PODSTAWY BIOTECHNOLOGII HODOWLE KOMÓRKOWE (2h
Transkrypt
PODSTAWY BIOTECHNOLOGII HODOWLE KOMÓRKOWE (2h
PODSTAWY BIOTECHNOLOGII HODOWLE KOMÓRKOWE (2h) KLONOWANIE KWIATU KALAFIORA 1. Wysterylizuj miejsce swojej pracy za pomocą wacika nasączonego 70% etanolem. 2. Odetnij maleńki kawałek z kwiatu kalafiora, mniej więcej wielkości wiśni. Pracuj nad czystą szalką Petriego, podziel wycięty fragment rośliny na trzy części. 3. Umieść kawałeczki kalafiora (eksplanty = przeszczepy) w wybielaczu na 10 minut. Od tego momentu należy zwrócić uwagę na szybkie, sterylne wykonywanie czynności, ponieważ będzie to istotne dla zapobiegnięcia zakażenia hodowli. 4. Wypłucz przeszczepy w trzech kolejnych zlewkach zawierających sterylną wodę destylowaną. Za każdym razem wyjmując przeszczepy pamiętaj o wyjałowieniu pęsety w płomieniu palnika i ochłodzeniu jej przed zanurzeniem w wodzie. (Prawidłowy sposób sterylizacji pęsety lub innych narzędzi w pracy w warunkach sterylnych – opalić pęsetę w płomieniu palnika, ostudzić, zanurzyć pęsetę w alkoholu, a następnie przeciągnąć ją przez płomień. Pomimo tego, że etanol dezynfekuje to dodatkowo wysoka temperatura spowoduje zabicie wszystkich zanieczyszczeń znajdujących się na powierzchni używanych instrumentów. Nigdy jednak nie rozpalaj pęsety czy skalpela do czerwoności i pamiętaj aby alkoholu używać daleko od włączonego palnika). 5. Eksplanty można pozostawić w ostatniej zlewce ze sterylną wodą (zakrytą wieczkiem szalki Petriego) do czasu ponownego ich użycia. 6. Weź pierwszą probówkę z medium hodowlanym, wyciągnij korek i szybko opal wylot probówki w płomieniu. Wysterylizuj pęsetę w płomieniu palnika, wystudź ją, pobierz jedną cząstkę kalafiora z ostatniej zlewki, i szybko umieść ją w probówce z medium hodowlanym. Odłóż pęsetę do naczynia z alkoholem etylowym. Ponownie opal wylot probówki i zamknij ją korkiem. 7. Powtórz całą procedurę zawartą w punkcie 6 dla pozostałych dwóch przeszczepów kalafiora, umieszczając je w dwóch kolejnych probówkach z medium hodowlanym. 8. Probówki powinny być przechowywane w ciepłym i wilgotnym miejscu. Wzrost powinien być zauważalny już po 10 dniach. 9. Niepowodzenie hodowli – brak wzrostu przeszczepów, wynika zwykle ze złego wypłukania tkanki roślinnej w wybielaczu. Obserwacje, wyniki i wnioski należy przedstawić w zeszycie w formie sprawozdania z ćwiczeń. Literatura 1. Bajaj Y.P.S. Biotechnology in Agriculture and Forestry, vol. 1-10 - ed. Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York, London, Paris, Tokyo, 1988. 2. Bednarski W., Reps A. (red.) Biotechnologia żywności. Wydawnictwo Naukowo Techniczne, Warszawa, 2003. 3. Bednarski W. (red) Biotechnologia żywności. Wydawnictwo Art., Olsztyn, 1993. 4. Legocki A.B. (red.) Transformowanie i regeneracja roślin. Instytut Chemii Bioorganicznej PAN, Poznań, 1990. 5. Libudzisz Z., Kowal K. (red.) Mikrobiologia techniczna. Tom II, Wydawnictwo Politechniki Łódzkiej, Łodź, 2000. 6. Malepszy S., Niemirowicz-Szczytt K., Przybecki Z..Biotechnologia w genetyce i hodowli roślin. PWN, Warszawa, 1989 7. Malepszy S. (red.) Wprowadzenie do biotechnologii w genetyce i hodowli roślin. Wyd. SGGW, Warszawa 1990 8. Pijanowski E., Dłużewski M., Dłużewska A., Jarczyk A. Ogólna technologia żywności. Wydawnictwo Naukowo-Techniczne, Warszawa, 2004. 9. Wareing P.F., Phillips I.D.J. Przekład zbiorowy pod redakcją Lidii D. WasilewskiejDąbrowskiej. Wzrost i różnicowanie się roślin. PWN, Warszawa, 1985. 10. Zenkteler M. Hodowla komórek i tkanek roślinnych. PWN, Warszawa, 1984.