WZROST DROBNOUSTROJÓW BEZTLENOWYCH

WZROST DROBNOUSTROJÓW BEZTLENOWYCH
Warunkiem niezbędnym dla wzrostu bakterii beztlenowych jest eliminacja tlenu ze środowiska
wzrostowego.
Posiew redukcyjny polega pobraniu materiału inkokulum i bez dalszego pobierania wprowadzanie
do 4 kolejnych środowisk. (met. Fiz i chem)
Charakterystyczny wzrost drobnoustrojów beztlenowych na wybranych podłożach z zastosowaniem
różnych metod eliminacji tlenu ze środowiska wzrostowego.
Podłoże
Charakterystyka wzrostu
Zastosowana metoda
CMM płynne
Fizyczna
RCM zawiera agar 12,5%
słupki
Chemiczna
Płytka Fortnera-agar cukrowy
L-Wzrost na .............
biologiczna
P-pojedyncze kolonie
......
Metody te polegają wspólnej hodowli drobnoustrojów tlenowych z beztlenowymi.
Charakterystyka wzrostu drobnoustrojów beztlenowych na wybranych podłożach z zastosowaniem
różnych metod eliminacji tlenu ze środowiska wzrostowego.
• Metody mieszane-stanowią one połączenie kilku metod. Przykładem jest posiew na podłoże
Wrzoska
• Metody fizyczne:
• tkanka
• regeneracja
• nawarstwienie
• metody chemiczne:
• związki redukujące (0,5-1% roztwór glukozy; 0,1% roztwór Na2SO3; substancje
biologicznie czynne: cysteina, glutation, kwas askrobiowy, tiogliokolan sodowy)
[kociołki do metody chemicznej]
• dodawanie związków redukujących poza podłożem
• pirogallol (C6H3(OH)3)
• tiosiarczan sodu (Na2S2O3)
Metoda biologiczna Fortnera polega na .....
Na płytce w zastygłej pożywce wycina się pasek oddzielający dwa pola płytki. Na jednym z nich
wysiewa się (na ................) drobnoustrój zużywający tlen w czasie wzrostu a na drugim beztlenowy.
Płytki uszczelniane są plasteliną i inkubuje. W pierwszej kolejności korzystając z obecności tlenu
wyrośnie drobnoustrój tlenowy który wykorzystując tlen stwarza warunki odpowiednie do wzrostu
beztlenowca
Metody fizyczne
Adsorpcję tlenu z podłoży płynnych przez dodatek tkanki roślinnej (ziemniaki, marchew) lub
zwierzęcej (wątroba, serce) a następnie pokrycie powierzchni pożywki warstwą parafiny, wazeliny,
agaru wodnego.
• Hodowla beztlenowa na wysokim słupku pożywki agarowej
• usunięcie powietrza pompą próżniową i hodowli w ............................. lub ..............................
próżniowym. Po usunięciu powietrza może by wprowadzony gaz obojętny.
•
•
Ogrzanie pożywki i szybkie schłodzenie przed posiewem (regeneracja podłoża) Powoduje to
obniżenie e13
nawarstwienie zregenerowanego podłoża warstwą parafiny lub ............ agarowym
Metody chemiczne
Metody chemiczne polegają na wiązaniu tlenu przez substancje redukujące łatwo utlenialne,
substancje te mogą by dodawane do pożywki lub też umieszczone poza nią.
• Związki redukcyjne dodawane do pożywek:
• 0,5-1% roztwór glukozy
• 0,1% roztwór Na2SO3
• substancje bilogicznie czynne (cysteina, glutation, kw. Askrobiowy, tioglikolan sodowy)
• związki redukujące dodawane poza podłożem
• pirogallol C6H3(OH)3
• gotowe zestawy eliminujące tlen ze środowiska wzrostowego:
• gas-pak
• anaeroben
Metody mieszane stanowią połączenie kilku metod. Przykładem takiej metody jest posiew na
podłożu Wrzoska. Jest to pożywka płynna, w której tlen jest absorbowany przez kawałek wątroby,
pożywka oddzielona jest od tlenu atmosferycznego warstwą płynnej jałowej parafiny. Przed
posiewem podłoże należy zregenerować przez gotowanie
MORFOLOGIA BAKTERII
Badania morfologii i komórki bakteryjnej ze względu na mikrorozmiary komórki) jest możliwe przy
użyciu mikroskopu, cechy morfologiczne bakterii wykorzystywane są w ustaleniu przynależności
systemowej.
Kształt i barwienie: kuliste i cylindryczne
Kształt komórek bakterii
• ziarniak
• dwoinka
• paciorkowiec
• czworaczki
• pakietowiec
mureina-składnik składnik bakteryjnej ściany komórkowej
Niektóre mają 80% mureiny – barwią się na fioletowo GRAM+
Te które mają mało mureiny – barwią się na różowo GRAMKształt komórek bakterii 2
• laseczka
• laseczki skupienia dwukomórkowe
• laseczki skupienia w formie łańcuszków
• laseczki skupienia kształtu liter
promieniowanie 24h hodowla, promieniste ułożenie
Kształt komórek bakterii 3
• maczugowiec
• dyfteroid (zniekształcony maczugowiec)
• kokkopałeczka (pośrednie między ziarniakiem a pałeczką)
• przecinkowiec
• śrubowiec
• ................
reponema-barwienie negatywne-tło na fioletowo kom. na biało
Drobnoustroje G+ G-
•
•
•
•
różnice w grubości błony komórkowej
różna wrażliwość na wiele czynników fiz i chem
występowanie w błonie cytoplazmatycznej bakterii G+ kompleksu białka i rybonukleinu
magnezu
różnica w wysokości punktu izoelektrycznego. Organizmy G+ mają pkt. Izoelektryczny w ........
pH i w związku z tym silniejsze powinowactwo do .....
Metody określania morfologii komórki
• oglądanie żywych nie zabarwionych komórek
• oglądanie żywych zabarwionych komórek
Metody barwienia: proste , złożone
W zależności od tego ......
dzielimy na:
• pozytywowe-barwi się komórki przy niezabarwionym tle
• negatywowe-na zabarwionym tle widoczne są nie zabarwione struktury
• pozytywowo-negatywowe