Pobierz dokument

RZECZPOSPOLITA
POLSKA
(12)
(96)
TŁUMACZENIE PATENTU EUROPEJSKIEGO
Data i numer zgłoszenia patentu europejskiego:
10.06.2004 07008942.0
(97)
Urząd Patentowy
Rzeczypospolitej
Polskiej
O udzieleniu patentu europejskiego ogłoszono:
(19)
PL
(11)
PL/EP 1820494
(13)
T3
(51) Int. Cl.
A61K31/565
A61K31/57
A61K9/16
A61P5/30
A61K9/14
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
(2006.01)
13.01.2010 Europejski Biuletyn Patentowy 2010/02
EP 1820494 B1
(54) Tytuł wynalazku:
Mikrocząstki składające się z estradiolu i cholesterolu
(30) Pierwszeństwo:
US20030477939P
13.06.2003
(43) Zgłoszenie ogłoszono:
19.09.2007 Europejski Biuletyn Patentowy 2007/38
(45) O złożeniu tłumaczenia patentu ogłoszono:
30.07.2010 Wiadomości Urzędu Patentowego 07/2010
(73) Uprawniony z patentu:
PL/EP 1820494
T3
Skendi Finance, Ltd., Road Town, VG
(72) Twórca (y) wynalazku:
Savoir John Claude, Mexico, MX
Angeles Uribe Juan, Nezahualcoyotl, MX
(74) Pełnomocnik:
Przedsiębiorstwo Rzeczników Patentowych Patpol Sp. z o.o.
rzecz. pat. Tagowska Magdalena
02-770 Warszawa 130
skr. poczt. 37
Uwaga:
W ciągu dziewięciu miesięcy od publikacji informacji o udzieleniu patentu europejskiego, każda osoba może wnieść do Europejskiego Urzędu Patentowego sprzeciw
dotyczący udzielonego patentu europejskiego. Sprzeciw wnosi się w formie uzasadnionego na piśmie oświadczenia. Uważa się go za wniesiony dopiero z chwilą
wniesienia opłaty za sprzeciw (Art. 99 (1) Konwencji o udzielaniu patentów europejskich).
EP 1 820 494 B1
Opis
[0001]
Niniejsze zgłoszenie zastrzega pierwszeństwo z tymczasowego zgłoszenia o nr seryjnym
60/477.939, zgłoszonego 13 czerwca 2003 i stanowi zgłoszenie wydzielone ze zgłoszenia EP 04736545.7.
[0002] Niniejszy wynalazek dotyczy mikrosfer z estradiolu i cholesterolu, które są użyteczne w preparatach
5
farmaceutycznych do antykoncepcji i hormonalnej terapii zastępczej. Preparaty te są formułowane do
wydłużonego lub opóźnionego uwalniania i umożliwiają podawanie w odstępach wynoszących około cztery
tygodnie lub więcej.
Tło wynalazku
[0003] Cykl jajeczkowania/menstruacyjny jest skomplikowanym zdarzeniem charakteryzującym się bogatą
10
w estrogen fazą folikularną oraz, po owulacji, bogatą w progesteron fazą lutealną. Każda faza trwa około 14
dni, co składa się na około 28 dni okresu międzymiesiączkowego. Tkanka endometrium odpowiada na
zmiany w poziomach hormonów.
[0004] Początek menstruacji jest początkiem nowego cyklu menstruacyjnego i jest liczony jako dzień
pierwszy. W okresie pięciu do siedmiu dni, powierzchniowe warstwy endometrium, które ulegały wzrostowi i
15
rozwinięciu podczas poprzedniego cyklu jajeczkowania/menstruacyjnego, są złuszczane, ponieważ zanik
ciałka żółtego w niepłodnym cyklu jest związany z utratą wydzielania progesteronu. Następuje dojrzewanie
pęcherzyków w jajnikach, stopniowo powodując wzrost poziomów estrogenu w krążeniu, co z kolei prowadzi
do nowej proliferacji endometrium.
[0005] Dominujący pęcherzyk w jajnikach przechodzi owulację w połowie cyklu, zazwyczaj pomiędzy 12 a
20
16 dniem cyklu i jest przekształcany z głównie źródła estrogenu w źródło, w przewarzającej mierze,
progesteronu (ciałko żółte). Zwiększający się poziom progesteronu we krwi przekształca proliferacyjne
endometrium w fazę wydzielniczą, w której proliferacja tkanki ulega szybkiemu zmniejszeniu, co prowadzi do
powstawania endometrialnych gruczołów lub narządów. Kiedy poddany owulacji oocyt jest zapłodniony w
sposób zdolny do życia i prowadzi swój postępujący podział zarodkowy, wydzielające edometrium i zarodek
25
mogą oddziaływać, co prowadzi do implantacji, począwszy około szóstego do ósmego dnia po zapłodnieniu.
[0006] Jeżeli trwająca ciąża jest ustanowiona przez implantację, embrion przyłączy się i zagnieździ w
wydzielniczym endometrium oraz zacznie wytwarzać ludzką gonadotropinę kosmówkową (HCG). HCG z
kolei stymuluje przedłużoną funkcję ciałka żółtego, tj. funkcja progesteronu pozostaje wysoka i miesiączka
nie pojawia się w płodnym cyklu menstruacyjnym. Ciąża jest wówczas ustalona.
30
[0007] W niepłodnym cyklu menstruacyjnym, zanikający poziom progesteronu we krwi powoduje, że tkanka
endometrium zostaje złuszczona. To zapoczątkowuje kolejny cykl menstruacyjny.
[0008] Ponieważ proliferacja endometrium służy przygotowaniu macicy do nadchodzącej ciąży, manipulacja
hormonami dla środowiska macicznego może dostarczyć antykoncepcji. Na przykład, wiadomo, że
estrogeny obniżają wydzielanie hormonu folikulotropowego poprzez hamowanie zwrotne. W pewnych
35
okolicznościach, estrogeny mogą również hamować wydzielanie hormonu luteinizującego, również poprzez
wychwyt zwrotny. W prawidłowych okolicznościach pik krążących estrogenów, występujący przed owulacją,
wywołuje nagły wzrost hormonów gonadotropowych, który występuje akurat przed i powoduje owulację.
Wysokie dawki estrogenu mogą zapobiegać zapłodnieniu prawdopodobnie z powodu zakłócania implantacji.
[0009] Progestyny mogą również dostarczać antykoncepcji. Endogenny progesteron jest odpowiedzialny za
40
sprzyjające ciąży zmiany w endometrium i cykliczne zmiany komórek i tkanek w szyjce i pochwie.
Podawanie progestyny czyni śluz szyjkowy gęstym, lepkim i bogatokomórkowym, co uważa się utrudnia
1
EP 1 820 494 B1
transport plemników. Podawanie progestyny hamuje również wydzielanie hormonu luteinizującego i blokuje
owulację u ludzi.
[0010]
Obecnie na rynku znajdują się liczne preparaty antykoncepcyjne, które mogą być łatwo
zaklasyfikowane do kilku głównych rodzajów. Pierwsze z nich są znane jako preparaty jednofazowe.
5
Preparaty jednofazowe zawierają stałą ilość estrogenu i progestyny. Niedogodność działań ubocznych
pigułek prepararu jednofazowego zależy od równowagi pomiędzy komponentem estrogenowym a
progestynowym pigułki. Na przykład, w przypadku pigułki o względnej przewadze progestyny, preparat
będzie powodował, z czasem, utratę receptorów zarówno estrogenowych jak i progestynowych. Można się
spodziewać, że wynikiem tego będzie stymulowane w niewystarczający sposób lub zanikowe endometrium,
10
co może ostatecznie powodować albo brak miesiączki po odstawieniu pigułki, albo przełomowe krwawienie,
albo plamienie spowodowane słabą epitelializacją. Z drugiej strony, możliwe jest, że przedłużone stosowanie
preparatu ze względną przewagą estrogenów, mogłoby powodować wzrost endometrium z rozwojem
niepodpartego, kruchego zrębu i następczym plamieniem lub przełomowym krwawieniem.
[0011] Nowe preparaty znane jako trójfazowe mają różne poziomy estrogenu i progestyny; w większości
15
przypadków składają się one ze względnie stałych poziomów estrogenu ze stopniowo wzrastającym
poziomem progestyny podczas cyklu. Ten wzorzec podawania estrogenu i progestyny powoduje względną
przewagę preparatu estrogenowego na początku opakowania z rosnącą aktywnością progestagenową w
stronę końca opakowania. Stabilność endometrium może być lepsza w przypadku tych pigułek, ponieważ
aktywność estrogenowa na początku opakowania pobudza zarówno receptory estrogenu jak i progestyny
20
czyniąc endometrium wrażliwym na rosnące poziomy progestyny ku końcowi opakowania. Aktywność
progestyny wytwarza bardziej zwarty i stabilny zrąb endometrium, chociaż względnie długo trwająca
ekspozycja na progestynę pod koniec opakowania może ciągle prowadzić do zmniejszenia receptorów
estrogenu i progestyny oraz estrogenowej i progestynowej aktywności.
[0012] Znaczącym problemem z tego typu preparatem jest niska dawka steroidów na początku opakowania,
25
która czyni te pigułki podatnymi na interakcje z lekami, lub fakt, że w przypadku pominięcia pigułek, może
wystąpić przełomowa owulacja. Początek opakowania jest krytycznym okresem w odniesieniu do
przełomowej owulacji, ponieważ zażywający ukończył siedmiodniową przerwę w zażywaniu leku, podczas
której może się rozpocząć rozwój pęcherzykowy. Nawet jeżeli ciąża nie wystąpi, przełomowa owulacja może
prowadzić do słabej kontroli cyklu.
30
[0013] 17-β-estradiol (E2) jest najsilniejszym naturalnym estrogenem, którego występowanie stwierdzono u
ludzi i jest głównym produktem wydzielniczym jajników. Jest łatwo utleniany w organizmie do estronu E,
który z kolei może być uwodniony do estriolu. Przemiany te mają miejsce głównie w wątrobie, gdzie
wzajemna przemiana pomiędzy E1 a estradiolem jest wolna. Wszystkie trzy z tych naturalnych estrogenów
są wydzielane w moczu jako glukuronidy i siarczany, wraz z szeregiem powiązanych, mniejszych produktów
35
w postaci rozpuszczalnych w wodzie kompleksów. Powszechnie wiadomo, że po doustnym podaniu
mikronizowanego E2, narastający w krążeniu estrogen jest głównie mniej aktywnym rodzajem E1, który
osiąga wartość szczytową wiele razy większą niż E2. Konwersja E2 do E1, a następnie do innych
metabolitów ma miejsce podczas wchłaniania z jelita i przejścia przez wątrobę. Ten obszerny metabolizm
znacznie ogranicza doustną skuteczność naturalnych estrogenów i ich estrów. Istotnie, z powodu ich
40
ograniczonej doustnej skuteczności, E2 i jego estry są zazwyczaj podawane poprzez iniekcje domięśniowe.
2
EP 1 820 494 B1
[0014] Progesteron (P4) jest aktywną naturalną progestyną, która występuje w ciałku żółtym, łożysku i korze
nadnerczy. Tak jak E2, P4 jest również nieskuteczna przy podawaniu doustnym, z powodu jej szybkiego
metabolizmu w nabłonku jelitowym i w wątrobie. Dlatego podawana jest tylko domięśniowo.
[0015] Z powodu ich ograniczonej skuteczności przy podaniu doustnym, specjaliści w dziedzinie uważają te
5
naturalne żeńskie hormony płciowe za nieodpowiednie w preparacie doustnych środków antykoncepcyjnych.
Specjaliści w dziedzinie skoncentrowali się, w zamian, na wytworzeniu i podawaniu syntetycznych
estrogenów i progestyn dla celów antykoncepcji. Zastosowanie syntetycznych pochodnych również zastąpiło
substancje naturalne w leczeniu menopauzy, zagrażającego poronienia, etc. Jednakże, te syntetyczne
pochodne z większym prawdopodobieństwem powodują toksyczne efekty uboczne, niż stosunkowo
10
bezpieczne hormony endogenne.
[0016]
Podczas gdy chemiczne modyfikacje naturalnych hormonów wykazują zwiększoną doustną
aktywność, mogą one również powodować różne niepożądane działania uboczne. Na przykład, wiadomo, że
syntetyczne pochodne naturalnych hormonów posiadają niekorzystny stymulujący wpływ na syntezę białek
wątroby (być może sprzyjając zakrzepicy) i wykazują wpływ diabetogenny, w przeciwieństwie do naturalnych
15
hormonów płciowych.
[0017] Syntetyczny estrogen jest, na przykład, szybko wchłaniany w żołądku i jelitach. Ponieważ jest on
łatwo metabolizowany, jest szybko wchłaniany przez błonę śluzową jelita cienkiego i/lub podlega szybkim
zmianą chemicznym.
W rezultacie, mogą występować duże indywidualne różnice w biodostępności. Ponadto, syntetyczne
20
estradiole mogą prowadzić do niepożądanej akumulacji pewnych ksenobiotyków, o których wiadomo, że
wykazują właściwości rakotwórcze.
[0018] Wiadomo, że syntetyczne progestyny wykazują również niepożądane działania uboczne łącznie z,
na przykład, maskulinizacją i niekorzystnymi wpływami na poziomy cholesterolu, poziomy trójglicerydów i
poziomy lipoprotein o wysokiej gęstości. Syntetyczne progestyny mogą również powodować zatrzymanie
25
płynów i depresję.
[0019]
Dodatkowym niepożądanym działaniem ubocznym, któremu mogą podlegać osoby poddane
leczeniu antykoncepcyjnemu syntetycznymi hormonami, jest zmniejszenie/zaprzestanie wytwarzania
naturalnych hormonów. Wiele osób doświadcza również niepożądanego braku równowagi hormonalnej
wynikającego z ustania owulacji wywołanego antykoncepcyjnym działaniem podawanych hormonów
30
syntetycznych.
[0020] Preparaty farmaceutyczne, zawierające endogenne hormony, które mogą być podawane w ilościach
zapewniających nie tylko działanie antykoncepcyjne, ale również działanie hormonozastępcze opisano w
WO 2004/110408 i w zgłoszeniu EP nr 04736545.7, będącym zgłoszeniem macierzystym dla niniejszego
zgłoszenia. Takie preparaty obejmują estradiol i progesteron.
35
[0021] Patent US 6.528.094 ujawnia inter alia stabilne w przechowywaniu kompozycje farmaceutyczne
składające się z mieszaniny estradiolu i cholesterolu w stosunku molowym 1:1. Istnieje zapotrzebowanie na
preparaty estradiolu, które są stabilne w trakcie przechowywania i wykazują kontrolowane i opóźnione
uwalnianie aktywnych substancji.
Streszczenie wynalazku
40
[0022] Niniejszy wynalazek dotyczy mikrosfer z estradiolu i cholesterolu, w stosunku około 1:1, o szybkości
rozpuszczania estradiolu (EDR, ang. estradiol dissolution rate) wynoszącej około 6% lub mniej.
[0023] Stosowane tu określenie mikrosfery obejmuje mikrocząstki, mikrokapsułki, liposomy i tym podobne.
3
EP 1 820 494 B1
[0024] Szybkość rozpuszczania estradiolu (EDR) jest miarą ilości estradiolu rozpuszczonego w wodnym
®
roztworze 0,3% wag./obj. monooleinianu polioksyetylenosorbitolu (Tween 80 ), w wodzie
oczyszczonej
USP, przez 24 godziny w 37°C i przy standardowym ciśnieniu.
[0025] Wytwarzanie cząstek o niskim EDR ułatwia przygotowanie preparatu farmaceutycznego do
5
hormonalnej terapii zastępczej (HRT, ang. hormone replacement therapy) zawierającego bardzo niskie
stężenie estradiolu.
Krótki opis figur
[0026]
Figura 1: Wykres profilu średnich wartości estradiolu w osoczu, skala arytmetyczna.
10
[0027]
Figura 2: Wykres profilu średnich wartości progesteronu w osoczu, skala arytmetyczna.
[0028]
Figura 3A: Dyfraktogram rentgenowski mikrosfer estradiol-cholesterol (40:60) przed krystalizacją
(porównanie).
15
[0029]
Figura 3B: Dyfraktogram rentgenowski (rtg) mikrosfer estradiol-cholesterol (40:60) po krystalizacji
(porównanie).
[0030]
Figura 4: Profil rozpuszczania mikrosfer estradiol-cholesterol (60:40) po krystalizacji w fazie stałej według
20
sposobu USPN 6.528.094 B1 (porównanie).
[0031]
Figura 5: Porównawcze profile rozpuszczania mikrosfer estradiol-cholesterol (1:1) przygotowanych w
Procesie Krystalizacji A (Przykład 2) i Procesie Krystalizacji B (Przykład 3).
[0032]
25
Figura 6: Skaningowa kalorymetria różnicowa (DSC, ang. differential scannig calorimetry) mikrosfer
estradiol-cholesterol (1:1) wytworzonych zgodnie z Procesem B.
[0033]
Figura 7: Porównawcze profile rozpuszczania mikrosfer estradiolu (E); oraz estradiol-cholesterol (1:1), (1:2) i
(1:3) zastosowanych w klinicznym badaniu antykoncepcyjnym i wytworzono zgodnie z Procesem
30
Krystalizacji B.
[0034]
Figura 8: Porównawcze profile estradiolu w osoczu w funkcji czasu dla mikrosfer estradiolu (E) oraz
estradiol-cholesterol (1:1), (1:2) i (1:3) wytworzonych zgodnie Procesem Krystalizacji B.
[0035]
35
Figura 9: Porównawcze profile estradiolu w osoczu w funkcji czasu dla mikrosfer estradiolu (E) oraz
estradiol-cholesterol (1:1), (1:2) i (1:3); dawka estradiolu 9 mg i progesteronu 400 mg; a wytworzonych
zgodnie z Procesem Krystalizacji B.
[0036]
Figura 10: Porównawcze profile progesteronu w osoczu w funkcji czasu dla mikrosfer estradiolu (E) oraz
40
estradiol-cholesterol (1:1), (1:2) i (1:3); dawka estradiolu 9 mg i progesteronu 400 mg; a wytworzonych
zgodnie z Procesem Krystalizacji B.
[0037]
4
EP 1 820 494 B1
Figura 11: Porównawcze profile rozpuszczania mikrosfer estradiol-cholesterol (1:1) jak przygotowano w
Procesie Krystalizacji A, B i C.
[0038]
Figura 12: DSC mikrosfer estradiol-cholesterol (1:1) wytworzonych zgodnie z Procesem C.
5
[0039]
Figura 13: Dyfraktogram rtg mikrosfer estradiol-cholesterol (1:1) wytworzonych zgodnie z Procesem C.
[0040]
Figure 14: Dyfraktogram rtg mikrosfer estradiol-cholesterol (1:1) wytworzonych zgodnie z Procesem C.
Szczegółowy opis korzystnych postaci wykonania
10
[0041] W niniejszym wynalazku są wytwarzane mikrosfery estradiolu i cholesterolu w stosunku molowym
około 1:1, o EDR wynoszącym około 6% lub niższym.
[0042]
Preparat farmaceutyczny obejmujący mikrosfery progesteronu oraz mikrosfery estradiolu i
cholesterolu wywoływały niezawodny wpływ antykoncepcyjny. Patrz Przykład 1, Badany produkt B, poniżej.
Poznaną wadą pozajelitowych preparatów antykoncepcyjnych zawierających estradiol jest ich wysoka
15
rozpuszczalność w roztworach wodnych. Mikrosfery zawierające estradiol mogą być formułowane przez
poprodukcyjne traktowanie lub odpuszczanie mikrosfer. To jest, mikrosfery są najpierw formowane do
pożądanych wielkości i kształtów, poddane etapowi traktowania lub odpuszczania w kontrolowanej
atmosferze, a następnie suszone i/lub odzyskiwane. W zależności od obróbki, wytworzone mikrosfery EC
posiadają szybkość rozpuszczania estradiolu (EDR) w roztworze wodnym przez 24 godziny około 6% lub
20
niższą.
[0043]
Jak już wspomniano, wytwarzanie cząstek o niskim EDR ułatwia przygotowanie preparatu
farmaceutycznego do hormonalnej terapii zastępczej (HRT), zawierającego bardzo niskie stężenie
estradiolu. Takie kompozycje o niskim stężeniu estradiolu są bardzo odpowiednie dla pacjentów
wymagających HRT w ciągu pierwszych pięciu lat menopauzy. Ponadto, preparaty o niskim EDR ułatwiają
25
reżim leczenia, który wymaga mniejszej liczby cykli podawania lub ich niższą częstotliwość. Rozważa się, że
preparaty według wynalazku mogą być podawane tak rzadko jak co miesiąc lub co drugi miesiąc.
[0044] Badania cząstek prowadzone z zastosowaniem dyfrakcji rtg, wykazujące tak niskie szybkości
rozpuszczania estradiolu, sugerują, że cząstki są molekularnymi agregatami o półkrystalicznej budowie
obejmującymi zarówno składnik amorficzny, jak i krystaliczny. Kompozycjami o niskiej EDR są korzystnie te,
30
w których estradiol składa się z około 45% do około 65% amorficznego składnika, i około 35% do około 55%
składnika krystalicznego. Korzystnie, cząstki są w około 50-60% składnikiem amorficznym i w około 40-50%
składnikiem krystalicznym. Korzystniej, cząstki są w około 55% składnikiem amorficznym i w około 45%
składnikiem krystalicznym. Te kompozycje o niskim EDR są wytwarzane z mieszaniny estradiol:cholesterol o
stosunku molowym 1:1 .
35
[0045] Nie chcąc być związanym żadną teorią lub zasadą naukową, zgłaszający uważają, że zmniejszenie
rozpuszczalności i niski profil rozpuszczania można przypisać orientacji składnika amorficznego i składnika
krystalicznego w molekularnym agregacie lub molekularnym kompozycie. To jest bierze się pod rozwagę, że
zewnętrzna powierzchnia cząstki jest złożona przeważającej mierze ze składnika amorficznego tak, że
cząsteczki estradiolu orientują się przeważająco hydrofobową częścią cząsteczki ku rozpuszczalnikowi,
40
tworząc w ten sposób cząstki w zasadzie nierozpuszczalne w wodzie.
[0046] Szczególnie powinno się wspomnieć o mikrosferach o krystalograficznych spektrach rentgenowskich
zasadniczo takich samych, jak przedstawione na Fig. 14. Korzystnie estradiol jest 17β-estradiolem.
5
EP 1 820 494 B1
[0047] Zastosowane tu określenie „17-β-estradiol” obejmuje jakąkolwiek farmaceutycznie dopuszczalną i
posiadającą aktywność estrogenu postać 17-β-estradiolu, tj. samego estra-1,3,5(10)-trieno-3,17-β-diolu o
wzorze:
5
lub jednego z jego estrów. 17-β-estradiol może być otrzymywany z naturalnych źródeł lub wytwarzany
syntetycznie. Odpowiednie estry 17-β-estradiolu, dla celów niniejszego wynalazku, obejmują, na przykład, 3monoestry, takie jak benzoesan estradiolu i 3-octan estradiolu; 17-monoestry, takie jak cypionian estradiolu,
17-propionian estradiolu, 17-octan estradiolu, 17-heptanian estradiolu (enantan estradiolu), 17-undekanian
estradiolu (undecylan estradiolu) i 17-walerianian estradiolu; oraz 3,17-diestry, takie jak dipropionian
10
estradiolu i dioctan estradiolu i tym podobne oraz ich kombinacje.
[0048] Cząstki powolnie uwalniające estradiol można formułować łącząc estradiol i cholesterol w stosunku
molowym 1:1, przekształcając kompozycję w cząstki o pożądanej wielkości i kształcie oraz poddając je
działaniu atmosfery nasyconej rozpuszczalnikiem przez dłuższy okres w podwyższonej temperaturze, a
następnie, susząc cząstki w podwyższonej temperaturze. W jednej postaci wykonania, wytworzone cząstki
15
są wystawiane na działanie atmosfery o niskiej wilgotności względnej (RH, ang. relative humidity) przez
około 12 godzin lub więcej przed ekspozycją na atmosferę nasyconą rozpuszczalnikiem. Cząstki są
formułowane w postaci mikrosfer.
[0049] Mikrosfery o EDR wynoszącym około 15% lub mniej mogą być wytworzone przez: tworzenie cząstek
składających się zasadniczo z estradiolu i cholesterolu w stosunku molowym 1:1, w których jedno lub oba są
20
w postaci amorficznej lub polimorficznej; ekspozycję cząstek na działanie atmosfery o względnej wilgotności
(RH) wynoszącej około 25% lub niższej przez około 12 godzin; ekspozycję cząstek w atmosferze wysyconej
acetonem i wodą przez co najmniej około 48 godzin w około 50° do około 65°C; suszenie cząstek w około
35° do około 50°C przez około 24 godziny lub dłużej; i odzyskiwanie wspomnianych cząstek, przy czym EDR
odzyskanych cząstek jest niższe niż około 15% (wagowo) w ciągu 24 godzin.
25
[0050]
Korzystniej, sposób obejmuje tworzenie cząstek składających się zasadniczo z estradiolu i
cholesterolu, przy czym jedno lub oba występują w postaci amorficznej lub polimorficznej; ekspozycję
wspomnianych cząstek w atmosferze o niskim RH przez około 24 godziny; ekspozycję cząstek w atmosferze
wysyconej acetonem i wodą przez co najmniej około 72 godzin w około 60°C; suszenie cząstek w około
45°C przez około 42 godziny; i odzyskiwanie wspomnianych cząstek, przy czym szybkość rozpuszczania
30
estradiolu z odzyskanych cząstek w roztworze wodnym wynosi mniej niż około 6% (wagowo) w ciągu 24
godzin.
[0051] Względne stężenia acetonu i wody wysycające atmosferę wynoszą odpowiednio około 65 %
molowych do około 80 % molowych, i około 20 % molowych do około 35 % molowych. Korzystnie, względne
stężenia wynoszą około 70 % molowych do około 75 % molowych acetonu; i około 25 % molowych do około
35
30 % molowych wody. Najkorzystniej, stężenia dwóch składników wynoszą około 72 % molowych acetonu
6
EP 1 820 494 B1
do około 28 % molowych wody. Niska względna wilgotność RH otoczenia wynosi około 25% lub mniej; a
korzystnie około 20% lub mniej.
[0052] Alternatywnie, cząstki o EDR o około 20% lub mniejszym mogą być formułowane przez seryjną
ekspozycję w atmosferze zawierającej aceton/wodę i atmosferze zawierającej etanol/wodę. Sposób ten
5
obejmuje: (a) tworzenie cząstek składających się zasadniczo z estradiolu i cholesterolu w stosunku
molowym około 1:1, przy czym jedno lub oba są w postaci amorficznej lub polimorficznej; (b) ekspozycję
wspomnianych cząstek w atmosferze wysyconej acetonem i wodą; (c) powtórzenie etapu (b) co najmniej
raz, a korzystnie dwa razy; (d) ekspozycję wspomnianych cząstek w atmosferze wysyconej etanolem i wodą;
(e) suszenie cząstek; i (f) odzyskiwanie wspomnianych cząstek, przy czym szybkość rozpuszczania
10
estradiolu z odzyskanych cząstek w wodnym roztworze wynosi mniej niż około 20% (wagowo) w ciągu 24
godzin.
[0053] W tym alternatywnym sposobie, korzystnie, cząstki są wystawiane na działanie pary mieszaniny
aceton/woda przez około dwa do około pięciu kolejnych etapów trwających co najmniej około 12 godzin w
temperaturze około 20° - 40°C. Korzystnie, etap aceton/woda jest przeprowadzany w trzech kolejnych
15
etapach w ciągu około 24 godzin, w około 30°C.
[0054] Względne stężenie mieszaniny aceton/woda jest jak opisano powyżej (chociaż należy również
rozważyć stężenie około 95 % molowych acetonu i około 10 % molowych wody); a względne stężenie
mieszaniny etanol/woda wynosi około 95 % molowych do około 99 % molowych etanolu; i około 5 %
molowych do około 1 % molowych wody. Cząstki mogą być suszone w około 40° do około 50°C, korzystnie
20
w około 45°C, przez 24 godziny lub dłużej, a korzystnie około 36 godzin. Opisane tutaj oraz powyżej etapy
suszenia mogą by przeprowadzane w próżni lub powietrzu.
[0055] Korzystniej, alternatywny sposób obejmuje: tworzenie cząstek składających się zasadniczo z
estradiolu i cholesterolu w stosunku molowym około 1:1, przy czym jedno lub oba są w postaci amorficznej
lub polimorficznej; ekspozycję wspomnianych cząstek w atmosferze wysyconej acetonem i wodą w około
25
30°C przez trzy kolejne etapy trwające około 24 godzin; ekspozycję wspomnianych cząstek w atmosferze
wysyconej etanolem i wodą przez około dwie godziny w około 30°C; suszenie cząstek w około 45°C przez
około 42 godziny; i odzyskiwanie wspomnianych cząstek, przy czym szybkość rozpuszczania estradiolu
odzyskanych cząstek w wodnym roztworze wynosi mniej niż około 20% (wagowo) w ciągu 24 godzin.
[0056]
30
Estradiol w mikrosferach według niniejszego wynalazku korzystnie występuje w postaci
półkrystalicznej lub kompozytowej, przy czym około 50-60% jest w postaci amorficznej, a około 40-50% w
postaci krystalicznej. Szczególnie korzystnymi postaciami wykonania są te, w których estradiol w około 55%
jest amorficzny, a w około 45% jest krystaliczny.
[0057] Cząstki estradiol/cholesterol o niskim EDR według niniejszego wynalazku mogą być połączone z
progesteronem w celu wytworzenia preparatów o niskiej dawce estradiolu, które mogą być podawane raz w
35
miesiącu lub rzadziej. Na przykład, preparat farmaceutyczny może obejmować około 5 do około 15 mg 17-βestradiolu zmieszanego z cholesterolem w stosunku molowym około 1:1, i około 200 do około 500 mg, np.
około 300 do około 400 mg progesteronu; przy czym stosunek wagowy 17-β-estradiolu do progesteronu
wynosi około 1:40, 17-β-estradiol jest w postaci półkrystalicznej, która jest w około 50-60% amorficzna i w
około 40-50% krystaliczna, a EDR preparatu wynosi około 6% lub mniej. Preparat farmaceutyczny może
40
być wytworzony z mikrosfer estradiol/cholesterol w kombinacji z cząstkami progestyny, korzystnie
progesteronu. Korzystnie cząstki progestyny są mikrosferami. Ponadto cząstki mogą zawierać dodatki i
zaróbki, takie jak środki poślizgowe, bufory, stabilizatory i tym podobne. Dodatkowo, cząstki mogą być
7
EP 1 820 494 B1
zawieszone w nośniku do podawania pozajelitowego. Preparaty te posiadają działanie antykoncepcyjne i
mogą być skutecznie stosowane w hormonalnych terapiach zastępczych obejmujących podawanie
pozajelitowe raz w miesiącu lub nawet co drugi miesiąc. Korzystnie, preparat jest podawany domięśniowo.
[0058] Użyte tu określenie „progesteron” odnosi się do pregn-4-eno-3,20-dionu, tj. związku o wzorze:
5
i zgodnie z zamierzeniem obejmuje progesteron pochodzący ze źródeł naturalnych, jak również wytworzony
syntetycznie.
[0059] Zgodnie z dalszym aspektem wynalazku preparat farmaceutyczny może zawierać wodną formulację
10
obejmującą mikrosfery estrogenu. Korzystnie mikrosfery mają około 25 µm do około 105 µm średnicy;
korzystniej około 35 µm do około 75 µm. Korzystnie mikrosfery są łączone z innymi czynnikami, nośnikami i
zaróbkami takimi, że preparat jest odpowiedni do podawania pozajelitowego strzykawką podskórną.
[0060] Preparaty farmaceutyczne mogą obejmować wodne zawiesiny mikrosfer zawierających estrogen
(np. 17-β-estradiol (E2)) i mikrosfer zawierających progestynę (np., progesteron (P4)) w skutecznej ilości
15
antykoncepcyjnej i skutecznej ilości hormonozastępczej, przy czym mikrosfery zawierające estrogen,
zawierają dodatkowo cholesterol, a mikrosfery progestyny mogą również dodatkowo zawierać endogenne
steroidy, takie jak cholesterol. Każdy z E2 i P4 może być obecny w preparacie w ilości skutecznej do
zapewnienia działania antykoncepcyjnego i hormonozastępczego. W ten sposób, nawet jeśli E2 i P4 nie są
obecne razem w pojedynczej mikrosferze, każde obecne jest w preparacie w skutecznych ilościach.
20
Zatem w szczególności należy wspomnieć o preparacie, w którym 17-β-estradiol i cholesterol są włączone
do mikrosfer, a progesteron jest oddzielnie włączony do odrębnych mikrosfer.
[0061] Określenie „skuteczna ilość antykoncepcyjna i skuteczna ilość hormonozastępcza” 17-β-estradiolu i
progesteronu, gdy dotyczy ssaków, a szczególnie do kobiet, odnosi się do preparatu obejmującego 17-βestradiol i progesteron w stosunku wagowym około 1:40. Korzystnie, ten stosunek wagowy wynosi około
25
9:400. Określenie „dawka jednostkowa” odnosi się do ilości wystarczającej do działania zarówno
antykoncepcyjnego, jak i
w hormonalnej terapii zastępczej u jednej pacjentki przez co najmniej jeden
kompletny cykl menstruacyjny.
[0062] Skuteczna ilość antykoncepcyjna i skuteczna ilość hormonozastępcza 17-β-estradiolu i progesteronu
może być podawana osobnikowi w sposób kontrolowany, żeby zasadniczo zminimalizować i/lub
30
wyeliminować niepożądane działania uboczne powszechnie związane z terapiami antykoncepcyjnymi
hormonami syntetycznymi. Podlegający takiemu podawaniu osobnik, nazywany również “płodnym
osobnikiem płci żeńskiej”, jest korzystnie ssakiem płci żeńskiej w wieku reprodukcyjnym.
[0063] Sposób na jednoczesne działania antykoncepcyjne i hormonozastępcze obejmuje podawanie
pacjentowi preparatu farmaceutycznego obejmującego mikrosfery zawierające 17-β-estradiol według
35
niniejszego wynalazku i ewentualnie mikrosfery progesteronu. Korzystnie, preparat jest dyspersją lub
8
EP 1 820 494 B1
zawiesiną wspomnianych mikrosfer w płynnym podłożu. 17-β-estradiol i, jeśli jest, progesteron są obecne w
preparacie w skutecznej ilości antykoncepcyjnej i skutecznej ilości hormonozastępczej. W przypadku kobiet
skuteczna ilość 17-β-estradiolu wynosi około 9 mg, a skuteczna ilość progesteronu wynosi około 400 mg.
[0064]
5
Cholesterol obecny w mikrosferach według wynalazku jest obojętny względem czynnika
estrogenowego i posiada istotnie zmniejszoną rozpuszczalność w płynach biologicznych, takich jak krew.
Jak omówiono bardziej obszernie powyżej, istotnie stała szybkość rozpuszczania aktywnego czynnika
ułatwia kontrolowane uwalnianie aktywnych czynników w ciągu przedłużonego okresu. Korzystnie,
przedłużonym okresem jest co najmniej jeden pełny cykl menstruacyjny, a w przypadku kobiety są to co
najmniej cztery tygodnie.
10
[0065] Mogą być stosowane skuteczne antykoncepcyjnie i skuteczne hormonozastępczo ilości E2 i P4
odpowiednie do dostarczenia jednoczesnego działania antykoncepcyjnego i hormonozastępczego. W
szczególności w odniesieniu do działania antykoncepcyjnego skuteczną ilością E2 i P4 jest ilość, która jest
wystarczająca do działania na podwzgórze i przysadkę osobnika traktowanego, w celu zahamowania
uwalniania hormonów gonadotropowych koniecznych do utrzymania prawidłowej funkcji jajników.
15
[0066] Dodatkowo, skuteczna ilość hormonozastępcza E2 i P4 jest ilością wystarczającą do istotnego
zastąpienia naturalnej podaży tych hormonów, których endogenne wytwarzanie jest zmniejszone i/lub
eliminowane wraz z zaprzestaniem owulacji.
[0067] Skuteczne ilości antykoncepcyjne i skuteczne ilości hormonozastępcze E2 i P4 są korzystnie
odpowiednimi do osiągnięcia pożądanego działania u kobiety i w odniesieniu do dawki jednostkowej
20
wynoszą około 5 mg do około 15 mg estradiolu i/lub około 200 do 500 mg, np. około 300 mg do około 500
mg progesteronu, korzystniej około 9 mg 17-β-estradiolu i około 400 mg progesteronu.
[0068]
Preparaty według niniejszego wynalazku obejmują zawierające hormon mikrosfery w celu
dostarczenia kontrolowanego, przewidywalnego i powtarzalnego podawania hormonów w nich zawartych.
Różne fizykochemiczne właściwości mikrosfer są ważne do osiągnięcia kontrolowanego uwalniania
25
hormonów. W szczególności rozpuszczalność, wielkość i polimorficzność kompozycji mikrosfer ma istotny
wpływ na szybkość uwalniania. Na przykład, im większa średnica mikrosfery, tym dłużej utrzymuje się
poziom hormonu osiągający niewykrywalne wartości. W niniejszym wynalazku średnica mikrosfer korzystnie
wynosi około 25 µm do około 125 µm; korzystniej około 35 µm do około 105 µm; a najkorzystniej około 35
µm do około 75 µm.
30
[0069] Wiadomo, że naturalny hormon E2 (i również naturalny hormon P4) gdy jest podawany doustnie
ulega metabolicznej degradacji. Odpowiednio, preparat według niniejszego wynalazku korzystnie jest
podawany pacjentkom drogą pozajelitową, w szczególności przez iniekcję domięśniową. Poprzez
zapewnienie naturalnych poziomów hormonów osiągany jest cel, tj. działanie antykoncepcyjne z
jednoczesnym działaniem hormonozastępczym. Dalej, preparaty farmaceutyczne według niniejszego
35
wynalazku sprzyjają ustanowieniu zdrowych miesięcznych cykli menstruacyjnych trwających około 28 dni V
3 dni. W korzystnych postaciach wykonania preparaty według niniejszego wynalazku są podawane
osobnikowi poprzez iniekcję w odstępach miesięcznych, z zastosowaniem odpowiednich środków do iniekcji,
takich jak na przykład, podskórna igła o grubości 18 lub 20.
[0070] Preparaty farmaceutyczne mogą zawierać skuteczne w antykoncepcji i zastępowaniu hormonów
40
ilości estrogenu i
progestyny, połączone w preparacie o przedłużonym lub opóźnionym uwalnianiu.
Preparaty o opóźnionym lub przedłużonym uwalnianiu mogą być skutecznie podawane w odstępach około
czterotygodniowych bez utraty działania antykoncepcyjnego lub hormonozastępczego podczas okresów
9
EP 1 820 494 B1
interwencji. W takich preparatach z opóźnionym uwalnianiem estrogen jest połączony z cholesterolem, a
ewentualnie progestyna może być również połączona z nośnikiem, zaróbką lub spoiwem o zmniejszonej
rozpuszczalności w płynach biologicznych w miejscu podania. Cholesterol ma istotnie niższą
rozpuszczalność w płynach biologicznych, takich jak krew w porównaniu z estrogenami i progestynami,
5
przez co zmniejsza rozpuszczalność tych aktywnych czynników i opóźnia uwalnianie tych aktywnych
składników do krwiobiegu. Dodatkowa informacja, która może być przydatna do wytwarzania takich
preparatów mikrosfer o opóźnionym uwalnianiu, znajduje się w Patencie US nr 5.360.616; 5.512.303;
5.633.014; 5.643.604; oraz 6.287.693.
[0071] Patent US nr 6.287.693 ujawnia proces krystalizacji w fazie stałej, zgodnie z którym wytwarzana jest
10
kompozycja o mieszanej morfologii w postaci cząstek o pożądanej wielkości i kształcie, która, poprzez
ekspozycję
cząstek
na
środowisko
o
wysokim
stężeniu
atmosferycznym
jednego
lub
więcej
rozpuszczalników, jest następnie krystalizowana do postaci najbardziej stabilnego polimorfu każdego z
odpowiednich składników, bez utraty właściwości wielkości/kształtu cząstek. Wskutek krystalicznej postaci
cząstki są stabilne podczas przechowywania, to jest mogą być pakowane i przechowywane jako suche ciało
15
stałe lub proszek lub jako zawiesina w wodnym podłożu przez dłuższe okresy (np., przez co najmniej około
jeden miesiąc) bez utraty pożądanych właściwości wielkości/kształtu. Ponieważ proces krystalizacji w fazie
stałej zapewnia wysoką czystość i stabilność, przygotowane cząstki mikrosfer mogą być wytwarzane z lub
bez dodatkowych zaróbek, buforów, stabilizatorów, środków konserwujących i biocydów.
[0072] Zdolność do wytwarzania cząstek o pożądanej wielkości i kształcie jest szczególnie korzystna,
20
ponieważ stanowi środek do zapewnienia stałej lub nawet jednolitej wielkości i kształtu cząstek, co z kolei
zapewnia łatwość podawania (np., strzykawką podskórną), oraz kontrolowane i przewidywalne
rozpuszczanie i uwalnianie aktywnego czynnika.
[0073]
Preparaty według wynalazku nogą być podawane jakimikolwiek konwencjonalnymi drogami.
Korzystną droga podawania jest podawanie pozajelitowe, a korzystniejszą drogą jest iniekcja domięśniowa
25
(IM, ang. intramuscular). Gdy podawany drogą pozajelitową, korzystne jest, żeby preparat był wytworzony
jako płyn, czy w roztworze, czy też jako mieszanina, taka jak zawiesina. Korzystnie, preparat obejmuje
omówione powyżej mikrosfery jako zawiesinę w wodnym podłożu.
[0074] Dodatkowo, preparat może być wytworzony jako proszek do następujących później zmieszania z
nośnikiem i podawania. W takich postaciach wykonania, preparat farmaceutyczny może być pakowany i
30
udostępniany komercyjnie jako część zestawu. Taki zestaw może obejmować jednostkową lub wielokrotne
dawki: (1) proszku obejmującego aktywny materiał w kombinacji z zaróbkami, dodatkami, buforami,
konserwantami i tym podobnymi; (2) ilości jednostkowej lub wielokrotnej dawki płynnego nośnika,
ewentualnie obejmującego bufory, konserwanty, i/lub biocydy; oraz (3) urządzenie do iniekcji, takie jak
podskórna strzykawka, korzystnie o rozmiarze około 18 lub 20.
35
[0075]
Jeszcze inną opcją podawania preparatów według niniejszego wynalazku jest dostarczenie
przezskórne. Przezskórne dostarczenie leku może być dokonywane różnymi sposobami, włączając iniekcję
proszku, np. w sposób biolistyczny, przy czym cząstki są przyspieszane przez gaz lub inne środki do
przechodzenia przez skórę. Przykład takiego podejścia opisano w Patencie US nr 6.168.587 zatytułowanym
„Bezigłowa strzykawka wykorzystująca naddźwiękowy przepływ gazu do dostarczania cząstek”; i 6.475.181
40
zatytułowanym „Dostarczanie Cząstek Leku”.
10
EP 1 820 494 B1
[0076] Podobne przezskórne dostarczanie może być osiągnięte bardziej biernie, jak przez samoprzylepne
plastry stosowane na skórze przez dłuższe okresy. Takie plastry opisano np. w Patencie US nr 6.149.935
zatytułowanym „Układ stałej matrycy do przezskórnego dostarczania leku”.
[0077] Preparaty farmaceutyczne według niniejszego wynalazku mogą być skutecznie podawane do
5
organizmu jakiegokolwiek ssaka, takiego jak naczelny, pies, kot, owca, koń, świnia, bydło lub mysz.
Korzystnie, osobnikiem jest naczelny, a jeszcze korzystniej kobieta. Będzie zrozumiałe, że szczególny
estrogen i progestyna, stosowane w preparatach dla różnych ssaków mogą różnić się, w tym również w
odniesieniu do ilości.
[0078]
10
Preparaty zawierające mikrosfery według niniejszego wynalazku mogą być wytwarzane z
zastosowaniem jakiegokolwiek odpowiedniego sposobu. W jednej korzystnej postaci wykonania, mikrosfery
są wytwarzane przez ogrzewanie E2 i następnie szybkie schładzanie, tak aby mikrosfery stały się
wystarczająco wykrystalizowane. Po krystalizacji, kapsułki mogą być zbierane przez filtrację, na podstawie
wielkości cząstek.
[0079] Ogólnie, mikrosfery większych rozmiarów zmniejszają maksymalne stężenie hormonu i czas
15
wymagany do osiągnięcia tego stężenia. Dodatkowo, mikrosfery większych rozmiarów zwiększają okres
półtrwania wchłaniania hormonu.
[0080] Zestaw może być wytworzony do stosowania w terapii antykoncepcyjnej/hormonalnej terapii
zastępczej. Zestaw może obejmować preparat farmaceutyczny, który zawiera skuteczną antykoncepcyjnie
ilość i skuteczną hormonozastępczo ilość 17-β-estradiolu i progesteronu. Zestaw może dalej obejmować
20
jeden lub więcej dodatkowych składników, takich jak sterylna ampułka zawierająca wodne podłoże do
odtworzenia mikrosfer dostarczonych w postaci sterylnego proszku w jednorodnej zawiesinie. Dalej, zestaw
może obejmować środki do podawania preparatu, takie jak na przykład strzykawki z igłami o rozmiarach 18
i/lub 20 do iniekcji domięśniowej.
[0081] Paczkowany preparat proszku może być zawieszony w wodnym podłożu.
25
W korzystnej postaci wykonania, wodne podłoże jest pobierane ze sterylnej ampułki zawierającej 3,0 ml
wodnego podłoża. Korzystne wodne podłoże stosowane do zawieszania mikrosfer jest złożone z
następujących składników:
Metyloparaben NF
4,11 mg
Propyloparaben NF
0,45 mg
Mannit NF
144 mg
Sól sodowa karboksymetylocelulozy
USP o niskiej lepkości
2,25 mg
Polisorbat 80 NF
0,60 mg
Woda do iniekcji USP
3,00 mg
Specjalista w dziedzinie zrozumie, że kompozycja i względne stężenia takiego wodnego podłoża nie są
istotne dla niniejszego wynalazku, a zatem zarówno mogą być różne bez istotnej zmiany lub zmniejszenia
30
korzyści, jak i użyteczne według wynalazku.
[0082] Odtworzenie może by dokonywane przez energiczne mieszanie, aż do otrzymania homogennej
zawiesiny. Otrzymana zawiesina korzystnie jest podawana przez głęboką domięśniową iniekcję, np. w
okolicę pośladkową. Pierwsza dawka powinna być podana w pierwszych pięciu dniach od początku ostatniej
miesiączki. Kolejne dawki mają być podawane w schemacie co 28 dni V 3 dni. Dla ułatwienia i komfortu
35
kolejne dawki mogą być podawane w okolice pośladkowe naprzemiennie.
11
EP 1 820 494 B1
[0083] Preparaty zawierające estrogen i progestynę dostarczają rzeczywistych korzyści związanych z
terapią hormonozastępczą. Ponieważ takie preparaty są wytwarzane z naturalnie występujących hormonów,
podawanie tych preparatów służy przywróceniu lub uzupełnieniu naturalnie występujących hormonów, w
innym przypadku wytwarzanych u ssaka płci żeńskiej w wieku reprodukcyjnym. Konwencjonalne środki
5
antykoncepcyjne obejmujące aktywne, doustnie hormony syntetyczne nie dostarczają takich hormonozastępczych korzyści.
[0084] Bez dalszego opisu, uważa się, że specjalista w dziedzinie może, stosując powyższy opis i
następujące ilustrujące przykłady, wytworzyć i stosować preparaty według niniejszego wynalazku i
wykonywać zastrzegane sposoby. Zatem następujące przykłady wykonania ilustrują korzystne postacie
10
wykonania i sposoby wytwarzania i stosowania niniejszego wynalazku, które nie mogą być interpretowane
jako ograniczające w żaden sposób reszty ujawnienia i zawierają również porównawcze przykłady
wykraczające poza niniejszy wynalazek.
Przykład 1
15
Badanie farmakokinetyczne na królikach w celu oceny biodostępności różnych kombinacji mikrosfer
progesteronu i mikrosfer estradiolu oraz mikrosfer w różnych proporcjach estradiolu do cholesterolu
[0085] Badanie to ma na celu ocenę profilu farmakokinetycznego badanych produktów zawierających
Progesteron (P) i 17-ß-Estradiol (E). Prospektywne i porównawcze badanie przeprowadzono na królikach
20
New Zealand płci męskiej. Badane produkty składały się z zawiesin wodnych wykorzystujących opisane
powyżej podłoże wodne z mikrosferami progesteronu + mikrosferami estradiolu (E) lub estradiolu cholesterolu (EC), wytwarzanych w następującym procesie, opisanym w Patencie US nr 5.360.616, i
krystalizowanych według Patentu US nr 6.528.094 B1. Ocenie poddano następujące badane produkty:
Badany produkt
Kompozycja
A
P Mikrosfery (ME) + E ME
B
P ME + (1:1) Estradiol Cholesterol ME
C
P ME + (2:1) Estradiol Cholesterol ME
D
P ME + (3:1) Estradiol Cholesterol ME
[0086] Wodne zawiesiny były podawane w postaci iniekcji domięśniowych (IM). Każdy królik otrzymał 133
25
mg progesteronu i 3 mg estradiolu. Próbki krwi pobierano w punkcie czasowym 0 (przed dawką), 1, 2, 4 i 9
godzinie, i codziennie od 2 do 14 dnia, a co drugi dzień od 14 do 28 dnia. Uzyskane próbki były testowane
pod kątem progesteronu i estradiolu testem radioimmunologicznym (RIA).
[0087]
Z profili osocza obliczono następujące parametry farmakokinetyczne: Pole Pod Krzywą do
nieskończoności (AUC_INF, ang. Area Under the Curve to infinite), Pole Pod Krzywą do czasu pobrania
30
ostatniej próbki (ABC0_t, ang. Area Under the Curve to the last sampling time), Maksymalne stężenie w
osoczu (Cmax), czas do osiągnięcia Cmax (Tmax), okres półtrwania (t2), Stała Eliminacji (Ke) oraz Średni Czas
Przebywania (MRT, ang. Mean Residence Time). Wyniki te poddano analizie statystycznej w celu oceny
ewentualnych różnic między grupami.
[0088] W przypadku porównania parametrów obliczonych dla Estradiolu, chociaż analiza nie wykazała
35
dowodów ewentualnych istotnych statystycznie różnic (p<0,05) w tych parametrach, wśród grup są różnice w
MRT, ponieważ MRT dla (1:1) EC ME (Badany Produkt B) był prawie dwukrotnie dłuższy niż dla Mikrosfer E
(Badany Produkt A), jak przedstawiono w następującej tabeli:
12
EP 1 820 494 B1
Badany Produkt
[0089]
A
B
C
D
MRT (dni)
4,56 ∀ 1,05
8,33 ∀ 2,61
5,01 ∀ 0,55
6,40 ∀ 2,27
CV
23,3
31,3
11
35,5
n
4
4
4
4
W przypadku porównania parametrów obliczonych dla Progesteronu, chociaż obserwowano
zmienności w obliczonych parametrach, nie stwierdzono istotnej statystycznie różnicy (p<0,05) wśród grup.
[0090] Analiza graficzna:
5
[0091] Średnie profile w osoczu dla Estradiolu i Progesteronu ocenione dla czterech badanych produktów
przedstawiono na Fig. 1 i 2. Zgodnie z wynikami dla estradiolu i progesteronu, chociaż analiza statystyczna
nie wykazała różnicy pomiędzy grupami, analiza graficzna profili w osoczu (Patrz Fig. 1) wykazała różne
zachowania. Może to być przypisane małej liczebności próby.
Przykład 2 (porównawczy)
10
[0092] Mikrosfery mieszaniny 49% 17-ß-estradiolu i 51% cholesterolu
[0093] Ten porównawczy przykład jest analogiczny do wytwarzania cząstek zgodnie z przykładem 7
Patentu US nr 6.528.094 B1 (o którym również mowa w niniejszym dokumencie jako “Proces Krystalizacji
A”). Mikrosfery estradiol/cholesterol mogą być połączone z mikrosferami progesteronu w celu wytworzenia
preparatu farmaceutycznego Badanego Produktu B z Przykładu 1 powyżej.
15
[0094] Mikrosfery tej mieszaniny otrzymano przez topienie razem składników i, jak dla czystych substancji,
rozpylanie w krople, które krzepły tworząc mikrosfery. Mikrosfery początkowo wykazywały wysoko
amorficzną zawartość.
[0095] Kiedy mikrosfery umieszczono w odbiorniku o pojemności około 7 litrów i eksponowano przez 24
godziny w 30°C na działanie oparów 8 ml etanolu w porowatym materiale celulozowym, początkowo
20
amorficzne mikrosfery krystalizowały całkowicie w obecności oparów.
[0096] Mikrosfery suszono w 60°C w próżni przez 24 godziny, a pozostałości etanolu obecne w
mikrosferach wynosiły mniej niż 0,01%.
[0097] Do oceny stabilności mikrosfer, niekrystalizowane mikrosfery (jedynie stopione i skrzepłe) i
mikrosfery według niniejszego wynalazku były umieszczone oddzielnie w wodnym roztworze w 40°C, i
25
obserwowane przez mikroskop optyczny po 82 dniach. Jak zaobserwowano przez mikroskop optyczny,
mikrosfery krystalizowane według niniejszego wynalazku pozostawały stabilne w czasie gdy były
umieszczone w wodzie, natomiast niekrystalizowane mikrosfery nie były stabilne.
[0098]
Otrzymane krystalizowane mikrosfery były morfologicznie stabilne przez 82 dni, gdy były
umieszczone w roztworze 0,01 % Polisorbatu 80 w oczyszczonej wodzie USP w 40° C, lub przez 14 dni gdy
30
były domięśniowo wstrzyknięte królikom.
[0099] Fig. 3 przedstawia dyfraktogram rtg Mikrosfer EC (40:60) przed i po krystalizacji; a Fig. 4
przedstawia odpowiadający profil rozpuszczania (tj. 74% estradiolu uległo rozpuszczeniu w ciągu 24 godzin
w wodnym roztworze 0,3% Tween 80®).
Modyfikowany proces krystalizacji dla EC ME przedstawiający 20% rozpuszczenie w ciągu 24 godzin
35
(„Proces Krystalizacji B”)
[0100] Mikrosfery Estradiol-cholesterol (1:1) wytworzono jak w przykładzie 2 powyżej.
Mikrosfery o wysokiej amorficznej zawartości były eksponowane na pary acetonu i wody (95 % molowych
13
EP 1 820 494 B1
acetonu: 5 % molowych wody) przez trzy kolejne 24 godzinne etapy w 30°C. Pomiędzy etapami,
hermetyczne pojemniki otwierano i zawartości suszono powietrzem, pozostały rozpuszczalnik usuwano i
wówczas mikrosfery estradiolu poddawano następnemu etapowi ekspozycji na opary.
[0101] Cząstki były wówczas ogrzewane (suszone) w 45°C przez 42 godziny w próżni (około 12,2 in. Hg).
5
[0102] Powstające cząstki charakteryzowały się średnią EDR około 20%. Patrz Fig. 5.
[0100] Przykład 4
[0103]
Proces krystalizacji dla ultraniskiego rozpuszczania mikrosfer Estradiol-Cholesterol („Proces Krystalizacji C”)
[0104] Mikrosfery estradiol-cholesterol wytworzono zgodnie z procesem z przykładu 2. Cząstki były
10
przechowywane w stosunkowo niskiej wilgotności przez 24 godziny. Cząstki były wówczas eksponowane na
pary acetonu i wody (72 % molowych acetonu/28 % molowych wody) przez 72 godziny w 60°C. Cząstki były
wówczas ogrzewane (w celu osuszenia) w 45°C przez 42 godziny.
[0105] Otrzymane cząstki miały średnio około 5% rozpuszczalność estradiolu w ciągu 24 godzin w wodnym
roztworze 0,3% monooleinianu polioksyetylenosorbitolu (Tween 80®) w standartowej temperaturze i
15
ciśnieniu.
[0106] Fig. 11 przedstawia profil rozpuszczania cząstek z tego Przykładu porównany z cząstkami
otrzymanymi sposobami z Przykładów 2 i 3.
[0107] Fig. 12 przedstawia profil DSC cząstek otrzymanych w tym Przykładzie.
[0108] Fig. 13 i 14 są dyfraktogramami rtg cząstek otrzymanych w Przykładzie 4.
20
Zastrzeżenia patentowe
1. Mikrosfery estradiolu i cholesterolu w stosunku molowym 1:1 o EDR 6% lub mniejszej.
2. Mikrosfery według zastrz. 1, o krystalograficznych spektrach rentgenowskich zasadniczo takich samych
jak na Fig. 14.
25
3. Mikrosfery według zastrz. 1, przy czym estradiol składa się z postaci półkrystalicznej, która w 50-60% jest
amorficzna, a w 40-50% jest krystaliczna.
4. Mikrosfery według zastrz. 1, przy czym estradiol jest w postaci półkrystalicznej, która w 55% jest
amorficzna, a w 45% krystaliczna.
5. Mikrosfery według zastrz. 1, przy czym estradiol jest 17- β-estradiolem.
30
14
n = 4 króliki na badany produkt
Czas (dni)
Badanie nr BIO 2002 01
Profil estradiolu w osoczu ± błąd standardowy
Profil średnich wartości estradiolu w osoczu. Skala arytmetyczna
EP 1 820 494 B1
5
15
n = 4 króliki na badany produkt
Czas (dni)
Badanie nr BIO 2002 01
Profil progesteronu w osoczu ± błąd standardowy
Profil średnich wartości progesteronu w osoczu. Skala arytmetyczna
EP 1 820 494 B1
16
,
teta
Liniowy
,
,
,
Dyfraktogram rentgenowski mikrosfer estradiol-cholesterol (40:60) przed krystalizacją
EP 1 820 494 B1
17
,
teta
Liniowy
,
,
,
Dyfraktogram rentgenowski mikrosfer estradiol-cholesterol (40:60) po krystalizacji
EP 1 820 494 B1
18
19
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
Czas (godziny)
Profil rozpuszczania mikrosfer EC (60:40) po krystalizacji oparami
,
EP 1 820 494 B1
,
,
,
Czas (godziny)
,
krystalizowane zgodne z procesem B
krystalizowane zgodne z procesem A
,
Porównawcze profile rozpuszczania mikrosfer EC (1:1) przygotowanych w Procesie A i B
EP 1 820 494 B1
20
Temperatura (°C)
Uniwersalny przyrząd V3.8 TA
Mikrosfery estradiol-cholesterol (1:1) wytworzone zgodnie z Procesem B
EP 1 820 494 B1
21
Czas (godziny)
klinicznym badaniu antykoncepcyjnym
Porównawcze profile rozpuszczania mikrosfer E oraz EC (1:1), (1:2) i (1:3) zastosowanych w
EP 1 820 494 B1
22
Czas (dni)
Profile estradiolu w osoczu
EP 1 820 494 B1
23
Czas (dni)
Profil estradiolu w osoczu
Badanie kliniczne 0103/I/APL
Średnia ± SE n =10
Dawka: E2 9 mg + P4 400 mg
EP 1 820 494 B1
24
Czas (dni)
Profil progesteronu w osoczu
Badanie kliniczne 0103/I/APL
Średnia ± SE n =10
Dawka: E2 9 mg + P4 400 mg
MIKR.
MIKR.
MIKR.
MIKR.
EP 1 820 494 B1
25
Czas (godziny)
ME krystalizowane zgodne z procesem C
ME krystalizowane zgodne z procesem B
ME krystalizowane zgodne z procesem A
Porównawcze profile rozpuszczania mikrosfer EC (1:1) przygotowanych w Procesie A, B i C
EP 1 820 494 B1
26
Temperatura (°C)
Mikrosfery estradiol-cholesterol (1:1) wytworzone zgodnie z Procesem C
EP 1 820 494 B1
27
Skala 2-teta
Mikrosfery estradiol-cholesterol (1:1) wytworzone zgodnie z Procesem C
EP 1 820 494 B1
28
Skala 2-teta
Mikrosfery estradiol-cholesterol (1:1) wytworzone zgodnie z Procesem C
EP 1 820 494 B1
29