cwiczenie II praktyka

Bioaktywne składniki żywności funkcjonalnej
Ćwiczenie 2
część praktyczna
___________________________________________________________________________
WPŁYW SUBSTANCJI CZYNNYCH WYSTĘPUJĄCYCH W
ŻYWNOŚCI NA WZROST BAKTERII PROBIOTYCZNYCH
LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS LA-5
Cel ćwiczenia


Zbadanie wpływu substancji bioaktywnych zawartych w ekstraktach z roślin o
znanym działaniu prozdrowotnym (cytryniec chiński, sok z noni, pestki grejpfruta
(Citrosept), jagody goji, żurawina) na wzrost bakterii probiotycznych Lactobacillus
acidophilus LA-5.
Zbadanie wpływu etanolu na wzrost bakterii probiotycznych.
1. Wpływ ekstraktów roślinnych na L. acidophilus LA-5
1. Przygotować gęstwę bakterii w MRS o gęstości ok. 0,5 MF (standard McFarlanda 0,5
odpowiada 1,5 x 108 cfu/ml).
2. Do 15 kolejnych probówek odmierzyć po 9,4 ml jałowego podłoża MRS, a do 5
probówek odmierzyć po 9,9 ml MRS.
3. 2 probówki z 9,9 ml czystego MRS opisać jako kontrola negatywna – i odstawić do
inkubacji.
4. Do pozostałych 3 probówek z 9,9 ml MRS dodać po 0,1 ml gęstwy bakterii, opisać
jako kontrola pozytywna i odstawić do inkubacji.
5. Do 3 probówek z 9,4 ml MRS dodać po 0,5 ml etanolowych ekstraktów z cytryńca
chińskiego (5% stężenie końcowe), do następnych 3 probówek – po 0,5 ml ekstraktu z
pestek grejpfruta (Citroseptu – ostrożnie pipetować, gęste), dalej z jagód goji,
żurawiny i do ostatniej trójki soku z noni.
6. Do każdej probówki z ekstraktem jałowo dodać po 100l gęstwy.
7. Odebrać po 1 probówce z każdego oznaczenia i zmierzyć pH roztworu. Zapisać.
8. Zmierzyć liczebność komórek w pozostałych probówkach (pomiar gęstości optycznej
za pomocą densytometru)  zapisać wyniki jako czas 0h.
9. Probówki umieścić w cieplarce (37°C) na 24 h (potem przełożyć do chłodni).
10. Po inkubacji wykonać pomiar gęstości optycznej za pomocą densytometru DEN-1B, a
potem zmierzyć pH.
2. Wpływ różnych stężeń etanolu na L. acidophilus LA-5
1. Przygotować gęstwę bakterii w MRS o gęstości ok. 0,5 MF (standard McFarlanda 0,5
odpowiada 1,5 x 108 cfu/ml). .
2. Do kolejnych probówek odmierzyć jałowego MRS w ilości podanej w tabeli poniżej.
3. Następnie do kolejnych probówek odmierzyć odpowiednie objętości etanolu.
__________________________________________________________________________________________
KATEDRA TECHNOLOGII FERMENTACJI I MIKROBIOLOGII TECHNICZNEJ
http://www.ar.krakow.pl/tz/ktfimt/
1
Bioaktywne składniki żywności funkcjonalnej
Ćwiczenie 2
część praktyczna
___________________________________________________________________________
4. Do wszystkich probówek (za wyjątkiem kontroli negatywnych) dodać po 100l
gęstwy.
5. Zmierzyć liczebność komórek w probówkach (pomiar gęstości optycznej za pomocą
densytometru)  zapisać jako czas 0h.
6. Probówki umieścić w cieplarce (37°C) na 24 h (potem wstawić do chłodni).
7. Po inkubacji wykonać pomiar gęstości optycznej za pomocą densytometru DEN-1B.
Oznaczenie
probówki
Medium
Objętość
EtOH
[µL]
1a
1b
1c
1Ø
4900
4900
4900
4900
-
2a
2b
2c
2Ø
4900
4900
4900
4900
5
5
5
5
3a
3b
3c
3Ø
4875
4875
4875
4875
25
25
25
20
4a
4b
4c
4Ø
4850
4850
4850
4850
50
50
50
50
5a
5b
5c
5Ø
4775
4775
4775
4775
125
125
125
125
6a
6b
6c
6Ø
4650
4650
4650
4650
250
250
250
250
Stężenie
końcowe
EtOH
MF
przed
dodaniem
bakterii
MF
Po dodaniu
bakterii
t=0 h
MF
t=24 h
K poz
K poz
K poz
Kontrola poz bez
bakterii
0,1%
0,1%
0,1%
Kontrola 0,1% bez
bakterii
0,5%
0,5%
0,5%
Kontrola 0,5% bez
bakterii
1%
1%
1%
Kontrola 1% bez
bakterii
2,5%
2,5%
2,5%
Kontrola 2% bez
bakterii
5%
5%
5%
Kontrola 5% bez
bakterii
Piśmiennictwo
1. Gibson G.R., Roberfroid M.B. Handbook of prebiotics, CRC Press, Taylor & Francis
Group, Boca Raton, 2008
__________________________________________________________________________________________
KATEDRA TECHNOLOGII FERMENTACJI I MIKROBIOLOGII TECHNICZNEJ
http://www.ar.krakow.pl/tz/ktfimt/
2
Bioaktywne składniki żywności funkcjonalnej
Ćwiczenie 2
część praktyczna
___________________________________________________________________________
2. Probiotyki w żywności. Właściwości zdrowotne i żywieniowe oraz wytyczne do ich
oceny, Polskie Towarzystwo Probiotyczne i Probiotyczne, Kraków, 2007.
3. Salminen S., von Wright A., Ouwehand A. Lactic Acid Bacteria: Microbiological and
Functional Aspects, Marcel Dekker, Inc., New York, U.S.A, 2004.
__________________________________________________________________________________________
KATEDRA TECHNOLOGII FERMENTACJI I MIKROBIOLOGII TECHNICZNEJ
http://www.ar.krakow.pl/tz/ktfimt/
3