(Dako Autostainer/Autostainer Plus) Nr kat. IS611

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Smooth Muscle Actin
klon 1A4
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Nr kat. IS611
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Smooth Muscle Actin, klon 1A4, Ready-to-Use,
(Dako Autostainer/Autostainer Plus) jest przeznaczone do stosowania w immunocytochemii w aparatach Dako
Autostainer/Autostainer Plus. Przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich, miofibroblasty i komórki mięśniowonabłonkowe, stanowiąc uŜyteczne narzędzie identyfikacji mięśniaków gładkich, mięśniakomięsaków
gładkokomórkowych (1) i gruczolaków pleomorficznych (2). Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce
róŜnicowej. Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę
morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa
w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Aktyny cytoplazmatyczne, naleŜące do białek mikrofilamentarnych cytoszkieletu, stanowią jedne z najlepiej zachowanych
białek eukariotycznych, jakie podlegają ekspresji u ssaków i ptaków. Aktyna występuje w sześciu izoformach o róŜnej
kolejności aminokwasów, jednak wszystkie mają tę samą masę cząsteczkową, wynoszącą 42 kDa. Izoformy wykazują
ponad 90% homologię sekwencji, jednak w 18 N-końcowych elementach homologia wynosi tylko 50–60%. Region Nkońcowy wydaje się stanowić główny obszar antygenowy (3). Istnieją róŜne α izoformy charakterystyczne dla tkanek
mięśniowych, tj. α mięśni szkieletowych, α mięśnia sercowego i α mięśni gładkich (4). Aktyny β i γ mogą występować w
komórkach mięśniowych oraz większości innych typów komórek ciała, w tym niemięśniowych (5).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola
jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór azydku sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: 1A4. Klon 1A4 jest identyczny z przeciwciałem anty-asm-1 opisanym w (3). Izotyp: IgG2a, kappa.
Immunogen
N-końcowy, syntetyczny dekapeptyd α-aktyny mięśni gładkich, sprzęŜony z KLH (hemocyjaniną z Megathura
crenulata) (4).
Swoistość
W testach Western blot i testach immunoblot SDS-PAGE izoformy α aktyny z mięśni gładkich przeciwciało znakuje
prąŜek odpowiadający aktynie α z mięśni gładkich (3).
Jak wykazały badania techniką Western blot i/lub immunocytochemiczne, przeciwciało reaguje krzyŜowo z białkiem
stanowiącym ekwiwalent α-aktyny mięśni gładkich u kur, krów i szczurów (3).
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali.
Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego względu
jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne.
W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych,
gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
(116841-002)
Dako Denmark A/S
IS611/PL/MNI/2009.12.04 str. 1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8010).
W aparacie Dako Autostainer/Autostainer Plus wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji, które są
aktywne podczas korzystania z następujących protokołów:
Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (dawka odczynnika 200 µL) lub FLEXRTU3 (dawka odczynnika 300 µL)
Autoprogram: SMActin (bez barwienia kontrastowego) lub SMActinH (z barwieniem kontrastowym)
W przypadku programów barwienia ≤10 szkiełek etap Auxiliary naleŜy ustawić na „rinse buffer”. W przypadku
programów barwienia >10 szkiełek etap Auxiliary naleŜy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy płukania.
Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje
zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Dako
Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z róŜnym
nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w celu
uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować okręŜnicę i migdałki,
natomiast komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części
„Charakterystyka wydajnościowa” we wszystkich dodatnich preparatach. Zalecana kontrola ujemna to FLEX
Negative Control, Mouse, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS750).
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało znakuje komórki mięśni gładkich w naczyniach krwionośnych oraz dodatkowo
przewody ślinowe i komórki mięśniowo-nabłonkowe wokół zrazików w śliniankach (2). Pozytywnie znakowane były
równieŜ komórki mięśni gładkich w prawidłowej mięśniówce macicy (35/36) (1). Co więcej, obserwowano czasowe
znakowanie komórek okołozatokowych wątroby (6). Komórki mięśni gładkich błony mięśniowej w okręŜnicy wykazują
odczyn umiarkowany do silnego, natomiast komórki mięśni gładkich wyściełających zatoki wątroby wykazują odczyn
słaby do umiarkowanego.
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało znakuje mięśniaki gładkie (24/26), atypowe mięśniaki gładkie (6/7)
i mięśniakomięsaki gładkokomórkowe macicy (21/25), podobnie jak pozamaciczne wrzecionowatokomórkowe
mięśniakomięsaki gładkokomórkowe spoza przewodu pokarmowego (13/13) (1). Ponadto przeciwciało znakuje zmienne
ilości komórek w 8/8 pseudomięsakowych miofibroblastycznych nowotworach pęcherza moczowego u dzieci (7).
W gruczolakach pleomorficznych przeciwciało znakowało rakowe komórki nabłonkowe (komórki mięśniowonabłonkowe) w 19 na 20 przypadków (2).
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Brennan PA, Umar T, Zaki GA, Langdon JD, Spedding A, Buckley J, et al. Are myoepithelial cells responsible
for the widespread expression of inducible nitric oxide synthase in pleomorphic adenoma? An
immunohistochemical study. J Oral Pathol Med 2000;29:279-83.
Skalli O, Ropraz P, Trzeciak A, Benzonana G, Gillessen D, Gabbian G. A monoclonal antibody against
α-smooth muscle actin: a new probe for smooth muscle differentiation. J Cell Biol 1986; 103:2787-96.
Alberts B, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K, Watson JD. The cytoskeleton. In: Alberts B, Bray D, Lewis J, Raff
M, Roberts K, Watson JD, editors. Molecular biology of the cell. 2nd ed. New York and London: Garland
Publishing; 1989. p. 613-629.
Rizeq MN, van de Rijn M, Hendrickson MR, Rouse RV. A comparative immunohistochemical study of uterine
smooth muscle neoplasms with emphasis on the epithelioid variant. Hum Pathol 1994; 25:671-7.
Schmitt-Gräff A, Krüger S, Bochard F, Gabbiani G, Denk H. Modulation of alpha smooth muscle actin and
desmin expression in perisinusoidal cells of normal and diseased livers. Am J Pathol 1991; 138:1233-42.
Hojo H, Newton WA, Hamoudi AB, Qualman SJ, Wakasa H, Suzuki S, et al. Pseudosarcomatous
myofibroblastic tumor of the urinary bladder in children: a study of 11 cases with review of the literature. Am J
Surg Pathol 1995; 19:1224-36.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(116841-002)
Dako Denmark A/S
IS611/PL/MNI/2009.12.04 str. 2/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17