analiza składu komórkowego osocza leukocytarno

Magdalena TRZEPIZUR, Dominika CZACHOR, Studenckie Koło Naukowe Ortopedii
przy Katedrze i Klinice Chirurgii Urazowo-Ortopedycznej Szpitala im. Św. Barbary w
Sosnowcu, Śląski Uniwersytet Medyczny w Katowicach, Wydział Lekarski z Oddziałem
Lekarsko-Dentystycznym w Zabrzu
ANALIZA SKŁADU KOMÓRKOWEGO OSOCZA LEUKOCYTARNOPŁYTKOWEGO ZE SZCZEGÓLNYM UWZGLĘDNIENIEM
KOMÓREK MACIERZYSTYCH – WSTĘPNE WYNIKI
STEM CELL QUANTIFICATION FROM LEUKOCYTE- AND
PLATELET-RICH PLASMA – PRELIMINARY RESULTS
Słowa kluczowe: osocze bogatopłytkowe, zakażenie, gojenie, czynniki wzrostu
1. WSTĘP
Na przełomie wieków zaczęto zastanawiać się nad wykorzystaniem biologicznego
potencjału elementów morforycznych krwi w leczeniu uszkodzonych tkanek [1].
Zaobserwowano bowiem, iż jedno z najwyższych stężeń PDGF i TGF-β, wynoszące około 50
ng/ml występuje trombocytach [2]. Stwierdzono, że co najmniej 0,06 ng PDGF przypada na
milion trombocytów, co daje 6 x 10–17 g PDGF w pojedynczej płytce krwi. Wartości te
wskazują na możliwość wspomagania gojenia ran i regeneracji kości poprzez aplikację
trombocytówdo uszkodzonej tkanki [1]. Dalsze badania zaowocowały przygotowaniem
koncentratu płytek krwi tzw. osocza bogatopłytkowego (platelet-rich plasma – PRP)
uzyskanego poprzez odwirowanie i wyizolowanie ich z pełnej autogennej krwi [3,4].
Zagęszczenie płytek spowodowało, iż w preparacie wzrosły stężenia PDGF i TGFβ, integryn i
innych cząsteczek adhezyjnych, a po dodaniu do niego trombiny powstała galaretowata masa,
tzw. żel bogatopłytkowy (PRG) z uwolnionymi z ziarnistości trombocytów czynnikami
wzrostu [5].
W koncentratach płytkowych, w zależności od zastosowanego systemu preparacji, znajdują
się także inne komórki. W dostępnej literaturze, poza jednym doniesieniem Bieleckiego i wsp.
[6], nie znalazłem prac, które by analizowały skład komórkowy krwi i L-PRP z
uwzględnieniem komórek macierzystych. Stąd celem pracy była analiza dojrzałych komórek
macierzystych z linii leukocytarnej z podziałem na subpopulacje we krwi i osoczu
leukocytarno-płytkowym.
2. MATERIAŁ I METODA
Badania wykonywano w Katedrze i Oddziale Klinicznym Ortopedii w Sosnowcu oraz
w laboratorium Szpitala Klinicznego nr 1 w Zabrzu. Materiał stanowiły próbki krwi pobrane
od 10 wolontariuszy, mężczyzn w wieku od 25-33 lat. Każdemu pobrano 54 ml krwi, do
strzykawki w której znajdował się antykoagulant. Do pozyskania osocza leukocytarnopłytkowego służył jednorazowy zestaw do izolacji płytek krwi (GPS II, Biomet, US).Pobraną
od wolontariuszy krew wstrzykiwano do specjalnego zbiorniczka i odwirowywano przez 15
XII Konferencja Naukowa Majówka Młodych Biomechaników im. prof. Dagmary Tejszerskiej s. 174
minut przy obrotach 3200/min. W ten sposób otrzymano 3 warstwy – między warstwą 1 i 2
powstał kożuszek, który stanowiły płytki krwi i inne komórki. Następnie pobierano osocze
bezkomórkowe, a pozostały w zbiorniczku materiał był przez 30 sekund wstrząsany ruchami
okrężnymi. Z każdej z próbek uzyskano 6 ml osocza bogatego w płytki krwi i leukocyty, które
następnie poddano analizie.
Skład dojrzałych komórek macierzystych (komórek
progenitorowych) w L-PRP należących do układu immunologicznego, poddano badaniu
poprzez oznaczanie molekuły powierzchniowe CD.
3. WYNIKI
Oznaczane zostały molekuły powierzchniowe CD3, CD19, CD33, CD45, CD56, HLA
DR oraz CD34. Analiza linii leukocytarnej wykazała, iż podczas separacji komórek wzrasta
ponad 5-krotnie liczba komórek progenitorowych. Wykazano znaczną koncentrację
trombocytów, leukocytów i komórek macierzystych. Z uzyskanych obserwacji wynika
również, że L-PRP żel wykazuje działanie antybakteryjne niezależnie od posiadanego przez
drobnoustrój mechanizmu odporności.
4. WNIOSKI
Wykazano duży potencjał autogennego osocza leukocytarno-płytkowego z komórkami
progenitorowymi m. in. o możliwościach aktywizacji procesów obronnych oraz gojenia.
Wydaje się, ze L-PRP może stanowić terapię uzupełniającą leczenie operacyjne zakażonych
tkanek. Kierunek badań rokuje duże nadzieje i powinien być kontynuowany.
5. LITERATURA
1. Dohan Ehrenfest DM, Bielecki T, Mishra A, Borzini P, Inchingolo F, Sammartino G,
Rasmusson L, Evert PA. In search of a consensus terminology in the field of platelet
concentrates for surgical use: platelet-rich plasma (PRP), platelet-rich fibrin (PRF),
fibrin gel polymerization and leukocytes. Curr Pharm Biotechnol. 2012 Jun;13(7):11317.
2. Bielecki T. Właściwości osteoindukcyjne i antybakteryjne autologicznego żelu
płytkowo-leukocytarnego oraz możliwości ich wykorzystania w praktyce klinicznej.
Rozprawa Habilitacyjna, Śląski Uniwersytet Medyczny, 17/2008
3. Bielecki T, Dohan Ehrenfest DM. Platelet-rich plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin
(PRF): surgical adjuvants, preparations for in situ regenerative medicine and tools for
tissue engineering. Curr Pharm Biotechnol. 2012 Jun;13(7):1121-30
4. Cieslik-Bielecka A, Choukroun J, Odin G, Dohan Ehrenfest DM. L-PRP/L-PRF in
esthetic plastic surgery, regenerative medicine of the skin and chronic wounds. Curr
Pharm Biotechnol. 2012;13:1266–1277.
5. Del Corso M, Vervelle A, Simonpieri A, et al. Current knowledge and perspectives for
the use of platelet-rich plasma (PRP) and platelet-rich fibrin (PRF) in oral and
maxillofacial surgery part 1: Periodontal and dentoalveolar surgery. Curr Pharm
Biotechnol. 2012;13:1207–1230.
6. Bielecki T., Cieślik-Bielecka A., Sędek Ł., Gaździk T.S. The analysis of leukocytes for
CD3, CD14, CD15, CD16, CD19, CD45, CD56 with progenitor cells (CD34+) and
platelet-derived growth factors in blood and platelet-leukocyte rich plasma/gel preliminary report. Pol.J.Environ.Stud., 2009; Vol.18, No.1A, 649-652.