Monoclonal Mouse Anti-Human B-Cell-Specific Activator

Monoclonal Mouse
Anti-Human
B-Cell-Specific Activator Protein
Clone DAK-Pax5
Kod M7307
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Produkt Monoclonal Mouse Anti-Human B-Cell-Specific Activator Protein, Clone DAK-Pax5 jest przeznaczony do
stosowania w badaniach immunohistochemicznych. Przeciwciała przeciwko aktywatorowi białek specyficznych dla
limfocytów B (BSAP) mogą być uŜyteczne w identyfikacji form pro-B, pre-B oraz dojrzałych limfocytów B w
klasyfikacji białaczek (1–4). Razem z panelem przeciwciał, jest on szczególnie uŜyteczny w diagnostyce róŜnicowej
pomiędzy klasyczną postacią ziarnicy złośliwej, a białaczką z duŜych anaplastycznych komórek limfocytów T oraz
typu „null-cell” (1, 3). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez badania
morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez
doświadczonego patologa, z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
BSAP, Pax5, NF-HB, Sα-BP, NFSµ-B1, LR1 and EBB-1 (2, 4).
Podsumowanie
i wyjaśnienie
BSAP, zwany równieŜ jako aktywator białek specyficznych dla limfocytów B 5(Pax5), jest czynnikiem transkrypcyjnym
występującym w limfocytach typu B. BSAP naleŜy do rodziny genów PAX, która koduje czynniki transkrypcyjne,
biorące udział w rozwoju limfocytów B. BSAP jest wytwarzane w komórkach pro-B, pre-B oraz dojrzałych limfocytach
B, lecz nie w komórkach plazmatycznych (3, 4). Celowane trawienie genu BSAP u myszy, powoduje blokowanie
rozwoju limfocytów B na etapie pro-B, co sugeruje rolę BSAP w kontroli rozwoju limfocytów B (2). W trakcie rozwoju
zarodka ekspresja BSAP jest czasowo wyraŜana w rozwoju ośrodkowego układu nerwowego. Później, ekspresja
BSAP jest wykrywana w wątrobie płodu, gdzie jej występowanie koreluje z początkiem limfopoezy B. Tym samym,
BSAP moŜe nie tylko odgrywać waŜną rolę w rozwoju limfocytów B, lecz równieŜ w rozwoju tkanki nerwowej (1, 3, 5).
W badaniach immunohistochemicznych, moŜe być trudno odróŜnić klasyczną ziarnicę (CHL) od białaczki z
anaplastycznych komórek duŜych z limfocytów T oraz komórek „null-cell” (1). W komórkach CHL, Hodgkin’a i ReedSternberg’a (komórki HRS) dochodzi do ekspresji BSAP, gdy tymczasem komórki HRS w większości nie
uwidaczniają antygenów limfocytów B, takich jak CD19 lub CD20 (6). BSAP jest markerem przydatnym w
diagnostyce chłoniaka nieziarniczego z limfocytów B i ziarnicy złośliwej oraz guzów neuroendokrynnych (1-4, 6-8),
pomimo jego ekspresji w części złośliwych nowotworów nabłonkowych (7).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci nadsączu hodowli komórkowej, dializowanego w buforze
Tris/HCl o stęŜeniu 0,05 mol/L i pH 7,2, zawierającym azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: DAK-Pax5. Izotyp: IgG1, kappa.
StęŜenie mysich IgG [mg/L]: Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
StęŜenie białek w róŜnych partiach moŜe się róŜnić bez wpływu na rozcieńczenie optymalne. W celu zapewnienia
jednolitości odczynów immunohistochemicznych wykonywanych przy uŜyciu róŜnych partii produktu, miano kaŜdej
partii jest porównywane i dostosowywane do partii referencyjnej.
Immunogen
Syntetyczny peptyd 17-merowy z końca C domenty hamującej proteiny.
Swoistość
W testach Western blot lizatów komórek śledziony myszy, przeciwciało znakuje białko 55 kDa odpowiadające BSAP.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji, wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą, naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
(119105-001)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta, naleŜy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem
z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
M7307/PL/KDH/2008.10.07 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Skrawki parafinowe:
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Wymagane jest poddanie odparafinowanych skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER).
Optymalne wyniki uzyskuje się po wstępnej obróbce tkanek w systemie HIER przy uŜyciu odczynników HIER using
Dako EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (nr kat. K8005/K8015) lub Dako Target Retrieval Solution
(nr kat. S1700/S1699).
Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkankowych, które zostały
odparafinowane, zalecany jest odczynnik Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera
Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link (PT Link User Guide). Dla aparatów PT Link naleŜy stosować następujące
parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania: 65 °C; temperatura i czas odmasko wania antygenu: 97 °C w czasie
20 (±1) minut; schłodzić do 65 °C. Wyj ąć stojak na szkiełka ze zbiornika PT i niezwłocznie zanurzyć je w słoju lub
zbiorniku (np.: PT Link Rinse Station, nr kat. PT109), zawierającym rozcieńczony bufor EnVision™ FLEX Wash Buffer
(10X) (nr kat. K8002//K8012) o temperaturze pokojowej. Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1 – 5 minut.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury barwienia immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Skrawki mroŜone i rozmazy komórkowe:
Opisywane przeciwciała są zalecane do stosowania na skrawkach utrwalonych w acetonie, skrawkach mroŜonych
lub utrwalonych rozmazach cytologicznych.
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Rozcieńczanie: Monoclonal Mouse Anti-Human B-Cell-Specific Activator Protein, nr kat. M7307, mogą być uŜywane
w rozcieńczeniu 1:15 – 1:30 na poddanych wstępnej obróbce skrawkach utrwalonych w formalinie i zatopionych w
parafinie, przy 20-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. Zaleca się rozcieńczenie przeciwciał odczynnikiem
EnVision™ FLEX Antibody Diluent (nr kat. K8006/K8016) lub Dako Antibody Diluent (nr kat. S0809) lub Dako Real™
Antibody Diluent (nr kat. S2022). Są to jednak wyłącznie wytyczne. Optymalne warunki mogą się zmieniać w
zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania, i powinny być określone indywidualnie w kaŜdym
laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Negative Control, Mouse IgG1 (nr kat. X0931)
rozcieńczony do tego samego stęŜenia IgG1, co przeciwciało pierwotne. O ile nie potwierdzono stabilności
rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej w rzeczywistej procedurze wykonania odczynu, zaleca się
rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed uŜyciem. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym
od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji, taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”.
Wizualizacja: EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (nr kat. K8002/K8012), zastępujący odczynnik High pH Target
Retrieval Solution z tego zestawu odczynnikiem EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (10x), (nr kat.
K8005/K8015), przy 20-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. Postępować zgodnie z procedurą
dostarczoną z wybranymi systemami do wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych w systemach
zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer, Autostainer Plus oraz Autostainer Link.
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn jądrowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki normalne: Prawidłowe tkanki limfoidalne (węzeł chłonny, śledziona i migdałki) wykazują silny odczyn jądrowy
BSAP limfocytów B grudek chłonnych i w strefie płaszcza, lecz limfocyty w strefach T, komórki plazmatyczne,
komórki nabłonka i makrofagi wykazują odczyn ujemny. Słabe wybarwianie się moŜna zaobserwować w blaszce
właściwej okręŜnicy. Barwienie tła występuje równieŜ w torebce Bowmana nerek.
Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakowało 97/158 przypadków klasycznej postaci ziarnicy złośliwej, 127/127
przypadków rozlanych chłoniaków z duŜych komórek B, 41/41 przypadków chłoniaków typu grudkowego, 66/66
przypadków chłoniaków z komórek płaszcza, 11/11 przypadków chłoniaków strefy brzeŜnej, 5/5 przypadków
atypowych chłoniaków Burkitta, 30/30 przypadków chłoniaków Burkitta, 76/76 przypadków przewlekłych białaczek
limfocytowych/chłoniaków limfocytarnych drobnokomórkowych, 22/22 przypadków chłoniaków śródpiersia z duŜych
limfocytów B, 6/6 przypadków białaczek limfoblastycznych z prekursorów limfocytów B/chłoniaków, 6/6 przypadków
chłoniaków z limfocytów B bogatych w limfocyty T, 6/6 przypadków białaczek włochatokomórkowych,
4/16 przypadków raków neuroendokrynnych, 12/12 przypadków białaczek węzłowych ze strefy brzeŜnej,
6/6 przypadków chłoniaków ziarniczych z przewagą limfocytów węzłowych, 23/30 przypadków poprzeszczepiennych
chorób limfoproliferacyjnych i 1/18 przypadków anaplastycznych chłoniaków wielkokomórkowych, 1/26 przypadków
raków nerek, 1/16 przypadków raków pęcherza, 7/21 przypadków raków stercza, 1/14 przypadków raków Ŝołądka,
4/81 przypadków raka okręŜnicy, 3/19 przypadków raka szyjki macicy, 3/18 przypadków raka macicy i
4/13 przypadków raka jajnika. Nie stwierdzono odczynu w 6 ostrych białaczkach szpikowych, 45 przypadkach
angioimmunoblastycznych chłoniaków z komórek T, 27 przypadkach aplastycznych białaczek z duŜych komórek
ALK+, 6 przewlekłych białaczek szpikowych, 1 przypadku pozawęzłowego chłoniaka z nosowych komórek NK/T,
1 przypadku wątrobowo-śledzionowej białaczki z limfocytów T, 5 przypadkach ziarniniaka grzybiastego,
157 przypadkach niesklasyfikowanych chłoniaków z obwodowych komórek T (PTCL/U), 6 przypadkach szpiczaka z
komórek plazmatycznych, 1 przypadku poprzeszczepiennego PTCL/U, 6 przypadkach chłoniaków/białaczek
limfoblastycznych z prekursorów limfocytów T, 1 przypadku podskórnego chłoniaka o przebiegu zapalenia tkanki
podskórnej z komórek T, 22 przypadkach raków trzustki, 27 przypadkach raków wątroby, 46 przypadkach mięsaków,
13 przypadkach czerniaków, 10 przypadkach grasiczaków, 10 przypadkach rdzeniaków, 10 przypadkach
gwiaździaków I/II, 10 przypadkach glyoblastoma, 100 przypadkach raków płuc i 21 przypadkach raków jąder.
(119105-001)
Dako Denmark A/S
M7307/PL/KDH/2008.10.07 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Browne P, Petrosyan K, Hernandez A, Chan JA. The B-cell transcription factors BSAP, Oct-2, and BOB.1 and
the pan-B-cell markers CD20, CD22 and CD79a are useful in the differential diagnosis of classic Hodgkin
lymphoma. Am J Clin Pathol 2003;120:767-77.
2.
Krenacs L, Himmelmann AW, Quintanilla-Martinez L, Fest T, Riva A, Wellmann A, et al. Transcription factor
B-cell-specific activator protein (BSAP) is differentially expressed in B cells and in subsets of B-cell lymphomas.
Blood 1998;92:1308-16.
3.
Torlakovic E, Torlakovic G, Nguyen PL, Brunning RD, Delabie J. The value of anti-pax-5 immunostaining in
routinely fixed and paraffin-embedded sections: a novel pan pre-B and B-cell marker. Am J Surg Pathol
2002;26:1343-50.
4.
Zhang X, Lin Z, Kim I. Pax5 expression in non-Hodgkin’s lymphomas and acute leukemias. J Korean Med Sci
2003;18:804-8.
5.
Nutt SL, Thévenin C, Busslinger M. Essential functions of Pax-5 (BSAP) in pro-B cell development [review].
Immunobiology 1997;198:227-35.
6.
Foss HD, Reusch R, Demel G, Lenz G, Anagnostopoulos I, Hummel M, Stein H. Frequent expression of the
B-cell-specific activator protein in Reed-Sternberg cells of classical Hodgkin’s disease provides further evidence
for its B-cell origin. Blood 1999;94:3108-13.
7.
Mhawech-Fauceglia P, Saxena R, Zhnag S, Terracciano L, Sauter G, Chadhuri A, Herrmann FR, Penetrante R.
Pax-5 immunoexpression in various types of benign and malignant tumours: a high-throughput tissue
microarray analysis. J Clin Pathol 2007:60:709-14.
8.
Feldman AL, Dogan A. Diagnostic uses of Pax5 immunohistochemistry [review]. Adv Anat Pathol 2007:14:323-34.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
ZuŜyć przed
(119105-001)
Dako Denmark A/S
Producent
M7307/PL/KDH/2008.10.07 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17