Funkcja regulatora OmpR w modulowaniu proteomu błony

Funkcja regulatora OmpR w modulowaniu proteomu błony

Funkcja regulatora OmpR w modulowaniu proteomu błony zewnętrznej
Yersinia enterocolitica oraz identyfikacja genów regulonu OmpR
związanych z wirulencją i adaptacją do warunków stresowych
Marta Nieckarz1, Adrianna Raczkowska, Katarzyna Brzostek
Zakład Mikrobiologii Stosowanej, Instytut Mikrobiologii, Wydział Biologii, Uniwersytet Warszawski
WSTĘP
W procesie patogenezy bakterii synteza czynników wirulencji i uruchamianie odpowiednich ścieżek
metabolicznych wymaga transdukcji sygnałów docierających do komórki na swoistą odpowiedź genetyczną, co
umożliwia adaptację patogenu do danej niszy w organizmie gospodarza. Ścisła kontrola regulacji ekspresji
genów utrzymywana jest m.in. dzięki aktywności białka OmpR, regulatora dwuskładnikowego systemu
EnvZ/OmpR.
CEL
Celem pracy była identyfikacja genów regulonu OmpR Yersinia enterocolitica O:9.
MATERIAŁ I METODY
Różnicową analizę proteomiczną białek błony zewnętrznej szczepu dzikiego Y. enterocolitica O:9 i mutanta
ΔompR wykonano metodą „shotgun”, z zastosowaniem tandemowej spektrometrii mas. Mutagenezę
transpozonową przeprowadzono z wykorzystaniem transpozonu Tn5-lacZ. Rolę białka OmpR w regulacji
ekspresji wybranych genów określano analizując aktywność fuzji transkrypcyjnych/translacyjnych z genami
reporterowymi lacZ czy gfp. Badania oddziaływania OmpR z sekwencjami promotorowymi przeprowadzano
techniką EMSA.
WYNIKI
Analiza proteomiczna pozwoliła na wskazanie 120 białek błonowych kontrolowanych pozytywnie lub
negatywnie przez regulator OmpR. Udokumentowano regulację ekspresji białek pełniących różnorodne funkcje
w komórce bakteryjnej, w tym związanych z transportem. Wyniki szczegółowych analiz genetycznych dowiodły
roli OmpR w regulacji ekspresji receptora HemR warunkujacego transport hemu do komórki. Udowodniono
funkcję regulatora OmpR w modulowaniu wirulencji Y. enterocolitica poprzez wpływ na poziom syntezy
adhezyny YadA. Analiza puli mutantów transpozonowych Tn5-lacZ w obecności i przy braku regulatora OmpR
pozwoliła na wskazanie OmpR-zależnych genów, w tym kodującego białko AcrB, komponent pompy oporności
wielolekowej AcrAB-TolC odpowiedzialnej za usuwanie z komórki bakteryjnej wielu antybiotyków.
WNIOSKI
Przeprowadzone badania potwierdziły rolę białka OmpR jako kluczowego regulatora ekspresji genów
związanych z wirulencją i adaptacją do warunków stresowych Y. enterocolitica.
1
Autor korespondencyjny, tel. 22 55 41 316 e-mail: [email protected]