Monoclonal Mouse Anti-Human Beta-Amyloid Klon 6F/3D

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Beta-Amyloid
Klon 6F/3D
Nr kat. M 0872
Wydanie 01.08.03
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human Beta-Amyloid, Klon 6F/3D jest przeznaczone do immunohistochemii.
Przeciwciało znakuje pozakomórkowy beta-amyloid i stanowi użyteczne narzędzie do rozpoznania starczych
płytek w mózgu pacjentów z chorobą Alzheimera (1). Diagnostyka różnicowa jest wspomagana przez wyniki z
panelu przeciwciał. Interpretacji wyników może dokonywać wykwalifikowany histopatolog, w kontekście
wywiadu chorobowego i innych badań diagnostycznych.
Synonimy dla antygenu
Białko-beta amyloid (A beta P), -peptyd amyloid, A, białko A4.
Wprowadzenie
Gen kodujący białko beta-amyloidu jest położony na chromosomie 21 (2). Białko beta-amyloidu o aminokwasach z
pozycji 39-43 jest fragmentem o wiele większej cząsteczki – prekursora białka beta-amyloidu i posiada różne
odcinki N- lub C-końcowe (3-5). Beta-amyloid jest obecny na płytkach starczych, w splotach neurofibrylarnych, i w
złogach naczyniowo-mózgowych u pacjentów z chorobą Alzheimera i zespołem Downa (trisomia 21) (4, 6).
Choroba Alzheimera jest najczęstszą przyczyną występowania otępienia wśród starszych ludzi. Cechą
charakterystyczną patologii mózgowia osób z chorobą Alzheimera jest zanik korowy, nasilony zanik neuronów oraz
wewnątrz- i zerwnątrzkomórkowe nieprawidłowe wtręty włóknkowate, tzn. sploty neurofibrylarne i płytki starcze
charakteryzujące się dużą zawartością beta-amyloidu. Beta-amyloid jest także wytwarzany w normalnym mózgu
jednak w małych ilościach pod pewnymi fizjologicznymi warunkami (4, 5).
Odczynnik dostarczony
Monoklonalne przeciwciało mysie w formie płynnej jako nadsącz kultury komórek, przedializowane wobec 50
mmol/L soli fizjologicznej buforowanej TRIS-em (Tris/HCl) o pH 7,2. Zawiera 15 mmol/L NaN3.
Klon: 6F/3D. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie IgG mysich: patrz etykietka na fiolce.
Immunogen
Syntetyczny peptyd składający się z odcinków 8-17 (ser-gly-tyr-glu-val-his-his-gln-lys-leu) z dodatkową Ckońcową cysteiną pasującą do hemocyjaniny w pozycji klucza poprzez odcinek cysteiny.
Swoistość
W immunohistochemii przeciwciało znakuje beta-amyloid zawierający epitop z N-końcowym łańcuchem (1, 5).
W metodzie ELISA przeciwciało reaguje z syntetycznym peptydem odpowiadającym aminokwasom 9-14 betaamyloidu (7).
Jak wykazano w immunohistochemii przeciwciało reaguje krzyżowo z białkami ekwiwalentnymi z betaamyloidem u psa (8).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać odpływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków w
kanalizacji.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8 °C. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli
odczynniki były przechowywane w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość
produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami
badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę dodatnią i ujemną. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane
wyniki bez zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy
skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być zastosowane do znakowania skrawków tkanki utrwalonych w
formalinie i zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne trawienie tkanek 85%-100% kwasem
mrówkowym lub odsłonięcie epitopów przez ogrzewanie. Podczas odsłaniania epitopów przez ogrzewanie
optymalne wyniki można uzyskać stosując Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, Dako Target
Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308 lub 10 mmol/L buforu cytrynianowego o pH 6,0. Zastosowanie Dako
Proteinase K, nr kat. S 3020 może być nieefektywne. Skrawki tkankowe nie powinny wysychać podczas
odsłaniania epitopów ani podczas podanej poniżej procedury immunohistochemicznego barwienia.
Skrawki mrożone i preparaty komórkowe: Przeciwciało nie nadaje się do znakowania skrawków mrożonych.
(111633-002)
M 0872/PL/COT/01.08.03 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: Monoclonal Mouse Anti-Human Beta-Amyloid, nr kat. M 0872 może być używane w zakresie
rozcieńczeń 1:50-1:100, gdy stosuje się go na skrawki mózgu ludzkiego od pacjentów z chorobą Alzheimera
utrwalane formaliną i zatapiane w parafinie, po odsłanianiu epitopów przez 2-10 min. ogrzewanie w Dako
Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700 i 30 min. inkubacji z pierwszym przeciwciałem w temperaturze
pokojowej. Optymalne warunki mogą się różnić zależnie od próbki i metod jej przygotowania, i powinny zostać
dobrane w każdym laboratorium. Zalecaną kontrolą ujemną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931,
rozcieńczone do takiego samego stężenia przeciwciał IgG mysich jak roztwór pierwszego przeciwciała. Jeśli nie
udowodniono trwałości przeciwciała i kontroli ujemnej w danej metodzie, zaleca się rozcieńczanie tych
odczynników tuż przed użyciem lub rozcieńczanie w Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Dodatnia i ujemna
kontrola powinna być oznaczana razem z materiałem badanym.
Uwidocznienie: Zalecane są zestawy odczynnikowe DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679, oraz DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 i K 4006. Procedura wykonania jest opisana w każdym z zestawów.
Barwienie automatyczne: Przeciwciało jest dobrze przystosowane do barwienia immunohistochemicznego z
użyciem automatycznych systemów barwienia preparatów takich jak Dako Autostainer.
Opis wyników
Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakuje płytki starcze oraz złogi kongofilne w ścianach naczyn krwionośnych w
mózgu u pacjentów z chorobą Alzheimera, zespołem Downa i angiopatią kongofilną.
Piśmiennictwo
1.
Akiyama H, Hiroshi M, Saido T, Kondo H, Ikeda K, McGeer PL. Occurrence of the diffuse amyloid protein (A) deposits with numerous A-containing glial cells in the cerebral cortex of patients with
Alzheimer's disease. Glia 1999;25:324-31.
2. Kang J, Lemaire H-G, Unterbeck A, Salbaum JM, Colin L, Masters CL, et al. The precursor of Alzheimer’s
disease amyloid A4 protein resembles a cell-surface receptor. Nature 1987;325:733-6.
3. Bayer TA, Wirths O, Majtényi K, Gartmann T, Multhaup G, Beyreuther K, et al. Key factors in Alzheimer’s
disease: -amyloid precursor protein processing, metabolism and intraneuronal transport [review]. Brain
Pathol 2001;11:1-11.
4. Morishima-Kawashima M, Ihara Y. Alzheimer’s disease: -amyloid protein and tau [review]. J Neurosci Res
2002;70:392-401.
5. Akiyama H, Schwab C, Kondo H, Mori H, Kametani F, Ikeda K, et al. Granules in glial cells of patients with
Alzheimer’s disease are immunopositive for C-terminal sequences of -amyloid protein. Neurosci lett
1996;206:169-72.
6. Tanzi RE, McClatchey AI, Lamperti ED, Villa-komaroff L, Gusella JF, Neve RL. Protease inhibitor domain
encoded by an amyloid protein precursor mRNA associated with Alzheimer’s disease. Nature
1988;311:528-30.
7. Matsunaga Y, Saito N, Fujii A, Yokotani J, Takakura T, Nishimura T. A pH-dependent conformational
transition of Apeptide and physiochemical properties of the conformers in the glial cell. Biochem J
2002;361:547-56.
8. Papaioannou N, Tooten PCJ, van Ederen AM, Bohl JRE, Rofina J, Tsangaris T, et al.
Immunohistochemical investigation of the brain of aged dogs. I. Detection of neurofibrillary tangles and of
4-hydroxynonenal protein, an oxidative damage product, in senile plaques. J Prot Folding Disord 2001;8:1121.
Objaśnienia symboli
(111633-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 0872/PL/COT/01.08.03 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17