BBL Trypticase Soy Broth BBL Trypticase Soy Broth with 6.5

BBL Trypticase Soy Broth BBL Trypticase Soy Broth with 6.5


BBL Trypticase Soy Broth

BBL Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride
L007517 • Wersja 16 • październik 2015
PROCEDURY KONTROLI JAKOŚCI (Opcjonalnie)
I
WPROWADZENIE
Trypticase Soy Broth (Bulion sojowy Trypticase) jest to uniwersalne podłoże do hodowli wymagających i niewymagających
drobnoustrojów. Dzięki 6,5% dodatkowi chlorku sodu można odróżnić gatunki tolerujące sól od gatunków nietolerujących soli.
II
PROCEDURA KONTROLI DZIAŁANIA
A. Trypticase Soy Broth (Bulion sojowy Trypticase)
1. Podłoża zaszczepia się reprezentatywnymi próbkami wymienionych szczepów.
a. Za pomocą 1,0 mL pipet zaszczepić probówki rozcieńczeniami 18- do 48-godzinnej hodowli w Trypticase Soy Broth.
Pojemniki zawierające ponad 5,0 mL powinny być szczepione 0,75 mL hodowli. Probówki zawierające 5,0 mL lub mniej
powinny być szczepione 0,075 mL hodowli.
b. W przypadku Escherichia coli, Staphylococcus aureus oraz drobnoustrojów przeznaczonych przez The United States
Pharmacopeia (USP) (Farmakopeę Stanów Zjednoczonych) do testowania pobudzenia wzrostu sterylności pożywek
testowych (szczepy Bacillus, Candida oraz Aspergillus) zastosowane rozcieńczenie powinno zawierać 100 lub
mniej CFU/mL.
c. W przypadku Streptococcus pneumoniae rozcieńczenie powinno zawierać 1000 lub mniej CFU/mL.
d. Probówki zaszczepione E. coli oraz S. aureus, a także probówki z S. pneumoniae należy inkubować z poluzowanymi
zatyczkami w temperaturze 30 – 35°C. Probówki z B. subtilis, C. albicans oraz A. brasiliensis inkubować z
poluzowanymi zatyczkami w temperaturze od 20 do 25°C.
UWAGA: W przypadku stosowania A. brasiliensis (ATCC 16404) pracować w komorze spełniającej wymogi
bezpieczeństwa biologicznego.
2. Oceniać hodowle S. pneumoniae po 18 – 24 godz., a hodowle E. coli oraz S. aureus po 24 – 48 godz. inkubacji. Oceniać
hodowle B. subtilis, C. albicans oraz A. brasiliensis po 18 – 24 godz. i 66 – 72 godz. Hodowle C. albicans i A. brasiliensis
mogą być inkubowane do 5 dni.
3. Oczekiwane wyniki
Drobnoustroje kontrolne CLSI (szczepy ATCC)
*Escherichia coli.......................................... Wzrost po 48 godz.
ATCC 25922
*Staphylococcus aureus ............................. Wzrost po 48 godz.
ATCC 25923
Dodatkowe szczepy stosowane
**Bacillus subtilis ......................................... Wzrost po 3 dniach
ATCC 6633
**Candida albicans...................................... Wzrost po 5 dniach
ATCC 10231
**Aspergillus brasiliensis ............................. Wzrost po 5 dniach
ATCC 16404
Streptococcus pneumonia .......................... Wzrost po 24 godz.
ATCC 6305
*Szczep zalecany do przeprowadzania kontroli jakości przez użytkownika.
**Do sprawdzenia pobudzenia wzrostu do stosowania w badaniach sterylności USP.
B. Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride (Bulion sojowy Trypticase z 6,5% dodatkiem chlorku sodu)
1. Podłoża zaszczepia się reprezentatywnymi próbkami wymienionych szczepów.
-1
a. Zaszczepić probówki, stosując 0,01 mL ezę oraz 10 rozcieńczenie 18- do 24-godz. hodowli w Trypticase Soy Broth.
b. Inkubować probówki z poluzowanymi zatyczkami w temperaturze 35 ± 2°C w atmosferze tlenowej.
2. Ocenić probówki po 18 do 24 godz. oraz po 42 do 48 godz. pod względem wzrostu i selektywności.
3. Oczekiwane wyniki
*Enterococcus faecalis................................ Wzrost
ATCC 29212
*Streptococcus gallolyticus ......................... Brak wzrostu
ATCC 9809
*Szczep zalecany do przeprowadzania kontroli jakości przez użytkownika.
III
DODATKOWA KONTROLA JAKOŚCI
1. Ocenić probówki według opisu w dziale „Pogorszenie jakości produktu.”
2. Wzrokowo ocenić reprezentatywne probówki, aby upewnić się, że żadne istniejące wady fizyczne nie będą przeszkadzały w
ich użytkowaniu.
L007517
1
Polski
3. Określić potencjometrycznie wartość pH w temperaturze pokojowej dla bulionu Trypticase Soy Broth, aby upewnić się, że
odczyn jest zgodny ze specyfikacją i wynosi 7,3 ± 0,2.
4. Inkubować reprezentatywne probówki bez wysianych drobnoustrojów w temperaturze 20 do 25°C i 30 do 35°C i ocenić po
7 dniach pod względem zanieczyszczenia drobnoustrojami.
INFORMACJE O PRODUKCIE
IV
PRZEZNACZENIE
Trypticase Soy Broth jest zgodny ze specyfikacją określoną w The United States Pharmacopeia (Farmakopei Stanów
Zjednoczonych) (USP).
Trypticase Soy Broth (podłoże z hydrolizatem mączki sojowej i kazeiny) jest uniwersalnym podłożem stosowanym w
metodach jakościowych do hodowli wymagających i niewymagających drobnoustrojów pobranych z różnych próbek klinicznych
i nieklinicznych.
Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride (podłoże z hydrolizatem mączki sojowej i kazeiny z 6,5% dodatkiem chlorku
sodu) jest stosowany do odróżnienia gatunków Enterococcus od grupy paciorkowców Streptococcus bovis.
V
Streszczenie i objaśnienie
Trypticase Soy Broth (TSB) jest pożywką z substancjami odżywczymi zapewniającą wzrost wielu odmian drobnoustrojów, w
1-4
tym szeroko rozpowszechnionych tlenowców, fakultatywnych beztlenowców oraz grzybów. Ze względu na swoją zdolność
5
pobudzania wzrostu to podłoże jest włączone do USP jako pożywka do oceny sterylności.
Ze względu na zdolność pobudzania wzrostu podłoże TSB jest również zalecane do stosowania jako bulion do szczepienia w
testach dyfuzji z krążka oraz w badaniu wrażliwości przeciwbakteryjnej testem rozcieńczenia w agarze, zgodnie ze
6,7
standardami Clinical and Laboratory Standards Institute (dawniej NCCLS).
Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride jest stosowany do odróżniania gatunków enterokoków od grupy S. bovis
8
paciorkowców za pomocą testu tolerancji 6,5% NaCl.
VI
ZASADA PROCEDURY
Enzymatyczne hydrolizaty kazeiny oraz mączki sojowej dostarczają aminokwasów oraz innych złożonych związków azotowych.
Źródło energii stanowi dekstroza. Chlorek sodu utrzymuje równowagę osmotyczną. Dwuzasadowy fosforan potasu pełni
funkcję bufora kontrolującego pH.
Dodatek 6,5% chlorku sodu do Trypticase Soy Broth umożliwia rozróżnienie enterokoków tolerujących sól, odpornych na
wysokie stężenia soli od nietolerującej soli grupy S. bovis oraz innych gatunków paciorkowców. W tym stężeniu chlorek sodu
1
jest czynnikiem selekcyjnym, wpływającym na przepuszczalność błony oraz na równowagę osmotyczną i elektrokinetyczną.
VII
ODCZYNNIKI
Trypticase Soy Broth
Przybliżony skład* w przeliczeniu na jeden litr wody oczyszczonej
Trzustkowy hydrolizat kazeiny ........................................ 17,0 g
Hydrolizat papainowy mączki sojowej .............................. 3,0 g
Chlorek sodu ..................................................................... 5,0 g
Wodorofosforan potasu..................................................... 2,5 g
Dekstroza .......................................................................... 2,5 g
*Skorygowany i (lub) uzupełniony zgodnie z wymaganiami mającymi na celu spełnienie kryteriów wydajności.
Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride zawiera dodatkowo 60 g/L chlorku sodu poza wymienionymi powyżej
składnikami.
Ostrzeżenia i środki ostrożności
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Podczas zgłaszania wyników bezpośredniego barwienia metodą Grama i/lub wyników bezpośredniego barwienia innymi
metodami mikrobiologicznymi próbek tkankowych obrabianych z zastosowaniem tego podłoża należy zachować ostrożność ze
względu na możliwą obecność martwych drobnoustrojów w podłożu.
Probówki z ciasno dopasowanymi zatyczkami należy otwierać ostrożnie, aby uniknąć obrażeń spowodowanych pęknięciem
szkła.
W próbkach mogą być obecne drobnoustroje patogenne, takie jak wirusy zapalenia wątroby i wirus HIV. Przy kontakcie z
wszelkimi materiałami zanieczyszczonymi krwią lub innymi płynami ustrojowymi należy przestrzegać „Uniwersalnych środków
9-12
oraz zaleceń obowiązujących w danej instytucji. Po użyciu wykorzystane probówki, pojemniki na próbki i inne
ostrożności”
skażone materiały należy przed wyrzuceniem wyjałowić w autoklawie.
Zalecenia dotyczące przechowywania:
Po otrzymaniu przechowywać probówki w ciemności zgodnie z wytycznymi na etykiecie. Unikać zamrażania i przegrzewania.
Otwierać dopiero bezpośrednio przed użyciem. Ograniczać do minimum kontakt ze światłem. W podłożach przechowywanych
do momentu użycia w probówkach, zgodnie z instrukcjami podanymi na etykiecie, można wykonywać posiewy do dnia
określonego terminem ważności, a następnie prowadzić inkubację przez zalecany czas. Przed posiewem ogrzać podłoże do
temperatury pokojowej.
Pogorszenie jakości produktu
Nie używać probówek, jeżeli są widoczne oznaki skażenia mikrobiologicznego, odbarwienia, wyschnięcia lub inne, świadczące
o pogorszeniu jakości.
L007517
2
Polski
VIII POBIERANIE I PRZYGOTOWYWANIE PRÓBEK
Próbki przeznaczone do hodowli można przygotowywać różnymi technikami. Szczegółowe informacje znaleźć można w
3,13
odpowiednim piśmiennictwie. Próbki należy pobierać przed podaniem czynnika przeciw drobnoustrojom. Konieczne jest
zapewnienie szybkiej dostawy do laboratorium.
IX
PROCEDURA
Dostarczane materiały
Trypticase Soy Broth lub
Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride
Materiały wymagane, ale niedostarczane
Pomocnicze pożywki hodowlane, odczynniki, szczepy do kontroli jakości i wyposażenie laboratoryjne zgodnie z wymaganiami.
Procedura testowa
Stosować techniki aseptyczne.
Zaszczepić pożywkę bezpośrednio po dostarczeniu próbek do laboratorium. Próbki pobrane jako wymaz na tamponie można
wprowadzić do pożywki po naniesieniu ich na odpowiednie podłoża na płytkach. W przypadku płynnych próbek za pomocą
sterylnej ezy przenieść jedną zawartość ezy na pożywkę bulionową. Próbki, o których wiadomo lub podejrzewa się, że
zawierają beztlenowce obligatoryjne, należy nanosić w pobliżu dna probówki.
Inkubować probówki z poluzowanymi zatyczkami w temperaturze 35 ± 2°C w atmosferze tlenowej z dodatkiem lub bez dodatku
dwutlenku węgla. Probówki z pożywką przeznaczone do hodowli beztlenowców powinny być inkubowane w warunkach
beztlenowych. Skutecznym i łatwym sposobem na otrzymanie właściwych warunków beztlenowych jest zastosowanie systemu
beztlenowego BD GasPak EZ lub równoważnego systemu alternatywnego.
Ocenić wzrost po 18 do 24 godz. oraz po 42 do 48 godz. inkubacji.
W przypadku stosowania w badaniach sterylności zapoznać się z USP w celu określenia szczegółów metody oraz specyfikacji
5
dotyczących stosowanej objętości pożywki w stosunku do wielkości pojemnika.
W przypadku stosowania w przygotowywaniu standaryzowanych materiałów inokulacyjnych do badania wrażliwości
6,7
przeciwbakteryjnej zapoznać się z normami CLSI.
Kontrola jakości przez użytkownika
Zobacz „Procedury kontroli jakości”.
Każda partia podłoża została przetestowana przy użyciu odpowiednich drobnoustrojów do kontroli jakości. Ten rodzaj
testowania jest zgodny ze specyfikacją produktu i standardami CLSI, jeśli mają zastosowanie. Jak zwykle, testy należy
wykonać zgodnie z obowiązującymi wymogami kontroli jakości, wynikającymi z przepisów miejscowych, stanowych,
federalnych lub krajowych, wymogami akredytacji i/lub rutynowymi procedurami kontroli jakości w danym laboratorium.
Aby określić pH podłoża próbki metodą potencjometryczną, należy wykorzystać pojedynczą elektrodę o odpowiednio
niewielkich rozmiarach dopasowanych do probówek. Końcówka elektrody powinna się znajdować poniżej powierzchni bulionu
(tylko Trypticase Soy Broth).
X
WYNIKI
Wzrost w pożywce bulionowej jest widoczny jako zmętnienie w porównaniu z niezaszczepioną kontrolą. Hodowle bulionowe
powinny zostać przetrzymane przynajmniej przez tydzień przed wyrzuceniem ich jako ujemne.
XI
OGRANICZENIA PROCEDURY
Do identyfikacji niezbędne są czyste kultury drobnoustrojów. W celu ostatecznej identyfikacji należy przeprowadzić badania
morfologiczne, biochemiczne i/lub serologiczne. Szczegółowe informacje i opisy zalecanych procedur można znaleźć w
3,13,14
stosownej literaturze.
Pożywki hodowlane zawierają czasami martwe organizmy pochodzące ze składników pożywki, które mogą być widoczne w
rozmazach z pożywek hodowlanych. Do innych źródeł martwych organizmów widocznych po zabarwieniu metodą Grama
należą barwniki, olejek imersyjny, fragmenty szkła oraz próbki stosowane do posiewu. W przypadku wystąpienia niepewności
związanej z prawidłowością barwienia metodą Grama należy przeprowadzić ponowną inkubację hodowli przez kolejną godzinę
lub dwie, a następnie powtórzyć test przed wydaniem wyniku.
Z ludzkich zakażeń wyizolowano również szczepy innych katalazo-ujemnych, gram-dodatnich ziarniaków np. Lactococcus,
Leuconostoc, Pediococcus oraz Vagococcus. Z tego powodu nie można przeprowadzić domniemanej identyfikacji
8
enterokoków tylko w oparciu o reakcję z żółcią i eskuliną oraz wzrost w bulionie z 6,5% NaCl.
XII
CHARAKTERYSTYKA WYDAJNOŚCIOWA
Trypticase Soy Broth
Trypticase Soy Broth był stosowany jako kontrola w badaniu przydatności żółci jako pożywki hodowlanej do izolacji
Salmonella z hodowli krwi. Sześćdziesiąt osiem procent (68%) hodowli Trypticase Soy Broth dało wynik pozytywny w kierunku
15
Salmonella. W innym badaniu porównano wzory wzrostu Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Listeria monocytogenes,
paciorkowców hemolitycznych z grupy B (GBS), Klebsiella pneumoniae oraz Staphylococcus epidermidis, stosując płyn
mózgowo-rdzeniowy (CSF), Trypticase Soy Broth (TSB) oraz bufor fosforanowy. Stwierdzono wzrost S. aureus, GBS,
L. monocytogenes, K. pneumoniae oraz S. epidermidis w ciągu 24 godz. na podłożu TSB; natomiast wzrost wyżej
wspomnianych bakterii w CSF oraz w buforze fosforanowym nie był większy niż jeden na skali logarytmicznej w porównaniu z
punktem początkowym, za wyjątkiem GBS oraz S. epidermidis, w przypadku których stwierdzono spadek wzrostu. W
16
przypadku wszystkich trzech płynów stwierdzono pobudzenie wzrostu E. coli w różnym stopniu przez okres 24 godz.
L007517
3
Polski
Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride
Przed dopuszczeniem do obrotu wszystkie serie Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride są testowane pod
względem skuteczności. Za pomocą 0,01 mL skalibrowanej ezy reprezentatywne próbki serii są testowane rozcieńczonymi w
-1
Trypticase Soy Broth hodowlami 10 Enterococcus faecalis (ATCC 29212) oraz Streptococcus gallolyticus (ATCC 9809).
Probówki są inkubowane w temperaturze 35 ± 2°C, a odczyt wzrostu jest wykonywany po 18 do 24 godz. oraz po
42 do 48 godz. W przypadku E. faecalis stwierdza się wzrost od umiarkowanego do intensywnego, natomiast wzrost
S. gallolyticus jest całkowicie zahamowany.
Dodatkowo reprezentatywne próbki są testowane chemicznie próbkami azotanu srebra pod kątem zawartości chlorku sodu.
Obliczony procent zawartości chlorku sodu wynosi od 6,0 do 7,0.
XIII DOSTĘPNOŚĆ
Numer kat.
Opis
295634
BD BBL Trypticase Soy Broth, 1 mL, pojemnik zawierający 100 probówek o rozmiarze K
221815
BD BBL Trypticase Soy Broth, 2 mL, pojemnik zawierający 100 probówek o rozmiarze K
221715
BD BBL Trypticase Soy Broth, 5 mL, opakowanie zawierający 10 probówek o rozmiarze K (filtrowanych)
221716
BD BBL Trypticase Soy Broth, 5 mL, pojemnik zawierający 100 probówek o rozmiarze K (filtrowanych)
221092
BD BBL Trypticase Soy Broth, 8 mL, opakowanie zawierający 10 probówek o rozmiarze K
221093
BD BBL Trypticase Soy Broth, 8 mL, pojemnik zawierający 100 probówek o rozmiarze K
297354
BD BBL Trypticase Soy Broth, 10 mL, pojemnik zawierający 100 probówek o rozmiarze A
221823
BD BBL Trypticase Soy Broth, 15 mL, pojemnik zawierający 100 probówek o rozmiarze A
299749
BD BBL Trypticase Soy Broth, 20 mL, pojemnik zawierający 100 probówek o rozmiarze A
221351
BD BBL Trypticase Soy Broth with 6.5% Sodium Chloride, pojemnik zawierający 100 probówek o rozmiarze K
XIV PIŚMIENNICTWO
1. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria, vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore.
2. Wehr, H.M. and J.F. Frank (ed.). 2004. Standard methods for the examination of dairy products, 17th ed. American Public Health Association,
Washington, D.C.
3. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 2007. Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 12th ed. Mosby, Inc., St. Louis.
4. Fredette, V., and A. Forget. 1961. The sensitivity of several media to small inocula. Extract from a paper presented at the Canadian Society
of Microbiology Annual Meeting, June 12-15. Kingston, Ontario.
5. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc. 2009. The U.S. pharmacopeia 32/The national formulary 27. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc.,
Rockville, Md.
6. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2009. Approved standard: M2-A10. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility
tests, 10th ed. CLSI, Wayne, Pa.
7. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2009. Approved standard: M7-A8. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for
bacteria that grow aerobically, 8th ed. CLSI, Wayne, Pa.
8. Facklam, R.R., D.F. Sahm, and L.M. Teixeira. 1999. Enterococcus, p. 297-305. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and
R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
9. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally
acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa.
10. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for
Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80.
11. U.S. Department of Health and Human Services. 2007. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 5th
ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C.
12. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to
exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). 8 Official
Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045.
13. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller (ed.). 2007. Manual of clinical microbiology, 9th ed. American Society
for Microbiology, Washington, D.C.
14. Holt, J.G., N.R. Krieg, P.H.A. Sneath, J.T. Staley, and S.T. Williams (ed.). 1994. Bergey's Manual of determinative bacteriology, 9th ed.
Williams & Wilkins, Baltimore.
15. Kaye, D. et al. 1966. Comparison of bile and Trypticase soy broth for isolation of Salmonella from blood. Am. J. Clin. Pathol. 46:408-410.
16. Agbayani, M.M. et al. 1981. Effect of CSF on bacterial growth. Arch. Neurol. 38: 43-45.
Dział Obsługi Technicznej firmy BD Diagnostics: należy skontaktować się z lokalnym przedstawicielem BD lub odwiedzić stronę
www.bd.com/ds.

Becton, Dickinson and Company
7 Loveton Circle
Sparks, MD 21152 USA

Benex Limited
Pottery Road, Dun Laoghaire
Co. Dublin, Ireland
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection.
BD, BD Logo, and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. © 2015 BD
L007517
4
Polski