QUANTA LiteTM dsDNA

QUANTA Lite® h-tTG IgA Calibrator Set
508763
Przeznaczenie
Zestaw kalibratorów QUANTA LiteTM h-tTG IgA jest stosowany wraz z testem QUANTA LiteTM h-tTG IgA
ELISA Dodatkowe instrukcje można znaleźć w broszurze QUANTA Lite TM h-tTG IgA ELISA.
Odczynniki
1.
2.
3.
4.
5.
Kalibrator A h-tTG IgA, 1 fiolka buforu zawierającego środek konserwujący i przeciwciała surowicy
ludzkiej przeciwko h-tTG IgA, rozcieńczony, 1,2 ml
Kalibrator B h-tTG IgA, 1 fiolka buforu zawierającego środek konserwujący i przeciwciała surowicy
ludzkiej przeciwko h-tTG IgA, rozcieńczony, 1,2 ml
Kalibrator C h-tTG IgA, 1 fiolka buforu zawierającego środek konserwujący i przeciwciała surowicy
ludzkiej przeciwko h-tTG IgA, rozcieńczony, 1,2 ml
Kalibrator D h-tTG IgA, 1 fiolka buforu zawierającego środek konserwujący i przeciwciała surowicy
ludzkiej przeciwko h-tTG IgA, rozcieńczony, 1,2 ml
Kalibrator E h-tTG IgA, 1 fiolka buforu zawierającego środek konserwujący i przeciwciała surowicy
ludzkiej przeciwko h-tTG IgA, rozcieńczony, 1,2 ml
Wymagane materiały nie dołączone do zestawu
Zestaw QUANTA Lite® h-tTG IgA ELISA
Mikropipety na 5, 100, 200–300 i 500 µl
Jednorazowe końcówki mikropipet
Probówki do roztworów próbek pochodzących od pacjenta, 4 ml objętości
Woda destylowana lub dejonizowana
Naczynie o objętości 1 l do rozcieńczonego koncentratu ELISA do płukania
Czytnik płytek z mikrodołkami umożliwiający pomiar gęstości optycznej przy 450 nm (i przy 620 nm dla
odczytów przy dwóch długościach fali)
Sposób przygotowania
1.
Przygotowanie krzywej wzorcowej: Dla punktów od A do E 5-punktowej krzywej wzorcowej stosować
WSTĘPNIE ROZCIEŃCZONE kalibratory A do E h-tTG IgA bezpośrednio z fiolki. Pięciopunktowa
krzywa wzorcowa ma następujące wartości:
Punkt
Jednostki
A
Rozcieńczony wstępnie kalibrator A h-tTG IgA
150,0
B
Rozcieńczony wstępnie kalibrator B h-tTG IgA
75,0
C
Rozcieńczony wstępnie kalibrator C h-tTG IgA
37,5
D
Rozcieńczony wstępnie kalibrator D h-tTG IgA
18,8 lub 18,75
E
Rozcieńczony wstępnie kalibrator E h-tTG IgA
9,4 lub 9,375
2.
Dodać do dołków 100 µl każdego z pięciu kalibratorów, rozcieńczone próbki od pacjentów,
negatywną kontrolę ELISA oraz kontrolę h-tTG IgA.
UWAGA: Kontrola h-tTG IgA oraz negatywna kontrola ELISA są wstępnie rozcieńczone i gotowe do
użycia. Zalecane jest wykonanie duplikatów wszystkich próbek.
Przykryć dołki i inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej na równej powierzchni. Czas
inkubacji rozpoczyna się po dodaniu ostatniej próbki.
Etap płukania: Odessać całkowicie zawartość każdego dołka. Wlać 200–300 µl rozcieńczonego
buforu do płukania do wszystkich dołków, a następnie go odessać. Powtórzyć tę sekwencję jeszcze
dwukrotnie, aby łącznie przeprowadzić trzy płukania. Odwrócić płytkę i postukać w nią na materiale
pochłaniającym w celu usunięcia pozostałości płynu po ostatnim płukaniu. Ważne jest, aby
całkowicie opróżnić każdy dołek po każdym etapie płukania. Zachować tę samą sekwencję
odsysania, jak w przypadku dodawania próbki.
3.
4.
1
5.
6.
7.
8.
9.
Do każdego dołka dodać 100 µl koniugatu IgA. Koniugat powinien być usunięty z butelek z
zastosowaniem standardowych warunków aseptycznych oraz zalecanych technik laboratoryjnych.
Pobrać z butelki jedynie wymaganą do analizy ilość koniugatu. ABY UNIKNĄĆ POTENCJALNEGO
ZANIECZYSZCZENIA BAKTERYJNEGO I/LUB CHEMICZNEGO, NIE WOLNO WLEWAĆ
NIEUŻYTEGO KONIUGATU Z POWROTEM DO BUTELKI. Inkubować dołki przez 30 minut jak w
etapie 3.
Etap płukania: Powtórzyć etap 4.
Dodać 100 µl chromogenu TMB do każdego dołka i inkubować w ciemności przez 30 minut w
temperaturze pokojowej.
Do każdego dołka dodać 100 µl roztworu zatrzymującego. Zachować tę samą sekwencję i czas
dodawania roztworu zatrzymującego, jak w przypadku chromogenu TMB. Delikatnie postukać płytkę
palcem, aby dokładnie wymieszać zawartość dołków.
Odczytać absorbancję (gęstość optyczną) każdego dołka przy długości fali 450 nm w ciągu jednej
godziny od zatrzymania reakcji. Jeśli wymagane są pomiary bichromatyczne, referencyjną długością
fali może być długość 620 nm.
Obliczanie wyników
1.
2.
3.
Ustalić wartość średnią wszystkich zdublowanych odczytów.
Wykreślić krzywą średniej absorbancji kalibratorów dla badania h-tTG IgA w funkcji logarytmu ich
stężeń. Użyć wykresu krzywej najlepszego dopasowania. Można również użyć wykresu
logarytmicznego. Jednostki h-tTG IgA przypisane do kalibratorów znajdują się na fiolce kalibratora.
Ustalić nieznane stężenie h-tTG IgA z osi „X”, odczytując odpowiednią absorbancję na osi „Y”.
QUANTA Lite jest zastrzeżonym znakiem handlowym firmy INOVA Diagnostics, Inc.
Copyright 2011. Wszelkie prawa zastrzeżone©
Wyprodukowano przez:
INOVA Diagnostics, Inc.
9900 Old Grove Road
San Diego, CA 92131
Stany Zjednoczone Ameryki
Pomoc techniczna (tylko na terenie Stanów Zjednoczonych i Kanady):
877-829-4745
Pomoc techniczna (poza terenem Stanów Zjednoczonych):
00+ 1 858-805-7950
[email protected]
Autoryzowani przedstawiciele na terenie Unii Europejskiej:
Medical Technology Promedt Consulting GmbH
Altenhofstrasse 80
D-66386 St. Ingbert, Niemcy
Tel.: +49-6894-581020
Faks.: +49-6894-581021
www.mt-procons.com
628763POL
Czerwiec 2011
Wersja 0
2