BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood

BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood

GOTOWE PODŁOŻA
HODOWLANE NA
PŁYTKACH – INSTRUKCJE
STOSOWANIA
PA-254042.05
wer.: Sep 2011
BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood
PRZEZNACZENIE
BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood jest nieselektywnym podłożem o
dużej zawartości składników odżywczych, przeznaczonym do izolacji i hodowli beztlenowców
bezwględnych o wysokich wymaganiach odżywczych z próbek pochodzenia klinicznego.
ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY
Metoda mikrobiologiczna.
Schaedler Agar with Sheep Blood jest podłożem o dużej zawartości składników odżywczych,
opracowanym specjalnie do hodowli beztlenowców bezwzględnych, takich jak pałeczki
mlekowe, paciorkowce, laseczki beztlenowe i Bacteroides.1-3 Dzięki dodatkowi witaminy K1 i
heminy stanowi ono podstawę szeregu pożywek selektywnych, w tym podłoża Schaedler-KV
Agar with 5% Sheep Blood.
W podłożu BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood źródłem składników
odżywczych są trzy peptony. Źródło energii stanowi glukoza. Dołączony jest także bufor Tris
zabezpieczający przed nadmiernym spadkiem pH podczas fermentacji glukozy. Wyciąg
drożdżowy jest bogatym źródłem witamin. Hemina i krew owcza dostarczają hemu,(niezbędny
dla różnych beztlenowców bezwzględnych) jak również dodatkowych substancji promujących
wzrost. Witamina K stanowi dodatkową modyfikację, która została wprowadzona, ponieważ
substancja ta jest niezbędna do wzrostu niektórych szczepów Prevotella melaninogenica
(Bacteroides melaninogenicus), a ponadto istnieją doniesienia, że poprawia wzrost niektórych
szczepów Bacteroides oraz niezarodnikujących bakterii Gram-dodatnich.4,5 Chlorek sodu
dostarcza niezbędnych elektrolitów.
Obecnie podłoże to jest szeroko stosowane jako nieselektywne podłoże o dużej zawartości
składników odżywczych do izolowania beztlenowców bezwzględnych.6,7
ODCZYNNIKI
BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood
Skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej
Trzustkowy hydrolizat kazeiny
8,2 g
L-cystyna
Hydrolizat pepsynowy tkanki
2,5
Hemina
zwierzęcej
Hydrolizat papainowy mączki
1,0
Witamina K
sojowej
Glukoza
5,8
Tris-(hydroksymetylo)-aminometan)
Wyciąg drożdżowy
5,0
Agar
Chlorek sodu
1,7
Krew owcza pozbawiona włóknika
Wodorofosforan potasu
0,8
pH 7,6 ± 0,2
*Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie
kryteriów wydajności.
0,4
0,01
0,01
3,0
13,5
5%
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych.
Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego,
odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne zjawiska wskazujące na pogorszenie jakości.
Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie
zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
STOSOWANIA.
PA-254042.05
-1-
PRZECHOWYWANIE I DOPUSZCZALNY OKRES PRZECHOWYWANIA
Po otrzymaniu, płytki należy przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C, w
ich oryginalnym opakowaniu izolującym do chwili użycia. Unikać zamrażania i przegrzewania.
Posiewu na płytki można dokonywać aż do daty ważności (patrz etykieta na opakowaniu) i
inkubować w zalecanych czasach inkubacji.
Płytek z otwartych stosów zawierających po 10 płytek można używać przez okres jednego
tygodnia, przechowując w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C.
KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA
Na płytki posiewa się próbki reprezentatywne niżej wymienionych szczepów (szczegółowe
informacje – zobacz dokument OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA).
Inkubować przez 48–72 godziny w atmosferze beztlenowej (np. system beztlenowy BD
GasPak), w temperaturze 35–37°C.
Szczepy bakteryjne
Bacteroides fragilis
ATCC 25285
Clostridium perfringens
ATCC 13124
Fusobacterium nucleatum
ATCC 25586
Peptostreptococcus anaerobius
ATCC 27337
Porphyromonas levii
ATCC 29147
Bez posiewu
Wzrost
Wzrost dobry lub bardzo dobry; kolonie szarobiałe
Wzrost dobry lub bardzo dobry; kolonie duże,
płatowate, szarobiałe; hemoliza beta (podwójne strefy)
Wzrost dobry lub bardzo dobry; kolonie szarobiałe,
otoczone ciemnoszarymi strefami
Wzrost dobry lub bardzo dobry; kolonie białawe
Wzrost dość dobry lub dobry; kolonie małe, o
nieuporządkowanym wyglądzie, białawe do
szarobrązowych
Zabarwienie czerwone (kolor krwi)
PROCEDURA
Dostarczane materiały
Podłoże BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood (płytki Stacker o śr. 90
mm). Sprawdzane pod kątem obecności mikroorganizmów.
Materiały niedostarczane
Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z
wymaganiami.
Typy próbek
Opisywany produkt jest nieselektywnym podłożem do izolacji i hodowli beztlenowców
bezwzględnych ze wszystkich typów próbek pochodzenia klinicznego (zobacz także
CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY). Podczas
wybierania, pobierania i transportu próbek bakterii beztlenowych należy przestrzegać zasad
odpowiedniej techniki.5-10 Należy stosować odpowiednie podłoża transportowe, np.
BD Port-A-Cul.
Procedura testowa
Wykonać posiew próbki możliwie jak najszybciej po dostarczeniu materiału do laboratorium.
Płytka do posiewu służy przede wszystkim do izolowania czystych kultur z próbek zawierających
florę mieszaną.
Ewentualnie, jeżeli materiał jest posiewany bezpośrednio z wymazówki, można przetoczyć
wymazówkę po niewielkiej powierzchni na krawędzi płytki, a następnie wykonać posiew poprzez
rozprowadzenie materiału po podłożu.
Do izolacji beztlenowców bezwzględnych z dowolnych próbek zaleca się stosowanie co najmniej
dwóch podłoży. Jedną płytkę z podłożem BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep
Blood po zaszczepieniu inkubuje się w atmosferze beztlenowej. Drugą płytkę z podłożem np.
BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood należy inkubować w atmosferze tlenowej
PA-254042.05
-2-
zawierającej 5–10% CO 2 w celu wyizolowania patogenów tlenowych, które mogą występować w
próbce. Ponadto należy wykonać posiew na podłożu selektywnym dla Gram-ujemnych
beztlenowców bezwzględnych, takim jak BD Schaedler Kanamycin-Vancomycin Agar with
5% Sheep Blood. Skutecznym i prostym sposobem uzyskania odpowiednich warunków
beztlenowych jest zastosowanie systemów beztlenowych BD GasPak. Niezależnie od
zastosowanego systemu beztlenowego konieczne jest użycie wskaźnika warunków
beztlenowych, takiego jak jednorazowy wskaźnik warunków beztlenowych GasPak.
Szczegółowe informacje dotyczące obróbki próbek przedstawiono w piśmiennictwie.5-9
Wynik ujemny można przyjąć dopiero po inkubacji płytek w odpowiedniej atmosferze, w
temperaturze 35–37°C, przez co najmniej 48 godz. do 7 dni.
Wyniki
Po inkubacji na większości płytek pojawią się obszary zlewania się wzrostu. W miejscach
posiewu pasmowego drobnoustroje występują w zmniejszonej ilości, ponieważ procedura
posiewu pasmowego w rzeczywistości stanowi technikę „rozcieńczeniową”. Wskutek tego, w
kilku miejscach powinny znajdować się wyizolowane kolonie drobnoustrojów zawartych w
próbce. Ponadto wzrost wszystkich drobnoustrojów można oceniać półilościowo na podstawie
wzrostu w każdym posianym pasmowo obszarze.
Na podłożu BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood obserwuje się wzrost
wszystkich beztlenowców bezwzględnych i względnych. Wzrost na tym podłożu jest
porównywany ze wzrostem występującym na inkubowanym w warunkach tlenowych podłożu
BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood, które będzie zawierać tylko beztlenowce
względne. Wreszcie, wzrost na podłożu BD Schaedler Kanamycin-Vancomycin Agar with
5% Sheep Blood jest porównywany ze wzrostem na pozostałych dwóch podłożach. W
przypadku uzyskania mieszanej hodowli beztlenowców bezwzględnych i względnych, z
podłoża beztlenowego należy wykonać odpowiednie hodowle pochodne na podłożach
nieselektywnych, inkubowanych w warunkach tlenowych i beztlenowych, w celu potwierdzenia,
że wyizolowany szczep jest beztlenowcem bezwzględnym.
Dodatkowe informacje dotyczące procedur różnicowania i identyfikacji przedstawiono w
odpowiednim piśmiennictwie.5,7-9,11
CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY
Na podłożu BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood, które jest jednym ze
standardowych podłoży do izolowania beztlenowców bezwzględnych, Bacteroides, Prevotella,
Porphyromonas, Fusobacterium, Clostridium, Peptostreptococcus, można także
zaobserwować wzrost bezwzględnie beztlenowych pałeczek niezarodnikujących (np. dawnego
rodzaju Eubacterium), Mobiluncus, Actinomyces i wielu innych drobnoustrojów.5,8,9,11
Należy zauważyć, że szybkość wzrostu beztlenowców względnych może wykazywać znaczne
różnice. O ile wzrost Bacteroides fragilis można zaobserwować po 24 godzinach, Mobiluncus
lub szczepy Porphyromonas wymagają 4 do 5 dni, a Actinomyces może wymagać 1 do 3
tygodni lub dłużej do czasu wytworzenia dobrze widocznych kolonii. Jeśli hodowle są ujemne
po 2–3 dniach inkubacji, należy powtórzyć inkubację w warunkach beztlenowych przez kolejne
2–3 dni. W przypadku podejrzenia Actinomyces należy wykonać specjalne posiewy na tym i na
innych podłożach (np. BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood), które sprawdza się po 1, 2
i wreszcie po 3 tygodniach inkubacji.
Podłoże BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood nie jest selektywne dla
beztlenowców bezwzględnych. Podczas inkubacji w warunkach beztlenowych na podłożu tym
można także zaobserwować wzrost drobnoustrojów będących beztlenowcami względnymi. W
związku z tym, w przypadku uzyskania hodowli mieszanej ważne jest porównanie wyników
hodowli beztlenowej z płytką inkubowaną w warunkach tlenowych.
Podłoże Schaedler Agar zawiera duże stężenie glukozy, która nasila szybki wzrost
drobnoustrojów rozkładających sacharozę, lecz może upośledzać przeżywalność
mikroorganizmów narażonych na kwasy nagromadzone w wyniku metabolizmu bakterii.7
Liczba gatunków bakterii występujących jako czynniki zakaźne jest bardzo duża. Dlatego też,
zanim pożywka będzie rutynowo używana do rzadko izolowanych lub nowo odkrytych
PA-254042.05
-3-
drobnoustrojów, użytkownik powinien najpierw sprawdzić jej przydatność, posiewając czyste
hodowle wspomnianych organizmów.
PIŚMIENNICTWO
1. Schaedler, R.W., R. Dubos, and R. Costello. 1965. The development of the bacterial flora in the
gastrointestinal tract of mice. J. Exp. Med. 122:59-66.
2. Mata, L.J., C. Carrillo, and E. Villatoro. 1969. Fecal microflora in healthy persons in a preindustrial
region. Appl. Microbiol. 17:596-602.
3. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation cultivation-identification-maintenance of medical bacteria,
vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore.
4. Gibbons, R.J., and J.B. MacDonald. 1960. Hemin and vitamin K compounds as required factors for
the cultivation of certain strains of Bacteroides melaninogenicus. J. Bacteriol. 80:164-170.
5. Allen, S.D., J.A. Siders, and L.M. Marler. 1985. Isolation and examination of anaerobic bacteria, p.
413-433. In E.H. Lennette, A. Balows, W.J. Hausler, Jr., and H.J. Shadomy (ed.), Manual of clinical
microbiology, 4th ed. American Society for Micro biology, Washington, D.C.
6. Murray, P.R., and D.M. Citron. 1991. General processing of specimens for anaerobic bacteria. In: A.
Balows, W.J. Hausler, Jr., K.L. Herrmann, H.D. Isenberg, and H.J. Shadomy (ed.), Manual of clinical
microbiology, 5th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
7. Holdeman, L.V., E.P. Cato, and W.E.C. Moore (ed.). 1977. Anaerobe laboratory manual, 4th ed.
Virginia Polytechnic Institute and State University, Blacksburg.
8. Engelkirk, P.G., J. Duben-Engelkirk, and V.R. Dowell, Jr. 1992. Principles and practice of clinical
anaerobic bacteriology. Star Publishing Co., Belmont, Calif.
9. Summanen, P., E.J. Baron, D.M. Citron, C.A. Strong, H.M. Wexler, and S.M. Finegold. 1993.
Wadsworth anaerobic bacteriology manual, 5th ed. Star Publishing Co., Belmont, CA, USA.
10. Miller, J.M., and H.T. Holmes. 1995. Specimen Collection, transport, and storage. In: Murray, P. R.,
E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th
ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
11. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of
clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
PAKOWANIE / DOSTĘPNOŚĆ
BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood
Nr katalogowy 254042
Gotowe podłoża na płytkach
hodowlanych, cpu 20
Nr katalogowy 254084
Gotowe podłoża na płytkach
hodowlanych, cpu 120
DODATKOWE INFORMACJE
W celu uzyskania dodatkowych informacji należy skontaktować się z lokalnym przedstawicielem
firmy BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2011 BD
PA-254042.05
-4-