CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody
Transkrypt
CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody
DOSTARCZANY ODCZYNNIK CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody 760-2523 05267072001 50 PRZEZNACZENIE CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody firmy Ventana Medical Systems, Inc. (Ventana) zawiera surowicę przeciwciała króliczego skierowaną przeciwko epitopowi występującemu w białku S100 i może wspomagać identyfikację komórek o prawidłowej i nieprawidłowej linii neuronalnej i neuroendokrynologicznej oraz działać pomocniczo w diagnozowaniu guzów Rysunek 1. Przeciwciało CONFIRM anti-S100 anaplastycznych. Przeciwciała te (Polyclonal) Primary wykazujące jądrowy są przeznaczone do jakościowego i cytoplazmatyczny schemat barwienia w barwienia skrawków tkanek tkance czerniaka. utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie przy użyciu automatu do barwienia preparatów firmy VENTANA. Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego histopatologa w oparciu o badania histopatologiczne, odpowiednie dane kliniczne i badania kontrolne. To przeciwciało jest przeznaczone do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA S100 ulega ekspresji na szeregu rodzajów komórek pochodzenia mezodermalnego, neuroektodermalnego i nabłonkowego, w tym komórkach glejowych i nerwowych, komórkach Schwanna, melanocytach, komórkach tkanki chrzęstnej i tłuszczowej, komórkach mięśniowo-nabłonkowych oraz komórkach Langerhansa. S100 to mające masę 20 kD kwaśne białko wiążące wapń o nieznanej funkcji składające się z dwóch podjednostek, z których każda może należeć do jednego z dwóch typów: alfa albo beta. Te podjednostki ulegają ekspresji w różny sposób w wielu tkankach ludzkich1. S100 to czuły marker czerniaka. Przeciwciała skierowane przeciwko białku S100 barwią czerniaki bezbarwnikowe silniej niż nowotwory pigmentowane i umożliwiają wykrycie czerniaków dających często odczyn negatywny w badaniu innymi markerami melanocytów, np. czerniaków desmoplastycznych. Wzorzec barwienia jest cytoplazmatyczny i jądrowy. S100 ma bardzo wysoką czułość w przypadku czerniaków, ale wykazuje także pozytywne wyniki w przypadku wielu guzów o charakterze innym niż melanocytyczny. S100 jest zwykle obecny w komórkach nerwowych (komórkach glejowych i Schwanna) oraz atakujących je komórkach rakowych1. Zaletą powszechnego występowania wysoce immunoreaktywnego białka S100 w nerwach obwodowych obecnych w niemal każdej tkance prawidłowej i chorobowej jest to, że charakteryzuje się kontrolą pozytywną w barwieniu immunologicznym S1002. ZASADY PRZEPROWADZANIA PROCEDURY CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody to królicze przeciwciało poliklonalne wytwarzane przeciw oczyszczonemu białku S100 mózgu bydlęcego. CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody wiąże się z białkiem S100 w zatopionych w parafinie skrawkach tkanki i wykazuje schemat barwienia jądrowego i cytoplazmatycznego. Przeciwciało można wykryć za pomocą zestawu do detekcji OptiView DAB IHC Detection Kit (nr kat. 760-700/06396500001), zestawu do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit (nr kat. 760-500/05269806001) lub zestawu do detekcji ultraView Universal Alkaline Phosphatase Red Detection Kit (nr kat. 760-501/05269814001). Dodatkowe informacje, patrz odpowiednie ulotki dołączone do opakowania. 2016-10-10 FT0700-410m 1/4 CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody zawiera odczynnik w ilości wystarczającej na 50 testów. Jeden dozownik 5 ml przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody zawiera około 50 μg króliczego przeciwciała poliklonalnego. Przeciwciało jest rozcieńczone w buforowanym fosforanem roztworze soli, zawierającym białko nośnikowe i 0,05% ProClin 300 jako konserwant. Całkowite stężenie białka w odczynniku wynosi około 3 mg/ml. Stężenie swoistego przeciwciała wynosi około 10 μg/ml. Nie jest znana żadna nieswoista reaktywność przeciwciał zawartych w tym produkcie. CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody to królicze przeciwciało poliklonalne wytwarzane przeciw materiałowi wodobrzusza. Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy VENTANA, dołączonej do opakowania zestawu do detekcji, aby uzyskać szczegółowy opis następujących kwestii: Zasady przeprowadzania procedury, Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone do zestawu, Pobranie próbki i przygotowanie do analizy, Procedury kontroli jakości, Interpretacja wyników, Ogólne ograniczenia i Rozwiązywanie problemów. MATERIAŁY WYMAGANE, ALE NIEDOSTARCZANE Nie dołączono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy VENTANA, ani elementów pomocniczych, takich jak pozytywne i negatywne kontrolne preparaty tkankowe. Nie wszystkie produkty przedstawione w ulotce dołączonej do opakowania są dostępne we wszystkich rejonach geograficznych. Należy skonsultować się z lokalnym przedstawicielem odpowiedzialnym za wsparcie techniczne. PRZECHOWYWANIE Po otrzymaniu preparat nieużywany przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać. W celu zapewnienia właściwego dozowania odczynnika i trwałości przeciwciała po każdym użyciu należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce w pozycji pionowej. Na każdym dozowniku przeciwciała podana jest data ważności. Prawidłowo przechowywany odczynnik zachowuje trwałość do daty określonej na etykiecie. Nie należy stosować odczynnika po upływie terminu ważności. PRZYGOTOWANIE PRÓBKI Do stosowania z tym przeciwciałem pierwszorzędowym nadają się rutynowo przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem stosowania zestawów do detekcji firmy VENTANA i zautomatyzowanych urządzeń serii VENTANA BenchMark IHC/ISH. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek jest 10% obojętna, zbuforowana formalina3. Preparaty należy niezwłocznie wybarwić, ponieważ antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem ulegać osłabieniu. Przy badaniu nieznanych preparatów zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli pozytywnej i negatywnej. OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). Wyłącznie do zastosowania profesjonalnego. W tym preparacie jako konserwant zastosowano ProClin 300. Został on uznany za środek drażniący i jego kontakt ze skórą może powodować uczulenie. Podczas pracy z produktem należy w uzasadnionym stopniu stosować środki ostrożności. Unikać kontaktu odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. Stosować odzież i rękawice ochronne. Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych środków ostrożności. Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu odczynników z wrażliwymi miejscami spłukiwać obfitą ilością wody. Skażenie mikrobiologiczne odczynników może skutkować otrzymaniem nieprawidłowych wyników. W celu uzyskania informacji na temat zalecanej metody utylizacji produktu należy skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub krajowymi. Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach dotyczących zagrożeń na stronie www.ventana.com. 18088PL Rev D PROCEDURA BARWIENIA Przeciwciała podstawowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania w urządzeniach VENTANA BenchMarkIHC/ISH razem z zestawami do detekcji i akcesoriami firmy VENTANA. Zalecane protokoły barwienia zawiera Tabela 1, Tabela 2 i Tabela 3. Te przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji, jednak użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego odczynnika. Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat procedur barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej do opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA. Tabela 1. Zalecane protokoły barwienia dla odczynnika CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody z użyciem zestawu do detekcji ultraView DAB IHC Detection Kit oraz urządzeń BenchMark GX, Benchmark XT i BenchMark ULTRA. Rodzaj procedury Metoda Odparafinowanie Wybrana Cell Conditioning (odsłanianie antygenu) Cell Conditioning 1 BenchMark GX i XT Mild (30 min) Urządzenie BenchMark ULTRA 36 min (łagodnie) Przeciwciało (pierwotne) Urządzenie BenchMark GX 16 minut, 37°C Urządzenie BenchMark XT 20 minut, 37°C Urządzenie BenchMark ULTRA 24 minuty, 36°C ultraBlock* 8 minut Barwienie kontrastowe Hematoxylin II, 4 minuty Po barwieniu kontrastowym Bluing, 4 minuty Tabela 3. Zalecane protokoły barwienia dla odczynnika CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody z użyciem zestawu do detekcji OptiView DAB IHC Detection Kit oraz urządzenia BenchMark GX instrument, Benchmark XT i BenchMark ULTRA. Rodzaj procedury Metoda Odparafinowanie Wybrana Cell Conditioning (odsłanianie antygenu) Cell Conditioning 1 Urządzenia BenchMark GX, XT i ULTRA 16 min Inhibitor peroksydazy przed przeciwciałem podstawowym Wybrana Przeciwciało (pierwotne) Urządzenie BenchMark GX i XT 12 minut, 37°C Urządzenie BenchMark ULTRA 12 minut, 36°C Opcja 2* 8 minut Barwienie kontrastowe Hematoxylin II, 4 minuty Po barwieniu kontrastowym Bluing, 4 minuty * Odczynnik blokujący (P/N 760-219) Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, jak również zmienność między poszczególnymi urządzeniami i warunkami środowiska laboratoryjnego, konieczne może być wydłużenie lub skrócenie czasu inkubacji przeciwciała pierwotnego i kondycjonowania komórek (cell conditioning) lub ich wstępnej obróbki proteazą, zależnie od próbki, zastosowanej metody detekcji i preferencji użytkownika. Więcej informacji na temat zmiennych związanych z utrwalaniem można znaleźć w pracy „Immunohistochemistry Principles and Advances” (Podstawy i postępy immunohistochemii)4. TKANKA DO DODATNIEJ PRÓBY KONTROLNEJ * Odczynnik blokujący (P/N 760-219) Tabela 2. Zalecany protokół barwienia dla przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody z użyciem zestawu do detekcji ultraView Universal Alkaline Phosphatase Red Detection Kit oraz urządzeń BenchMark GX, Benchmark XT i BenchMark ULTRA. Zalecana pozytywna kontrola tkankowa to wyrostek. Komórki Schwanna we włóknach nerwów obwodowych, zwojowe komórki satelitarne w warstwie mięśni i podśluzówce powinny być silnie pozytywne podobnie jak adipocyty i komórki dendrytyczne oraz makrofagi w blaszce właściwej. Komórki nabłonkowe powinny być negatywne. INTERPRETACJA WYBARWIENIA / OCZEKIWANE WYNIKI Wzór barwienia komórek dla przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) jest jądrowy i cytoplazmatyczny. Rodzaj procedury Metoda SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA Odparafinowanie Wybrana Cell Conditioning (odsłanianie antygenu) Cell Conditioning 1 BenchMark GX i XT Mild (30 min) Urządzenie BenchMark ULTRA 36 min (łagodnie) Przeciwciało (pierwotne) Urządzenie BenchMark GX 16 minut, 37°C Urządzenie BenchMark XT 20 minut, 37°C Urządzenie BenchMark ULTRA 24 minuty, 36°C System detekcji OptiView jest ogólnie bardziej czuły niż inne systemy detekcji. Użytkownik musi walidować wyniki uzyskane przy użyciu tego odczynnika oraz systemów detekcji. Zaobserwowano, że tkanki prawidłowe i nowotworowe, które barwią się negatywnie pod względem przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody przy użyciu zestawu iView DAB Detection mogą barwić się pozytywnie przy użyciu systemów detekcyjnych wymienionych w ulotce dołączonej do opakowania. ultraBlock* 8 minut Barwienie kontrastowe Hematoxylin II, 4 minuty Po barwieniu kontrastowym Bluing, 4 minuty CHARAKTERYSTYKA ROBOCZA Przeprowadzono badania barwienia preparatem pod kątem jego swoistości, czułości i powtarzalności. Wyniki tych badań można znaleźć w Tabela 4 i Tabela 5 oraz rozdziale Powtarzalność. * Odczynnik blokujący (P/N 760-219) 2016-10-10 FT0700-410m 2/4 18088PL Rev D Swoistość Tabela 4. Swoistość przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody oceniano na podstawie badania próbek tkanek zdrowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w parafinie. Nowotwór Liczba pozytywnych/ wszystkich przypadków Tkanka Liczba pozytywnych/ wszystkich przypadków Mózg 3/3 Grasica 0/3 Móżdżek 3/3 Szpik kostny 0/3 Nadnerczea 2/3 Płuco 0/3 Jajnik 0/3 Mezotelium płuca 0/3 Trzustkab 2/3 Serce 0/3 Węzeł chłonny 0/3 Przełyk 0/3 Przytarczyce 0/3 Żołądek 0/3 Przysadka 0/3 Jelito cienkie 0/3 Jądroc 2/3 Okrężnica 0/3 Tarczyca 0/4 Wątroba 0/3 Sutekd 5/5 Ślinianka 0/3 Śledziona 0/3 Nerka Migdałek 0/3 Endometrium Mięśnie szkieletowe Tkanka Nerw obwodowy Rak zarodkowy 0/1 Rak rdzeniowy tarczycy 1/1 Rak brodawkowaty tarczycy 0/1 Inwazyjny rak przewodowy 0/8 Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuca 0/1 Rak płaskonabłonkowy płuca 0/2 Gruczolakorak płuca 0/1 Gruczolakorak przełyku 0/1 Gruczolakorak śluzowy 0/1 Gruczolakorak jelita cienkiego 0/1 Złośliwy guz podścieliskowy jelita cienkiego 0/1 Gruczolakorak okrężnicy 0/1 Nowotwór z komórek śródmiąższowych okrężnicy 0/1 Gruczolakorak (odbytu) 0/1 0/3 Złośliwy guz podścieliskowy odbytu o umiarkowanej złośliwości 0/1 Gruczoł krokowy 0/3 Rak wątrobowokomórkowy 0/1 0/3 Szyjka macicy 0/3 Wątrobiak zarodkowy 0/1 0/3 Skóra Rak jasnokomórkowy nerek 0/1 Gruczolakorak (punktacja Gleasona: 3+3) (gruczołu krokowego) 0/1 Gruczolakorak (punktacja Gleasona: 3+4) (gruczołu krokowego) 0/1 Mięśniak gładkokomórkowy macicy 0/1 Gruczolakorak macicy 0/1 Rak jasnokomórkowy macicy 0/1 Rak płaskonabłonkowy szyjki macicy 0/2 Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy 0/1 Czerniak złośliwy odbytnicy 1/1 Rak podstawnokomórkowy 0/1 Rak płaskonabłonkowy skóry 0/1 Nerwiakowłókniak 5/7 Nerwiak płodowy 0/1 Międzybłoniak złośliwy 0/1 Rak nabłonka dróg moczowych 0/1 Mięsak gładkokomórkowy o niskim stopniu złośliwości 0/1 Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych 0/1 Mięsak gładkokomórkowy o umiarkowanym stopniu złośliwości 0/1 Chłoniak rozlany z limfocytów B wielkokomórkowy 0/3 11/11 Pęcherz moczowy 44/45 0/3 a Komórki koszyczkowe, b komórki wysepek, c komórki Sertoliego, d komórki mięśniowo- nabłonkowe Czułość Tabela 5. Czułość przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary oceniano na podstawie badania próbek tkanek nowotworowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w parafinie. Nowotwór Liczba pozytywnych/ wszystkich przypadków Glejak 2/2 Oponiak 2/4 Wyściółczak złośliwy 2/2 Skąpodrzewiak 1/1 Surowiczy gruczolakorak jajnika 0/1 Gruczolakorak jajnika 0/1 Rak komórek wyspowych 0/1 Gruczolakorak trzustki 0/1 Nasieniak 0/1 2016-10-10 FT0700-410m Liczba pozytywnych/ wszystkich przypadków 3/4 18088PL Rev D Nowotwór Liczba pozytywnych/ wszystkich przypadków Ziarnica złośliwa 0/1 Chłoniak anaplastyczny wielkokomórkowy 0/1 Czerniak złośliwy 41/46 Hiperplazja sutka 5/5 Gruczolakowłókniak sutka 3/3 Inwazyjny rak zrazikowy 0/2 Choroba Pageta (sutek) 0/1 Tłuszczakomięsak 8/8 Skąpodrzewiakogwiaździak 1/1 Gwiaździak 1/2 Glejakomięsak 1/1 Chłoniak z limfocytów T 0/1 Złośliwy nerwiak 3/20 Niedojrzały guz neuroektodermalny 0/2 Nerwiak osłonkowy Nerwiak zwojowy DANE KONTAKTOWE Ventana Medical Systems, Inc. 1910 E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona 85755 USA +1 520 887 2155 +1 800 227 2155 (USA) www.ventana.com Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D-68305 Mannheim Germany 10/12 2/2 Powtarzalność Przeprowadzono badania powtarzalności dla przeciwciała CONFIRM anti-S100 (Polyclonal) Primary Antibody w celu określenia: • odtwarzalności w obrębie jednej lub kilku serii na aparacie BenchMark ULTRA; • odtwarzalności wyników w obrębie platformy za pomocą urządzeń BenchMark GX, BenchMark XT i BenchMark ULTRA; • odtwarzalności między platformami oraz między urządzeniami BenchMark GX, BenchMark XT oraz BenchMark ULTRA. Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy. PIŚMIENNICTWO 1. 2. 3. 4. Taylor RT and Cote RJ. Immunomicroscopy: A Diagnostic Tool for the Surgical Pathologist, 2nd Edition. Philadelphia: W.B. Saunders Company; 1994. True L. Atlas of Diagnostic Immunohistopathology. Philadelphia: J.B. Lippincott Company; 1990. Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009. Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002. WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA BENCHMARK, CONFIRM, OPTIVIEW, ULTRAVIEW i VENTANA są znakami towarowymi firmy Roche. Wszystkie pozostałe znaki towarowe stanowią własność odpowiednich właścicieli. © 2016 Ventana Medical Systems, Inc. 2016-10-10 FT0700-410m 4/4 18088PL Rev D