Nr kat. IR606
Transkrypt
Nr kat. IR606
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Desmin Klon D33 Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR606 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Desmin, klon D33, Ready-to-Use, (Link), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich i prąŜkowanych oraz komórki międzybłonka oraz jest przydatne w identyfikacji mięsaków prąŜkowanokomórkowych (1, 2), mięśniaków gładkokomórkowych, (3, 4) i międzybłoniaków (5). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Streszczenie i informacje ogólne Desmina naleŜy do klasy III filamentów pośrednich, będąc częścią cytoszkieletu, jest charakterystycznym filamentem pośrednim wszystkich trzech typów komórek mięśniowych (szkieletowych, serca i mięśni gładkich). Desmina jest białkiem o masie cząsteczkowej 53-kDa kodowanym przez 9 eksonów genu zlokalizowanego przy 2q35. Desmina tworzy sieć cytoszkieletu wzdłuŜ włókna mięśniowego, otaczając plazmę i błonę komórkową. Jest zlokalizowana głównie w obszarach subplasmolemicznych i prąŜku Z (6). Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Materiały wymagane, ale niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i roztwór azydku sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: D33. Izotyp: IgG1, kappa. Immunogen Oczyszczona desmina ludzkich mięśni. Swoistość W testach Western Blot preparatów cytoszkieletu komórek MCF-7 komórki SCC-4 i RT-112s, epidermy skóry, hodowli pierwotnej komórek raków z nerek, mięśniaka gładkiego, serca płodu i surowego ekstraktu z ludzkiej istoty białej mózgu przeciwciało znakuje tylko prąŜek o masie cząsteczkowej ~53 kDa w preparatach mięśniaka gładkiego i serca płodu, co wskazuje reaktywność z desminą i potwierdza brak reaktywności z innymi typami badanych filamentów pośrednich (7). W badaniach immunohistochemicznych na tkankach utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie przeciwciało wykazuje reaktywność krzyŜową z białkowym odpowiednikiem desminy u myszy i szczurów. Środki ostroŜności 1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). (115479-002) Dako Denmark A/S IR606/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować okręŜnicę, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse, (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja odczynu Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn cytoplazmatyczny. Barwienie moŜe wykazać odczyn włókienkowy (7). Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich naczyń i przełyku (3). W 8/10 przypadków tkanek utrwalonych przeciwciało znakuje komórki międzybłonka (5). Tkanka prawidłowa szpiku kostnego, nerek, sutka, gruczołu krokowego, mózgu (istota szara), jelita czczego, gruczołu tarczycy, płuca, okręŜnicy, Ŝołądka, moczowodu i migdałków wykazuje brak odczynu z wyjątkiem komórek pochodzenia mięśniowego (1). Komórki mięśni gładkich błony mięśniowej w okręŜnicy wykazują odczyn umiarkowany do silnego, natomiast komórki mięśni gładkich w małych naczyniach w blaszce właściwej wykazują odczyn słaby do umiarkowanego. Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało znakuje 4/4 przypadki mięsaka prąŜkowanokomórkowego (1). W ludzkim przełyku przeciwciało znakuje 35/35 przypadków mięśniaka gładkokomórkowego, 1/3 przypadki mięśniakomięsaków gładkokomórkowych i 3/17 guzów komórek podścieliska (3). Ponadto przeciwciało znakuje 33/33 przypadki mięśniaków gładkokomórkowych macicy o intensywnym podziale komórkowym (4). Oznakowane zostały takŜe 8/16 przypadków złośliwego, rozsianego międzybłoniaka opłucnej (5). W ludzkich polipach pochwy i wewnątrzszyjkowych przeciwciało znakowało komórki zrębu w tle i nietypowe komórki zrębu w zakresie warstwy podnabłonkowej (8). Brak odczynu odnotowano w 10 przypadkach kaŜdego nerwiaka niedojrzałego, chłoniaka, guza Wilmsa, pierwotnych guzów neuroektodermalnych i retinoblastomy (2), a takŜe 4 przypadkach raka drobnokomórkowego płuc, 3 przypadkach mięsaka Ewinga (1) i 6 przypadkach guzów zrębowych endometrium (4). (115479-002) Dako Denmark A/S IR606/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Piśmiennictwo 1. Chang TK, Li CY, Smithson WA. Immunocytochemical study of small round cell tumors in routinely processed specimens. Arch Pathol Lab Med 1989;113:1343-8. 2. Pollock L, Rampling D, Greenwald SE, Malone M. Desmin expression in rhabdomyosarcoma: influence of the desmin clone and immunohistochemical method. J Clin Pathol 1995;48:535-8. 3. Miettinen M, Sarlomo-Rikala M, Sobin LH, Lasota J. Esophageal stromal tumors. A clinicopathologic, immunohistochemical, and molecular genetic study of 17 cases and comparison with esophageal leiomyomas and leiomyosarcomas. Am J Surg Pathol 2000;24:211-22. 4. Oliva E, Young RH, Clement PB, Bhan AK, Scully RE. Cellular benign mesenchymal tumors of the uterus. A comparative morphologic and immunohistochemical analysis of 33 highly cellular leiomyomas and six endometrial stromal nodules, two frequently confused tumors. Am J Surg Pathol 1995;19:757-68. 5. Hurlimann J. Desmin and neural marker expression in mesothelial cells and mesotheliomas. Hum Pathol 1994;25:753-7. 6. Goebel HH, Warlo IAP. Progress in desmin-related myopathies (review). J Child Neurol 2000;15:565-72. 7. Van Muijen GNP, Ruiter DJ, Warnaar SO. Coexpression of intermediate filament polypeptides in human fetal and adult tissues. Lab Invest 1987;57:359-69. 8. Pitt MA, Roberts ISD, Agbamu DA, Eyden BP. The nature of atypical multinucleated stromal cells: a study of 37 cases from different sites. Histopathol 1993;23:137-45. Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania ZuŜyć przed Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Zawartość wystarcza na <n> testów Producent Sprawdzić w instrukcji stosowania Numer serii (115479-002) Dako Denmark A/S IR606/PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17