(Dako Autostainer/Autostainer Plus) Nr kat. IS643
Transkrypt
(Dako Autostainer/Autostainer Plus) Nr kat. IS643
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD7 Klon CBC.37 Ready-to-Use (Dako Autostainer/Autostainer Plus) Nr kat. IS643 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD7, klon CBC.37, Ready-to-Use, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Dako Autostainer/Autostainer Plus.. CD7 ulega ekspresji w większości limfocytów T z krwi obwodowej, większości naturalnych komórek cytotoksycznych i we wszystkich tymocytach. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji chłoniaków z komórek T (1). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Podsumowanie i wyjaśnienie CD7 to transbłonowa, jednołańcuchowa glikoproteina o masie cząsteczkowej 40 kD, naleŜąca do nadrodziny immunoglobulin (2). Obecność lub brak białka CD7, będącego jednym z najwcześniejszych antygenów powierzchniowych linii komórek T i naturalnych komórek cytotoksycznych, jest markerem przydatnym w klasyfikacji złośliwych nowotworów z takich komórek. CD7 wykazuje ekspresję w większości niedojrzałych złośliwych limfocytów T, tj. w ostrej białaczce limfoblasytycznej (ALL) oraz w komórkach chłoniaka limfoblastycznego z limfocytów T. Obecność CD7 stwierdzano takŜe w białaczkach z naturalnych komórek cytotoksycznych, w tym w zespołach ALL dodatnich na obecność CD16 i CD56 oraz w zespole białaczki z duŜych ziarnistych limfocytów z naturalnymi komórkami cytotoksycznymi dodatnimi na obecność CD7 (3). Cząsteczki CD7 nie występują w podzbiorze ludzkich limfocytów T w określonych warunkach fizjologicznych i patologicznych. Z tego względu CD7-ujemne limfocyty T występują w niektórych zapalnych chorobach skóry, zaś białko CD7 nie występuje w wielu nowotworach z dojrzałych limfocytów T, zwłaszcza pierwotnych skóry (1). Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Odczynnik dostarczony Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: CBC.37 (1). Izotyp: IgG2b, kappa. Immunogen Linia limfocytóww T CEM (ATCC CCL-199), linia limfoblastoidalnych komórek T, pochodzących od pacjenta cierpiącego na ostrą białaczkę limfoblastyczną (1). Swoistość Analiza SDS-PAGE immunoprecypitatów wytwarzanych w reakcji między lizatami komórek CEM a przeciwciałem wykazuje, Ŝe precypitat jest polipeptydem o masie 40 kD, będącym odpowiednikiem białka CD7 (1). Środki ostroŜności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować właściwe procedury postępowania. 4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne. 5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, oraz gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie preparatów cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (10x) (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8015). Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, które zostały odparafinowane, zalecany jest odczynnik Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. (118908-003) Dako Denmark A/S IS643/PL/SSM/2009.06.09 str. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Law pH (10x), (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8015). Dla aparatów PT Link naleŜy stosować następujące parametry: 97°C przez 20 (±1) minut, ochłodzi ć do 65°C. Usun ąć statywy na szkiełka aparatu Autostainer wraz ze szkiełkami ze zbiornika aparatu PT Link i natychmiast zanurzyć szkiełka w słoju/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat. PT109) wypełnionym rozcieńczonym EnVision FLEX Wash Buffer (10x), (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8012) o temperaturze pokojowej. Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1 – 5 minut. Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek zarówno odparafinowanie, jak i odmaskowanie moŜna wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje moŜna znaleźć w Instrukcji uŜytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe naleŜy poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003). Procedura barwienia oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8012), zastępując odczynnik High pH Target Retrieval Solution z tego zestawu odczynnikiem EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (10x), (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8015). Kolejne kroki barwienia oraz czasy inkubacji zaprogramowano wstępnie w oprogramowaniu aparatów Dako Autostainer/Autostainer Plus, przy uŜyciu następujących protokołów: Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (200 µL dozowanych odczynników) lub FLEXRTU3 (300 µL dozowanych odczynników) Autoprogram: CD7 (bez barwienia kontrastowego) lub CD7H (z barwieniem kontrastowym) Dla etapu „Auxiliary” naleŜy ustawić opcję „rinse buffer ” w programach barwienia ≤10 szkiełek. W przypadku programów barwienia >10 szkiełek etap Auxiliary naleŜy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy płukania.. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Dako Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z róŜnym nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS750). Interpretacja wybarwienia Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn błonowy. Charakterystyka działania Tkanki normalne: W grasicy przeciwciała dają silny odczyn z komórkami limfoidalnymi rdzenia i kory. W węzłach chłonnych i migdałkach silny odczyn występuje w międzygrudkowych limfocytach T. Nie obserwuje się odczynu w pozostałych prawidłowych tkankach ludzkich, w których silnie znakowane są tylko małe komórki T (1). W migdałkach, stłoczone komórki T w strefie T wykazują silny odczyn, podczas gdy izolowane komórki T w ośrodkach rozmnaŜania migdałków wykazują odczyn umiarkowany do silnego. Tkanki patologiczne: Spośród 110 przebadanych chłoniaków z limfocytów T wszystkie chłoniaki limfoblastyczne z limfocytów T dawały silny odczyn dodatni z przeciwciałem (n=15), natomiast tylko 25/95 obwodowych nowotworów z limfocytów T dawało odczyn dodatni. Zwracała uwagę duŜa wartość diagnostyczna CD3+, fenotypu limcofytów T z CD7 w diagnostyce zajmowania węzłów chłonnych przez chłoniaka skóry z limfocytów T. W róŜnych kategoriach choroby Hodgkina (n=15) komórki nowotworowe dawały konsekwentnie odczyn ujemny, a komórki Reed-Sternberga były często otoczone silnie wybarwionymi małymi limfocytami T. Wszystkie oprócz jednej z 35 chłoniaków z komórek B dały odczyn ujemny z przeciwciałem, które znakowało tylko małe reaktywne komórki T. Nowotwory nielimfoidalne (n=69) konsekwentnie dawały odczyn ujemny — zgodnie z oczekiwaniami znakowane były jedynie małe reaktywne limfocyty T (1). Piśmiennictwo (118908-003) Dako Denmark A/S 1. Al Saati T, Alibaud L, Lamant L, Boyes J, March M, Delsol G. A new monoclonal anti-CD7 antibody reactive on paraffin sections. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2001;9:289-96. 2. Bowen MA. TC8. CD7 Workshop Panel Report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 62-3. 3. Sempowski GD, Lee DM, Kaufman RE, Haynes BF. Structure and function of the CD7 molecule. Crit Rev Immunol 1999;19:331-48. IS643/PL/SSM/2009.06.09 str. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Obja śnienie s ym boli Nume r kata lo go wy Temp era tu ra p rzec ho wywa ni a Zu Ŝyć p rzed Wyr ób me dycz ny d o d ia gn ostyki i n vi tro Zawa rtość wystarcz a na <n > te stów Prod uce nt Sp ra wdz ić w i nstru kcji sto sow an ia Nu mer se rii (118908-003) Dako Denmark A/S IS643/PL/SSM/2009.06.09 str. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17