Monoclonal Mouse

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Tissue Inhibitor of Metalloproteinases 1
Klon VT7
Nr kat. M7293
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human Tissue Inhibitor of Metalloproteinases 1, klon VT7, są przeznaczone do
stosowania w immunohistochemii. Przeciwciała te są przydatne w ocenie inwazyjnego raka gruczołowego okrężnicy,
w którym ekspresja TIMP-1 występuje w części komórek podścieliska przypominających miofibroblasty, które
przylegają do inwazyjnych komórek rakowych (1), a także do identyfikacji komórek neuroendokrynnych w tkankach
prawidłowych i nowotworowych (2). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona
przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana
przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (TIMP-1) należy do rodziny białek, do której należą 3 inne poznane
dotychczas związki (TIMP-2, TIMP-3 i TIMP-4). Gen TIMP-1 jest mapowany do chromosomu X i koduje białko
glikozylowane o masie 28,5 kDa. TIMP-1 składa się ze 184 aminokwasów, zawierające 12 reszt cysteinowych, które
uczestniczą w tworzeniu sześciu wiązań dwusiarczkowych. TIMP-1 ma zdolność blokowania aktywności wszystkich
znanych metaloproteinaz i odgrywa zasadniczą rolę w utrzymaniu homeostazy w przestrzeni pozakomórkowej
i procesach ponownego modelowania tkanki, w tym w procesie inwazyjnym raka, gojeniu ran i stanach zapalnych.
TIMP-1 może także wpływać na przemianę komórek nowotworowych, proliferację komórek i regulację apoptozy
(3, 4).
Ekspresja TIMP-1 występuje w komórkach przypominających miofibroblasty, znajdujących się w części obwodowej
inwazyjnego czoła gruczolakoraka jelita grubego i odbytu oraz sporadycznie w prawidłowej błonie śluzowej (2, 5),
natomiast w gruczolakach jelita grubego i odbytu ekspresja TIMP-1 zachodzi w obszarach z ogniskowym stanem
zapalnym podścieliska przy powierzchni rozdzielającej komórki nabłonkowe i podścieliska (5). W tych tkankach nie
zaobserwowano ekspresji TIMP-1 w komórkach nabłonka, w komórkach naczyń ani w komórkach mięśni gładkich
(5). Raki sutka wykazują wysokie poziomy transkrypcji RNA TIMP-1 wokół naczyń krwionośnych guza i w
podścielisku, zwłaszcza przy powierzchni rozdzielającej guz i podścielisko (3). Dodatkowo wysoką ekspresję TIMP-1
wykazują komórki neuroendokrynne w tkankach prawidłowych i nowotworowych (2).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Monoklonalne przeciwciała mysie dostarczane w postaci płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej (zawierający
płodową surowicę bydlęcą), dializowany wobec roztworu Tris/HCl o stężeniu 0,05 mol/L, pH 7,2 i zawierający azydek
sodu o stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: VT7. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysich IgG mg/L: Zobacz etykietę na fiolce.
Immunogen
Ludzkie rekombinowane komórki eukariotyczne TIMP-1 (r-h-TIMP-1) (6, 7).
Swoistość
Zgodnie z liniowym mapowaniem epitopów w oparciu o peptydy przeciwciało rozpoznaje sekwencję liniową
(LWTDQL), co odpowiada aminokwasom 169–174 dojrzałej postaci TIMP-1 (6).
W testach Western blot r-h-TIMP-1 i próbek plazmatycznych pacjenta z rakiem jelita grubego, a także nadsączu
hodowli wzrastających komórek MCF7-S1 przeciwciało znakuje dwa prążki 24–28 i 50–54 kDa, co odpowiada
różnicowo glikozylowanemu monomerowi i homodimerowi TIMP-1 (6).
Środki ostrożności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek – azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków
w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
(115150-001)
M7293/PL/JOG/14.06.07 s. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu. Jeżeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego
względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Skrawki parafinowe:
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Wymagane jest poddanie odparafinowanych skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER).
Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek polegającej na odmaskowaniu HIER przy użyciu
roztworu Dako Target Retrieval Solution, Citrate pH 6 (10x) (nr kat. S2369).
Odmaskowanie HIER: 15 minut w temperaturze wrzenia. Przed zanurzeniem preparatów należy ogrzać roztwór do
odmaskowania antygenu. Po zakończeniu ogrzewania należy odstawić pojemnik z buforem zawierającym preparaty
do ostygnięcia w temperaturze pokojowej na 20 minut. Przepłukać skrawki delikatnie buforem lub dejonizowaną
wodą. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie
powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się
stosowanie szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Skrawki mrożakowe i rozmazy komórkowe:
Opisywane przeciwciała nie mogą być stosowane do odczynów na utrwalonych w acetonie skrawkach mrożakowych
lub utrwalonych rozmazach cytologicznych.
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Rozcieńczenie: Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human Tissue Inhibitor of Metalloproteinases 1, klon VT7,
mogą być używane w zakresie rozcieńczeń od 1:50 do 1:100 na poddanych wstępnej obróbce utrwalanych
w formalinie skrawkach zatopionych w parafinie, przy 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. Zaleca się
rozcieńczenie przeciwciał odczynnikiem Dako Antibody Diluent (nr kat. S0809). Podane informacje mają charakter
wyłącznie orientacyjny. Optymalne stężenie może się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego
przygotowania i powinny być ustalane indywidualnie w każdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik
Dako Negative Control, Mouse IgG1, nr kat. X0931, rozcieńczony do tego samego stężenia mysich IgG, co
przeciwciało pierwotne. O ile nie potwierdzono stabilności rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej
w rzeczywistej procedurze wykonania odczynu, zaleca się rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed
użyciem. Równolegle z barwieniem próbek pochodzących od pacjenta należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie odczynników Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse (nr kat.
K4061), Dako EnVision™+ System/HRP, Rabbit/Mouse (nr kat. K4065), Dako Real™ EnVision™ Detection Kit,
Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse (nr kat. K5007*), Dako EnVision™+ System/HRP, Mouse (nr kat. K4004/K4005).
Postępować zgodnie z procedurą dla danego systemu wizualizacji.
*Niedostępne na terenie Stanów Zjednoczonych
Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych w systemach
zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer.
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciała dają odczyn praktycznie ze wszystkimi komórkami endokrynnymi
i neuroendokrynnymi pochodzenia śródnabłonkowego (komórki wykazujące dodatni odczyn chromograniny A)
rozproszonymi w błonie śluzowej przewodu pokarmowego (przełyk, żołądek, jelito cienkie i grube) (2). Znakuje także
komórki endokrynne wysp trzustkowych Langerhansa, komórki główne przytarczyc i komórki chromochłonne
nadnerczy. Dodatkowo przeciwciało barwi komórki nabłonka wydzielniczego normalnego i rozrostowego stercza.
Nie zaobserwowano odczynu w nerkach prawidłowych, hepatocytach i komórkach części zewnątrzwydzielniczej
trzustki (2).
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciała dawały odczyn z nowotworowymi tkankami endokrynnymi w tym
w 3/3 przypadków gruczolaków przytarczycy, 4/4 rakowiaków płuc, 3/3 rakowiaków wyrostka robaczkowego,
2/2 rakowiaków odbytu i 4/4 rakowiaków jelita cienkiego, 6/6 guzów chromochłonnych nadnerczy, 4/4 raków
rdzeniastych tarczycy, 1/1 guza z komórek Merkela i 2/2 nerwiaków niedojrzałych (2). Znakuje także komórki
przypominające fibroblasty znajdujące się w bezpośrednim sąsiedztwie inwazyjnych komórek raka oraz w obszarach
z ogniskowym stanem zapalnym przy powierzchni rozdzielającej guz i podścielisko w gruczolakorakach jelita
grubego i odbytu oraz gruczolakach. Zaobserwowano odczyn w nielicznych przypadkach komórek nowotworowych
typu nabłonkowego.
(115150-001)
M7293/PL/JOG/14.06.07 s. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Sørensen IV, Winther H, Foged NT, Fenger C and Brünner N. Tissue inhibitor of metalloproteinases 1 (TIMP-1)
as an immunohistochemical marker for colorectal cancer. Eur J Cancer Supplements 2005;3:196.
2.
Sørensen IV, Fenger C, Winther H, Foged NT, Lademann U, Brünner N and Usher P. Characterization of antiTIMP-1 monoclonal antibodies for immunohistochemical localization in formalin fixed paraffin embedded tissue.
J Histochem Cytochem 2006; In press.
3.
Gomez DE, Alonso DF, Yoshiji H and Thorgeirsson UP. Tissue inhibitors of metalloproteinases: structure,
regulation and biological functions. Eur J Cell Biol 1997;74:111-22.
4.
Fassina G, Ferrari N, Brigati C, Benelli R, Santi L, Noonan DM, et al. Tissue inhibitors of metalloproteases:
regulation and biological activities. Clin Exp Metastasis 2000;18:111-20.
5.
Holten-Andersen MN, Hansen U, Brünner N, Nielsen HJ, Illemann M and Nielsen BS. Localization of tissue
inhibitor of metalloproteinases 1 (TIMP-1) in human colorectal adenoma and adenocarcinoma. Int J Cancer
2005;113:198-206.
6.
Sørensen NM, Dowell BL, Stewart KD, Jensen V, Larsen L, Lademann U, et al. Establishment and
characterization of 7 new monoclonal antibodies to tissue inhibitor of metalloproteinases-1. Tumour Biol
2005;26:71-80.
7.
Murphy G, Houbrechts A, Cockett MI, Williamson RA, Oshea M and Docherty AJP. The N-terminal domain of
tissue inhibitor of metalloproteinases retains metalloproteinase inhibitory activity. Biochem 1991;30:8097-101.
Objaśnienie symboli
(115150-001)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M7293/PL/JOG/14.06.07 s. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17