CK-MB
Transkrypt
CK-MB
CK-MB Zestaw odczynnikowy do oznaczania aktywności izoenzymu MB kinazy kreatynowej (CK-MB) Tylko do diagnostyki in vitro Nr kat 5026.1 3 x 20 ml (R1: 3 x 16 ml; R2: 1 x 12 ml) ZASTOSOWANIE Zestaw służy do oznaczania aktywności izoenzymu CK-MB kinazy kreatynowej w surowicy lub osoczu krwi. ZASADA METODY Izoenzym MB kinazy kreatynowej zbudowany jest z jednej podjednostki CK-M i jednej podjednostki CK-B. Przeciwciała przeciwko podjednostkom CK-M kinazy kreatynowej całkowicie blokują aktywność izoenzymu CK-MM oraz podjednostki CK-M wchodzącej w skład izoenzymu CK-MB. W reakcji oznaczania aktywności CK uczestniczą tylko podjednostki CK-B. Oznaczona aktywność podjednostek CK-B stanowi połowę aktywności izoenzymu CK-MB; podwojenie tej wartości daje aktywność CK-MB w badanej próbce. MATERIAŁ DO BADAŃ Surowica lub osocze pobrane na EDTA lub heparynian litu zgodnie ze standardowymi procedurami. Próbki można przechowywać do 7 dni w temp. 2-8°C. WARTOŚĆI PRAWIDŁOWE 25°C 30°C 37°C Dorośli < 10 U/l < 15 U/l < 24 U/l (< 0,17 µkat/l) (< 0,25 µkat/l) (< 0,40 µkat/l) Aktywność CK-MB < 6% aktywności CK Podane wartości należy traktować jako orientacyjne. Zaleca się, aby każde laboratorium określiło własne zakresy wartości prawidłowych. SKŁAD ODCZYNNIKÓW R1 100 mmol/l Bufor imidazolowy pH 6,0 EDTA 2 mmol/l N-Acetylocysteina 25 mmol/l Octan magnezu 12,5 mmol/l Glukoza 25 mmol/l Adenozyno-5'-monofosforan (AMP) 6,25 mmol/l NADP 2,5 mmol/l Di-(adenozyno-5)-pentafosforan (AP5A) 12,5 µmol/l Azydek sodu 13,8 mmol/l Przeciwciała przeciwko blokowanie akt. CK-M podj. CK-M kinazy kreatynowej do 2000 U/l R2 400 mmol/l Bufor glicynowy pH 9,1 EDTA 2 mmol/l Fosforan kreatyny 150 mmol/l Adenozyno-5'-difosforan (ADP) 10 mmol/l Heksokinaza (HK) > 10 kU/l Dehydrogenaza glukozo-6-fosforanowa (G-6-P DH) > 10 kU/l Azydek sodu 13,8 mmol/l Niereaktywne stabilizatory i konserwanty. PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKA ROBOCZEGO Zmieszać odczynniki R1 i R2 w stosunku 4 + 1. Odczynnik roboczy jest stabilny przez co najmniej 2 tygodnie w temp. 2-8°C lub 1 dzień w temp. 15-25°C. PRZECHOWYWANIE ODCZYNNIKÓW Przechowywać w temp. 2-8°C w oryginalnych, zamkniętych opakowaniach. Chronić przed kontaminacją i bezpośrednim działaniem światła. Nie zamrażać. Po otwarciu odczynniki prawidłowo przechowywane i chronione przed zanieczyszczeniem są stabilne do daty ważności podanej na opakowaniu. CHARAKTERYSTYKA UŻYTKOWA Limit detekcji: 10 U/l (0,17 ěkat/l) Czułość: 0,12 ÄmA x l / U x min. (7,27 ÄmA x l / ěkat x min.) Liniowość: 1000 U/l (16,67 ěkat/l). Dla wyższych aktywności próbkę należy rozcieńczyć 0,9 % roztworem NaCl w stosunku 1+1; wynik oznaczenia pomnożyć przez 2. Powtarzalność (w serii oznaczeń): poziom I 18 n średnia (U/l) 49,8 0,83 średnia (µkat/l) < 4,00% % CV II 18 195,5 3,26 < 2,50% Odtwarzalność (między seriami oznaczeń): poziom I II 18 n 18 49,5 196,2 średnia (U/l) 0,83 3,27 średnia (µkat/l) < 5,00 % < 3,00% % CV Korelacja: Podczas przeprowadzonych badań uzyskano wysoki stopień korelacji wyników z wynikami uzyskanymi za pomocą odczynników referencyjnych. Dokładne wyniki badań są dostępne na życzenie. Interferencje: Bilirubina do 20 mg/dl nie wpływa na wyniki oznaczeń. Inne substancje i leki mogą interferować. KONTROLA POPRAWNOŚCI DZIAŁANIA Do kontroli jakości oznaczeń stosować surowice kontrolne z wartościami CK-MB zmetrykowanymi dla metody IFCC z immunoinhibicją. Nie stosować odczynników, jeżeli absorbancja odczynnika roboczego mierzona wobec wody przy długości fali 340 nm jest wyższa niż 0,300. DODATKOWE MATERIAŁY I WYPOSAŻENIE - Fotometr lub analizator automatyczny z termostatowanym gniazdem pomiarowym umożliwiający pomiar absorbancji przy ë = 340 nm. - Standardowe wyposażenie laboratorium diagnostycznego. WYKONANIE OZNACZENIA Do kuwety napipetować: Odczynnik roboczy: 1000 µl Doprowadzić do temperatury oznaczenia (25°C, 30°C lub 37°C), następnie dodać: Próbka: 40 µl Dokładnie wymieszać; po 3 min. inkubacji w temperaturze oznaczenia odczytać absorbancję wobec powietrza lub wody przy dł. fali 340 nm. Powtarzać odczyty absorbancji po dokładnie 1, 2 i 3 minutach. Wyznaczyć średnią zmianę absorbancji na minutę (∆A/min.). 19-12-2007 OBLICZENIA Obliczenia prowadzone są w oparciu o następujący wzór: Vt x 105 x R aktywność CK-MB [U/l] =--------------- x AA/min. s x l x Vs STOSOWANE SYMBOLE GRAFICZNE - OBJAŚNIENIA: CONT. zawartość numer katalogowy Vt - całkowita objętość mieszaniny reakcyjnej = 1,04 ml R - współczynnik przeliczający zmierzoną aktywność CK-B na aktywność CK-MB = 2 s - molowy współczynnik absorbancji NADPH przy długości fali 340 nm = 6,3 xl02 m7mol 1 - długość drogi światła = 1 cm Vs - objętość próbki = 0,04 ml przed użyciem zapoznać się z instrukcją aktywność CK-MB [U/l] = 8254 x AA/min. aktywność CK-MB [µkat/l] = 137,57 x AA/min numer serii INFORMACJE DODATKOWE 1. Odczynniki zawierają śladowe ilości azydku sodu. Przy pracy z odczynnikami stosować środki ostrożności typowe dla rutynowych prac laboratoryjnych. 2. Odpady utylizować zgodnie z obowiązującymi przepisami - przez termiczne przekształcanie lub odpowiednimi metodami obróbki fizyczno-chemicznej. 3. Aplikacje do analizatorów automatycznych dostarczamy na życzenie wyrób do diagnostyki in vitro temperatura przechowywania producent data ważności REFERENCJE 1. Gerhardt W., Waldenstrom J.: Creatine kinase B-subunit activity in serum after immunoinhibition of M-subunit activity. Clin. Chem., 25/7, 1274-1280 (1979). 1. Bishop C, Chu T. M., Shihabi Z. K.: Single stable reagent for creatine kinase assay. Clin. Chem., 17/6, 548-550 (1971). 2. Empfehlungen der Deutschen Gesselschaft fur Klinische Chemie. Standard-Methode zur Bestimmung der AktMtat der Creatin-Kina-se. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 15/4, 249-254 (1977). 3. Kohl H. H, Telander D. H., Roberts E. C, Elliott H. C: Inhibition of creatine kinase activity by Ca2+ and reversing effect of ethylene-diaminetetraacetate. Clin. Chem., 24/1, 177-178 (1978). 4. The Committee on Enzymes of The Scandinavian Society for Clini-cal Chemistry and Clinical Physiology (SCE): Recommended metod for the determination of creatine kinase in blood modified by the inclusion of EDTA. Scand. J. Clin. Lab Invest, 39, 1-5 (1979). 5. Mathieu M., Bretaudiere J. P., Galteau M. M., Guidollet J., Lalege-rie P., Bailly M., Buret P., Dorche C, Louisot P., Schiele F.: Re-commendations for measuring the catalytic concentration of creatine kinase in human serum at +30°C. Ann. Biol. Clin., 40, 87-164 (1982). 6. International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), Scientific DMsion, Committee on Enzymes: Approved Recommendation on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 7. IFCC method for creatine kinase (ATP: creatine N-phosphotransferase, EC 2.7.3.2). Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 29/7, 435-456 (1991). 7. IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes. Part 2. Reference procedurę for the measurement of catalytic concentration of creatine kinase (ATP: creatine N-phosphotransferase (CK), EC 2.7.7.2). Clin. Chem. Lab. Med. 40/6, 635-643 (2002). 8. Young D. S.: Effects of drugs on clinical laboratory tests, AACC Press, 4th ed. (1995). 19-12-2007