VENTANA anti-E-cadherin (36) Mouse Monoclonal Primary
Transkrypt
VENTANA anti-E-cadherin (36) Mouse Monoclonal Primary
VENTANA anti-E-cadherin (36) Mouse Monoclonal Primary Antibody DOSTARCZANY ODCZYNNIK 790-4497 05905290001 50 PRZEZNACZENIE VENTANA anti-E-cadherin (36) Mouse Monoclonal Primary Antibody (VENTANA anti-E-cadherin (36)) jest skierowane przeciwko domenie cytoplazmatycznej ludzkiego białka transbłonowego kadheryna E (ang. E-cadherin), ulegającego ekspresji jako część kompleksu odpowiedzialnego za adhezję pomiędzy komórkami w tkankach nabłonkowych. Rysunek 1. VENTANA anti-E-cadherin Ograniczenie lub zatrzymanie ekspresji (36) Barwienie w raku przewodowym wiązano z inwazyjnymi nowotworami i prawdopodobieństwem przerzutów rozlicznych nowotworów. Przeciwciało to można stosować dla wspomagania diagnozy różnicowej zrazikowego raka sutka, in situ i/lub inwazyjnego, i przewodowego raka sutka, in situ i/lub inwazyjnego. Przeciwciało jest przeznaczone do jakościowego barwienia skrawków tkankowych utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego patologa w połączeniu z badaniem histologicznym, odnośnymi danymi klinicznymi i właściwymi badaniami kontrolnymi. To przeciwciało jest przeznaczone do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA Kadheryna E jest białkiem adhezyjnym o masie 120 kD, związanym z błoną cytoplazmatyczną komórek nabłonkowych i będącym supresorem nowotworzenia.1 Kadheryna E wraz z kateninami pełni funkcję wapniowozależnego regulatora ścisłej adhezji pomiędzy komórkami nabłonka.2 W procesach nowotworowych zaburzenia kadheryny E skutkują utratą lokalizacji tego białka w błonie komórkowej i są skorelowane z utratą zdolności do adhezji oraz ze wzrostem zdolności nowotworów do inwazji i przerzutów.3 Przeciwciała przeciwko kadherynie E były stosowane przy licznych nowotworach, przy czym najwięcej publikacji dotyczy nowotworów sutka i płuc. W prawidłowych komórkach przewodowych sutka kadheryna E ulega silnej ekspresji w błonach komórkowych. W nowotworach z linii komórek przewodowych nadal utrzymuje się wzorzec błonowy barwienia kadheryny E, zaś w nowotworach z linii zrazikowej często pojawia się nieprawidłowe rozmieszczenie kadheryny E (w tym często w cytoplazmie) lub brak reaktywności kadheryny E.4, 5 W niektórych badaniach skłaniano się do wniosku, że rak zrazikowy daje ujemny wynik barwienia kadheryny E, zaś rak przewodowy – dodatni, co prawdopodobnie zależy od grupy badanych, których wyniki podlegały ocenie, oraz od zastosowanego klonu przeciwciał przeciwko kadherynie E.6–8 Liczne raki zrazikowe nie wykazują barwienia klonem 36 przeciwko białku kadheryny E, jednak obserwuje się barwienie w obrębie cytoplazmy wraz z częściowym, bardzo słabym i punktowym barwieniem błony. Ponadto w piśmiennictwie dla klonu 36 przeciwko kadherynie E wykazano jądrowy wzór barwienia w kilku rodzajach nowotworów.9 Ponieważ kliniczna istotność jądrowego barwienia kadheryny E nie jest w pełni poznana, patolog powinien zwrócić uwagę na obecność jądrowego wzoru barwienia i zachować ostrożność podczas interpretowania preparatów z barwieniem kadheryny E. Obecnie informacje kliniczne należy opierać wyłącznie na błonowym wzorze barwienia, a wszystkie inne wzory barwienia należy uznawać za odbiegające od normy. Sugeruje się, że w płucach kadheryna E jest użyteczna w odróżnianiu międzybłoniaka od gruczolakoraka płuc, przy czym gruczolakoraki dają wyniki dodatnie, a wiele międzybłoniaków daje wyniki ujemne. Międzybłoniaki z komórek wrzecionowatych dają najczęściej wyniki ujemne dla kadheryny E, podczas gdy 48% międzybłoniaków nabłonkowatych wykazuje reaktywność dla kadheryny E.10 2014-09-01 FT0700-410k 1/4 VENTANA anti-E-cadherin (36) zawiera odczynnik w ilości wystarczającej na 50 testów. Jeden dozownik VENTANA anti-E-cadherin (36) o pojemności 5 ml zawiera około 1,57 μg mysich przeciwciał monoklonalnych. Przeciwciała są rozcieńczone w buforze fosforanowym o stężeniu 0,1 M, z dodatkiem 0,3% białka nośnikowego i środka ProClin 300 w stężeniu 0,10%, będącego konserwantem. Całkowite stężenie białek w odczynniku wynosi około 3 mg/ml. Stężenie swoistego przeciwciała wynosi około 0,314 μg/ml. Nie występuje żadna znana nieswoista reaktywność przeciwciała zawartego w tym produkcie. VENTANA anti-E-cadherin (36) jest przeciwciałem monoklonalnym wytwarzanym z supernatantu kultury tkankowej. Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki dołączonej przez firmę VENTANA do opakowania zestawu do detekcji, aby uzyskać szczegółowy opis następujących zagadnień: (1) Zasady przeprowadzania procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone do zestawu, (3) Pobranie próbki i przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości, (5) Rozwiązywanie problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne ograniczenia. MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE Nie dołączono odczynników do barwienia, takich jak produkowane przez firmę VENTANA zestawy do detekcji (ultraView Universal DAB Detection Kit), ani elementów pomocniczych, takich jak dodatnie i ujemne kontrolne preparaty tkankowe. Nie wszystkie produkty przedstawione w ulotce dołączonej do opakowania są dostępne we wszystkich rejonach geograficznych. Należy skonsultować się z lokalnym przedstawicielem odpowiedzialnym za wsparcie techniczne. PRZECHOWYWANIE Po otrzymaniu i gdy preparat nie jest używany, należy go przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać. W celu zapewnienia właściwego dostarczenia odczynnika i stabilności przeciwciał należy po każdym użyciu założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce w pozycji pionowej. Na każdym dozowniku przeciwciał podana jest data ważności. Prawidłowo przechowywany odczynnik pozostaje stabilny do daty określonej na etykiecie. Nie wolno stosować odczynnika po upływie daty ważności. PRZYGOTOWANIE PRÓBKI Do stosowania z tym pierwszorzędowym przeciwciałem nadają się rutynowo przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem stosowania zestawu do detekcji firmy VENTANA i automatu do barwienia VENTANA BenchMark XT lub BenchMark ULTRA. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek jest 10% obojętna zbuforowana formalina.11 Preparaty należy niezwłocznie wybarwić, ponieważ antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem ulegać osłabieniu. Przy badaniu nieznanych preparatów zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli dodatniej i ujemnej. OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego. Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały niebezpieczne biologicznie i utylizować z zachowaniem właściwych środków ostrożności. Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu z wrażliwymi miejscami spłukiwać dużą ilością wody. Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników. Może ono powodować nieprawidłowe wyniki. W celu uzyskania informacji na temat zalecanej metody utylizacji produktu należy skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub krajowymi. Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach określających zagrożenie na stronie www.ventana.com. 1007821PL Rev C PROCEDURA BARWIENIA POZYTYWNA KONTROLA TKANKOWA Przeciwciała pierwszorzędowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania w automatach do barwienia VENTANA BenchMark XT lub BenchMark ULTRA wraz z zestawami do detekcji i akcesoriami firmy VENTANA. Zalecane protokoły barwienia dla aparatów BenchMark XT i BenchMark ULTRA z zestawem ultraView Universal DAB Detection Kit przedstawiono w Tabela 1. Zalecane protokoły barwienia dla aparatów BenchMark XT z zestawem iView DAB Detection Kit przedstawiono w Tabela 2. Te przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji, jednakże użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego odczynnika. Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi aparatu. Więcej informacji na temat procedury barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej do opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA. Przykładem pozytywnej kontroli tkankowej dla tego przeciwciała jest tkanka nowotworowa przewodowego raka sutka. Barwienie dodatnie w komórkach nowotworowych powinno być podobne do prawidłowego poziomu ekspresji w przewodach sutka. Oczekiwany wzór barwienia komórek dla VENTANA anti-E-cadherin (36) jest błonowy. Barwienie cytoplazmatyczne i jądrowe jest uznawane za odbiegające od normy i powinno być interpretowane zgodnie z opisem w części „Podsumowanie i objaśnienia” niniejszego dokumentu. Tabela 1. Zalecane protokoły barwienia dla odczynnika VENTANA anti-E-cadherin (36) z użyciem zestawu do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit na aparatach BenchMark XT i BenchMark ULTRA. CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA Typ procedury Metoda Odparafinowanie Wybrana Kondycjonowanie preparatu komórkowego (odsłanianie antygenu) Standardowa Cell Conditioning 1 Enzym (proteaza) Niewymagana Przeciwciała (pierwszorzędowe) Aparat BenchMark XT Około 16 minut, 37°C Aparat BenchMark ULTRA Około 24 minut, 36°C Procedura opcjonalna (np. płukanie, amplifikacja itp.) Brak Barwienie kontrastowe Hematoxylin II, 4 minuty Po barwieniu kontrastowym Bluing, 4 minuty INTERPRETACJA WYBARWIENIA / OCZEKIWANE WYNIKI SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA To przeciwciało zostało zoptymalizowane dla 16-minutowego czasu inkubacji w aparacie BenchMark XT oraz 24-minutowego czasu inkubacji w aparacie BenchMark ULTRA w połączeniu z zestawem do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit, jednak użytkownik musi dokonać walidacji wyników uzyskanych przy pomocy tego odczynnika. Przeprowadzono badania pod kątem swoistości, czułości i odtwarzalności barwienia preparatem VENTANA anti-E-cadherin (36) z użyciem zestawu do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit oraz aparatów BenchMark XT i BenchMark ULTRA. Swoistość Tabela 3. Swoistość preparatu VENTANA anti-E-cadherin (36) oceniano na podstawie badania próbek tkanek zdrowych, utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Liczba pozytywnych/ wszystkich przypadków Tkanka Liczba pozytywnych/ wszystkich przypadków Mózg 0/3 Grasica 0/3 Móżdżek 0/3 Szpik kostny 0/3 Nadnercze 0/3 Płuco 0/3 Jajnik 0/3 Serce 0/3 Trzustka 3/3 Przełyk 3/3 Przytarczyce 3/3 Żołądek 3/3 Przysadka 3/3 Jelito cienkie 3/3 Tkanka Tabela 2. Zalecany protokół barwienia dla odczynnika VENTANA anti-E-cadherin (36) z użyciem zestawu do detekcji iView DAB Detection Kit na aparacie BenchMark XT. Typ procedury Metoda Jądra 0/3 Okrężnica 2/3 Tarczyca 3/3 Wątroba 3/3 Sutek 3/3 Ślinianka 3/3 Śledziona 3/3 Nerka 3/3 Migdałek 3/3 Gruczoł krokowy 3/3 Błona śluzowa trzonu macicy 3/3 Szyjka macicy 2/2 Mięśnie szkieletowe 0/3 Skóra 3/3 Nerwy (nieliczne) 0/3 Mezotelium i płuco 0/3 Odparafinowanie Wybrana Kondycjonowanie preparatu komórkowego (odsłanianie antygenu) Standardowa Cell Conditioning 1 Enzym (proteaza) Niewymagana Przeciwciała (pierwszorzędowe) Aparat BenchMark XT Około 16 minut, 37°C Procedura opcjonalna (np. płukanie, amplifikacja itp.) Brak Barwienie kontrastowe Hematoxylin II, 4 minuty Po barwieniu kontrastowym Bluing, 4 minuty Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, a także różne warunki środowiskowe i ogólne wyposażenie laboratoryjne, konieczne może być wydłużenie lub skrócenie inkubacji przeciwciała pierwszorzędowego, kondycjonowania komórek albo wstępnej obróbki proteazą dla poszczególnych próbek, w zależności od zastosowanej metody detekcji i preferencji badacza. Więcej informacji na temat zmiennych związanych z utrwalaniem zawiera pozycja „Immunohistochemistry Principles and Advances”.12 2014-09-01 FT0700-410k 2/4 1007821PL Rev C Czułość Tabela 4. Czułość preparatu VENTANA anti-E-cadherin (36) oceniano na podstawie badania próbek tkanek nowotworowych utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Nowotwór Liczba pozytywnych/ wszystkich przypadków Glejak 0/1 Oponiak atypowy 1/1 Wyściółczak złośliwy 0/1 Skąpodrzewiak złośliwy 0/1 Surowiczy gruczolakorak brodawkowaty 1/1 Śluzowy gruczolakorak brodawkowaty 1/1 Rak z komórek wyspowych 0/1 Gruczolakorak trzustki 1/1 Nasieniak 1/1 Rak zarodkowy 0/1 Rak rdzeniowy 1/1 Rak brodawkowaty 1/1 Rak wewnątrzprzewodowy sutka Rak zrazikowy sutka in situ Nowotwór 25/28 1/1 Inwazyjny przewodowy rak sutka 165/192 Inwazyjny rak zrazikowy sutka 41/57* Chłoniak rozlany z limfocytów B 0/1 Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuc 1/17 Rak kolczystokomórkowy płuc 49/54 Gruczolakorak płuc 38/43 Liczba pozytywnych/ wszystkich przypadków Rak jasnokomórkowy błony śluzowej macicy 1/1 Rak płaskonabłonkowy macicy 2/2 Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy 0/1 Rak podstawnokomórkowy 1/1* Rak kolczystokomórkowy 1/1 Nerwiakowłókniak 0/1 Nerwiak niedojrzały zaotrzewnowy 0/1 Międzybłoniak złośliwy nabłonkowy 1/1 Chłoniak złośliwy rozlany 0/1 Chłoniak Hodgkina 0/1 Chłoniak złośliwy rozlany 0/1 Rak z komórek przejściowych pęcherza moczowego 1/1 Mięsak gładkokomórkowy wysoko zróżnicowany 0/1 Kostniakomięsak 0/1 Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych 0/1 Mięsak gładkokomórkowy o umiarkowanym stopniu złośliwości 1/1* Czerniak złośliwy 0/1 *barwienie cytoplazmatyczne lub ogniskowe błony komórkowej Powtarzalność między różnymi partiami Określono na podstawie równoległego barwienia 1 zestawu tkanek (3 tkanki na zestaw) z 3 partii za pomocą aparatu BenchMark XT. Uzyskano równoważne wyniki we wszystkich 3 partiach. Powtarzalność między seriami odczynów Określona na podstawie barwienia 2 zestawów tkanek (3 tkanki na zestaw, łącznie 6 tkanek) w 50 preparatach za pomocą aparatu BenchMark XT przez 5 nienastępujących po sobie dni. Dla 150 z 150 preparatów uzyskano równoważne wyniki. Rak płaskonabłonkowy przełyku 1/1 Gruczolakorak przełyku 1/1 Śluzowy gruczolakorak żołądka 0/1 Określono na podstawie równoległego barwienia 2 zestawów tkanek (3 tkanki na zestaw, łącznie 6 tkanek) w 28 preparatach za pomocą aparatu BenchMark XT. Dla 84 z 84 preparatów uzyskano identyczne wyniki. Gruczolakorak przewodu pokarmowego 1/1 Powtarzalność w ramach platformy Nowotwór podścieliskowy przewodu pokarmowego (GIST) 0/1 Rak z komórek wątrobowych 1/1 Wątrobiak zarodkowy 0/1 Rak jasnokomórkowy nerki 0/1 Gruczolakorak prostaty 1/1 Rak z komórek przejściowych gruczołu krokowego 1/1 Mięśniak gładkokomórkowy 0/1 Wykazanie kompatybilności Gruczolakorak błony śluzowej macicy 1/1 VENTANA anti-E-cadherin (36) wykazywało zgodność z aparatami VENTANA BenchMark XT oraz BenchMark ULTRA i z zestawami do detekcji iView DAB Detection Kit i ultraView Universal DAB Detection Kit. 2014-09-01 FT0700-410k Powtarzalność w obrębie serii odczynów Określona na podstawie równoległego barwienia 2 zestawów tkanek (3 tkanki na zestaw, łącznie 6 tkanek) w 10 preparatach za pomocą 3 aparatów BenchMark XT. Dla 90 z 90 preparatów uzyskano równoważne wyniki. Określono na podstawie równoległego barwienia 1 zestawu tkanek (3 tkanki na zestaw) w 5 preparatach za pomocą 3 aparatów BenchMark ULTRA. Dla 45 z 45 preparatów uzyskano równoważne wyniki. Powtarzalność pomiędzy platformami Określono na podstawie równoległego barwienia 1 zestawu tkanek (3 tkanki na zestaw) w 5 preparatach za pomocą 3 aparatów BenchMark ULTRA i 3 aparatów BenchMark XT. Dla 45 z 45 preparatów uzyskano równoważne wyniki. 3/4 1007821PL Rev C PIŚMIENNICTWO 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Berx G, Van Roy F. The E-cadherin/catenin complex: an important gatekeeper in breast cancer tumorigenesis and malignant progression. Breast Cancer Res. 2001;3(5):289-293. Van Roy F, Berx G. The cell-cell adhesion molecule E-cadherin. Cell Mol Life Sci. 2008;65(23):3756-3788. Beavon, IR. The E-cadherin-catenin complex in tumour metastasis: structure, function, and regulation. European Journal of Cancer. 2000;36(13):1607-1620. Siitonen SM, et al. Reduced E-cadherin expression is associated with invasiveness and unfavorable prognosis in breast cancer. Am J Clin Pathol. 1996;105(4): 394402. Acs G, et al. Differential expression of E-cadherin in lobular and ductal neoplasms of the breast and its biologic and diagnostic implications. Am J Clin Pathol. 2001;115(1):85-98. Choi YJ, et al. Interobserver variability and aberrant E-cadherin immunostaining of lobular neoplasia and infiltrating lobular carcinoma. Mod Pathol. 2008;21(10):12241237. Qureshi HS, et al. E-cadherin status in breast cancer correlates with histologic type but does not correlate with established prognostic parameters. Am J Clin Path. 2006;125(3):377-385. Kowalski PJ, et al. E-cadherin expression in primary carcinomas of the breast and its distant metastases. Breast Cancer Res. 2003;5(6):R217-R222. Chetty R, Serra S. Nuclear E-cadherin immunoexpression: from biology to potential applications in diagnostic pathology. Adv Anat Pathol. 2008;15(4):234-240. Abutaily AS, et al. Cadherins, catenins and APC in pleural malignant mesothelioma. J Pathol. 2003;201(3):355-362. Sheehan DC, Hrapchak BB. Theory and Practice of Histotechnology, 2nd edition. St. Louis, MO: The C.V. Mosby Company; 1980. Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002. WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA BENCHMARK, ultraView, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi firmy Roche. Wszystkie pozostałe znaki towarowe stanowią własność odnośnych właścicieli. © 2010-2014 Ventana Medical Systems, Inc. DANE TELEADRESOWE Ventana Medical Systems, Inc. 1910 E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona 85755 USA +1 520 887 2155 +1 800 227 2155 (USA) www.ventana.com Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D-68305 Mannheim Germany 2014-09-01 FT0700-410k 4/4 1007821PL Rev C