Naszyjnik z DNA - BioCentrum Edukacji Naukowej

6� Za pomocą plastikowej pipetki wyjmij delikatnie białą „chmurkę” DNA wraz z
odrobiną alkoholu i przenieś do małej szklanej fiolki. Nie przepełnij jej alkoholem – pamiętaj, żeby zostawić trochę miejsca na gumową zatyczkę.
7� Wciśnij gumową zatyczkę zamykając w ten sposób szczelnie fiolkę z Twoim
DNA. Pamiętaj, że fiolka jest szklana, ściskaj ją lekko, żeby jej nie zgnieść. Utnij
zatyczkę równo z brzegiem fiolki.
8� Upewnij się, że szklana fiolka i zatyczka są suche. Nanieś jedną kroplę kleju
szybkoschnącego (np. Kropelka) na górę zatkanej fiolki. Wciśnij na nią metalowy
kapturek. Kiedy klej zastygnie i metalowy kapturek nie będzie się już ruszał,
przetknij sznurek przez metalowe uszko. Zwiąż końce.
Twój naszyjnik z DNA jest już gotowy do noszenia!
Zestaw zawiera:
Broszurkę z opisem doświadczenia, kolorową kartę z ilustrowaną instrukcją, dwie plastikowe pipetki, dwie przezroczyste probówki, dwie sterylne wymazówki, butelkę z niebieskim
buforem ekstrakcyjnym, butelkę denaturatu (skażonego alkoholu etylowego), dwie szklane
fiolki, dwa metalowe kapturki, gumową zatyczkę, sznurek.
Zrób własny
BioCentrum Edukacji Naukowej, http://www.biocen.edu.pl, na licencji:
National Centre for Biotechnology Education, University of Reading
Earley Gate, Reading RG6 6BZ. United Kingdom
Tel: + 44 (0) 118 9873743. Fax: + 44 (0) 118 9750140. eMail: [email protected]
Web: www.ncbe.reading.ac.uk/myDNA/
Wersja 2.0PL, październik 2010 | Copyright © Dean Madden, 2006
Naszyjnik z DNA
Instrukcja
Naszyjnik z DNA
Zestaw edukacyjny pozwala wyizolować niewielkie ilości DNA z komórek
nabłonkowych policzka. Tak otrzymane DNA zanurzone w odrobinie
alkoholu możesz umieścić w szklanej fiolce i zawiesić jako naszyjnik.
Dwa komplety materiałów i odczynników pozwalają przygotować dwa
naszyjniki – jeden dla Ciebie, a drugi dla koleżanki lub kolegi.
Wyizolowane w ten sposób DNA nie jest wystarczająco czyste do dalszych analiz, np. diagnostyki medycznej czy badań genealogicznych.
OSTRZEŻENIE: Zestaw nie jest zabawką! Powinien być używany
wyłącznie przez osoby dorosłe lub młodzież pod opieką dorosłego.
Zestaw zawiera potencjalnie niebezpieczny odczynnik chemiczny –
denaturat (skażony alkohol etylowy). W zestawie znajdują się także
niewielkie elementy, które grożą zakrztuszeniem, dlatego nie zaleca się
używania zestawu przez dzieci poniżej 3 roku życia.
Zanim zaczniesz
Jeśli niedawno jadłeś, piłeś lub myłeś zęby, powinieneś odczekać około
3 – 4 godziny, zanim rozpoczniesz procedurę. Jedzenie, płyny oraz mycie zębów powoduje wymywanie złuszczonych komórek, pozostawiając
zbyt mało komórek do wydanej izolacji DNA.
Denaturat (stężony roztwór alkoholu) umieść w zamrażalniku co najmniej godzinę przed rozpoczęciem ekstrakcji. Zalecane jest pozostawienie alkoholu w zamrażalniku na noc.
OSTRZEŻENIE: Denaturat (stężony roztwór alkoholu) jest łatwopalny.
Większość zamrażarek może w środku iskrzyć, dlatego w razie wycieku
alkoholu z pojemniczka, może nastąpić eksplozja. Przed włożeniem do
zamrażalnika, należy upewnić się, że pojemnik z denaturatem jest szczelnie zamknięty.
Naszyjnik krok po kroku
1� Odmierz jeden mililitr (1 ml) niebieskiego buforu ekstrakcyjnego nalewając go
za pomocą pipetki do plastikowej probówki. Zamknij probówkę, aby płyn się
nie wylał. Bufor ekstrakcyjny zawiera detergent, dlatego możesz zauważyć
na jego powierzchni pianę.
2� Przygotuj sterylny patyczek higieniczny wyjmując go z opakowania i połknij
całą ślinę, którą masz w ustach. Pozyskaj komórki nabłonka pocierając energicznie wacikiem patyczka wewnętrzną stronę policzka przez minimum 2
minuty. Możesz pocierać policzki, dziąsła, podniebienie, a nawet delikatnie
pod językiem. Ten krok jest kluczowy dla całego eksperymentu: jego celem
jest zebranie jak największej liczby komórek, z których następnie będziemy
izolować DNA. Im więcej będziesz pocierać (i mniej śliny spłucze komórki),
tym uzyskasz lepszy końcowy rezultat.
3� Otwórz ostrożnie probówkę zawierającą niebieski bufor ekstrakcyjny, umieść
w nim wacik z pobranymi komórkami. Wymyj z wacika komórki nabłonka
intensywnie płucząc go w buforze przez 2 minuty. Przed wyjęciem wyciśnij
jak najwięcej roztworu z wacika, poprzez dociskanie go do ścianek probówki.
Detergent zawarty w buforze spowoduje rozpuszczenie błon komórkowych i
wypłynięcie DNA do roztworu.
4� Wyjmij pojemniczek ze zmrożonym alkoholem z zamrażalnika. Następny krok
będzie wymagał uwagi i zręczności. Przechyl probówkę z Twoją próbką i za
pomocą pipetki nalej po ściance probówki około dwa mililitry (2 ml) denaturatu tak, aby spływając tworzył widoczną warstwę na powierzchni buforu
ekstrakcyjnego (tak, jakbyśmy przygotowywali wielowarstwowy, egzotyczny
koktajl). Zamknij probówkę, a następnie odstaw ostrożnie, tak, aby przez kilka
minut jej nie ruszać.
5� Czekając następne 10 minut obserwuj co się dzieje wewnątrz probówki. DNA z
komórek policzka będzie powoli wypływać do wierzchniej warstwy alkoholu.
Sól zawarta w buforze ekstrakcyjnym powoduje, że nitki DNA zlepiają się ze
sobą tworząc białawe kłaczki. „Chmurki” te będą się powoli przemieszczać do
góry wypychane przez drobne bąbelki powietrza, które można zaobserwować
wokół nici DNA.
WAŻNE: Jeśli próbka twojego DNA zawierała dużo śliny, prawdopodobnie
będziesz musiał poczekać dłużej niż 10 minut. Jeśli po 10 minutach nie widzisz nawet małej „chmurki” DNA, odstaw probówkę na kilka godzin (lub
nawet całą noc). W końcu białe pasemka DNA powinny się pojawić.