(Dako Autostainer/Autostainer Plus) Nr kat. IS526
Transkrypt
(Dako Autostainer/Autostainer Plus) Nr kat. IS526
FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Carcinoembryonic Antigen Ready-to-Use (Dako Autostainer/Autostainer Plus) Nr kat. IS526 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało FLEX Rabbit Polyclonal Rabbit Anti-Human Carcinoembryonic Antigen, Ready-to-Use (Dako Autostainer/Autostainer Plus), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Dako Autostainer/Autostainer Plus. Przeciwciało znakuje komórki wykazujące ekspresję białek CEA i CEA-podobnych, i moŜe pomóc w określeniu histogenezy nowotworów nabłonka w kilku kategoriach morfologicznych (1–4). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne, z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych, i powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa, z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Podsumowanie i wyjaśnienie Rodzina białek CEA family obejmuje dwie gałęzie określane jako CEACAM (cząsteczka adhezyjna komórek powiązanych z CEA) i gałąź PSG (glikoproteiny swoiste dla ciąŜy). Członkami rodziny naleŜącymi do gałęzi CEACAM są (poprzednie nazwy podano w nawiasach): CEACAM1 (glikoproteina Ŝółciowa, BGP1, TM-CEA, CD66a); CEACAM3 (członek 1 rodziny genu CEA, CGM1, CD66d); CEACAM4 (członek 7 rodziny genu CEA, CGM7); CEA (antygen karcynoembrionalny, CEA CD66e); CEACAM6 (nieswoisty antygen reagujący krzyŜowo, NCA, NCA-50/90, CD66c); CEACAM7 (członek 2 rodziny genu CEA, CGM2); CEACAM8 (członek 6 rodziny genu CEA, CGM6, CD67, CD66b) (5, 6) Podobieństwo immunologiczne pomiędzy białkami CEACAM jest wyraźnie zaznaczone (6). Patrz dokument “Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Odczynnik dostarczony Gotowe do uŜycia poliklonalne przeciwciało królicze dostarczane w postaci płynnej w buforze zawierającym białko stabilizujące i azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L. Immunogen Ludzkie CEA izolowane z przerzutów do wątroby raka gruczołowego jelita grubego. Swoistość Przeciwciało reaguje z białkami CEA i CEA-podobnymi, na przykład z CEACAM1 i CEACAM6. Ślady ilości przeciwciał przeciwko innym białkom osocza ludzkiego usunięto przy uŜyciu absorpcji w fazie stałej. Absorpcji dokonano takŜe dla antygenów grup krwi A i B. Przy zadziałaniu 12,5 µL stęŜonego przeciwciała na cm2 Ŝelu na wyciąg z przerzutów do wątroby gruczolaka okręŜnicy w stęŜonym kwasie nadchlorowym, w immunoelektroforezie krzyŜowej pojawia się tylko osad białek CEA CEA-podobnych. W przypadku 2 µL normalnego osocza ludzkiego, Ŝadna reakcja nie jest widoczna. Barwnik: Coomassie Brilliant Blue. W testach ELISA z antygenem uwięzionym między przeciwciałami (sandwich) nie obserwuje się reakcji z ludzkim osoczem pozbawionym CEA. Środki ostroŜności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować właściwe procedury postępowania. 4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne. 5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami. Przechowywanie (119595-001) Dako Denmark A/S Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta, naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. IS526/PL/SSM/2009.01.20 str. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Procedura barwienia oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX+, High pH (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8010). Kolejne kroki barwienia oraz czasy inkubacji zaprogramowano wstępnie w oprogramowaniu aparatów Dako Autostainer/Autostainer Plus, przy uŜyciu następujących protokołów: Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (200 µL dozowanych odczynników) lub FLEXRTU3 (300 µL dozowanych odczynników) Autoprogram: CEAPOLY (bez barwienia kontrastowego) lub CEAPOLYH (z barwieniem kontrastowym) Dla etapu „Auxiliary” naleŜy ustawić opcję „rinse buffer ” w programach barwienia ≤10 szkiełek. W przypadku programów barwienia >10 szkiełek etap Auxiliary naleŜy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy płukania. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Dako Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania, i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z róŜnym nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako, w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować wątrobę i trzustkę, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki, jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Rabbit, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS600). Interpretacja wybarwienia Komórki znakowane przeciwciałem wykazują odczyn błonowy i/lub cytoplazmatyczny. Charakterystyka działania Tkanki normalne: W wątrobie kanaliki Ŝółciowe wykazują odczyn z zakresu od umiarkowanego do silnego. Trzustce przewody komórek zrazikowych wykazują odczyn z zakresu od słabego do umiarkowanego. Przeciwciała dają odczyn z komórkami nabłonka okręŜnicy, nabłonka oskrzeli i pęcherzyków płucnych oraz makrofagami pęcherzyków płucnych, leukocytami polimorfonuklearnymi i makrofagami w śledzionie oraz powierzchowną warstwą komórek nabłonka i komórkami okładzinowymi Ŝołądka (7). Tkanki patologiczne: Spośród gruczolakoraków przewodu pokarmowego, trzustki i dróg Ŝółciowych, przeciwciało dawało odczyn w 10/10 przypadków gruczolaków z przełyku i Ŝołądka, 13/13 przypadków gruczolaków jelita grubego, 2/3 przypadków gruczolaków trzustki i 5/6 przypadków gruczolaków dróg Ŝółciowych. Spośród gruczolakoraków innych niŜ z przewodu pokarmowego, odczyn dodatni dawało 7/7 przypadków gruczolaków płuc, 0/5 przypadków gruczolaków jajnika (surowiczych), 2/2 przypadków gruczolaków jajnika (śluzowych), 0/11 przypadków gruczolaków pęcherza (z komórek przejściowych) i 1/1 przypadek gruczolaka pęcherza (gruczolakorak). Ponadto, przeciwciało dawało odczyn dodatni w 33/42 przypadków gruczolakoraka sutka, 6/14 stercza, 1/6 rakowiaków i 6/12 wątrobiaków (1). W badaniu nowotworów złośliwych wątroby, opisywane przeciwciało wraz z przeciwciałem Anti-Hepatocyte, klon OCH1E5 i przeciwciałem Anti-Epithelial-Related Antigen, klon MOC-31, prawidłowo sklasyfikowało 99/100 przypadków, obejmujących 25 przypadków raka z komórek wątrobowych i 75 przypadków raka z komórek kanalików Ŝółciowych i grzuczolakoraków metastatycznych (2). Określone zostały profile immunologiczne wysoce swoiste dla gruczolakoraka szyjki macicy oraz endometrium, co obejmuje znakowanie z uŜyciem przeciwciała skierowanego przeciwko antygenowi karcynoembrionalnemu. JednakŜe, większość nowotworów wykazywała pośredni, nieswoisty immunofenotyp (3). W przypadku czerniaka złośliwego, plamiste, głównie błonowe odczyny dodatnie z przeciwciałem, zaobserwowano w około 70% przypadków (4). (119595-001) Dako Denmark A/S IS526/PL/SSM/2009.01.20 str. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Piśmiennictwo 1. Sheahan K, O'Brien MJ, Burke B, Dervan PA, O'Keane JC, Gottlieb LS, et al. Differential reactivities of carcinoembryonic antigen (CEA) and CEA-related monoclonal and polyclonal antibodies in common epithelial malignancies. Am J Clin Pathol 1990;94:157-64. 2. Morrison C, Marsh W, Frankel WL. A comparison of CD10 to pCEA, MOC-31, and hepatocyte for the distinction of malignant tumors in the liver. Mod Pathol 2002;15:1279-87. 3. Alkushi A, Irving J, Hsu F, Dupuis B, Liu CL, Rijn M, et al. Immunoprofile of cervical and endometrial adenocarcinomas using a tissue array. Virchows Arch 2003;442:271-7. 4. Sanders DSA, Evans AT, Allen CA, Bryant FJ, Johnson GD, Hopkins J, et al. Classification of CEA-related positivity in primary and metastatic malignant melanoma. J Pathol 1994;172:343-8. 5. Beauchemin N, Draber P, Dveksler G, Gold P, Gray-Owen S, Grunert F, et al. Nomenclature announcement. Redefined nomenclature for members of carcinoembryonic antigen family. Exp Cell Res 1999;252:243-9. 6. Skubitz KM, Micklem K, van der Schoot E. M14. CD66 and CD67 cluster workshop report. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. Volume1 p. 889-99. 7. Nap M, Hoor KAT, Fleuren GJ. Cross-reactivity with normal antigens in commercial anti-CEA sera, used for immunohistology. The need for tissue controls and absorptions. Am J Clin Pathol 1983;79:25-31. Objaśnienie symboli N ume r ka ta log owy Tempe ratura prze chow ywan ia Zu Ŝyć p rzed Wyró b medyczny do d ia gno styki in vi tro Zawa rto ść w ysta rcza na <n> testów Produ cent S prawd zić w instrukcj i sto sowa nia Nu mer serii (119595-001) Dako Denmark A/S IS526/PL/SSM/2009.01.20 str. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17