VENTANA anti-Cyclin D1 (SP4-R) Rabbit Monoclonal
Transkrypt
VENTANA anti-Cyclin D1 (SP4-R) Rabbit Monoclonal
VENTANA anti-Cyclin D1 (SP4-R) R) Rabbit Monoclonal Primary Antibody 790-4508 05862949001 50 PRZEZNACZENIE Przeciwciała VENTANA anti antiCyclin D1 (SP4 (SP4-R) Rabbit Monoclonal Primary Antibody (VENTANA VENTANA anti anti-Cyclin D1 (SP4R))) są skierowane przeciwko cząsteczkom cykliny D1. Cyklina D1 to kluczowy regulator cyklu komórkowego, ulegający ekspresji głównie w fazie G1 cyklu. Przeciwciało to wykazuje jądrowy wzorzec barwienia. Może Rysunek 1. VENTANA anti-Cyclin D1 (SP4-R) być ono stosowane pomocniczo wykazujące wzorzec barwienia jądrowego w w rozpoznawaniu chłoniaka tkance chłoniaka z komórek płaszcza z komórek płaszcza oraz w rozpoznawaniu raka sutka. utka. Przeciwciało jest przeznaczone do jakościowego barwienia skrawków tkankowych utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Wynik powinien zinterpretować wykwalifikowany patolog w połączeniu z badaniem histologicznym, odnośnymi danymi klinicznymii i właściwymi badaniami kontrolnymi kontrolnymi. To przeciwciało jest przeznaczone do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA Cyklina D1 to białko o masie cząsteczkowej 36 kD, które pełni rolę podjednostki regulacyjnej enzymów CDK 4 i CDK 6 (kinazy zależnej od cyklin 4 i 6). Cyklina D1 jest ważna dla postępu cyklu komórkowego w fazie G1 i G2, jednak jej aktywność wygasa podczas fazy S1. Cyklina D1 jest znanym onkogenem pełniącym istotną rolę w rozwoju wielu nowotworów. Jest także przydatnym znacznikiem immunohistochemicznym. Nadekspresja cykliny D1 podczas namnażania komórek jest często wykorzystywana do odróżnienia chłoniaka z komórek płaszcza od chłoniaka z małych limfocytów 2. Chłoniaka z komórek płaszcza (MCL) można scharakteryzować na podstawie dstawie translokacji chromosomowej obejmującej przegrupowanie protoonkogenu cykliny D1 z chromosomu 11 do chromosomu 14, skutkujące nadekspresją cykliny D1 mRNA RNA2. Ponadto nadekspresję cykliny D1 zaobserwowano w wielu rodzajach nowotworów, na przykład w nowotworach przełyku3,6, żołądka3, płuc4,6, pęcherza5, wątrobowokomórkowym6, a także w szpiczaku mnogim7 i oponiakach8. Cyklina D1 ma również znaczenie w wykrywaniu raka piersi9. ZASADY DZIAŁANIA VENTANA anti-Cyclin D1 (SP4-R) to królicze przeciwciało monoklo monoklonalne produkowane przeciwko C-końcowemu końcowemu fragmentowi rekombinowanego białka ludzkiego cykliny D1.VENTANA anti-Cyclin D1 (SP4-R) wiąże się z cykliną D1 w skrawkach tkanek zatopionych w parafinie i wykazuje jądrowy wzorzec barwienia. Przeciwciało to można wizualizować przy użyciu zestawu OptiView DAB IHC Detection Kit (nr kat. 760-700/06396500001) lub ultraView Universal DAB Detection etection Kit (nr kat. 760-500/05269806001). 500/05269806001). Dodatkowe informacje można znaleźć w ulotkach dołączonych do opakowania produktów OptiView DAB IHC Detection etection Kit lub ultraView Universal DAB Detection Kit. Nie dołączono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy VENTANA, ani elementów pomocniczych, takich jak pozytywne i negatywne kontrolne preparaty tkankowe. Nie wszystkie produkty przedstawione w ulotce lotce dołączonej do opakowania są dostępne we wszystkich rejonach geograficznych. Odpowiednich informacji udzieli lokalny przedstawiciel odpowiedzialny za wsparcie techniczne. PRZECHOWYWANIE Produkt – bezpośrednio po odebraniu i zawsze, gdy nie jest używany używan – powinien być przechowywany w temperaturze 2–8°C. 8°C. Nie zamrażać. W celu zapewnienia właściwego dozowania odczynnika i stabilności przeciwciał należy po każdym użyciu założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce, w pozycji pionowej. Na każdym dozowniku przeciwciała podana jest data ważności. Prawidłowo przechowywany odczynnik zachowuje trwałość do daty podanej na etykiecie. Nie wolno stosować odczynnika po upływie daty ważności. PRZYGOTOWANIE PRÓBKI Do stosowania z tym przeciwciałem pierwszorzędowym wszorzędowym nadają się rutynowo przygotowane tkanki utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie pod warunkiem stosowania zestawów do detekcji firmy VENTANA i aparatów do barwienia z serii VENTANA BenchMark IHC/ISH.. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek tkan jest 10% obojętna zbuforowana formalina10. Preparaty należy niezwłocznie wybarwić, ponieważ antygenowość ciętych skrawków tkanek może z czasem ulegać osłabieniu. Przy badaniu nieznanych preparatów zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli dodatniej i ujemnej. OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI 1. 2. 3. 5. 6. 7. 8. VENTANA anti-Cyclin D1 (SP4-R) zawiera odczynnik w ilości wystarczającej na 50 testów. Jeden dozownik VENTANA anti-Cyclin D1 (SP4-R) o pojemności 5 ml zawiera około 0,33 μg króliczego przeciwciała monoklonalnego. FT0700-410l WYMAGANE MATERIAŁY, AŁY, KTÓRE NIE WCHODZĄ WCHOD W SKŁAD ZESTAWU 4. DOSTARCZANY ODCZYNNIK 2016-07-25 To przeciwciało jest rozcieńczone w roztworze soli z buforem Tris-HCI Tris 0,05 M z dodatkiem 1% białka nośnikowego i konserwantu ProClin 300. 300 Całkowite stężenie białek w odczynniku ku wynosi około 10 mg/ml. Stężenie swoistego przeciwciała wynosi około 0,07 μg/ml. Nie jest znana żadna nieswoista reaktywność przeciwciał zawartych w tym produkcie. VENTANA anti-Cyclin D1 (SP4-R) jest rekombinowanym króliczym przeciwciałem monoklonalnym, otrzymywanym z oczyszczonego supernatantu z hodowli komórkowej. Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki dołączonej do opakowania zestawu do detekcji firmy VENTANA,, aby uzyskać szczegółowy opis dotyczący następujących kwestii: (1) Zasady przeprowadzania nia procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone do zestawu, (3) Pobieranie próbek i przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości, (5) Rozwiązywanie problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne ograniczenia. 1/4 Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD). Wyrób przeznaczony wyłącznie do stosowania przez personel medyczny. W tym odczynniku zastosowano ProClin 300 jako środek konserwujący. Jest on klasyfikowany jako substancja drażniąca i w kontakcie ze skórą może wywoływać reakcje uczuleniowe. Podczas pracy z produktem należy stosować uzasadnione środki ostrożności. Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. ś Stosować odpowiednią odzież i rękawice ochronne. Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak niebezpieczne materiały biologiczne i utylizować z zachowaniem właściwych środków ostrożności. Unikać kontaktu odczynników z oczami czami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu odczynników z wrażliwymi miejscami spłukiwać obficie dużą ilością wody. Unikać skażenia mikrobiologicznego odczynników ze względu na możliwość otrzymania nieprawidłowych wyników. W celu uzyskania informacji na temat zalecanej metody utylizacji produktu należy skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub krajowymi. Dodatkowe informacje na temat bezpieczeństwa można znaleźć w Karcie charakterystyki produktu oraz w Przewodniku po symbolach i zwrotach dotyczących zagrożeń na stronie www.ventana.com. 1008718PL Rev D PROCEDURA BARWIENIA Przeciwciała pierwszorzędowe firmy VENTANA zostały opracowane w celu stosowania w automatach do barwienia z serii BenchMark IHC/ISH w połączeniu z zestawami do detekcji tekcji i akcesoriami firmy VENTANA. Zalecane protokoły barwienia zawierają Tabela 1 oraz Tabela 2. Niniejsze przeciwciała zostały zoptymalizowane pod kątem określonego czasu inkubacji, jednakże użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego odczynnika. Parametry ry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat procedury barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej do opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy VENTANA VENTANA. Tabela 1. Zalecany protokół barwienia dla odczynnika VENTANA anti anti-Cyclin D1 (SP4-R) z zestawem OptiView DAB IHC w automatach do barwienia BenchMark GX GX, BenchMark XT oraz BenchMark ULTRA. Typ procedury Odparafinowanie Kondycjonowanie preparatu komórkowego (odsłanianie antygenu) Inhibitor peroksydazy przed przeciwciałem pierwszorzędowym Przeciwciała (pierwszorzędowe) Barwienie kontrastowe Po barwieniu kontrastowym Metoda Wybrano Cell Conditioning 1 Aparat BenchMark ULTRA ULTRA: 72 minuty Aparat BenchMark XT XT: 48 minut Aparat BenchMark GX GX: 72 minuty Odparafinowanie Kondycjonowanie preparatu komórkowego (odsłanianie antygenu) Przeciwciała (pierwszorzędowe) Barwienie kontrastowe Po barwieniu kontrastowym INTERPRETACJA WYBARWIENIA IENIA / OCZEKIWANE WYNIKI W Wzorzec barwienia komórek dla odczynnika VENTANA anti-Cyclin anti D1 (SP4-R) jest jądrowy. SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA Niniejsze przeciwciała zostały zoptymalizowane do 12-minutowej 12 inkubacji w aparacie BenchMark ULTRA w połączeniu z zestawem OptiView DAB IHC Detection Detecti Kit, jednakże użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego odczynnika. Barwienie komórek śródbłonka i fibroblastów obserwowano w przypadkach dodatnich i ujemnych. Detekcja za pomocą OptiView jest metodą bardziej czułą, czułą niż system detekcji ultraView. Użytkownik musi walidować wyniki uzyskane za pomocą tego odczynnika i systemów detekcji. CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA JNOŚCIOWA Przeprowadzono badania barwienia odczynnikiem pod kątem jego swoistości, czułości i powtarzalności, a wyniki yniki zostały zamieszczone w Tabeli 3, 3 Tabeli 4 i w sekcji Powtarzalność. Wybrano Swoistość Aparat BenchMark ULTRA 12 minut, 36°C Aparat BenchMark XT 12 minut, 37°C Aparat BenchMark GX 12 minut, 37°C Tabela 3. Swoistość odczynnika VENTANA anti-Cyclin Cyclin D1 (SP4-R) (SP4 oceniano na podstawie badania próbek tkanek zdrowych, utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafiniea. Tkanka Hematoxylin IIII, 4 minuty Mózgb Bluing,, 4 min minuty Tabela 2. Zalecany protokół barwienia dla odczynnika VENTANA anti anti-Cyclin D1 (SP4-R) z ultraVIEW Universal DAB IHC w automatach do barwienia BenchMark GX GX, BenchMark XT i BenchMark ULTRA. Typ procedury POZYTYWNA KONTROLA TKANKOWA KANKOWA Zalecaną kontrolą pozytywną jest zdrowa tkanka migdałków. Suprabazalne komórki nabłonka wielowarstwowego płaskiego powinny wykazywać umiarkowany, ale wyraźny wzorzec barwienia jądrowego. Komórki śródbłonka mogą również wybarwiać się dodatnio z cykliną D1 i służyć jako cenna wewnętrzna kontrola dodatnia. Wszystkie komórki B strefy płaszcza i komórki B centrum zarodkowego powinny dać barwienie ujemne. Metoda Wybrano 2/3 Jajnik 0/3 Nadnercze Trzustka Przysadka Jądro Aparat BenchMark ULTRA 24 minuty, 36°C Aparat BenchMark XT 16 minut, 37°C Aparat BenchMark GX 16 minut, 37°C Tarczyca Sutek Śledziona Migdałek Hematoxylin IIII, 4 minuty Endometrium Bluing,, 4 minuty Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, a także różne warunki środowiskowe i ogólne wyposażenie laboratoryjne, konieczne może być wydłużenie lub skrócenie inkubacji przeciwciała pierwszorzędowego, owego, kondycjonowania komórek albo wstępnej obróbki proteazą dla poszczególnych próbek, w zależności od zastosowanej metody detekcji i preferencji badacza. Więcej informacji na temat zmiennych związanych z utrwalaniem zawiera pozycja „Immunohistochemistry Principles and Advances Advances”11. 1/3 Móżdżekb,c Przytarczyce Cell Conditioning 11, standardowe Stosunek dodatnich przypadków Mięśnie szkieletowe Nerw obwodowy Węzeł chłonny 0/3 1/3 4/4 0/3 2/3 0/3 3/3 0/3 3/3 0/3 0/3 0/3 1/3 Tkanka Grasica Szpik kostny Płuco Serce Przełyk Żołądek Jelito cienkie Okrężnica Wątroba Ślinianka Nerka Gruczoł krokowy Szyjka macicy Skóra Mezotelium Pęcherz moczowy Stosunek dodatnich przypadków 0/3 0/3 0/3 0/3 3/3 2/3 3/3 3/3 0/3 3/3 3/3 3/3 3/3 2/3 0/3 3/3 a przypadki dodatnie (z wyłączeniem mózgu i móżdżku) wykazały barwienie komórek nabłonkowych (głównie bazalnych / strefy proliferacyjnej). b dodatnie barwienie komórek glejowych c cytoplazmatyczne barwienie komórek Purkinjego 2016-07-25 FT0700-410l 2/4 1008718PL Rev D Czułość Nowotwór Tabela 4. Czułość przeciwciała VENTANA anti-Cyclin D1 (SP4-R) R) określono poprzez badanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie próbek tkanek nowotworowych. Nowotwór Glejak z martwicą Oponiak atypowy Wyściółczak złośliwy Skąpodrzewiak złośliwy Gruczolakorak surowiczy (jajnik) Gruczolakorak (jajnik) Rak komórek wyspowych Gruczolakorak (trzustka) Nasieniak (jądro) Nasieniak z naczyń guza skrzepliny (rzadki) Rak rdzeniowy (tarczyca) Rak brodawkowaty (tarczyca) Chłoniak rozlany z limfocytów B Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy (płuco) Rak płaskonabłonkowy (płuco) Gruczolakorak (płuco) Rak neuroendokrynny (przełyk) Gruczolakorak (przełyk) Rak z komórek sygnetowatych Gruczolakorak (jelito cienkie) Mięsak podścieliska (jelito cienkie) Gruczolakorak (okrężnica) Interstitialoma (otrzewna) Gruczolakorak (odbytnica) Złośliwy guz podścieliskowy o umiarkowanej złośliwości (odbytnica) 1/1 Mięśniakomięsak gładkokomórkowy o niskim stopniu złośliwości (pęcherz) 0/1 Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych 1/1 0/1 1/1 1/1 0/1 1/1 0/1 1/1 Rak jasnokomórkowy (macica) 1/1 1/1 1/1 1/1 Inwazyjny rak przewodowy (sutek) 54/54 2/2 2/2 1/1 1/1 2/2 2/2 1/1 1/1 Rak płaskonabłonkowy ściany klatki piersiowej 1/1 FT0700-410l 0/2 Przeprowadzono badania powtarzalności dla przeciwciała VENTANA anti-Cyclin D1 (SP4-R) w celu określenia: odtwarzalności wyników między seriami przeciwciał; odtwarzalności w obrębie jednej lub kilku serii na aparacie BenchMark XT; odtwarzalności wyników w obrębie platformy przy użyciu aparatów: BenchMark XT, BenchMark GX oraz BenchMark ULTRA; odtwarzalności wyników w obrębie platform pomiędzy aparatami: BenchMark XT, BenchMark GX oraz BenchMark ULTRA. Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy. 0/1 1/2* 2016-07-25 3/6** 2/30 * umiarkowane barwienie komórek tucznych ** barwienie w centrach proliferacji Powtarzalność 0/1 1/15 Chłoniak grudkowy Rak wewnątrzprzewodowy (sutek) 1/1 Rak płaskonabłonkowy (szyjka macicy) Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy 72/82 Inwazyjny rak brodawkowaty (sutek) 1/1 1/1 Chłoniak z komórek płaszcza Rak cewkowy (sutek) 1/1 0/1 3/20 Inwazyjny rak zrazikowy (sutek) 0/1 1/1 Chłoniak z komórek B nie określony inaczej Rak przewodowy in situ (sutek) 1/1 0/1 0/1 Chłoniak z limfocytów T 0/1 1/1 Mięśniakomięsak gładkokomórkowy (leiomyosarcoma) o umiarkowanej złośliwości (mięsień gładki) Chłoniak limfocytowy z małych komórek 1/1 1/1 0/1 Chłoniak strefy brzeżnej tkanek związanych z błoną śluzową (MALT) 0/1 1/1 Kostniakomięsak prawej kości udowej (rzadki) Chłoniak Hodgkina (ziarnica złośliwa) 1/1 Rak jasnokomórkowy (nerki) Gruczolakorak (macica) Rak przejściowokomórkowy (pęcherz) 1/1 0/1 Gruczolakorak (gruczoł krokowy) Międzybłoniak złośliwy Stosunek dodatnich przypadków Rak wątrobowokomórkowy Wątrobiak zarodkowy Nerwiak płodowy Stosunek dodatnich przypadków 1/1 3/4 1008718PL Rev D LITERATURA 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Yang K, Hitomi M, Stacey DW. Variations in Cyclin D1 levels through the cell cycle determine the proliferative fate of a cell. Cell Division. 2006;1:1 2006;1:1-8. Aguilera NS, Bijwaard KE, Duncan B, Krafft AA, Chu W, Abbondanzo SL, Lichy JH, Taubenberger JK. Differential expression of Cyclin D1 in mantle cell lymphoma and other non-Hodgkin’s Hodgkin’s lymphomas. Am J of Path. 1998;153:1969 1998;153:1969-76. Wang L, Shi ST, Zhou Q, Goldstein S, Hong J, Shao P, Qiu S. Changes in p53 and Cyclin D1 protein levels and cell proliferation in different stages of human esophageal and gastric-cardia cardia carcinogenesis. Int J Cancer. 1994;59:514 1994;59:514-519. Dobashi Y, Goto A, Fukayama M, Abe A, Ooi A. Overexpression of CDK4/Cyclin D1, a possible mediator of apoptosis and an indicator of prognosis in human primary lung carcinoma. Int J Cancer. 2004;110:532-541. Yang C, Chu K, Chen H, Chen W. Expression of p16 and Cyclin D1 in bladder can cancer and correlation in cancer progression. Urologia Internationalis. 2002;69:190 2002;69:190-194. Zhang Y, Jiang W, Chen CJ, Lee CS, Kahn SM, Santella RM, Weinstein IB. Amplification and overexpressin of Cyclin D1 in human heapatocellular carcinoma. Biochemical and Biophysical ophysical Research Communications. 1993;196:1010 1993;196:1010-1016. Milenkovic S, Marinkovic T, Jovanovic M, Djuricic S, Berisavac I. Cyclin D1 immunoreactivity in meningiomas. Cell Mol Neurobiol. 2008;28:907 2008;28:907-913. Lesage D, Troussard X, Sola B. The enigmatic role of Cyclin yclin D1 in multiple myeloma. Int J Cancer. 2005;115:171-176. Arnold A, Papanikolaou A. Cyclin D1 in breast cancer pathogenesis. J Clin Oncol. 2005;23:4215-4224. Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong Kong: American an Society for Clinical Pathology Press; 2009. Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles Principles and Advances. Manual of Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002. WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA BENCHMARK, OptiView, ultraView, VENTANA oraz logo VENTANA są znakami towarowymi firmy Roche. Wszystkie pozostałe znaki towarowe stanowią własność odpowiednich właścicieli. © 2016 Ventana Medical Systems, Inc. DANE KONTAKTOWE Ventana Medical Systems, Inc. 1910 E. Innovation Park Drive Tucson, Arizona 85755 USA +1 520 887 2155 +1 800 227 2155 (USA) www.ventana.com Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D-68305 Mannheim Germany 2016-07-25 FT0700-410l 4/4 1008718PL Rev D