Polyclonal Rabbit Anti-Human Chorionic Gonadotropin Nr
Transkrypt
Polyclonal Rabbit Anti-Human Chorionic Gonadotropin Nr
Polyclonal Rabbit Anti-Human Chorionic Gonadotropin Nr kat. A 0231 Wydanie 01.12.02 Przeznaczenie Do diagnostyki in vitro. . Polyclonal Rabbit Anti-Human Chorionic Gonadotropin (hCG), Nr kat. A 0231, jest przeznaczone do użytku w immunohistochemii. Przeciwciało znakuje komórki zawierające hCG- (1) I może być używane do demonstracji elementów trofoblastycznych np. komórek guzów terminalnych (2). Różnicowe wykrywanie jest wspomagane przez wyniki z panelu przeciwciał. Przeciwciało jest odpowiednie do testów ciążowych, zakładając, że ich czułość jest wystandaryzowana do poziomu pozwalającego uniknąć reakcji z lutenizującym hormonem (LH). Poziom ten musi być ustanowiony dla każdego testu. Przykład używania A 0231 w teście ELISA przedstawiono w (3). Interpretacji wyników może dokonywać tylko osoba wykwalifikowana, w kontekście wywiadu klinicznego i innych badań diagnostycznych. Wprowadzenie hCG jest 40 kDa glikoproteiną złożoną z dwóch cześci, i . Część jest powszechna dla hCG, LH, follicle stimulating hormone (FSH), i tyroid stimulating hormone (TSH), podczas gdy część jest unikiatowa dla hCG jakkolwiek jego sekwencja aminokwasu jest częściowo identyczna z z tą częścią hormonu LH (3, 4). hCG jest najważniejszym markerem komórek gestational trophoblastic, obecnych w komórkach syncytiotrophoblastycznych i komórek średnio-zaawansowanych trofoblastów ale nieobecna w cytotrofoblastach. Ekspresja hCG została również zademonstrowana w guzach nietrofoblastycznych np. u 14% pacjentów z hepatocellular carcinoma (4). W czasie ciąży koncentracja surowicy wzrasta początkowo w tępie funkcji eksponens, następnie osiąga szczyt w okolicy 100 kIU/L w dziesiątym tygodniu od zapłodnienia. Koncentracja maleje dziesięciokrotnie przez kilka następnych tygodni zakończona małym wzrostem w okolicach terminu (5). Odczynnik dostarczony Oczyszczona frakcja globulinowa surowicy króliczej, w formie płynnej. Zawiera 0,1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3. Stężenie białka g/L: patrz etykietka na fiolce. Różnice w mianie pomiędzy poszczególnymi seriami A 0231 nie przekraczają 10%. Uzyskano to dzięki doprowadzaniu miana każde serii do stałej wartości próby referencyjnej, przechowywanej w temp. -80oC. Immunogen Izolowany łańcuch hCG. Specyfikacja Przeciwciało reaguje z hCG, I jak większość przeciwciał poliklonalnych z beta-hCG wykazuje także nieznaczną reaktywność krzyżową (około 4%) z LH (3). Ślady białek ludzkiego osocza zanieczyszczających przeciwciała zostały usunięte w fazie stałej. Specyficzność przeciwciała została przetestowana w następujący sposób: Immunoelektroforeza krzyżowa:: Używając 12.5 L A 0231 na cm2 przeciwko 10 L skoncentrowanego moczu od ciężarnej kobiety (15ty-16ty tydzień ciąży) ukazuje się tylko łuk precypitacyjny hCG. Nie zaobserwowano precypitacji kiedy używano 12.5 L przeciwciała na cm2 powierzchni żelu przeciwko 10 L normalnego ludzkiego osocza. Barwienie: Coomassie Brilliant Blue. Jak wykazała immunoelektroforeza rakietkow, reaguje krzyżowo z ekwiwalentem myszy, wołu piżmowego, tchórza, świni i gnu (6). Środki ostrożności hCG u chomika, konia, 1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo. 2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków. 3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury. 4. Produkt może być stosowany w różnych technikach i w zestawieniu z różnymi typami próbek i materiałów, a zatem każde laboratorium powinno ustalić własny system kontroli jakości. Przechowywanie Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako. IMMUNOCYTOCHEMIA Przygotowanie próbek (108840-002) Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być zastosowane do znakowania tkanki utrwalonej w formalinie i zatopionej w parafinie. Dla odzyskiwania epitopu za pomocą wzbudzania temperaturą optymalne rezultaty uzyskiwane są przy pomocy docelowego roztworu odzyskiwania Dako TRS nr kat. S1700 lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA, pH 9.0. Mniej optymalne rezultaty uzyskiwane są przy pomocy Dako Target Retriewal A 0231/PL/KSS/01.12.02 str. 1/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 Sollution, o wysokim pH nr kat. S3308 lub 10 mmol/L buforu cytrynianowego pH 6.0. Skrawki tkankowe nie powinny wyschnąć podczas obchodzenia się z nimi lub podczas następującej immunohistochemicznej procedury barwienia. Procedura barwienia Rozcieńczenie: Polyclonal Rabbit Anti-Human Chorionic Gonadotropin (hCG), Nr kat. A 0231, może być użyte w rozcieńczeniu od 1:300-1:600 kiedy nanoszone na utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie skrawki ludzkiego łożyska i używając 20 minutowego odzyskiwania epitopu za pomocą temperatury w Dako TRS nr kat. S1700 i 30 minutowej inkubacji z przeciwciałem pierwotnym w pokojowej temperaturze. Optymalne warunki mogą się różnić zależnie od próby i metod preparatyki i powinny być określone przez każde laboratorium. Polecana kontrolą negatywna jest Dako Rabbit Immunoglobulin Fraction (absorbowane w fazie stałej) nr kat. X0936, rozcieńczone do tego samego stężenia białka jak pierwotne przeciwciało. O ile stabilność we właściwym systemie nie została ustanowiona, zaleca się rozcieńczyć produkt tuż przed użyciem lub rozcieńczać w Dako Antibody Diluent, nr kat. S0809. Wizualizacja: Zalecane są: Zestaw DAKO LSABTM+/HRP nr kat. K0679 i zestawy DAKO EnVisionTM+/HRP nr kat. K4008 i K4010. Postępować zgodnie z procedurą dołączoną do wybranego zestawu wizualizacji. Automatyzacja: Przeciwciało to jest dobrze dobrane do barwienia immunohistochemicznego, używając automatycznych platform, takich jak Dako Autostainer. Charakterystyka Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia. (1). Normalne tkanki: W pierwszym trymestrze łożyska, przeciwciało znakuje dużą ilość syncytiotrophoblast cytoplasmic granules, niektóre przechodzące exocytosis (1). Tkanki nieprawidłowe: 189 orchidectomy próbki z germ cell tumours (95 seminomas i 94 non-seminomas) były badane z przeciwciałem. hCG było demonstrowane we wszystkich komponentach choriocarcinoma w syncytiotrophoblasts i syncytiotrophoblast-like cells w 8% wśród seminomas i 30% wśród non-seminomas. Carcinoma-in-situ obecny w kanalikach seminiferous sąsiadującymi z guzami był pozytywny na hCG w kilku przypadkach (2). Referencje 1. Morrish DW, Marusyk H, Siy O. Demonstration of specific secretory granules for human chorionic gonadotropin in placenta. J Histochem Cytochem 1987;35:93-101. 2. Jacobsen GK, Jacobsen M. Alpha-fetoprotein (AFP) and human chorionic gonadotropin (HCG) in testicular germ cell tumours. A prospective immunohistochemical study. Acta Path Microbiol Immunol Scand Sect A 1983;91:165-76. 3. Mehta HC, MacDonald DJ. A sensitive enzyme immunoassay specific for human chorionic gonadotrophin. Clin Chim Acta 1982;121:245-50. 4. Leong AS-Y, Cooper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology; London: Oxford University Press; 1999. p. 25-6. 5. The National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Choriogonadotropin testing: Nomenclature, reference preparations, assay performance, and clinical application; Approved guideline. NCCLS document I/LA10-A (1-56238-314-0) NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA; 1996. 6. Hau J, Nilsson M, Skovgaard-Jensen H-J, de Souza A, Eriksen E, Wandall LT. Analysis of animal serum proteins using antisera against human analogous proteins. Scand J Lab Anim Sci 1990;17:3-7. Objaśnienia symboli (108840-002) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Numer serii Sprawdź w instrukcji stosowania Zużyć przed Producent A 0231/PL/KSS/01.12.02 str. 2/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17