Monoclonal Mouse Anti-Human CD138 Klon MI15 Nr kat. M

Monoclonal Mouse
Anti-Human CD138
Klon MI15
Nr kat. M 7228
Wydanie 01.03.04
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Monoclonal Mouse Anti-Human CD138, klon MI15, jest przeznaczone do zastosowań w metodach
immunocytochemicznych wraz z zestawem innych przeciwciał. CD138 jest obecne w całkowicie zróżnicowanych,
zmienionych nowotworowo komórkach plazmatycznych związanych ze szpiczakiem mnogim (1, 2, 3, 4).
Interpretacja musi być wykonana w odniesieniu do historii choroby i innych testów diagnostycznych przez
wykwalifikowanego patologa.
Synonim nazwy antygenu
Syndecan-1 (1).
Wstęp
CD138 jest transmemebranowym proteoglikanem, zawierającym w swojej cząsteczce sierczan heparanu oraz
czasami siarczan chondroityny. Zbudowany jest z białak szkieletowego o masie cząsteczkowej 30.5 i pięciu
glikozoamidglikanów. CD138 naoleży do rodziny syndekanu. Spotykane są cząsteczki o masie od 85 000 do 92
000, prawdopodobnie zależy to od składu glikosoaminoglikanów w molekule (1).
CD138 jest ściśle związany z późnymi fazami różnicowania limfocytów B w układzie krwiotwórczym. Typowymi
miejscami ekspresji CD 138 są obszary o dużej gęstości komórkowej zdrowych i zmienionych nowotworowo
komórek plazmatycznych (5, 6) i komórek limfoplazmacytarnych (6). W dojrzałej tkance stwierdza się ekspresję
CD138 w nabłonku płaskim i wielowarstwowym, w fibroblastach, w keratynocytach wielowarstwowych oraz w
endotelium (1).
Znaczenie i funkcje CD138 nie są dokładnie znane. Jednakże wewnątrzkomórkowy odcinek CD138 uczestniczy
razem innymi składnikami w budowie cytoszkieletu (1), natomiast część pozakomórmkowa uczestniczy w
wiązaniach różnych ligandów. Prawdopodobnie CD138 odgrywa rolę w róznych procesach komórkowych tkich jak:
proliferacja, programowaa śmierć komórki (apoptoza), procesach adhezji pomiędzy komórkami oraz pomiędzy
komórką a macierzą (5), np. Cd 138 pośredniczy w procesach adhezji komórek szpiczaka do kolagenu typu I (2).
Ekspresja CD138 zmniejsza się w czasie transformacji nowotworowej (złośliwienia) komórek nabłonka (7), komórki
szpiczaka ulegające apoptozie raptownie tracą ten antygen. Z tego powodu CD138 jest markerem żywotności
komórek szpiczaka (1, 2). W trakcie złośliwienia niektóre nabłonki wielowarstwowe tracą także antygen CD138 (7).
Razem z BCL-6 i IRF4, CD138 może być przydatny w diagnostyce związanych z AIDS chłonianków typu nonHodgkin jak i związanych z HIV- chłoniaków Hodgkin’a (8).
Odczynniki dostarczane
Monoklonalne mysie przeciwciało dostarczane jest w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
oczyszczony przez dializę z 0,05 mol/L buforem Tris/HCl, pH 7,2, i zawiera 15 mmol/L NaN 3,
Klon: MI15. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiego IgG:: Patrz etykieta na fiolce.
Immunogen
Mieszanina linii komórkowych U266 oraz XG-1 ludzkiego szpiczaka (3, 9).
Swoistość
Anti-CD138, MI15, zostało zap[rezentowane na The Sixth International Workshop and Conference on Human
Leucocyte Differentiation Antigens (Kobe 1996), przeprowadzone w licznych laboratoriach badania potwierdziły
jego reaktywność z CD138 (1).
Epitop rozpoznawany przez anti-CD138, MI15, został znaleziony w ektodomenie (część pozakomórkowa ) CD138
core protein. Szeroko prowadzone badania wykazały że, epitop rozpoznawany przez MI15 częściowo pokrywa się z
epitopem rozpoznawanym przez przeciwciało przeciwko CD138, klon B-B4 (1, 5). Anty-CD138, MI15, silnie reaguje
z CD138 wydzielanym komórki linii komórkowych pochodzących ze szpiczaka mnogiego takich jak U266 oraz XG1 (9).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt
był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma
wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi
powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur
laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem
technicznym firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być zastosowane do znakowania tkanki utrwalonej w formalinie i
zatopionej w parafinie. Konieczne jest odzyskiwanie antygenowości na gorąco w Dako Target Retreval Solution
nr kat. S 1700 lub S 1699.
(108559-003)
M 7228/PL/KIM/01.03.04 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Skrawki mrożone i preparaty komórkowe: Przeciwciało można stosować do reakcji na preparatach z tkanek
mrożonych utrwalonych w acetonie jak również do utrwalonych rozmazów komórkowych i preparatów z
cytospinu.
Nie należy dopuszczać do wysuszenia tkanki w czasie całej procedury barwienia immunocytochemicznego.
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: Monoclonal Mouse Anti-Human CD138, nr kat. M 7228, może być używane w rozcieńczeniu
1:25-1:50, w czasie 30 minut inkubacji z pierwszym przeciwciałem w temperaturze pokojowej w zastosowaniu
na skrawkach parafinowych, skrawkach mrożonych utrwalanych w acetonie, utrwalonych rozmazach
komórkowych, i utrwalonych preparatach z cytospinu. Optymalne warunki są zależne od rodzaju tkanki oraz
zastosowanych metod preparatyki i dlatego też niezbędne jest ich indywidualne określenie dla każdego
laboratorium. Zaleca się stosowanie jako kontroli negatywnej Dako Mouse IgG1, Nr kat. X 0931, rozcieńczone do
takiego samego stężenia IgG jak pierwsze przeciwciało. Jeżeli nie udowodniono trwałości przeciwciała i kontroli
negatywnej w danej metodzie zaleca się ich rozcieńczanie tuż przed użyciem, lub zastosowanie do rozcieńczania
Dako Antibody Diluent, Nr kat. S 0809. Kontrole pozytywną i negatywną należy wykonywać równolegle z
barwieniem materiału tkankowego pobranego od pacjenta.
Wizualizacja : Zaleca się stosowanie zestawów: DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679, lub DAKO
EnVision™+/HRP, nr-y kat. K 4004 i K 4006. Dla skrawków przygotowanych z tkanek mrożonych zaleca
się zestaw Dako APAAP, nr kat. K 0670, będący dobrą alternatywą jeżeli występuje barwienie endogennej
peroksydazy. Procedurę barwienia należy przeprowadzić zgodnie z przepisem dołączonym do zestawu
wizualizacji
Ograniczenia
Ze względu na czułość CD138 na działanie enzymów proteolitycznych istotną rolę dla jakości barwienia mogą
odgrywać sposób przechowywania próbek taki jak zamrażanie oraz czas przechowywania przed barwieniem z
użyciem przeciwciała (1).
Charakterystyka wyników
Komórki wykazują zabarwienia na powierzchni błony komórkowej.
Krew: Nie stwierdza się znaczącej reakcji z leukocytami z normalnej ludzkiej krwi obwodowej (< 5%).
Szpik kostny: Nie obserwuje się znaczącej reakcji w normalnym szpiku kostnym (< 5%). CD138 jest nieobecne w
CD34 pozytywnych komórkach macierzystych (1). W szpiku kostnym u pacjentów chorych na szpiczaka mnogiego
wszystkie typy komórek plazmatycznych są reaktywne w tym także: komórki siateczki, leukocyty wielojądrowe oraz
komórki plazmoblastyczne (3).
Literatura
1.
Wijdenes J, Clément C, Klein B, Dore J-M. New B-cell CD antigens. BC29: CD138 (syndecan-1)
workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY,
Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the
6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland
Publishing Inc.; 1997. p. 249-52.
2.
Jourdan M, Ferlin M, Legouffe E, Horvathova M, Liautard J, Rossi JF, et al. The myeloma cell antigen
syndecan-1 is lost by apoptotic myeloma cells. Br J Haematol 1998;100:637-46.
3.
Costes V, Magen V, Legouffe E, Durand L, Baldet P, Rossi J-F, et al. The MI15 monoclonal antibody
(anti-syndecan-1) is a reliable marker for quantifying plasma cells in paraffin-embedded bone marrow
biopsy specimens. Hum Pathol 1999;30:1405-11.
4.
van Zaanen HCT, Vet RJWM, de Jong CM, von dem Borne AEGKr, van Oers MHJ. A simple and
sensitive method for determining plasma cell isotype and monoclonality in bone marrow using flow
cytometry. Br J Haematol 1995;91:55-9.
5.
Gattei V, Godeas C, Degan M, Rossi FM, Aldinucci D, Pinto A. Characterization of anti-CD138
monoclonal antibodies as tools for investigating the molecular polymorphism of syndecan-1 in human
lymphoma cells. Br J Haematol 1999;104:152-62.
6.
Sebestyén A, Berczi L, Mihalik R, Paku S, Matolcsy A, Kopper L. Syndecan-1 (CD138) expression in
human non-Hodgkin lymphomas. Br J Haematol 1999;104:412-9.
7.
Inki P, Jalkanen M. The role of syndecan-1 in malignancies [review]. Ann Med 1996;28:63-7.
8.
Carbone A, Gloghini A, Larocca LM, Capello F, Pierconti F, Canzonieri V, et al. Expression profile of
MUM1/IRF4, BCL-6, and CD138/syndecan-1 defines novel histogenetic subsets of human
immunodeficiency virus-related lymphomas. Blood 2001; 97:744-51.
9.
Horvathova M, Gaillard JP, Liautard J, Duperray C, Lavabre-Bertrand T, Bourquard P, et al. B30.6.
Identification of novel and specific antigens of human plasma cells by mAb. In: Schlossman SF,
Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7;
Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 713-4.
Objaśnienia symboli
(108559-003)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 7228/PL/KIM/01.03.04 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17