BD Salmonella Shigella Agar

GOTOWE PODŁOŻA
HODOWLANE NA
PŁYTKACH – INSTRUKCJE
STOSOWANIA
PA-254047.06
wer.: April 2013
BD Salmonella Shigella Agar
PRZEZNACZENIE
BD Salmonella Shigella Agar (SS Agar) jest selektywnym, różnicującym podłożem
przeznaczonym do izolowania patogennych laseczek jelitowych, zwłaszcza z rodzaju
Salmonella, z próbek klinicznych.
ZASADY I OBJAŚNIENIE PROCEDURY
Metoda mikrobiologiczna.
Salmonella Shigella Agar jest modyfikacją podłoża Desoxycholate-Citrate Agar, opisanego
przez Leifsona.1 Jest to podłoże umiarkowanie selektywne, hamujące wzrost drobnoustrojów
Gram-dodatnich i Enterobacteriaceae innych niż Salmonella i Shigella ze względu na
zawartość soli żółciowych, zieleni brylantowej i cytrynianów.
Na podłożu BD Salmonella Shigella Agar możliwe jest różnicowanie drobnoustrojów
jelitowych dzięki zawartości laktozy. Bakterie zdolne do fermentacji laktozy wytwarzają kwas,
który w obecności wskaźnika, czerwieni obojętnej, powoduje tworzenie czerwonych kolonii.
Bakterie niezdolne do fermentacji laktozy tworzą kolonie bezbarwne. Do tej ostatniej grupy
należy większość patonegów jelitowych, w tym Salmonella i Shigella. Tiosiarczan sodu i
cytrynian żelaza (III) umożliwiają wykrycie drobnoustrojów wytwarzających siarczki, o czym
świadczą kolonie z czarnymi środkami. Opisywane podłoże jest wykorzystywane do pierwszej
izolacji Salmonella z próbek kału ludzkiego.2 Ze względu na to, że do izolacji Shigella dostępne
są skuteczniejsze podłoża, opisywane podłoże nie powinno być stosowane do tego celu.2-4
ODCZYNNIKI
BD Salmonella Shigella Agar
Skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej
Wyciąg wołowy
5,0 g
Trzustkowy hydrolizat kazeiny
2,5
Hydrolizat pepsynowy tkanki
2,5
zwierzęcej
Laktoza
10,0
Sole żółciowe
8,5
Cytrynian sodu
8,5
Tiosiarczan sodu
8,5
Cytrynian żelaza (III)
1,0
Czerwień obojętna
0,025
Agar
13,5
Zieleń brylantowa
0,330 mg
pH 7,2 ± 0,2
*Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie
kryteriów wydajności.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
. Wyłącznie do zastosowań profesjonalnych.
Nie należy używać płytek, jeżeli są na nich widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego,
odbarwienia, wyschnięcia, pęknięcia lub inne zjawiska wskazujące na pogorszenie jakości.
Procedury aseptycznej techniki pracy z produktem, zagrożenia biologiczne oraz usuwanie
zużytego produktu opisano w dokumencie OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE
STOSOWANIA.
PA-254047.06
-1-
PRZECHOWYWANIE I DOPUSZCZALNY OKRES PRZECHOWYWANIA
Po otrzymaniu, płytki należy przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C, w
ich oryginalnym opakowaniu izolującym do chwili użycia. Unikać zamrażania i przegrzewania.
Posiewu na płytki można dokonywać aż do daty ważności (patrz etykieta na opakowaniu) i
inkubować w zalecanych czasach inkubacji.
Płytek z otwartych stosów zawierających po 10 płytek można używać przez okres jednego
tygodnia, przechowując w czystym miejscu w temperaturze od 2 do 8° C.
KONTROLA JAKOŚCI PRZEZ UŻYTKOWNIKA
Na płytki posiewa się próbki reprezentatywne niżej wymienionych szczepów (szczegółowe
informacje – zobacz dokument OGÓLNE INSTRUKCJE DOTYCZĄCE STOSOWANIA). Płytki
inkubuje się w atmosferze tlenowej, w temperaturze 35–37°C, przez okres 18–24 godzin.
Szczepy bakteryjne
Wzrost
Escherichia coli ATCC 25922
Częściowe lub całkowite zahamowanie wzrostu;
kolonie różowoczerwone z osadem
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Całkowite zahamowanie wzrostu
Salmonella Typhimurium ATCC 14028
Wzrost dobry lub bardzo dobry; kolonie beżowe z
czarnym środkiem
Shigella flexneri ATCC 12022
Wzrost dość dobry lub dobry; kolonie jasnoróżowe
do bezbarwnych
Bez posiewu
Pomarańczowoczerwone, odcień różowawy
PROCEDURA
Dostarczane materiały
Podłoże BD Salmonella Shigella Agar (płytki Stacker o śr. 90 mm). Sprawdzane pod kątem
obecności mikroorganizmów.
Materiały niedostarczane
Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z
wymaganiami.
Typy próbek
Produkt ten jest selektywnym podłożem różnicującym do izolacji Salmonella z próbek kału lub
wymazów z odbytu pochodzących od pacjentów z podejrzeniem bakteryjnego zakażenia
jelitowego (patrz także CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA I OGRANICZENIA
PROCEDURY).
Procedura testowa
Wykonać posiew próbki możliwie jak najszybciej po dostarczeniu materiału do
laboratorium.Płytka do posiewu służy przede wszystkim do izolowania czystych kultur z próbek
zawierających florę mieszaną. Ewentualnie, jeżeli materiał jest hodowany bezpośrednio z
wymazówki, można przetoczyć wymazówkę po niewielkiej powierzchni na krawędzi płytki, a
następnie wykonać posiew poprzez rozprowadzenie materiału po podłożu. Należy także
wykonać posiew na podłożu mniej selektywnym, takim jak BD MacConkey II Agar, w celu
zwiększenia szansy wyhodowania drobnoustrojów w przypadku, gdy populacja bakterii
Gram-ujemnych jest mała, a także w celu wykrycia innych organizmów występujących w
próbce.
Płytki inkubuje się bez dostępu światła w temperaturze 35 ± 2°C, przez okres 18–24 godz., a w
razie potrzeby dłużej.
Wyniki
Typowa morfologia kolonii:
Drobnoustroje
E. coli
Enterobacter/Klebsiella
Proteus
Salmonella
Shigella
BD Salmonella Shigella Agar
Niewielki wzrost, różowe lub czerwone
Niewielki wzrost, różowe
Bezbarwne z czarnym środkiem
Bezbarwne, zazwyczaj z czarnym środkiem
Bezbarwne
PA-254047.06
-2-
Pseudomonas
Bakterie Gram-dodatnie
Nieregularne, niewielki wzrost
Zahamowanie wzrostu
CHARAKTERYSTYKA WYNIKÓW I OGRANICZENIA DOTYCZĄCE PROCEDURY
Podłoże BD Salmonella Shigella Agar jest jednym z podłoży zalecanych do izolowania rodzaju
Salmonella z próbek kału ludzkiego.2-4
Podłoże to nie jest już obecnie zalecane do izolowania Shigella. Zamiast opisywanego podłoża
do tego celu należy stosować BD XLD Agar lub BD Hektoen Enteric Agar.2-4
Podłoża BD Salmonella Shigella Agar nie należy stosować do wykonywania hodowli
pochodnych z pożywki płynnej Selenite F Broth. Zamiast tego należy stosować podłoże BD
MacConkey II Agar, BD XLD Agar lub BD Hektoen Enteric Agar.
Pojedyncze podłoże rzadko umożliwia wykrycie wszystkich patogenów występujących w próbce.
W związku z tym próbkę należy posiać także na inne podłoża do izolowania Salmonella i (lub)
Shigella oraz ewentualnie innych patogenów jelitowych.5
Wprawdzie pewne testy diagnostyczne można wykonywać bezpośrednio na opisywanym
podłożu, jednak w celu przeprowadzenia pełnej identyfikacji konieczne jest wykonanie badania
biochemicznego oraz, jeśli jest to wskazane, badania immunologicznego z użyciem czystych
hodowli. Należy zapoznać się z odpowiednim piśmiennictwem.2,3
PIŚMIENNICTWO
1. Leifson, E. 1935. New culture media based on sodium desoxycholate for the isolation of intestinal
pathogens and for the enumeration of colon bacilli in milk and water. J. Pathol. and Bacteriol.
40:581-599.
2. Bopp, C. A., F. W. Brenner, P. I. Fields, J. G. Wells, and N. A. Stockbrine. 2003. Escherichia,
Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H.
Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
3. MacFaddin, J.F. 1985. Media for the isolation – cultivation – maintenance of medical bacteria. Volume
1. Williams and Wilkins, Baltimore, London.
4. Chapin, K.C., and T.-L. Lauderdale. 2003. Reagents, stains, and media: bacteriology. In: Murray, P.
R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
PAKOWANIE / DOSTĘPNOŚĆ
BD Salmonella Shigella Agar
Nr katalogowy 254047
Gotowe podłoża na płytkach
hodowlanych, cpu 20
Nr katalogowy 254085
Gotowe podłoża na płytkach
hodowlanych, cpu 120
DODATKOWE INFORMACJE
W celu uzyskania dodatkowych informacji należy skontaktować się z lokalnym przedstawicielem
firmy BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2013 BD
PA-254047.06
-3-