/1
Jajnik
0/3
Żołądek
3/3
Gruczolakorak płuca
0/1
Trzustka
0/3
Jelito cienkie
3/3
Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuca
1/1
Przytarczyce
0/3
Okrężnicaa
34/34
Rak płaskonabłonkowy przełyku
0/1
Przysadka
0/3
Wątroba
Gruczolakorak przełyku
0/1
Tkanka
2016-04-08
FT0700-410l
0/3
2/3
1002585PL Rev B
Nowotwór
Powtarzalność
Liczba
dodatnich/wszyst
kich przypadków
Gruczolakorak okrężnicy
54/65
Gruczolakorak śluzowy okrężnicy
13/13
Przeprowadzono badania powtarzalności dla CONFIRM anti-Cytokeratin 20 antibody w
celu określenia:
·
odtwarzalności wyników między seriami przeciwciał;
·
odtwarzalności w obrębie jednej lub kilku serii na aparacie BenchMark XT;
·
odtwarzalności wyników w obrębie platformy przy użyciu aparatu BenchMark XT
oraz aparatu BenchMark ULTRA;
·
odtwarzalności wyników między platformami dla aparatów BenchMark XT i
BenchMark ULTRA.
Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy.
Gruczolakorak sygnetowatokomórkowy okrężnicy
2/2
Gruczolak okrężnicy
2/2
Gruczolak cewkowo-kosmkowy okrężnicy
3/3
Gruczolakowate polipy okrężnicy
3/3
Hiperplastyczne polipy okrężnicy
2/2
Rak kolczystokomórkowy okrężnicy
1/5
Gruczolakorak śluzowy żołądka
0/1
Gruczolakorak jelita cienkiego
1/1
Nowotwór podścieliskowy przewodu pokarmowego (GIST)
0/3
Gruczolakorak odbytnicy
0/1
Rak wątrobowokomórkowy
0/1
Wątrobiak zarodkowy
0/1
Rak jasnokomórkowy
0/1
Rak gruczołowy gruczołu krokowego
0/1
Rak z komórek przejściowych gruczołu krokowego
1/1
Mięśniak gładkokomórkowy
0/1
Gruczolakorak błony śluzowej macicy
0/1
8.
Rak jasnokomórkowy endometrium
0/1
9.
Rak płaskonabłonkowy szyjki macicy
0/2
Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy
0/1
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
Czerniak
0/1
Rak podstawnokomórkowy
0/1
Rak kolczystokomórkowy skóry
0/1
CONFIRM, ultraView, BENCHMARK, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami
towarowymi firmy Roche.
Wszystkie pozostałe znaki towarowe stanowią własność odnośnych właścicieli.
© 2016 Ventana Medical Systems, Inc.
Nerwiakowłókniak
0/1
Nerwiak niedojrzały przestrzeni pozaotrzewnowej
0/1
Międzybłoniak nabłonkowy złośliwy
0/1
Chłoniak
0/4
Rak przejściowokomórkowy pęcherza moczowego
1/1
Mięsak gładkokomórkowy
0/2
Kostniakomięsak prawej kości udowej
0/1
Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych
0/1
Przerzuty gruczolakoraka okrężnicy
11/14
Przerzuty gruczolakoraka śluzowego okrężnicy
9/13
Przerzuty raka sygnetowatokomórkowego okrężnicy
2/2
2016-04-08
FT0700-410l
PIŚMIENNICTWO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Zhou Q, Toivola D, et al. Keratin 20 Helps Maintain Intermediate Filament
Organization in Intestinal Epithelia. Molecular Biology of the Cell. July 2003;14:
2959-71.
Moll R, Zimbelmann R, et al. The Human Gene Encoding Cyokeratin 20 and its
Expression During Fetal Development and in Gastrointestinal Carcinomas.
Differentiation. 1993;53: 75-93.
Moll R, Lowe A, et al. Cytokeratin 20 in Human Carcinomas: A New Histodiagnostic
Marker Detected by Monoclonal Antibodies. American Journal of Pathology.
Feb 1992;140(2):427-447.
Chan J, Suster S, et al. Cytokeratin 20 Immunoreactivity Distinguishes Merkel Cell
(Primary Cutaneous Neuroendocrine) Carcinomas and Salivary Gland Small Cell
Carcinomas from Small Cell Carcinomas of Various Sites. American Journal of
Surgical Pathology. Feb 1997;21(2): pp226-234.
Zhou Q, Cadrin M, et al. Keratin 20 Serine 13 Phosphorylation is a Stress and
Intestinal Goblet Cell Marker. Journal of Biological Chemistry. Jun 2006;281(24):
16453-16461.
Kyung-Joon M, Byung-Chul J, et al. Intestinal Adenocarcinoma Arising in a Mature
Cystic Teratoma of the Ovary: A Case Report. Pathology Research and Practice.
2006;202:531-535.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition.
Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of
Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. (NR Rose Ed.) ASM Press, 2002.
Tot T. Patterns of Distribution of Cytokeratins 20 and 7 in Special Types of Invasive
Breast Carcinoma: A study of 123 cases. Annals of Diagnostic Pathology.
Dec 1999;3(6):350-356.
DANE KONTAKTOWE
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventana.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
3/3
1002585PL Rev B