FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human MutL Protein

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
MutL Protein Homolog 1
Clone ES05
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR079
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciała FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human MutL Protein Homolog 1, Clone ES05, Ready-to-Use,
(Link) są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w urządzeniach Autostainer Link. Przeciwciało
pozwala wykryć homolog 1 białka MutL (MLH1) zarówno w tkance prawidłowej, jak i w nowotworowej. Wyniki
ułatwiają klasyfikację nowotworów przewodu pokarmowego. Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub
jego braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i
powinna być przeprowadzana przez certyfikowanego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i
innych badań diagnostycznych. Przeciwciała te przeznaczone są do stosowania po pierwotnym rozpoznaniu
guza w konwencjonalnym badaniu histopatologicznym z zastosowaniem barwników do nieimmunologicznych
barwień histochemicznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Przeciwciała przeciwko MLH1 słuŜą do immunohistochemicznego (IHC) wykrywania ekspresji białka MLH1 w
guzach przewodu pokarmowego i innych powiązanych rakach poza jelitem grubym. Brak ekspresji białka MLH1,
ustalony w odczynie immunohistochemicznym, został wykazany w nowotworach jelita grubego i nowotworach
endometrium powiązanych z dziedzicznym rakiem jelita grubego niezwiązanym z polipowatością (HNPCC) (1, 2).
Patrz dokument General Instructions for Immunohistochemical Staining (Ogólne instrukcje wykonywania
odczynów immunohistochemicznych) firmy Dako lub instrukcje do systemu detekcji IHC, aby poznać: 1) Zasady
procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Procedurę barwienia, 6) Kontrolę jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretację wyników
barwienia, 9) Ograniczenia ogólne.
Dostarczony
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne dostarczane w postaci ciekłej jako nadsącz hodowli
komórkowej (zawierający płodową surowicę bydlęcą), dializowane wobec roztworu Tris/HCl o stęŜeniu
0,05 mol/L, pH 7,2 i zawierające NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: ES05. Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Rekombinowane białko odpowiadające 210 aminokwasom ludzkiej cząsteczki MLH1.
Swoistość
W badaniachWestern-blot lizatów komórkowych ludzkiej linii Caco-2 przeciwciało barwi główny prąŜek o masie
cząsteczkowej 88 kDa, odpowiadający oczekiwanej masie cząsteczkowej MLH1 (3).
Środki ostroŜności
1.
Do stosowania przez wyszkolony personel.
2.
Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny w czystej postaci związek chemiczny – azydek sodu (NaN3).
Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe
reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie
wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się
azydku metalu w kanalizacji.
3.
Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
Przechowywanie
(119310-002)
4.
W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5.
Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie u Ŝywać po upływie daty waŜności podanej na fiolce. Jeśli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik powinien zweryfikować te warunki. Nie
ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek
pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W przypadku uzyskania
nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, i gdy
podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
307804PL_002 1/3
Skrócona instrukcja
uŜytkownika
Krok
Komentarze
Utrwalanie
Obróbka
wstępna
Formalina
Odczynnik EnVision™ FLEX+, High pH
(nr kat. K8004)
Rozcieńczenie
Bufor
rozcieńczenia
Kontrola ujemna
Wizualizacja
Gotowe do uŜycia
Wstępnie rozcieńczony
Barwnik
kontrastowy
Kontrola
tkankowa
Szkiełka
EnVision™ FLEX Hematoxylin (nr kat. K8008)
Inkubacja 20 min
Inkubacja 20 min, inkubacja w
odczynniku Mouse (LINKER) 15 min,
inkubacja w odczynniku DAB+
2 x 5 min
Inkubacja 5 min
Wyrostek robaczkowy, jelito grube
Odczyn jądrowy
FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020)
Zalecane w celu uzyskania lepszego
przylegania skrawków tkankowych do
szkiełek
Zatapianie
preparatu
Wymagane niewodne, trwałe zatapianie
preparatów
Po przeprowadzeniu barwienia skrawki
muszą zostać odwodnione,
oczyszczone i zatopione w środku do
trwałego zatapiania
Urządzenia
Autostainer Link 48
NaleŜy korzystać z fiolek
przeznaczonych dla danego
urządzenia (nr kat. SK201-SK203)
FLEX Negative Control, Mouse (nr kat. IR750)
EnVision™ FLEX+ Mouse, High pH
(nr kat. K8002).
20 min HIER, 3w1 z uŜyciem
urządzenia PT Link i stacji płuczącej
PT Link Rinse Station
Inkubacja 20 min
*UŜytkownik jest zobowiązany zapoznać się z ulotką dostarczoną do opakowania, która zawiera dokładne instrukcje
dotyczące procedury barwienia i postępowania z produktem.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i
zatopionych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości około 4 µm.
Obróbka wstępna: Wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się, dokonując wstępnej
obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Procesy odparafinowania, nawodnienia i odmaskowania antygenu przeprowadza się w
urządzeniu Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera podręcznik uŜytkownika
urządzenia PT Link. W urządzeniach PT Link naleŜy stosować następujące parametry: Temperatura ogrzewania
wstępnego: 65°C; temperatura i czas odmaskowania antyge nu: 97°C przez 20 (±1) minut, schłodzi ć do 65°C.
Usunąć statywy na preparaty ze zbiornika PT i natychmiast zanurzyć preparaty w naczyniu/zbiorniku (np. PT Link
Rinse Station, nr kat. PT109) z rozcieńczonym buforem EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (nr kat. K8007) o
temperaturze pokojowej. Pozostawić preparaty zanurzone w buforze Wash Buffer na 1–5 minut.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides, nr kat. K8020. Po zakończeniu barwienia preparatu naleŜy zatopić w
wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
Procedura barwienia
Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (nr kat. K8002). Oprogramowanie
urządzenia Autostainer Link zawiera wstępnie zaprogramowane etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe
informacje dotyczące umieszczania preparatów i odczynników przedstawiono w podręczniku uŜytkownika
urządzenia Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym systemie Autostainer, naleŜy
skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy
przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie
wybarwienia o innym natęŜeniu, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w
celu uzyskania informacji dotyczących zmiany zaprogramowanego protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w
części „Charakterystyka działania”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy uŜyciu odczynnika EnVision FLEX Hematoxylin,
(Link) (nr kat. K8008). Zaleca się stosowanie niewodnego środka do trwałego zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować wyrostek
robaczkowy, jelito grube i migdałki, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny
wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana
kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Odczyn komórkowy ma charakter jądrowy.
(119310-002)
307804PL_002 2/3
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe: Przeciwciała FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human MutL Protein Homolog 1, Clone ES05
znakują jądra róŜnych typów komórek w tkance prawidłowej. Jądra są znakowane przeciwciałem w komórkach
wyrostka robaczkowego, sutka, szyjki macicy, jelita grubego, przełyku, nerek, płuc, trzustki, gruczołu krokowego,
gruczołów ślinowych, jelita cienkiego, tarczycy, migdałków i macicy. Immunoreaktywność zaobserwowano w
komórkach zrębu i nabłonka róŜnych rodzajów tkanek. Przeciwciało znakuje teŜ jądra limfocytów migdałków i
przewodu pokarmowego oraz komórki endokrynne przysadki i przytarczyc. Odczyn dodatni zaobserwowano teŜ
w elementach innych tkanek, np. w adipocytach, komórkach blastycznych szpiku kostnego, międzybłonku,
splotach nerwowych, mięśniach gładkich wyrostka robaczkowego i mięśniówce macicy (4).
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
Lanza G, Gafá R, Maestri I, Santini A, Matteuzzi M, Cavazzini L. Immunohistochemical pattern of
MLH1/MSH2 expression is related to clinical and pathological features in colorectal adenocarcinomas with
microsatellite instability. Mod Pathol 2002; 15:741-9.
Peiró G, Diebold J, Mayr D, Baretton GB, Kimmig R, Schmidt M, et. al. Prognostic relevance of hMLH1,
hMSH2, and BAX protein expression in endometrial carcinoma. Mod Pathol 2001; 14:777-83.
Räschle M, Marra G, Nyström-Lahti M, Primo Schär P, Jiricny J. Identification of hMutLbeta a Heterodimer
of hMLH1 and hPMS1. J Biol Chem 1999; 274:32368-75.
M3640 IHC110608-161
Wydanie 09/15
(119310-002)
307804PL_002 3/3