Syngen Milk DNA Mini Kit

kolumienki.pl
syngen.pl
Syngen Milk DNA Mini Kit
Zawartość opakowania i warunki przechowywania
Syngen Milk DNA Mini Kit
Liczba izolacji
Bufor DLM1
Bufor DLM2
Bufor DP1
Bufor DP2
Bufor DE
Lizozym
Proteinaza K
Kolumienka DM
Probówki 2 ml
zestaw
demo
4
2 ml
2 ml
1,3 ml
1 ml
1 ml
3 mg
1 mg
4 szt.
4 szt.
SY245010
50
25 ml
30 ml
22 ml
15 ml
8 ml
36 mg
22 mg
50 szt.
50 szt.
Kolumienki DM, a także wszystkie roztwory poza
rozpuszczoną proteinazą K, powinny być przechowywane
w temperaturze pokojowej (15-25°C).
Proteinazę K po rozpuszczeniu należy przechowywać w
4°C.
Lizozym po rozpuszczeniu należy przechowywać w -20°C.
Sprzęt i odczynniki potrzebne do wykonania procedury, a
niedostarczone z zestawem
- Etanol (96-100%)
- Probówki 1.5 ml i 2 ml (eppendorfki)
- Statyw
- Sterylne końcówki do pipet (najlepiej z filtrem)
- Pipety automatyczne nastawne
- Mikrowirówka
- Worteks
- Dwie łaźnie wodne, bloki grzejne lub termomiksery
(jeden na 60°C, drugi na 37°C)
- Woda destylowana (czystości do PCR)
Przygotowanie odczynników przed pierwszym użyciem
Proteinaza K
Proteinaza K jest dostarczana w postaci liofilizowanej.
Aby przygotować porcję roztworu roboczego, probówkę
zawierającą liofilizat proteinazy K należy krótko zwirować,
dodać
· 50 ul wody destylowanej (czystości do PCR) – do
probówki z 1 mg
· 1,1 ml wody destylowanej (czystości do PCR) – do
probówki z 22 mg
Następnie zamknąć probówkę i dokładnie wymieszać, aż
do całkowitego rozpuszczenia. Po rozpuszczeniu
roztwór roboczy proteinazy K należy przechowywać w
temperaturze 4°C.
zawierającą liofilizat lizozymu należy krótko zwirować,
dodać
· 150 ul wody destylowanej (czystości do PCR) –
do probówki z 3 mg
· 1,8 ml wody destylowanej (czystości do PCR) – do
probówki z 36 mg
Następnie zamknąć probówkę i dokładnie wymieszać, aż
do całkowitego rozpuszczenia. Rozporcjuj lizozym i
przechowuj w temperaturze -20°C.
Bufory płuczące
Bufory płuczące DP1 i DP2 są dostarczane jako
koncentraty. Przed pierwszym użyciem dodaj do nich
odpowiednią ilość etanolu (96-100%) i starannie
wymieszaj. Poniższa tabela przedstawia sposób
przygotowania buforów płuczących.
Syngen Milk DNA Mini Kit
Liczba izolacji
Objętość etanolu, jaką należy
dodać do koncentratu buforu
płuczącego DP1
Objętość etanolu, jaką należy
dodać do koncentratu buforu
płuczącego DP2
SY245010
4 ml
60 ml
50
8 ml
Bufory DP1 i DP2 po dodaniu etanolu powinny być
szczelnie zamknięte i przechowywane w temperaturze
pokojowej.
Przed rozpoczęciem procedury zawsze
wymieszaj rozpuszczone bufory przez obrócenie butelki
kilka razy.
Materiał wyjściowy
Ilość materiału na 1 izolację: max. 1 ml mleka
Zanim zaczniesz
1.
2.
3.
4.
5.
Do buforów DP1 i DP2 dodaj odpowiednią ilość
96-100% etanolu.
Przygotuj roztwór proteinazy K.
Przygotuj roztwór lizozymu.
Nastaw łaźnie wodne, bloki grzejne lub
termomiksery: jeden na 60°C, drugi na 37°C.
Podgrzej bufor do elucji do 600C.
PROTOKÓŁ
1.
W 2 ml probówce (nie dołączono) umieść
maksymalnie 1 ml próbki mleka, zamknij
wieczko i wiruj przez 3 minuty z maksymalną
prędkością 18.000 x g (lub 14.000 rpm).
2.
Odrzuć supernatant. Przy pomocy ręcznika
papierowego lub pałeczki higienicznej usuń
wszystkie pozostałości supernatantu ze ścian
probówki.
3.
Dodaj 425 µl buforu DLM1 i 30 µl roztworu
lizozymu (20 mg/ml), zmieszaj na worteksie.
Inkubuj przez 30 minut w 370C.
Lizozym
Lizozym jest dostarczany w postaci liofilizowanej. Aby
przygotować porcję roztworu roboczego, probówkę
zestaw
demo
4
0,5 ml
kolumienki.pl
syngen.pl
Podczas inkubacji zworteksuj próbkę 2-3 krotnie.
4.
Dodaj 425 µl buforu DLM2 i 20 µl roztworu
proteinazy K (20 mg/ml), zmieszaj na worteksie.
Inkubuj przez 30-60 minut w 600C.
Podczas inkubacji zworteksuj próbkę 2-3 krotnie.
5.
Dodaj 450 µl etanolu (96-100%), mieszaj na
worteksie przez 10 sekund.
6.
Umieść kolumienkę DM w probówce 2 ml
(niedostarczono). Próbkę (max. 750 µl) przenieś
na kolumienkę DM, zamknij wieczko. Wiruj
przez 1 minutę z prędkością 18.000 x g. Odrzuć
supernatant, a kolumienkę przenieś z powrotem
do probówki.
7.
Powtórz krok 6 dla pozostałej objętości próbki.
8.
Umieść kolumienkę DM w nowej probówce 2 ml
(dostarczono). Dodaj do kolumienki 400 µl
buforu DP1 (upewnij się, czy do buforu dodano
etanol), zamknij wieczko. Wiruj przez 30 sekund
z prędkością 18.000 x g. Odrzuć supernatant, a
kolumienkę przenieś z powrotem do probówki.
9.
Dodaj do kolumienki DM 650 µl buforu
DP2(upewnij się, czy do buforu dodano etanol),,
zamknij wieczko. Wiruj przez 30 sekund z
prędkością 18.000 x g. Odrzuć supernatant, a
kolumienkę przenieś z powrotem do probówki.
10. Powtórz krok 9.
11. Wiruj kolumienkę przez 3 minuty z prędkością
18.000 x g.
12. Przenieś kolumienkę do nowej 1,5 ml probówki
(nie dostarczono). Na środek membrany dodaj
50-100 µl uprzednio podgrzanego buforu do
elucji DE i inkubuj w RT przez 3 minuty. Zamknij
wieczko.
13. Wiruj przez 1 minutę przy 18.000 x g.
14. Wyizolowane DNA należy przechowywać w 4°C
lub -20°C.
Producent
Syngen Biotech Sp. z o.o. Sp. k.
54-116 Wrocław, ul. Ostródzka 13
tel. 71 349 70 13, 71 349 91 66, 71 349 61 67, faks 71 349 70 33
kolumienki.pl, syngen.pl, [email protected]