Dane ogólne
Transkrypt
Dane ogólne
Zamierzone uwolnienie GMO Tytuł Zamierzone uwolnienie GMO Opis Wniosek o wydanie decyzji w sprawie zamierzonego uwolnienia GMO Dane ogólne INFORMACJE OGÓLNE O WNIOSKU Numer wniosku 02-02/2007 Status zgłoszenia Wydano decyzję Data zgłoszenia 2007-09-19 Znak decyzji DOPgmo-431-275/02-06/2007 Data wydania decyzji 2008-11-20 Data decyzji 2011-08-30 Numer decyzji 83/2008 Numer uchwały 32/2008 Tytuł zamierzonego uwolnienia Dokonanie oceny warunków bezpieczeństwa uprawy roślin transgenicznych Title Investigation of genetically modified triticale Cel zamierzonego uwolnienia Badanie przekazywania transgenów poprzez przepylenie w warunkach uprawy roślin transgenicznych do gatunków dzikich lub nietransgenicznych odmian tego samego i pokrewnych gatunków. Określenie stref izolacji dla upraw transgenicznych pszenżyta. Abstract Tissue material was bombarded with the plasmid pDB1 (Becker et al 1994) containing the ß - glucuronidase gene (uidA) under the control of actin-1 promoter (Act1) from rice and a selectable marker gene bar (phosphinothricin acetyl transferase) under the control of the CaMV 35S promoter. Bar gene is responsible for herbicide BASTA resistance. Becker D., Brettschneider R., Lorz H., 1994 - Fertile transgenic wheat from microprojectile bombardment of scutellar tissue. Plant Journal 5, 583-592. Strona 1 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Użytkownik 1.INFORMACJE O UŻYTKWONIKU GMO I OSOBACH ODPOWIEDZIALNYCH ZA PRZYGOTOWANIE I PRZEPROWADZENIE ZAMIERZONEGO UWOLNIENIA 1.1. Nazwa i siedziba lub nazwisko i adres użytkownika GMO Dane osoby prawnej Nazwa użytkownika Instytut Hodowli i Aklimatyzacji Roślin, Zakład Biotechnologii i Cytogenetyki Roślin Kod pocztowy 05-870 Miejscowość Błonie Ulica ..................................... Numer budynku ..................................... Numer lokalu ..................................... Adres e-mail [email protected] Telefon 0227252252 Faks 7967563 Dane osoby fizycznej Imię ..................................... Nazwisko ..................................... Kod pocztowy ..................................... Miejscowość ..................................... Ulica ..................................... Numer budynku ..................................... Numer lokalu ..................................... Adres e-mail ..................................... Telefon ..................................... Faks ..................................... 1.2. Imię i nazwisko oraz informacja o kwalifikacjach fachowych osoby (osób) odpowiedzialnej za przygotowanie i przeprowadzenie zamierzonego uwolnienia GMO do środowiska Dane osoby odpowiedzialnej Tytuł naukowy Prof. dr hab. Imię pracownika Janusz Nazwisko pracownika Zimny Telefon 0227252252 Faks 796756 Strona 2 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Adres e-mail [email protected] Kwalifikacje zawodowe pracownika Doświadczenie w zakresie kultur tkankowych roślin, transformacji roślin i analizy molekularnej roślin transgenicznych. Kierownik i wykonawca grantów KBN. Strona 3 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Uwolnienie 2. INFORMACJE O ZAMIERZONYM UWOLNIENIU GMO DO ŚRODOWISKA a) Tytuł zamierzonego uwolnienia GMO do środowiska Dokonanie oceny warunków bezpieczeństwa uprawy roślin transgenicznych Title Investigation of genetically modified triticale b) Cel zamierzonego uwolnienia GMO do środowiska i krótkie streszczenie Badanie przekazywania transgenów poprzez przepylenie w warunkach uprawy roślin transgenicznych do gatunków dzikich lub nietransgenicznych odmian tego samego i pokrewnych gatunków. Określenie stref izolacji dla upraw transgenicznych pszenżyta. Abstract Tissue material was bombarded with the plasmid pDB1 (Becker et al 1994) containing the ß - glucuronidase gene (uidA) under the control of actin-1 promoter (Act1) from rice and a selectable marker gene bar (phosphinothricin acetyl transferase) under the control of the CaMV 35S promoter. Bar gene is responsible for herbicide BASTA resistance. Becker D., Brettschneider R., Lorz H., 1994 - Fertile transgenic wheat from microprojectile bombardment of scutellar tissue. Plant Journal 5, 583-592. Strona 4 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Biorca 3. INFORMACJE O GMO a) Charakterystyka biorcy; organizmu rodzicielskiego (o ile występuje) 3.1. Nazwa taksonomiczna Triticale (xTriticosecale) Jeżeli w powyższym słowniku wybrana została wartość "Żadne z powyższych" należy wypełnić pole: ..................................... 3.2. Taksonomia Królestwo: jądrowe (Eucariota) Podkrólestwo: rośliny (Phytobionta) Dział : organowce (Cormophyta) Typ (d. gromada): okrytozalążkowe (Magnoliophyta = Angiospermae) Klasa: jednoliścienne (Liliopsida = Monocotyledones) Rząd: wiechlinowce (trawowce) (Poales) Rodzina: trawy (Poaceae [Gramineae]) Rodzaj: pszenżyto (Triticale) Gatunek: pszenżyto (Triticale x Triticosecale Witt.) 3.3. Inne nazwy (w szczególności: nazwa zwyczajowa, nazwa szczepu, nazwa hodowlana) Pszenżyto, odmiana Bogo 3.4. Cechy fenotypowe i genetyczne Dopuszczone na rynek rośliny uprawne 3.5. Stopień pokrewieństwa pomiędzy dawcą i biorcą lub między organizmami rodzicielskimi Pomiędzy dawcami genu (bakteriami Streptomyces hygroscopicus i Escherichia coli) a biorcą (rośliną pszenżyta) nie występuje żadne pokrewieństwo. 3.6. Opis technik identyfikacji i detekcji Pszenżyto jest uprawnym gatunkiem z rodziny Poaceae i jest dobrze opisane taksonomicznie, co umożliwia detekcję poprzez zastosowanie kontroli wzrokowej. 3.7. Dokładność, powtarzalność i specyficzność technik identyfikacji i detekcji Opisane w pkt. 3.6 techniki detekcji są powtarzalne, specyficzne i wystarczająco dokładne do identyfikacji pszenżyta. 3.8. Opis geograficznego zasięgu i naturalnego środowiska organizmu wraz z informacją o naturalnych wrogach, ofiarach, pasożytach, konkurentach, symbiontach i gospodarzach Pszenżyto [Triticale (x Triticosecale Wittm.)] - jest to mieszaniec otrzymany sztucznie przez człowieka pod koniec XIX wieku ze skrzyżowania 2 gatunków: żyta i pszenicy. Obecnie powierzchnia uprawy tego zboża na świecie to około 3,5 mln ha, w tym w Polsce około 1,1 mln ha. W uprawie występują formy jare i ozime tego gatunku. 3.9. Możliwość przeniesienia informacji genetycznej do innych organizmów. Krzyżowanie z innymi gatunkami użytkowymi lub dzikimi Transfer horyzontalny. Nie ma opublikowanych danych dotyczących istnienia jakichkolwiek naturalnych mechanizmów, innych poza krzyżowaniem płciowym pomiędzy roślinami pszenżyta, poprzez które geny mogłyby być przekazywane z pszenżyta do innych organizmów. Transfer międzygatunkowy lub międzyrodzajowy. Nie stwierdzono Transfer wewnątrzgatunkowy. Pszenżyto jest rośliną samopylną, ale publikowane badania wskazują na możliwość obcozapylenia w zakresie ok. 1,5 – 3 % jeżeli rodzice znajdują się w bezpośredniej bliskości. Jeżeli zdolny do życia pyłek zostanie przeniesiony przez wiatr na podatne znamię słupka, w czasie 30-minutowego okresu życia pyłku, może wówczas nastąpić transfer materiału genetycznego. Ten transfer staje się coraz mniej prawdopodobny wraz ze wzrostem odległości. Ponadto Strona 5 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO na możliwość zapylania mają wpływ takie czynniki jak: wilgotność i temperatura powietrza, termin siewu i kwitnienia, różnice odmianowe, bariery mechaniczne, siła i kierunek wiatru. 3.10. Stabilność genetyczna organizmów i czynniki na nią wpływające Stabilność genetyczna pszenżyta jest prawie wyłącznie kształtowana zabiegami hodowlanymi człowieka. System rejestracji odmian i certyfikacji materiału siewnego wymaga potwierdzenia stabilności cech (genetycznej) komercyjnych odmian pszenżyta. 3.11. Cechy patologiczne, ekologiczne i fizjologiczne a) cechy patologiczne, stosownie do istniejących norm dotyczących ochrony zdrowia ludzi lub ochrony środowiska Pszenżyto nie wykazuje żadnych cech patologicznych. b) wymiana pokoleń w naturalnym ekosystemie; płciowe i bezpłciowe cykle reprodukcyjne Pszenżyto nie występuje w Europie w naturalnych ekosystemach, ponieważ nie wytrzymałoby presji innych gatunków roślin, a także szkodników i chorób. Cykl reprodukcyjny odbywa się pod ścisłą kontrolą hodowców. c) zdolność do samodzielnego utrzymania się w środowisku, w tym wytwarzanie diaspor między innymi przez nasiona, spory. Specyficzne czynniki wpływające na przeżywalność i rozsiewanie Pszenżyto jako roślina uprawna nie jest zdolne do przeżycia bez obecności człowieka, jako chwast natomiast nie jest zdolne do przeżycia ze względu na wcześniejszą selekcję. Samosiewów pszenżyta nie znajduje się jako chwastów rosnących w rowach, czy też przy drodze d) patogenność: infekcyjność, toksyczność, alergenność, nośniki (wektory) patogenów, inne wektory, wpływ na organizmy nieobjęte celowym działaniem GMO. Możliwość aktywacji wirusów utajonych (prowirusów); zdolność do kolonizacji innych organizmów Kwestie patogenności, w tym: infekcyjność, toksyczność, alergenność, nośniki (wektory) patogenów, inne wektory, nie dotyczą pszenżyta. Zdolność do kolonizacji innych organizmów pszenżyta jest żadna. e) oporność na antybiotyki i możliwość wykorzystywania tych antybiotyków w leczeniu ludzi i zwierząt i w profilaktyce Pszenżyto nie zawiera genów odporności na antybiotyki f) rola w procesach środowiskowych, produkcja, przemiany metaboliczne, rozkład materii organicznej, inne Jak inne rodzaje zbóż. 3.12. Charakterystyka wcześniej wprowadzonych wektorów Ogólna chcrakterystyka wcześniej wprowadzonych wektorów Do pszenżyta nie wprowadzano wcześniej wektorów a) sekwencja Nie dotyczy b) częstotliwość użytkowania Nie dotyczy c) specyficzność Nie dotyczy Strona 6 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO d) obecność genów nadających oporność Nie dotyczy 3.13. Opis wcześniejszych modyfikacji genetycznych Nie dotyczy Strona 7 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Dawca 3. INFORMACJE O GMO b) Charakterystyka dawcy 3.14. Nazwa taksonomiczna Escherichia coli Streptomyces hygroscopicus Jeżeli w powyższym słowniku wybrana została wartość "Żadne z powyższych" należy wypełnić pole: ..................................... 3.15. Taksonomia a. Streptomyces hygroscopicus Klasa: Actinobacteria Rząd: Actinomycetales Rodzina: Streptomycetaceae Rodzaj: Streptomyces Gatunek: Streptomyces hygroscopicus b. Escherichia coli Klasa: Gammaprobacteria Rząd: Enterobacteriales Rodzina: Enterobacteriaceae Rodzaj: Escherichia Gatunek: Escherichia coli 3.16. Inne nazwy (w szczególności: nazw zwyczajowa, nazwa szczepu, nazwa hodowlana) Używa się nazwy taksonomicznej 3.17. Cechy fenotypowe i genetyczne Informacja jest bez znaczenia dla oceny bezpieczeństwa wnioskowanych badań polowych. 3.18. Stopień pokrewieństwa pomiędzy dawcą i biorcą lub między organizmami rodzicielskimi Pomiędzy dawcami genu (grzybem Streptomyces hygroscopicus i bakterią Escherichia coli) a biorcą (rośliną pszenżyta) nie występuje żadne pokrewieństwo. 3.19. Opis technik identyfikacji i detekcji Identyfikacji i detekcji dawcy służyć mogą tradycyjne metody powszechnie stosowane w przypadku grzybów i bakterii: obserwacje mikroskopowe i hodowla na pożywkach agarowych. 3.20. Dokładność, powtarzalność i specyficzność technik identyfikacji i detekcji Opisane w pkt. 3.19 techniki są w pełni specyficzne, dokładne i powtarzalne. 3.21. Opis geograficznego zasięgu i naturalnego środowiska organizmu wraz z informacją o naturalnych wrogach, pasożytach, konkurentach, symbiontach i gospodarzach a. Streptomyces hygroscopicus - organizm jest bakterią b. Escherichia coli - organizm jest bakterią 3.22. Możliwość przeniesienia informacji genetycznej do innych organizmów Krzyżowanie z innymi gatunkami użytkowymi lub dzikimi Związek pomiędzy pszenżytem a „dawcą”, czyli Streptomyces hygroscopicus i Escherichia coli, kończy się na etapie opracowania kaset genowych, z genem pDB1. Genom dawcy nie został zmieniony i dawca nie ma dalszego związku ze zmodyfikowanym pszenżytem, ponieważ nie został użyty do jego transformacji. Dalsze rozpatrywanie charakterystyki dawcy nie ma wpływu na określenie bezpieczeństwa badań. 3.23. Stabilność genetyczna organizmów i czynniki na nią wpływające patrz pkt. 3.22 b 3.24. Cechy epidemiologiczne (patologiczne i fizjologiczne oraz ekologiczne) a) cechy patologiczne, stosownie do istniejących norm dotyczących ochrony zdrowia ludzi lub ochrony środowiska patrz pkt. 3.22 b Strona 8 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO b) Wymiana pokoleń w naturalnym ekosystemie; płciowe i bezpłciowe cykle reprodukcyjne patrz pkt. 3.22 b c) zdolność do samodzielnego utrzymania się w środowisku, w tym wytwarzanie diaspor między innymi przez nasiona, spory. Specyficzne czynniki wpływające na przeżywalność i rozsiewanie patrz pkt. 3.22 b d) patogenność: infekcyjność, toksyczność, alergenność, nośniki (wektory) patogenów, inne wektory, wpływ na organizmy nieobjęte celowym oddziaływaniem GMO; możliwość aktywacji wirusów utajonych (prowirusów); zdolność do kolonizacji innych organizmów patrz pkt. 3.22 b e) oporność na antybiotyki i możliwość wykorzystywania tych antybiotyków w leczeniu ludzi i zwierząt i w profilaktyce patrz pkt. 3.22 b f) rola w procesach środowiskowych, produkcja, przemiany metaboliczne, rozkład materii organicznej, inne patrz pkt. 3.22 b 3.25. Charakterystyka wcześniej wprowadzonych wektorów Charaktetystyka wcześniej wprowadzonych wektorów Nie wprowadzano wcześniej innych wektorów a) sekwencja ................................................................................................................................................................................ b) częstość mobilizacji ................................................................................................................................................................................ c) specyficzność ................................................................................................................................................................................ d) obecność genów nadających oporność ................................................................................................................................................................................ 3.26. Opis wcześniejszych modyfikacji genetycznych Nie dokonywano wcześniej modyfikacji genetycznych Strona 9 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Wektor 3. INFORMACJE O GMO c) Charakterystyka wektora 3.27. Właściwości i źródło wektora Nazwa: pDB1, Opis szczegółowy: bakteryjny gen kodujący acylotransferazę fosfinotriciny, gen reporterowy gus (β-glukuronidazy) Oodnośnik literaturowy opisujący konstrukcję wektora: Becker D., Brettschneider R., Lörz H.,1994. Fertile transgenic wheat from microprojectile bombardment of scutellar tissue. Plant Journal, 5: 299-307 3.28. Sekwencja transpozonów, wektorów i innych niekodujących odcinków genetycznych, użytych do konstrukcji GMO i zrobienia wektorów wprowadzających oraz pozwalających na ich funkcjonowanie w GMO Nie stosowano. 3.29. Częstość mobilizacji wbudowanego wektora lub zdolność przenoszenia i metody określenia tych procesów Nie dotyczy 3.30. Informacje o tym, w jakim stopniu wektor jest ograniczony do DNA wymaganego do spełnienia planowanych funkcji Wektor jest ograniczony do spełnienia planowanych funkcji. Strona 10 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO GMO 3. INFORMACJE O GMO d) Charakterystyka GMO 3.31. Informacje związane z modyfikacjami genetycznymi a) metody modyfikacji Pszenżyto GM zostało zmodyfikowane poprzez wbudowanie fragmentu restrykcyjnego plazmidu DNA, oznaczonego jako pDB1, do genomu pszenżyta, przy zastosowaniu metody akceleracji cząsteczkowej (strzelby genowej). Metoda transformacji przy pomocy strzelby genowej. Strzelba genowa PDS 1000\He, która została wykorzystana w doświadczeniach, składa się z komory sprężania, przewodu lufy z siatką stopującą i półki na której umieszcza się próbki.Wszystkie elementy umieszczone są w komorze podciśnieniowej. Ciśnienie gazu wykorzystywane do przyspieszania cząstek niosących DNA wzrasta w komorze sprężania, która jest zamknięta membraną wyzwalającą. Membrana ta pęka kiedy ciśnienie przekracza jej wytrzymałość. Strumień rozprężającego się gazu uderza wtedy w membranę nośną, na której spodnią część naniesiono cząstki złota z przytwierdzonym do nich plazmidowym DNA. Membrana nośna wprawiona w ruch porusza się w dół po krótkim odcinku z dużą prędkością. Bieg jej kończy się na siatce stopującej, natomiast cząstki złota przelatują przez oczka siatki i poruszając się w dół natrafiają na obiekt jakim są komórki roślinne umieszczone na półce 5.5, 8.5 lub 11.5 cm poniżej siatki stopującej. Osadzenie DNA na cząstkach złota: 2 mg cząstek złota w 50 μl wody wytrząsano na mieszadle (worteks), dodano 5 μg DNA rozpuszczonego w 5μ l buforu TE (10mM Tris-HCl, 1mM EDTA) przy pH 8,0. Następnie dodano 50 μl 2,5 M roztworu CaCl2 i 20 μl 0,1 M spermidyny i wszystko wymieszano na mieszadle (worteks) po czym sedymentowano na mikrowirówce przy 3000 obrotów przez 5 sekund. Po przemyciu w alkoholu etylowym cząstki rozprowadzano w 240 μl alkoholu 96%. Do wykonania każdego strzału wykorzystywano 3,5 μl tak sporządzonego roztworu. Transformowanie prowadzono w warunkach podanych poniżej: odległość między a) dyskiem spustowym i membraną nośną - 2.5 cm, b) membraną nośną i siatką stpującą - 0.8 cm, c) siatką stopującą i obiektem (tkanką) - 5.5 cm, ciśnienie gazu - 1300, 1550 psi, podciśnienie - 27 inch Hg b) metody konstrukcji i wprowadzenia insertu bądź insertów do biorcy lub usunięcia sekwencji patrz pkt. 3.28 c) opis insertu i/ lub konstrukcji wektora W badaniach nad transformowaniem pszenżyta wykorzystano konstrukt plazmidowy pDB1 (Becker i in. 1994). Plazmid ten zawiera geny uidA ß-glukuronidazy (GUS) pod kontrolą promotora aktyny z ryżu i gen bar acetylotransferazy fosfinotricyny (PAT) pod kontrolą promotora 35S z wirusa mozaiki kalafiora. Izolację plazmidu, strącanie oraz oczyszczanie przeprowadzano wg. Sambrooka i in. (1989). d) metody użyte do selekcji W celu wykazania działania genu uidA metodą histochemiczną należy zastosować konstytutywny promotor, który zapewni silną ekspresję genu. Z tego powodu wykorzystano jako konstrukt wyjściowy pAct 1-D/gus (Mc Elroy i in. 1990), w którym gen uidA występuje pod kontrolą promotora aktyny z ryżu. Do konstruktu włączono także gen bar kodujący enzym PAT (acetylotransferazę fosfinotricyny) pod kontrolą promotora 35S z wirusa mozaiki kalafiora (CaMV). Gen ten niesie odporność na PPT. e) czystość insertu - obecność sekwencji o nieznanych funkcjach Brak takich sekwencji f) sekwencja, lokalizacja i funkcja wprowadzonych/ usuniętych/ zmienionych fragmentów DNA, ze szczególnym odniesieniem do jakiejkolwiek znanej szkodliwej sekwencji Brak usuniętych/zmienionych fragmentów DNA Strona 11 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO g) umiejscowienie insertu w komórce (chromosomy, mitochondria, chloroplasty, cytoplazma) i metody identyfikacji umiejscowienia insertu W chromosomach h) wielkość usuniętego fragmentu i jego funkcje Nie usuwano fragmentów DNA 3.32. Informacje o uzyskanym GMO Informacje o uzyskanym GMO ................................................................................................................................................................................ a) opis zmienionych cech genetycznych i fenotypowych GMO Gen glukuronidazy uidA Geny reporterowe są używane do transformowania w celu badania ekspresji w określonych warunkach i tkankach. Gen reporterowy nie powinien wykazywać ekspresji w tkance kontrolnej, ani mieć wpływu na metabolizm. Poza tym powinien on być łatwo wykrywalny, prostym i czułym testem, najlepiej w sposób ilościowy, nie powodując śmierci tkanki. Gen ß-glukuronidazy (GUS), kodowany przez lokus uidA z E. coli, jest najczęściej stosowanym genem reporterowym w transformacjach zbóż (Jefferson i in. 1987). ß-glukuronidaza katalizuje hydrolizę wielu substratów ß-glukuronidu wykrywanych fluorometrycznie i histologicznie. Aktywność tego enzymu można łatwo wykrywać w roślinach, a ekspresja kodującego go genu może być oznaczona ilościowo w teście fluorymetrycznym. Analiza histochemiczna pozwala zlokalizować miejsce aktywności genu w transgenicznej tkance. Gen selekcyjny, odporności na fosfinotricynę bar Stosowanie herbicydów, w celu ograniczenia strat powodowanych przez chwasty, stało się powszechnym zabiegiem we współczesnej agrotechnice. Zakłady produkujące herbicydy poszukują efektywnych substancji chemicznych, które byłyby bezpieczne dla zwierząt i środowiska. Herbicydami, które spełniają te warunki są te, które hamują przebieg biosyntezy niektórych aminokwasów w roślinach; niestety nie działają one selektywnie. Uzyskanie roślin odpornych na substancję czynną herbicydu pozwoliłoby na ich wybiórcze stosowanie w ochronie roślin. Takie rośliny można uzyskiwać w dwojaki sposób: poprzez indukowanie mutantów roślinnych mniej wrażliwych na herbicyd lub poprzez wprowadzanie do roślin genów pochodzących z innych organizmów np. z bakterii. Takim genem jest bar niosący odporność na fosfinotricynę (PPT) substancję czynną herbicydu Basta (Hoechst AG). Fosfinotricyna jest inhibitorem syntetazy glutaminy (GS). Enzym ten odgrywa zasadniczą rolę w asymilacji amoniaku i regulacji metabolizmu azotu w roślinach (Miflin, Lea 1977). Wiąże on amoniak uwolniony w wyniku redukcji azotanów, degradacji aminokwasów i fotooddychania. Syntetaza glutaminy katalizuje reakcję: glutaminian +NH4 + ATP→ glutamina +H2O +ADP +P Fosfinotricyna występuje w formie trójpeptydu. Składa się z dwóch reszt L-alaniny i analogu kwasu glutaminowego - który po odłączeniu reszt alaniny w komórce staje się inhibitorem syntetazy glutaminy, to powoduje z kolei nagromadzanie się w niej amoniaku. Hamowana jest fotosynteza i komórki giną. Gen odporności bar koduje enzym acetylotransferazę (PAT), która acetyluje grupy NH2 z PPT co powoduje jej inaktywację oraz zapobiega blokowaniu GS w komórkach. Gen bar uzyskany z bakterii Streptomyces hygroscopicus jest genem markerowym, który umożliwia selekcję komórek, tkanek i całych roślin i dlatego jest bardzo często stosowany w badaniach nad transformacją roślin. Sposób(y) i/lub tempo rozmnażania. Sposób rozmnażania roślin genetycznie zmodyfikowanych jest taki sam jak roślin niezmodyfikowanych genetycznie. Rośliny genetycznie zmodyfikowane zachowują się tak samo jak ich niezmodyfikowane odpowiedniki w odniesieniu do rozsiewania pyłku i wytwarzania nasion. Przeżywalność. Zdolność do przeżycia jest taka sama; genetycznie zmodyfikowana roślina pozostaje rośliną jednoroczną. Wprowadzony gen nie ma żadnego wpływu na zdolność rośliny do tworzenia kolonii. b) struktura i liczba kopii każdego wektora lub dodanego kwasu nukleinowego w GMO Więcej niż dwie kopie Strona 12 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO c) stabilność genetyczna i fenotypowa Stabilność fenotypowa pszenżyta nie została zmieniona w wyniku modyfikacji. d) charakterystyka i poziom ekspresji nowego materiału genetycznego; metody i czułość pomiaru; części organizmu, gdzie występuje ekspresja (np. korzeń) części organizmu, gdzie występuje ekspresja (np. korzeń) Analiza DNA metodą Southerna Genomowe DNA izolowano z zamrożonej tkanki liścia roślin T0, T1 i T2 wg. procedury Dellaporta i in. (1983). Próbki DNA trawiono enzymami restrykcyjnymi (25 �g) i rozdzielano na żelu agarozowym metodą elektroforezy. Trawienie enzymami restrykcyjnymi prowadzono według przepisów producentów enzymów restrykcyjnych. DNA z nietransformowanego pszenżyta, a także PAT- i GUS- pozytywne rośliny użyto odpowiednio jako kontrole negatywne i pozytywne. Obecność wprowadzonych genów badano zmodyfikowaną metodą hybrydyzacji typu Sotuhern z sondą znakowaną digoksygeniną. Identyfikację hybrydyzujących fragmentów DNA uzyskiwano metodą chemiluminescencji (Neuhaus-Url, Neuchaus, 1993). Filtry były hybrydyzowane sondą -Dellaporta i in. (1983). Próbki DNA trawiono enzymami restrykcyjnymi (25 �g) i rozdzielano na żelu agarozowym metodą elektroforezy. Trawienie enzymami restrykcyjnymi prowadzono według przepisów producentów enzymów restrykcyjnych. DNA z nietransformowanego pszenżyta, a także PAT- i GUSpozytywne rośliny użyto odpowiednio jako kontrole negatywne i pozytywne. Obecność wprowadzonych genów badano zmodyfikowaną metodą hybrydyzacji typu Sotuhern z sondą znakowaną digoksygeniną. Identyfikację hybrydyzujących fragmentów DNA uzyskiwano metodą chemiluminescencji (NeuhausUrl, Neuchaus, 1993). Filtry były hybrydyzowane sondą -Dellaporta i in. (1983). Próbki DNA trawiono enzymami restrykcyjnymi (25 �g) i rozdzielano na żelu agarozowym metodą elektroforezy. Trawienie enzymami restrykcyjnymi prowadzono według przepisów producentów enzymów restrykcyjnych. DNA z nietransformowanego pszenżyta, a także PAT- i GUS- pozytywne rośliny użyto odpowiednio jako kontrole negatywne i pozytywne. Obecność wprowadzonych genów badano zmodyfikowaną metodą hybrydyzacji typu Sotuhern z sondą znakowaną digoksygeniną. Identyfikację hybrydyzujących fragmentów DNA uzyskiwano metodą chemiluminescencji (Neuhaus-Url, Neuchaus, 1993). Filtry były hybrydyzowane sondą -Dellaporta i in. (1983). Próbki DNA trawiono enzymami restrykcyjnymi (25 �g) i rozdzielano na żelu agarozowym metodą elektroforezy. Trawienie enzymami restrykcyjnymi prowadzono według przepisów producentów enzymów restrykcyjnych. DNA z nietransformowanego pszenżyta, a także PAT- i GUSpozytywne rośliny użyto odpowiednio jako kontrole negatywne i pozytywne. Obecność wprowadzonych genów badano zmodyfikowaną metodą hybrydyzacji typu Sotuhern z sondą znakowaną digoksygeniną. Identyfikację hybrydyzujących fragmentów DNA uzyskiwano metodą chemiluminescencji (Neuhaus-Url, Neuchaus, 1993). Filtry były hybrydyzowane sondą -500 par zasad - gen bar lub 637 par zasad genu uidA znakowaną przy pomocy PCR. Sygnały utrwalano na filmach Kodak X-Omat Ar. e) funkcja nowego białka Patrz pkt. 3.32 a f) techniki identyfikacji i detekcji wprowadzonej sekwencji, wektorów i białka oraz metabolitów będących produktami wprowadzonego genu Techniki fenotypowe: Identyfikacja roślin poddanych transformacji może zostać dokonana poprzez sprawdzenie ich odporności na fosfinotricynę (PPT) substancję czynną herbicydu Basta (Hoechst AG). Rośliny pszenżyta zmodyfikowane genetycznie przeżyją zastosowanie herbicydu. Techniki genotypowe (zademonstrowanie specyficznych sekwencji w genomie rośliny). Wprowadzony gen może być rozpoznany przez zastosowanie analiz PCR (ang. Polymerase Chain Reaction) lub Southern blot. Patrz pkt. 3.32 a oraz d g) czułość, wiarygodność (w rozumieniu ilościowym) i specyficzność technik identyfikacji i detekcji Wymienione techniki detekcji są wystarczająco czułe i wiarygodne, aby odróżnić roślinę pszenżyta zmodyfikowaną od niezmodyfikowanej i wykryć działanie wprowadzonego genu. Strona 13 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO h) zmiany współczynnika rozmnożenia, zdolności do rozsiewania i przeżywalności GMO w porównaniu do organizmu biorcy Rośliny genetycznie zmodyfikowane zachowują się tak samo jak ich niezmodyfikowane odpowiedniki w odniesieniu do rozsiewania pyłku i wytwarzania nasion. Zdolność do przeżycia jest taka sama; genetycznie zmodyfikowana roślina pozostaje rośliną jednoroczną. Wprowadzone geny nie mają żadnego wpływu na zdolność rośliny do tworzenia kolonii. 3.33. Opis wcześniejszych uwolnień GMO Nie przeprowadzano wcześniej uwolnień GMO 3.34. Ustalenia zdrowotne Ustalenia zdrowotne ................................................................................................................................................................................ a) efekty toksyczne lub alergiczne GMO lub produktów ich metabolizmu Na podstawie dostępnego piśmiennictwa oraz syntezy wyników dotychczasowych badań zawartej w najnowszym opracowaniu europejskim (Aumaitre i wsp., 2002) i amerykańskim (Faust, 2002) można stwierdzić, że odporne na szkodniki lub herbicydy transgeniczne rośliny (kukurydza, soja, buraki cukrowe, bawełna) stosowane w doświadczalnym żywieniu zwierząt nie różniły się istotnie od swych izogenicznych form pod względem składu chemicznego, strawności składników pokarmowych lub wartości pokarmowej (substantial and nurtitional equivalence). Myszy szczepu C57BL/6J żywiono przez pięć kolejnych pokoleń wyłącznie granulatem zawierającym 20% pszenżyta transgenicznego, odpornego na fosfinotrycynę (substancja czynna herbicydu Basta) lub granulatem zawierającym 20% pszenżyta konwencjonalnego tej samej odmiany (odpowiednio grupa doświadczalna i kontrolna). Dieta z udziałem pszenżyta transgenicznego nie wpływała ujemnie na wzrost myszy (w 21, 42, 63 i 91 dniu życia i we wszystkich pokoleniach zwierzęta doświadczalne nie odbiegały pod względem masy ciała od kontrolnych). We krwi, nerkach, wątrobie, śledzionie i mięśniu uda myszy żywionych dietą z udziałem pszenżyta genetycznie zmodyfikowanego nie stwierdzono (analiza PCR, 637 p.z.) obecności transgenicznego DNA. Aumaitre A., Aulrich K., CHesson A., Flachowsky G., Piva G., 2002 - New feeds from genetically modified plants: substantial equivalence, nurtitional equivalence, digestibility, and safety for animals and the food chain. Livestock Production Science 74, 223-238.Baranowski A., Rosochaci S., Parada R., Jaszczak K., Zimny J., Połoszynowicz J., 2006 – The effect of diet containing genetically modified triticale on growth and transgenic DNA fate in selected tissues of mice. Animal Science Papers and Reports vol. 24, no. 2, 129-14. Faust M.A., 2002 - New feeds from genetically modified plants: the US approach to safety for animals and the food chain. Livestock Production Science 74, 239-254. b) produkty stwarzające zagrożenie patrz pkt. 3.34 a c) porównanie GMO z dawcą, biorcą lub organizmem rodzicielskim (o ile występuje), w odniesieniu do patogenności Porównanie linii pszenżyta GM z liniami wyjściowymi (użytymi do transformacji), nie wskazuje w najmniejszym stopniu na powstanie jakiejkolwiek patogenności będącej wynikiem transformacji. Pszenżyto w ogóle nie jest patogenne. d) zdolność do kolonizacji Pszenżyto GM nie wykazuje zdolności do kolonizacji. e) patogenność organizmu dla ludzi, którzy są immunokompetentni (o sprawnym układzie odpornościowym) Strona 14 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Do tej pory nie stwierdzono przypadku patogenności f) wywołane dolegliwości i mechanizm patogenności, włączając inwazyjność i złośliwość (zjadliwość) choroby Pszenżyto GM nie jest patogenne, inwazyjne, nie wywołuje chorób i jest w tych aspektach identyczne z każdym innym pszenżytem. Podobnie jak produkty z niego pochodzące. g) zaraźliwość (zakaźność) Pszenżyto GM nie jest ani zaraźliwe, ani zakaźne. h) dawka infekcyjna Nie istnieje dawka infekcyjna pszenżyta GM. i) zakres gospodarzy i możliwość ich zmiany Pszenżyto GM jest rośliną wyższą i nie posiada organizmu gospodarza. j) możliwość przeżycia poza organizmem gospodarza patrz pkt. 3.34 i k) obecność wektorów lub możliwość rozprzestrzeniania się Wektorem dla pszenżyta GM może być człowiek transportujący nasiona. l) stabilność biologiczna Stabilność biologiczna odmian pszenżyta GM jest identyczna ze stabilnością ich linii wyjściowych. Stabilność biologiczna nie ulega zmianie pod wpływem transformacji. m) formy oporne na antybiotyki Pszenżyto GM nie posiada genów markerowych kodujących oporność na antybiotyki i z tego powodu nie może mieć żadnego wpływu na powstawanie takiej oporności u konsumentów lub zwierząt skarmianych paszą zawierającą takie pszenżyto. n) możliwość leczenia W świetle powyższych informacji, punkt n) nie ma zastosowania do przypadku pszenżyta GM. Strona 15 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Warunki uwolenienia 4. Informacje dotyczące warunków zamierzonego uwolnienia GMO do środowiska a) Informacje o zamierzonym uwolnieniu do środowiska 4.1. Opis proponowanych zamierzonych uwolnień do środowiska, zawierający zamierzone i przewidywane skutki Badanie przekazywania transgenów poprzez przepylenie w warunkach uprawy roślin transgenicznych do gatunków dzikich lub nietransgenicznych odmian tego samego i pokrewnych gatunków. Określenie stref izolacji dla upraw transgenicznych pszenżyta. W doświadczeniu zostanie wykorzystana linia transgeniczna pszenżyta uzyskana w IHAR w roku 1993 (Zimny i in., 1995) i jej izogeniczna forma odmiana Bogo, charakteryzująca się tym samym terminem kwitnienia. Transgeniczna linia pszenżyta jest potomstwem odmiany Bogo transformowanej plazmidem pDB1. Plazmid pDB1 zawiera gen ß-glukuronidazy (uidA) kodowany przez lokus uidA z E. coli oraz gen bar kodujący enzym acetylotransferazę fosfinotricyny PAT). ß�glukuronidaza katalizuje hydrolizę wielu substratów ß-glukuronidu wykrywanych fluorometrycznie i histologicznie. Aktywność tego enzymu można łatwo wykrywać w roślinach. 4.2. Dane dotyczące zamierzonego uwolnienia do środowiska a) termin zamierzonego uwolnienia początek ..................................... koniec ..................................... czas uwolnienia Planuje się przeprowadzenie prób polowych w ciągu dwóch kolejnych sezonów wegetacyjnych, od roku 2008 do roku 2010 włącznie.Dane w tabeli przedstwione są w następującej kolejności:SEZON-OKRES WEGETACYJNY; 2008/2009-od września do sierpnia; 2009/2010-od września do sierpnia; b) charakter zamierzonego uwolnienia (jednorazowe, wielokrotne, czasowe) Wnioskuje się o wielokrotne tj. 3 letnie zezwolenie na uwolnienie do środowiska. 4.3. Przygotowanie miejsca i jego charakterystyka Pola doświadczalne będą przygotowane i zarządzane zgodnie z typowymi warunkami wymaganymi przy prowadzeniu badań skuteczności środków ochrony roślin. Materiał roślinny, który nie został zebrany w czasie żniw do analizy, będzie zniszczony poprzez wycięcie, rozdrobnienie i przeoranie resztek pożniwnych w glebie. 4.4. Metody używane do uwolnienia do środowiska Uprawa roślin na poletkach doświadczalnych patrz schematy eksperymentu pkt. 5.2 4.5. Planowana ilość uwolnionego do środowiska GMO lanowany jest wysiew około 1,6 kg nasion i otrzymanie 20 000 roślin. 4.6. Zmiany siedliska (typ i metoda uprawy, nawadnianie lub inne działania i ich znaczenie) W planowanych doświadczeniach przewiduje się typowe zabiegi agrotechniczne dla uprawy pszenżyta GM. Nie przewiduje się nawadniania. 4.7. Sposoby ochrony pracowników w czasie zamierzonego uwalniania GMO do środowiska Nie przewiduje się specjalnych warunków ochrony pracowników w czasie prowadzenia badań, innych niż wynikające z przepisów BHP. Strona 16 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO 4.8. Traktowanie terenu po zakończeniu uwolnienia do środowiska GMO (typ i metoda uprawy, nawadnianie lub inne działania i ich znaczenie) Obszar poletek doświadczalnych po zakończeniu badania (zbiorze pszenżyta GM) w danym roku, zostanie zaorany na głębokość ok. 35 cm, w celu zapewnienia humifikacji i mineralizacji resztek pożniwnych oraz w następnym roku oprysk innym herbicydem i wyłączenie poletka z uprawy. 4.9. Przewidywane techniki eliminacji lub inaktywacji GMO po zakończeniu eksperymentu Na końcu sezonu badań polowych (uwolnienia do środowiska), cały pozostały materiał roślinny, który nie został zebrany do analizy, będzie zniszczony poprzez wycięcie, rozdrobnienie i dalsze przeoranie resztek pożniwnych w glebie. Dotyczy to również pasa ochronnego z pszenżyta konwencjonalnego, które zostanie potraktowana tak samo jak pszenżyto transgeniczne. 4.10. Informacje i wyniki dotyczące wcześniejszego wprowadzenia do środowiska GMO, zwłaszcza w różnych skalach i różnych ekosystemach Brak takich danych Strona 17 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Środowisko 5. CHARAKTERYSTYKA ŚRODOWISKA, DO KTÓREGO MA NASTĄPIĆ ZAMIERZONE UWOLNIENIE GMO 5.1. Jednostka podziału administracyjnego, lokalizacja geograficzna Jednostka podziału administracyjnego, lokalizacja geograficzna Doświadczenia będą wykonane w roku 2008, 2009 i 2010 na polach Instytutu Hodowli i Aklimatyzacji Roślin w Radzikowie oraz Zakładzie Doświadczalnym w Młochowie, Województwo 5.2. Wielkość terenu Przewiduje się przeprowadzenie dwóch rodzajów doświadczeń. W obu przypadkach w centralnym punkcie pola doświadczalnego wysiana zostanie linia transgeniczna. Pole to zostanie obsiane nasionami odmiany BOGO w jednym przypadku i linii CMS w drugim. Poletka o powierzchni 10 x 10m w różnych odległościach (0-10m, 20-30m, 40-50m, 60-70m) od źródła pyłku. Pszenżyto transgeniczne (koło o średnicy 30m). 5.3. Fizyczne lub biologiczne pokrewieństwo uwalnianego organizmu z ludźmi lub innymi ważnymi organizmami (gatunki pokrewne dzikie i użytkowe) Pszenżyto GM nie jest spokrewnione z ludźmi, ani zwierzętami. W Polsce są gatunki z nim spokrewnione, ale nie ma kompatybilnych seksualnie z pszenżytem (pszenica i żyto). 5.4. Sąsiedztwo ważnych biotopów lub obszarów chronionych Pola doświadczalne nie leżą w najbliższej odległości od znanych biotopów i obszarów chronionych. Okoliczne: fauna i flora nie charakteryzują się żadnymi specjalnymi cechami. 5.5. Odległość od najbliższego obszaru chronionego wody pitnej i obiektów wyróżniających się cennymi walorami przyrodniczymi Patrz pkt. 5.4 5.6. Charakterystyka klimatyczna regionu Obszary prób polowych są umieszczone w tradycyjnych strefach uprawy pszenżyta. Pszenżyto GM będzie celowo testowane w dwóch rejonach, aby prześledzić jego rozwój i plonowanie w różnych warunkach klimatyczno-glebowych. 5.7. Charakterystyka geograficzna, geologiczna i gleboznawcza Teren równinny. Gleby klasy III – V. 5.8. Flora i fauna, włączając rośliny uprawne, żywy inwentarz i gatunki wędrowne Powierzchnie prób polowych są umieszczone w tradycyjnych strefach uprawy pszenżyta, gdzie występują również typowe warunki dla fauny i flory, żywego inwentarza i gatunków wędrownych. 5.9. Opis ekosystemów będących i niebędących celem wprowadzenia, na których może wystąpić efekt Strona 18 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Nie przewiduje się żadnego „efektu” badań na ekosystem, gdzie będą one prowadzone, a tym bardziej na inne ekosystemy. 5.10. Porównanie naturalnego środowiska organizmu biorcy z proponowanym terenem uwolnienia do środowiska Naturalny teren występowania biorcy obejmuje agrocenozy na większości terenów rolniczych na świecie. Proponowany teren badań polowych jest typowy dla występowania biorcy. 5.11. Informacja o planowanych zmianach zagospodarowania terenu i planach rozwoju regionu, które mogą mieć wpływ na środowiskowe oddziaływanie zamierzonego uwolnienia „Zamierzone uwolnienie” nie ma żadnego wpływu na zmiany zagospodarowania terenu i plany rozwoju regionu. 5.12. Liczebność społeczności lokalnej w zależności od obszaru zamierzonego uwolnienia Liczebność społeczności lokalnej w promieniu 5 km kilometrów od pól doświadczalnych z pszenżytem GM, będzie liczyć od kilkuset do kilkunastu tysięcy osób. 5.13. Główne kierunki działalności gospodarczej społeczności lokalnej, korzystającej z naturalnych zasobów obszaru We wszystkich planowanych lokalizacjach głównym kierunkiem aktywności ekonomicznej lokalnej społeczności jest rolnictwo lub w pobliżu miast również zajęcia pozarolnicze. Strona 19 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Oddziaływanie 6. Informacje o oddziaływaniach między GMO a środowiskiem a) Charakterystyka oddziaływań środowiska na przeżycie, rozmnażanie i rozpowszechnianie GMO 6.1. Cechy biologiczne mające wpływ na przetrwanie, rozmnażanie i rozprzestrzenianie Pszenżyto GM nie różni się cechami biologicznymi od wyjściowej odmiany Bogo 6.2. Cechy biologiczne mające wpływ na przetrwanie, rozmnażanie i rozprzestrzenianie Pszenżyto GM nie różni się cechami biologicznymi od wyjściowej odmiany Bogo 6.3. Wrażliwość na specyficzne warunki Pszenżyto GM nie różni się cechami biologicznymi od wyjściowej odmiany Bogo b) Oddziaływanie ze środowiskiem 6.4. Przewidziane środowisko GMO Środowiskiem pszenżyta GM mają być pola uprawne na terenie Polski. 6.5. Wyniki badań nad zachowaniem i charakterystyką GMO w kontrolowanych warunkach wzrostu, takich jak laboratoryjnie odtworzone ekosystemy, komory wzrostu, cieplarnie i inne Wszystkie badania przeprowadzane w środowisku zamkniętym potwierdziły bezpieczeństwo pszenżyta GM dla ludzi i zwierząt. 6.6. Zdolność przenoszenia materiału genetycznego a) z GMO do organizmów występujących w ekosystemie Patrz pkt. 3.9 b) z organizmów występujących w ekosystemie do GMO Patrz pkt. 3.9 6.7. Prawdopodobieństwo selekcji, po uwolnieniu do środowiska, prowadzące do nieoczekiwanej ekspresji niepożądanych cech w GMO Populacja pszenżyta (a więc i pszenżyta GM) nie jest w stanie przetrwać samodzielnie poza kontrolowanym środowiskiem pól uprawnych. Nie ma, zatem możliwości innej selekcji w środowisku naturalnym, jak tylko selekcja negatywna, której ofiarą będzie pszenżyto. 6.8. Stosowane środki dla zabezpieczenia i sprawdzenia stabilności genetycznej; opis mechanizmów genetycznych, które mogą zapobiegać lub minimalizować rozprzestrzenianie się materiału genetycznego; metody sprawdzania stabilności genetycznej Stabilności genetycznej innych roślin pszenżyta, mogących występować w okolicy prowadzenia badań, służyć będzie pas ochronny pszenżyta odmiany konwencjonalnej, otaczający poletka doświadczalne oraz zachowany obszar izolacyjny pomiędzy testowanymi mieszańcami transgenicznymi, a jakąkolwiek uprawą pszenżyta. Patrz pkt. 5.2 – schematy eksperymentu. 6.9. Szlaki biologicznego rozprzestrzeniania, znane lub potencjalne sposoby rozsiewania, włączając wdychanie, przyjmowanie pokarmu, przenikanie przez glebę lub skórę, inne Nie są znane, inne niż opisane powyżej, sposoby rozprzestrzeniania się pszenżyta, w jakiejkolwiek formie mogącej spowodować transfer materiału genetycznego. 6.10. Opis ekosystemów, do których GMO mógłby |być przeniesiony Strona 20 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO W formie nasion, przez świadome lub nieświadome działania ludzi, pszenżyto GM może teoretycznie trafić do dowolnego ekosystemu. Natomiast jego szkodliwość w takim przypadku będzie żadna. Ponadto, system organizacji badań zabezpieczy niekontrolowany transfer nasion i pyłku pszenżyta GM do innych ekosystemów. Patrz pkt. 6.8 c) Potencjalny wpływ na środowisko 6.11. Możliwość nadmiernego rozmnażania w środowisku Jak wyjaśniono we wcześniejszych informacjach pszenżyto nie ma możliwości nadmiernego, samoczynnego rozmnażania w środowisku, a jego modyfikacja genem pDB1 nic w tym aspekcie nie zmienia. 6.12. Konkurencyjność GMO w stosunku do niezmodyfikowanych biorców lub organizmów rodzicielskich Lepsza konkurencyjność pszenżyta GM w stosunku do niezmodyfikowanego pszenżyta (biorcy, lub linii wyjściowych) ujawnia się wyłącznie na polu uprawnym, na którym zastosuje się oprysk herbicydem zawierającym fosfinotricynę, jak Basta. Rośliny niezmodyfikowane w takiej sytuacji zginą. Inny aspekt lepszej konkurencyjności pszenżyta GM polega na możliwości doskonalszej ochrony przeciw chwastom, w porównaniu do tradycyjnych programów herbicydowych stosowanych w odmianach niezmodyfikowanych. W pozostałych sytuacjach pszenżyto GM nie ujawnia żadnych przewag konkurencyjnych, ani w stosunku do form wyjściowych (rodzicielskich) pszenżyta, ani w stosunku do innych gatunków roślin. 6.13. Identyfikacja i opis organizmów objętych celowym oddziaływaniem GMO Pszenżyto GM nie oddziałuje bezpośrednio na żadne organizmy celowe ani niecelowe. 6.14. Przewidywany mechanizm i rezultaty oddziaływania między GMO a organizmem objętym celowym oddziaływaniem GMO Stosownie do wyjaśnień w pkt. 6.13 nie istnieje mechanizm bezpośredniego oddziaływania pszenżyta GM na organizmy celowe i nie wystąpią żadne rezultaty z tego tytułu. 6.15. Identyfikacja i opis innych organizmów, na które mogą wpływać niezamierzone oddziaływania Organizmy niecelowe w przypadku pszenżyta GM nie występują, a pszenżyto GM nie wykazuje żadnych oddziaływań niezamierzonych. 6.16. Prawdopodobieństwo zmian biologicznych oddziaływań lub zmiany gospodarza Jak wyjaśniono powyżej pszenżyto GM nie wywołuje zmian biologicznych w środowisku innych niż tradycyjnie uprawiane pszenżyto. Jako roślina wyższa nie posiada ona także gospodarza. 6.17. Znane lub przewidywane wpływy na organizmy nieobjęte celowym oddziaływaniem GMO w środowisku, zmiany konkurencyjności w stosunku do ofiar, gospodarzy, symbiontów, wrogów, pasożytów i patogenów Na podstawie informacji przytoczonych wcześniej we wniosku, nie są znane i nie występują, a także nie przewiduje się wpływu pszenżyta GM na organizmy nieobjęte jego celowym oddziaływaniem w środowisku, zmiany konkurencyjności w stosunku do ofiar, gospodarzy, symbiontów, wrogów, pasożytów i patogenów. 6.18. Możliwy wpływ na środowisko, wynikający z wzajemnego oddziaływania GMO i organizmów nieobjętych celowym oddziaływaniem GMO Nie występuje oddziaływanie pszenżyta GM na organizmy niecelowe, ponieważ takowe nie istnieją w tym przypadku. Nie może, zatem istnieć wpływ takiego oddziaływania na środowisko. 6.19. Możliwe pozytywne i negatywne cechy u innych krzyżujących się gatunków, które mogą ujawniać się na skutek przeniesienia genów z GMO Patrz pkt. 5.3 6.20. Znany lub przewidywany udział w procesach biogeochemicznych Strona 21 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Jeśli tradycyjnie uprawiane konwencjonalne pszenżyto oddziałuje w jakikolwiek sposób na procesy biogeochemiczne, to przewiduje się, że udział pszenżyta GM będzie taki sam. 6.21. Inne potencjalnie możliwe interakcje i zależności ze środowiskiem biotycznym i abiotycznym Brak danych Strona 22 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Pracownicy 7. INFORMACJE DOTYCZĄCE PRZYGOTOWANIA ZAWODOWEGO PRACOWNIKÓW 7.1. Imię i nazwisko oraz informacje o kwalifikacjach fachowych osoby odpowiedzialnej za działanie polegające na zamierzonym uwolnieniu GMO Dane pracownika Tytuł Imię ..................................... Nazwisko ..................................... Telefon ..................................... Faks ..................................... Adres e-mail ..................................... Kwalifikacje zawodowe Patrz pkt. 1.2 7.2. Liczba osób zatrudnionych przy realizacji projektu (lista imienna) Dr Anna Linkiewicz Dr Sławomir Sowa Pracownicy techniczni 7.3. Wykształcenie i doświadczenie pracowników (w tym odbyte szkolenia) Pracownicy laboratorium GMO mają wykształcenie wyższe biologiczne i mają co najmniej kilkuletnie doświadczenie w pracy laboratoryjnej. Pracownicy byli lub są obecnie szkoleni przez ekspertów UE w kraju lub zagranicą Pracownicy techniczni maja wieloletnie doświadczenie w pracy z roślinami zbożowymi i transgenicznymi zbożami. Prace agrotechniczne wykonane zostaną przez wykwalifikowanych pracowników Zakładu Doświadczalnego IHAR. Strona 23 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Tryb kontroli 8. INFORMACJE DOTYCZĄCE TRYBU KONTRLOLI I MONITOROWANIA PROCESU UWALNIANIA GMO DO ŚRODOWISKA a) Informacje o technice monitorowania 8.1. Metody monitorowania GMO i efektów uwolnienia do środowiska Obszary będą regularnie wizytowane zgodnie z potrzebami wykonania zabiegów agrotechnicznych i prowadzenia obserwacji zgodnie z protokołem doświadczeń. Wizytacje będą także umożliwiały monitorowanie rozwoju roślin i nie rozprzestrzeniania się materiału roślinnego. 8.2. Specyficzność, czułość i wiarygodność technik monitorowania Patrz pkt. 3.32f 8.3. Techniki detekcji materiału genetycznego przenoszonego do innych organizmów Patrz pkt. 5.2 – schematy eksperymentu. 8.4. Czas trwania i częstotliwość monitorowania Monitorowanie pól doświadczalnych z pszenżytem GM będzie odbywać się przy każdej okazji wykonywania zabiegów agrotechnicznych, pobierania próbek i prowadzenia obserwacji wymaganych w protokole doświadczeń. Czas monitorowania wyznacza termin siewu (początek września) oraz zbiór i zaoranie resztek pożniwnych (koniec sierpnia). b) Kontrola zamierzonego uwalniania do środowiska 8.5. Metody i procedury zmierzające do uniknięcia lub zminimalizowania rozprzestrzeniania GMO poza miejscem uwolnienia do środowiska (izolacja przestrzenna lub mechaniczna) Rozprzestrzenianie pszenżyta GM będzie skutecznie ograniczone przez ścisłą kontrolę nasion przed, w trakcie i po siewie. Oraz inne zabezpieczenia patrz pkt. 5.2 – schematy eksperymentu. 8.6. Metody i procedury mające na celu ochronę miejsca uwolnienia GMO przed wtargnięciem osób nieupoważnionych Pola doświadczalne stanowią otwartą przestrzeń. Pola doświadczalne będą zlokalizowane pośród pól z innymi uprawami (głównie rzepaku). Pola będą oznakowane tablicą z numerem oznaczającym pole doświadczalne. (np. Pole nr. 1 , Pole nr. 2 itd.). Procedury ochronne sprowadzać się zatem muszą do: -nieujawniania i nieznakowania dokładnych lokalizacji doświadczeń przez administrację rządową, zachowania poufności przez pracowników jednostek upoważnionych, -dużej częstotliwości monitoringu na polach doświadczalnych, -powiadamiania policji w razie wtargnięcia osób niepowołanych w pobliże powierzchni doświadczalnych. 8.7. Metody i procedury ochrony miejsca uwolnienia przed innymi organizmami Nie zachodzi żadna negatywna interakcja pomiędzy zmodyfikowanym pszenżytem, a innymi organizmami ze świata roślin lub zwierząt. Poza wymienionymi metodami zabezpieczenia powierzchni doświadczalnych przed wandalizmem lub przypadkowym zniszczeniem, nie ma potrzeby stosowania specjalnych środków zaradczych chroniących miejsce wprowadzenia przed innymi organizmami. c) Izolacja przestrzenna 8.8. Planowana odległość od gatunków pokrewnych, zdolnych do krzyżowania się, dzikich i uprawnych Taka odległość nie występuje ze względu na brak możliwości krzyżowania się pszenżyta GM (tak jak konwencjonalnego pszenżyta) w polskich warunkach. Patrz pkt 5.3. Strona 24 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO 8.9. Metody zapobiegania niekontrolowanemu rozprzestrzenianiu się diaspor i pyłku Patrz pkt. 5.2 – schematy eksperymentu. d) Plany reagowania na zagrożenie 8.10. Metody i procedury kontroli GMO, w| przypadku nieoczekiwanego rozprzestrzenienia Wyrosłe poza planowanym miejscem uwolnienia do środowiska rośliny pszenżyta GM, można w każdej chwili zniszczyć mechanicznie lub chemicznie. Specjalne środki ostrożności przy niszczeniu takiego materiału nie są potrzebne. Podstawa procedura sprowadza się do zapobiegania takim zdarzeniom i ścisłej kontroli postępowania z materiałem siewnym i zebranym plonem. Patrz też pkt. 5.2 – schematy eksperymentu. 8.11. Plany ochrony zdrowia ludzi i środowiska, w przypadku wystąpienia niepożądanych efektów Nigdzie nie stwierdzono, ani nie przewiduje się wystąpienia niepożądanych efektów dla zdrowia ludzi i środowiska naturalnego pszenżyta GM, które wymagałyby tworzenia planów ich ochrony. 8.12. Metody postępowania z GMO, stwarzającym zagrożenie (unieczynnienie, usunięcie ze środowiska) Regularne monitorowanie upraw polowych umożliwi natychmiastową identyfikację wszelkich, niepożądanych przypadków lub niepożądanego rozwoju pszenżyta GM. W nagłym przypadku, uprawa polowa może zostać wstrzymana poprzez zastosowanie innego nieselektywnego herbicydu lub herbicydów, bądź też przez zastosowanie mechanicznych środków zniszczenia i przeorywanie resztek pożniwnych w glebie. 8.13. Metody eliminacji: roślin, zwierząt, gleby, inne, narażonych na kontakt z GMO po lub w trakcie rozprzestrzeniania Ewentualny kontakt roślin, zwierząt i gleby z pszenżytem GM nie rodzi żadnych negatywnych skutków, zatem nie będą potrzebne metody eliminacji. 8.14. Metody izolacji obszarów zagrożonych rozprzestrzenieniem się GMO Pszenżyto GM nie będzie się rozprzestrzeniać z powodu środków zaradczych opisanych powyżej, a nawet gdyby okazały się one niewystarczające (np. kradzież), rozprzestrzenienie się pszenżyta GM nie spowoduje zagrożenia dla innych obszarów. Stąd nie przewiduje się potrzeby rozwoju metod izolacji obszarów „zagrożonych”. Strona 25 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Odpady 9. INFORMACJE DOTYCZĄCE POSTĘPOWANIA Z ODPADAMI 9.1. Rodzaj wytwarzanych odpadów Odpadami powstającymi w wyniku uprawy pszenżyta GM na polu są resztki pożniwne oraz zebrany, przeważony, a następnie rozdrobniony i rozrzucony na polu doświadczalnym plon ziarna 9.2. Oczekiwana ilość odpadów Około 800 kg 9.3. Możliwe zagrożenia Odpady powstające na poletkach doświadczalnych nie stwarzają żadnego zagrożenia dla środowiska czy zdrowia ludzi i zwierząt. 9.4. Opis planowanego postępowania z odpadami, uwzględniający metody bezpiecznej dla zdrowia ludzi i środowiska dezaktywacji odpadów Jak wspomniano wcześniej, odpady powstające na poletkach doświadczalnych nie stwarzają żadnego zagrożenia dla środowiska, czy zdrowia ludzi i zwierząt. Postępowanie z nimi nie musi odbiegać od postępowania z każdym innym konwencjonalnym pszenżytem, jednak dla dołożenia wszelkiej staranności, przewiduje się zaoranie wszelkich resztek pożniwnych na poletku doświadczalnym na głębokość ok. 35 cm (w celu zapewnienia ich humifikacji i mineralizacji) oraz w następnym roku oprysk innym herbicydem i wyłączenie poletka z uprawy. Strona 26 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Poprzednie uwolnienia 10. INFORMACJE O WYNIKACH POPRZEDNICH ZAMIERZONYCH UWOLNIEŃ GMO DO ŚRODOWISKA Dane o poprzednich uwolnieniach Informacje o wynikach poprzednich zamierzonych uwolnień GMO do środowiska ................................................................................................................................................................................ a) Data wydanej zgody ..................................... Numer wydanej zgody ..................................... Początek ..................................... Koniec ..................................... Czas uwolnienia ................................................................................................................................................................................ b) Miejsce wprowadzenia ..................................... c) Cel wprowadzenia ................................................................................................................................................................................ d) Obserwacje po wprowadzeniu ................................................................................................................................................................................ e) Wnioski z poprzedniego wprowadzenia ................................................................................................................................................................................ f) Rezultaty wprowadzenia związane z ryzykiem dla zdrowia ludzi i środowiska ................................................................................................................................................................................ g) Wnioski dotyczące kumulatywnego wpływu na zdrowie ludzi i środowisko ................................................................................................................................................................................ Strona 27 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Komentarze 11. KOMENTARZE I UWAGI DODATKOWE, INNE INFORMACJE, UZNANE PRZEZ UZYTKOWNIKA ZA WAŻNE DLA ZACHOWANIA BEZPIECZEŃSTWA Komentarze i uwagi dodatkowe ................................................................................................................................................................................ Strona 28 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Załączniki 12. ZAŁĄCZNIKI 1) Ocena zagrożenia przygotowana dla uwalnianych organizmów genetycznie zmodyfikowanych 02-02_2007_ocena.doc 2) Dokumentacja związana z opracowaniem oceny zagrożenia wraz ze wskazaniem metod przeprowadzenia tej oceny brak 3) Techniczna dokumentacja zamierzonego uwolnienia 02-02_2007_techniczna.doc 4) Program działania w przypadku zagrożenia dla zdrowia ludzi lub dla środowiska związanego z zamierzonym uwolnieniem 02-02_2007_awaria.doc 5) Mapa wektora 02-02_2007_wektor.doc 6) Plany pól doświadczalnych 02-02_2007_MapMlochow.doc 7) Streszczenie wniosku 02-02_2007_SNIF_ang.doc DOKUMENTY DODAWANE PRZEZ PRACOWNIKA MINISTERSTWA ŚRODOWISKA Nazwa załącznika Wniosek Załącznik 02-02_2007_wniosek.doc Nazwa załącznika Sprawozdanie końcowe Załącznik 02-02_2007_sprawozdanie_koncowe.pdf Nazwa załącznika Sprawozdanie 2010 rok Załącznik 02-02_2007_sprawozdanie_2010.doc Strona 29 z 30 Zamierzone uwolnienie GMO Strona 30 z 30