(Link) Nr kat. IR650
Transkrypt
(Link) Nr kat. IR650
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human B-Cell-Specific Activator Protein Klon DAK-Pax5 Ready-to-Use (Link) Nr kat. IR650 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human B-Cell-Specific Activator Protein, klon DAK-Pax5, Ready-to-Use (Link) jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciała przeciwko białku aktywującemu, swoistemu dla komórek B (BSAP), mogą być uŜyteczne podczas identyfikacji stadiów pro-, pre- oraz dojrzałych komórek B a takŜe w klasyfikacji białaczek (1–4). Razem z panelem przeciwciał, są one szczególnie przydatne w diagnostyce róŜnicowej pomiędzy klasyczną ziarnicą złośliwą a chłoniakiem anaplastycznym z duŜych komórek T i komórek typu null (1, 3). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne, z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych, powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa, z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Synonimy antygenu BSAP, Pax5, NF-HB, Sα-BP, NFSµ-B1, LR1 i EBB-1 (2, 4). Podsumowanie i wyjaśnienie Białko BSAP, znane równieŜ jako paired box protein 5 (Pax5), jest czynnikiem transkrypcyjnym, którego ekspresja zachodzi w komórkach B. BSAP jest członkiem rodziny genów PAX, która koduje czynniki transkrypcyjne biorące udział w rozwoju limfocytów B. BSAP znajduje ekspresję w formach pro-, pre- oraz dojrzałych komórkach B, lecz nie w komórkach plazmatycznych (3, 4). Celowane rozerwanie genu BSAP u myszy, blokuje rozwój limfocytów B, na etapie komórek pro-B, co sugeruje znaczenie BSAP w kontrolowaniu rozwoju limfocytów B (2). W trakcie rozwoju zarodka, ekspresja BSAP czasowo zachodzi w rozwijającym się ośrodkowym układzie nerwowym. W późniejszym czasie, ekspresja BSAP jest wykrywana w wątrobie płodu, gdzie jej pojawienie się koreluje z rozpoczęciem wytwarzania limfocytów B. Tak więc, BSAP moŜe odgrywać nie tylko waŜną rolę w rozwoju limfocytów B, lecz równieŜ układu nerwowego (1, 3, 5). MoŜe być trudne rozróŜnienie metodami immunohistochemicznymi między klasyczną postacią ziarnicy złośliwej (CHL) a chłoniakiem anaplastycznym z duŜych komórek T i komórek typu null (1). W przypadku CHL, komórki Hodgkina i Reed-Sternberga (komórki HRS) wykazują ekspresję BSAP, podczas gdy komórki HRS najczęściej nie prezentują antygenów limfocytów B, takich jak CD19 lub CD20 (6). BSAP stanowi przydatny marker do róŜnicowania chłoniaków nieziarniczych z limfocytów B i ziarnicy złośliwej oraz nowotworów neuroendokrynnych (1–4, 6–8), pomimo jego ekspresji w podzbiorach złośliwych raków nabłonkowych (7). Patrz dokument “Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych” firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody. Odczynnik dostarczony Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko stabilizujące i azydek sodu w stęŜeniu 0,015 mol/L. Klon: DAK-Pax5. Izotyp: IgG1, kappa. Immunogen Syntetyczny, 17-meryczny peptyd z końca C domeny hamującej białka. Swoistość W testach Western blot lizatów komórkowych mysich komórek śledziony, przeciwciało znakuje białko 55 kDa odpowiadające BSAP. Środki ostroŜności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować właściwe procedury postępowania. 4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne. 5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami. (119414-001) Dako Denmark A/S IR650/PL/SSM/2009.01.20 str. 1/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta, naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm. Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje się po wstępnej obróbce tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat. K8005). Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat. K8005). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone i zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania. Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020). Procedura barwienia oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (nr kat. K8002) lub EnVision FLEX, High pH, (Link) (nr kat. K8000), łącznie z EnVision FLEX+ Mouse (LINKER), (Link) (nr kat. K8021), zastępując odczynnik High pH Target Retrieval Solution z tego zestawu odczynnikiem EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (nr kat. K8005). W systemie Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub 2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania, i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie wybarwienia o innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki, jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750). Interpretacja wybarwienia Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują odczyn jądrowy. Charakterystyka działania Tkanki normalne: W migdałku, komórki B ze strefy płaszcza i ośrodków rozmnaŜania wykazują umiarkowany lub silny odczyn Komórki B ośrodków rozmnaŜania wykazują odczyn cytoplazmatyczny słaby do umiarkowanego. Prawidłowe tkanki limfoidalne (węzeł chłonny i śledziona) wykazują silny odczyn jądrowy w komórkach B grudek chłonnych oraz komórkach B strefy płaszcza, lecz limfocyty strefy T, komórki plazmatyczne, komórki śródbłonka makrofagi wykazują odczyn ujemny. Odczyn słaby moŜna zaobserwować w blaszce właściwej okręŜnicy. Odczyn tła jest obserwowany w torebce Bowmana nerek. Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakowało 97/158 klasycznych postaci ziarnicy złośliwej , 127/127 chłoniaków rozlanych z duŜych limfocytów B, 41/41 chłoniaków typu grudkowego, 66/66 chłoniaków z komórek płaszcza, 11/11 chłoniaków strefy brzeŜnej, 5/5 atypowych chłoniaków Burkitta, 30/30 chłoniaków Burkitta, 76/76 przewlekłych białaczek limfocytowych/chłoniaków limfocytarnych drobnokomórkowych, 22/22 chłoniaków śródpiersia z duŜych komórek B, 6/6 białaczek limfoblastycznych z prekursorowych limfocytów B/chłoniaków, 6/6 chłoniaków z duŜych komórek B z duŜą zawartością komórek T, 6/6 białaczek włochatokomórkowych, 4/16 raków neuroendokrynnych, 12/12 węzłowych chłoniaków strefy brzeŜnej, 6/6 ziarnicy złośliwej struktur guzowatych z przewagą limfocytów, 23/30 poprzeszczepiennych chorób limfoproliferacyjnych i 1/18 przypadku anaplastycznego chłoniaka wielkokomórkowego, 1/26 raków nerek, 1/16 raków pęcherza, 7/21 raków stercza, 1/14 raków Ŝołądka, 4/81 raków okręŜnicy, 3/19 raków szyjki macicy, 3/18 raków macicy i 4/13 raków jajnika. Nie stwierdzono odczynu w 6 ostrych białaczkach szpikowych, 45 angioimmunoblastycznych chłoniakach z komórek T, 27 aplastycznych chłoniakach wielkokomórkowych ALK+, 6 przewlekłych białaczkach szpikowych, 1 chłoniaku pozawęzłowym z komórek NK/T typu nosowego, 1 chłoniaku wątrobowo-śledzionowym z komórek T, 5 ziarniniakach grzybiastych, 157 niesklasyfikowanych chłoniakach z obwodowych komórek T (PTCL/U), 6 szpiczakach z komórek plazmatycznych, 1 poprzeszczepiennym PTCL/U, 6 białaczkach/chłoniakach z prekursorów limfocytów T, 1 podskórnym chłoniaku z komórek T przypominającym zapalenie tkanki podskórnej, 22 rakach trzustki, 27 rakach wątroby, 46 mięsakach, 13 czerniakach, 10 grasiczakach, 10 rdzeniakach, 10 gwiaździakach I/II, 10 glioblastomach, 100 rakach płuc i 21 rakach jąder. (119414-001) Dako Denmark A/S IR650/PL/SSM/2009.01.20 str. 2/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Piśmiennictwo 1. Browne P, Petrosyan K, Hernandez A, Chan JA. The B-cell transcription factors BSAP, Oct-2, and BOB.1 and the pan-B-cell markers CD20, CD22 and CD79a are useful in the differential diagnosis of classic Hodgkin lymphoma. Am J Clin Pathol 2003;120:767-77. 2. Krenacs L, Himmelmann AW, Quintanilla-Martinez L, Fest T, Riva A, Wellmann A, et al. Transcription factor B-cell-specific activator protein (BSAP) is differentially expressed in B cells and in subsets of B-cell lymphomas. Blood 1998;92:1308-16. 3. Torlakovic E, Torlakovic G, Nguyen PL, Brunning RD, Delabie J. The value of anti-pax-5 immunostaining in routinely fixed and paraffin-embedded sections: a novel pan pre-B and B-cell marker. Am J Surg Pathol 2002;26:1343-50. 4. Zhang X, Lin Z, Kim I. Pax5 expression in non-Hodgkin’s lymphomas and acute leukemias. J Korean Med Sci 2003;18:804-8. 5. Nutt SL, Thévenin C, Busslinger M. Essential functions of Pax-5 (BSAP) in pro-B cell development [review]. Immunobiology 1997;198:227-35. 6. Foss HD, Reusch R, Demel G, Lenz G, Anagnostopoulos I, Hummel M, Stein H. Frequent expression of the B-cell-specific activator protein in Reed-Sternberg cells of classical Hodgkin’s disease provides further evidence for its B-cell origin. Blood 1999;94:3108-13. 7. Mhawech-Fauceglia P, Saxena R, Zhnag S, Terracciano L, Sauter G, Chadhuri A, Herrmann FR, Penetrante R. Pax-5 immunoexpression in various types of benign and malignant tumours: a high-throughput tissue microarray analysis. J Clin Pathol 2007:60:709-14. 8. Feldman AL, Dogan A. Diagnostic uses of Pax5 immunohistochemistry [review]. Adv Anat Pathol 2007:14:323-34. Objaśnienie symboli N ume r ka ta log owy Tempe ratura prze chow ywan ia Zu Ŝyć p rzed Wyró b medyczny do d ia gno styki in vi tro Zawa rto ść w ysta rcza na <n> testów Produ cent S prawd zić w instrukcj i sto sowa nia Nu mer serii (119414-001) Dako Denmark A/S IR650/PL/SSM/2009.01.20 str. 3/3 | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17