Monoclonal Mouse

FLEX
Monoclonal Rabbit
Anti-Human CD5
Clone SP19
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR081
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human CD68, klon SP19, Ready-to-Use, (Link), przeznaczone jest
do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała na CD5 mogą być przydatne do
identyfikacji nowotworów złośliwych z komórek typu B i T, w tym przewlekłej białaczki limfocytowej z komórek B
(B-CLL), chłoniaka limfocytarnego z małych limfocytów B (B-SLL), chłoniaka z komórek płaszcza (MCL) oraz
chłoniaka i białaczki T-komórkowej (1-4). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być
uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez
doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Leu-1, Ly-1, T1, Tp67 (3,5)
Podsumowanie
i wyjaśnienie
CD5 jest jednołańcuchową glikoproteiną przezbłonową o masie 67 kDa. Należy do rodziny receptorów
odpadkowych o dużej zawartości cysteiny (SRCR) struktur przypominających domeny pozakomórkowe biorących
udział w transdukcji sygnałów (6). Wśród komórek prawidłowych CD5 wykazuje słabą ekspresję w większości
prekursorów komórek T, które są CD34-dodatnie, a bardziej intensywną w dojrzałych limfocytach T. Ponadto
CD5 wykazuje słabą ekspresję w podzbiorze prawidłowych komórek B (3). W tkankach nowotworowych antygen
CD5 jest wykrywany w zaburzeniach proliferacji limfocytów B, w tym w chłoniaku z komórek płaszcza (MCL) i
chłoniaku limfocytarnym z małych limfocytów B/przewlekłej białaczce limfocytowej B (SLL/CLL) (1-4). Inne
chłoniaki z limfocytów B, takie jak chłoniak strefy brzeżnej, pęcherzykowaty, rozlany wielkokomórkowy i
limfoblastyczny, nie wykazują wcale ekspresji CD5 lub tylko nieznaczną. Antygen CD5 jest także wykrywany w
większości nowotworów złośliwych T-komórkowych, w tym w 85% ostrych białaczek limfoblastycznych
T-komórkowych (ALL) (2, 3). Stwierdzono, że przeciwciała na antygen CD5 są przydatne w diagnostyce i
klasyfikacji zmian nowotworowych B- i T-komórkowych (1-3).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z
zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości,
7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do użycia królicze przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu o stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: SP19
Immunogen
Syntetyczny peptyd z wewnątrzkomórkowego regionu antygenu CD5.
Swoistość
W testach Western blot lizatów komórkowych Raji9 przeciwciało barwi główny prążek o masie cząsteczkowej ok.
67 kD odpowiadający oczekiwanej masie cząsteczkowej białka CD5 (5).
Środki ostrożności
1.
2.
3.
4.
5.
Przechowywanie
(118441-001)
Do stosowania przez wyszkolony personel.
Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie
wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się
azydku metalu w kanalizacji.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, należy stosować
właściwe procedury postępowania.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą należy nosić odpowiednie osobiste wyposażenie ochronne.
Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, oraz gdy podejrzewa się
problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
307690PL_001 str. 1/3
Przygotowanie próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe należy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie preparatów cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy użyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(10x), (Link) (nr kat. K8000/K8004).
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, które zostały odparafinowane, zalecany jest odczynnik Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101).
Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja użytkownika aparatu PT Link.
Postępować według procedury wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target
Retrieval Solution, High pH (10x), (Link) (nr kat. K8000/K8004). Dla aparatów PT Link należy stosować
następujące parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania: 65°C; temperatura i czas odmaskowania antygenu:
97°C przez 20 (±1) minut, ochłodzić do 65°C. Usunąć statywy na szkiełka aparatu Autostainer wraz ze szkiełkami
ze zbiornika aparatu PT Link i natychmiast zanurzyć szkiełka w słoju/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat.
PT109) wypełnionym rozcieńczonym buforem EnVision FLEX Wash Buffer (10x), (Link) (nr kat. K8000) o
temperaturze pokojowej. Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1 -5 minut.
Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek zarówno odparafinowanie, jak i
odmaskowanie można wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje można
znaleźć w Instrukcji użytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe
należy poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer
Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania
szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji użytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli
protokoły nie są dostępne w używanym systemie Autostainer, należy skontaktować się z działem wsparcia
technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji należy również przeprowadzać w temperaturze
pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Aby możliwe było wykonanie oceny przez
patologów z różnym nasileniem odczynu preparatów, należy skontaktować się z działem obsługi/obsługą
techniczną firmy Dako w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. Należy upewnić
się, że działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu należy ocenić, czy odczyn jest taki jak
opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy użyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z użyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować tkankę chłonną,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Rabbit, (Link) (nr kat. IR600).
Interpretacja
wybarwienia
Odczyn komórkowy ma charakter cytoplazmatyczny i/lub błonowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne: W przypadku tkanek prawidłowych przeciwciała barwią błonę, a czasami cytoplazmę
limfocytów obecnych w rozmaitych typach tkanek prawidłowych. W 1/3 tkanek z migdałów zaobserwowano
regionalny odczyn rozlany w obszarach limfocytów o odczynie dodatnim, a w 1/3 tkanek z gruczołów ślinowych
słaby odczyn cytoplazmatyczny nabłonka przewodowego. W następujących tkankach żadne inne elementy
tkankowe nie dały odczynu dodatniego: 2/2 szpik kostny, 2/2 pierś, 2/2 szyjka macicy, 2/2 śródbłonek, 2/2
obwodowa tkanka nerwowa, 3/3 przytarczyca, 2/2 prostata, 3/3 gruczoł ślinowy, 3/3 jelito cienkie, 2/2 tarczyca,
3/3 migdał i 2/2 macica.
Tkanki patologiczne: W zaburzeniach proliferacji limfocytów B, przeciwciała znakowały chłoniaki z komórek
płaszcza (MCL), 3/4 chłoniaków limfocytarnych z małych limfocytów B/przewlekłych białaczek limfocytowych B
(SLL/CLL) oraz 1/1 chłoniaka i białaczki T-komórkowej.
(118441-001)
307690PL_001 str. 2/3
Piśmiennictwo
1.
Diaz de Leon E, Alkan S, Huang JC, Hsi ED. Usefulness of an immunohistochemical panel in paraffinembedded tissues for the differentiation of B-cell non-Hodgkin’s lymphomas of small lymphocytes. Mod
Pathol 1998;11:1046-51.
2.
Dorfman DM, Shahsafaei A. Usefulness of a new CD5 antibody for the diagnosis of T-cell and B-cell
lymphoproliferative disorders in paraffin sections. Mod Pathol 1997;10:859-63.
3.
Arber DA, Weiss LM. CD5 a review. Appl Immunohistochem 1995;3:1-22.
4.
Rossi S, Laurino L, Furlanetto A, Chinellato S, Orvieto E, Canal F, Facchetti F, Dei Tos AP. Rabbit
monoclonal antibodies: a comparative study between a novel category of immunoreagents and the
corresponding mouse monoclonal antibodies. Am J Clin Pathol 2005;124:1-8.
5.
Lozano F, Calvo J, Roca A, Places L and Simarro M. TC6 CD5 workshop panel report. In: Kishimoto T,
Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, Moretta L, Okumura K, Shaw S,
Springer TA, Sugamura K and Zola H, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the Sixth international workshop and conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York,
London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 1112-3.
6.
Lozano F, Calvo J, Roca A, Places L and Simarro M. TC6 CD5 workshop panel report. In: Kishimoto T,
Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, Moretta L, Okumura K, Shaw S,
Springer TA, Sugamura K and Zola H, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the Sixth international workshop and conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York,
London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 56-8.
Wydanie 04/08
(118441-001)
307690PL_001 str. 3/3