CK-NAC - "Aqua-Med" ZPAM – KOLASA sp.j

CK-NAC
ODCZYNNIKI
BIOLABO
Metoda jednoodczynnikowa IFCC
Odczynniki do ilościowego oznaczania aktywności kinazy kreatynowej
[EC 2.7.3.2] w ludzkiej surowicy.
BIOLABO
PRODUCENT:
WYŁACZNY DYSTRYBUTOR:
BIOLABO SA,
AQUA-MED ZPAM – KOLASA sp. j.,
02160, Maizy, France
Wólczańska 212, 90-531 Łódź
NR KAT. 92207 R1 20 x 3 mL
R2 1 x 60 mL
NR KAT. 92307 R1 8 x 20 mL R2 8 x 20 mL
AQUA-MED
Tel. : 0-42 636 38 02, 636 37 51
IVD DO DIAGNOSTYKI IN VITRO
Fax : 0-42 637 02 96
ZNACZENIE KILINICZNE (1)
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
Kinaza kreatynowa (CK) występuje głównie w sercu, mózgu i tkance
mięśni szkieletowych. Uszkodzenie lub choroba serca i mięśni (zawał
mięśnia sercowego, dystrofie mięśniowe) będą powodowały wzrost
poziomu aktywności CK w surowicy. CK ma 3 formy izoenzymatyczne
rozdzielane poprzez elektroforezę lub chromatografię kolumnową.
Diagnostyczna swoistość CK może być zwiększona przez oznaczanie w
surowicy poziomu każdego izoenzymu.
W zawale mięśnia sercowego aktywność CK zaczyna wzrastać w ciągu
4 do 6 godzin, osiąga szczyt pomiędzy 18 i 30 godziną i powraca do
normy do trzeciego dnia.
Odczynniki BIOLABO są przeznaczone do profesjonalnego użytku w
diagnostyce in vitro.
ZASADA (4) (5) (6)
Metody enzymatyczne opisane przez Olivier i zmodyfikowane przez
Rosalki, a później przez Szasz.
CK
1) Fosforan kreatyny + ADP
Kreatyna + ATP
2) D-Glukoza
+
HK
ATP
3) G-6-fosforan + NADP+
G6-PDH
• Używać odpowiedniej ochrony (fartuch, rękawiczki, okulary).
• Nie pipetować ustami.
• Zanieczyszczoną skórę czy zanieczyszczone oczy przemyć starannie dużą
ilością wody i zasięgnąć porady lekarza.
• Odczynnik zawiera azydek sodowy (stężenie < 0.1%), który może reagować z
miedzią i ołowiem kanalizacji. Wylewając spłukać dużą ilością wody .
• Pozostałe informacje są zawarte w Karcie Charakterystyki Substancji
Niebezpiecznej.
• Odpady : Przestrzegać przepisów obowiązujących w kraju.
Wszystkie próbki powinny być traktowane jako potencjalnie zakaźne –
zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej stosować odpowiednie środki
ostrożności. Przestrzegać przepisów obowiązujących w kraju.
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKÓW
ADP + G-6-fosforan
NR KAT. 92307: Przenieść szybko zawartość butelki R1 (enzymysubstraty) do butelki R2 (bufor).
6-Fosfoglukonian
+ NADPH + H+
NR KAT. 92207: Przenieść szybko 3 mL odczynnika R2 (bufor) do
butelki R1 (enzymy-substraty).
Wzrost absorbancji proporcjonalny do aktywności CK w próbce jest
mierzony w 340 nm.
SKŁAD ODCZYNNIKÓW (7)
Butelka R1 : Używać nieostrego narzędzia dla usunięcia aluminiowego
kapsla.
TRWAŁOŚĆ I PRZECHOWYWANIE
Skład odczynnika roboczego wg zaleceń IFCC:
AMP (Adenozyno-5’monofosforan)
5 mmol/L
D-Glukoza
20 mmol/L
NADP (fosforan
dwunukleotydu
nikotyamidoadeninowego)
2 mmol/L
N-Acetylo-L-cysteina
20 mmol/L
AP5A
[Di(adenozyno-5’)
pentafosforan]
10 µmol/L
HK (Heksokinaza )
> 3000 UI/L
EDTA
(Kwas etyleno
dwuaminoczterooctowy)
2 mmol/L
G-6-PDH
(Dehydrogenaza
glukozo-6fosforanowa)
> 2500 UI/L
Mg2+
10 mmol/L
Octan imidazolu
pH 6.7
100 mmol/L
ADP
(Adenozynodwufosforan)
2 mmol/L
Fosforan kreatyny
30 mmol/L
Odczynnik zawiera również surfaktanty i stabilizatory.
Wymieszać delikatnie i przed użyciem odczynnika poczekać do
całkowitego rozpuszczenia się (ok. 2 minuty).
Przechowywać w 2-8°C i chronić przed dostępem światła.
• Nie otwarte :
Odczynniki są trwałe do daty ważności na etykiecie.
• Po otwarciu :
Odczynnik roboczy jest trwały minimum 30 dni, jeśli jest wolny od
kontaminacji
Wyrzucić odczynnik, jeśli jest mętny lub jeśli absorbancja w 340 nm jest
> 0.800.
Zestaw może być transportowany minimum 1 tydzień w temperaturze
pokojowej.
POBIERANIE I PRZYGOTOWANIE PRÓBKI (1) (2)
Niezhemolizowana surowica. Unikać antykoagulantów takich, jak: EDTA,
cytryniany i fluorki. Chronić przed dostępem światła i przechowywać w
hermetycznych pojemnikach aby zapobiec utracie CO2. Dodawanie grup
tiolowych nie jest niezbędne.
Aktywność CK jest trwała w surowicy przez :
• 4 to 8 godzin w temperaturze pokojowej
• 1 do 2 dni w 2-8°C.
• 1 miesiąc w –20°C.
INTERFERENCJE (1) (3)
Odrzucić jakąkolwiek zhemolizowaną próbkę (niektóre enzymy i
produkty metabolizmu erytrocytów interferują z reakcją).
Obszerniejszy przegląd czynników mających wpływ na to oznaczenie
znajduje się w publikacji Young D.S.
Wersja : AT 92207 02 12 2004
NIEZBĘDNE NIE DOSTARCZONE MATERIAŁY
1. Podstawowe wyposażenie medycznego laboratorium analitycznego.
2. Prawidłowe i patologiczne surowice kontrolne.
MANUALNA PROCEDURA
KALIBRACJA
Wyniki będą zależały od dokładności kalibracji aparatu, czasu pomiaru
przyrostu absorbancji, przestrzegania stosunku odczynnik/próbka i
kontroli temperatury.
Zaleca się używanie teoretycznego współczynnika kalibracji
(§ OBLICZENIA) lub wieloparametrowego kalibratora spójnego
pomiarowo z metodą referencyjną czy materiałem referencyjnym.
•
BIOLABO EXATROL-N (wartości prawidłowe) NR KAT. R95010
•
BIOLABO EXATROL-P (wartości patologiczne) NR KAT. R95011
•
Inne surowice kontrolne odwołujące się do tej samej metody.
•
Zewnętrzny program kontroli jakości.
Zaleca się kontrolowanie w następujących przypadkach :
•
Minimum raz na serię.
•
Minimum raz w ciągu 24 godzin.
•
Przy zmianie butelki odczynnika.
•
Po serwisowaniu aparatu.
Jeśli kontrola jest poza zakresem, podjąć następujące działania :
1. Powtórzyć test z tą samą kontrolą.
2. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, przygotować świeżą
surowicę kontrolną i powtórzyć test.
3. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, zweryfikować parametry
oznaczenia : długość fali, temperaturę, stosunek próbka/odczynnik,
czas pomiaru spadku absorbancji, współczynnik kalibracji.
4. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, użyć nową butelkę
odczynnika i powtórzyć oznaczenie.
5. Jeśli kontrola jest nadal poza zakresem, skontaktować się z
działem technicznym BIOLABO lub lokalnym dystrybutorem.
WARTOŚCI OCZEKIWANE
IU/L
w 30°C
w 37°C
Odpipetować do termostatowanej kuwety o d=1cm:
1 mL
Odczynnik roboczy
Doprowadzić do 37°C (30°C) i następnie dodać :
50 µL
µKat/L
25 - 115
38 - 174
Kobiety
IU/L
w 30°C
w 37°C
17 - 92
26 - 140
Wymieszać. Włączyć minutnik i po 2 minutach odczytać absorbancję
początkową w 340 nm. Odczytywać absorbancje ponownie co minutę przez
3 minuty.
Obliczyć wzrost absorbancji na minutę (∆Abs/min).
Uwagi : Procedury na automatyczne analizatory są dostępne na
życzenie. Skontaktować się z działem technicznym BIOLABO.
OBLICZENIA
Obliczyć wynik następująco :
Z teoretycznym współczynnikiem :
IU/L = (∆Abs/min) x 3333
µKat/L =
IU/L
60
Za pomocą surowiczego multikalibratora :
(1) (2)
Na aktywność CK w surowicy ma wpływ wiek, płeć, źródło pochodzenia
tkankowego, waga ciała, aktywność fizyczna i inne słabiej poznane
czynniki genetyczne. Scharakteryzowano 3 rodzaje populacji i
wykazano, że aktywność CK u dzieci jest wyższa niż u dorosłych, u
mężczyzn wyższa niż u kobiet, u afroamerykanów aktywność jest z kolei
wyższa niż u ludności kaukaskiej czy hiszpańskiej.
Przykładowe zakresy wartości prawidłowych :
Mężczyźni
Pozwolić aby odczynniki i próbki osiągnęły temperaturę pokojową.
Próbkę
KONTROLA JAKOŚCI
µKat/L
[0.30 - 1.57]
[0.46 - 2.38]
Poziom
wysoki
Między
seriami
N = 20
Średnia IU/L
59.6
282.7
SD IU/L
0.92
1.49
CV %
1.54
0.53
Poziom
prawidłowy
Poziom
wysoki
Średnia IU/L
59.6
284.2
SD IU/L
1.11
3.09
CV %
1.86
1.09
Granica wykrywalności : ok. 10 IU/L
Czułość dla 330 IU/L : ∆Abs/min 0.100 w 340 nm.
Porównanie z komercyjnie dostępnym odczynnikiem w 37°C (n=24) :
y = 1.09 x – 7.88
r = 0.9995
LINIOWOŚĆ
Oznaczenie jest liniowe do 1000 IU/L (17 µKat/L).
(∆Abs/min) badanej
x stężenie kalibratora
(∆Abs/min) kalibratora
PIŚMIENNICTWO
(1)
(2)
(3)
TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R.
Ashwood, W.B. Saunders (1999) p. 657-666, 728, 1185-1190.
Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 180-186.
YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995)
p .3-43 to 3-46.
Oliver I.T., Biochem J., 61, (1955), p.116-122.
Rosalki S.B., J. Lab. Clin. Med., 69, 1967), p.696-705.
Szasz G., Gruber W., and Bernt E., Clin. Chem., 22 (1976), p.650-656.
Horder M and al, Approved IFCC recommendation on methods for the
measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 7. IFCC method for
creatine kinase [EC 2. 7. 3. 2]. Eur J. clin. Chem. Clin. Biochem., 29, p435456 (1991).
Wyprodukowano we Francji
CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA
Poziom
prawidłowy
Aktywność CK =
(4)
(5)
(6)
(7)
[0.43 - 1.95]
[0.65 - 2.96]
Każde laboratorium powinno wyznaczyć swoje własne zakresy wartości
prawidłowych dla populacji, dla której świadczy usługi laboratoryjne.
Wewnątrz
serii
N = 20
Jeśli ∆Abs/min > 0.300, rozcieńczyć próbkę roztworem soli i powtórzyć
oznaczenie biorąc pod uwagę przy obliczaniu wyniku współczynnik
rozcieńczenia. Liniowość zależy od stosunku próbka/odczynnik.
Wersja : AT 92207 02 12 2004