anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) Mouse Monoclonal Primary

WYMAGANE MATERIAŁY NIEDOŁĄCZONE DO ZESTAWU
anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) Mouse Monoclonal
Primary Antibody
Nie dostarczono odczynników do barwienia, takich jak zestawy do detekcji firmy Ventana
(np. zestaw ultraView Universal DAB Detection Kit) i elementów pomocniczych, takich jak
pozytywne i negatywne kontrolne preparaty mikroskopowe tkanek.
790-4554
PRZECHOWYWANIE
06478441001
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie zamrażać.
50
W celu zapewnienia właściwego dostarczenia odczynnika i stabilności przeciwciała po
każdym użyciu, należy założyć zatyczkę i niezwłocznie umieścić dozownik w lodówce w
pozycji pionowej.
PRZEZNACZENIE
Przeciwciało anti-Cytokeratin 5/6
(D5/16B4) Mouse Monoclonal Primary
Antibody (anti-Cytokeratin 5/6
(D5/16B4)) wykrywa cytokeratiny 5 i
6. Cytokeratina 5 ulega ekspresji w
różnych komórkach nabłonka i
mezotelium, podczas gdy cytokeratina
6 ulega ekspresji na proliferującym
nabłonku płaskim. To przeciwciało
wyraża jądrowy i cytoplazmatyczny
Rysunek 1. Obraz raka płaskonabłonkowego wzór barwienia i może być użyte w
płuca wybarwionego z zastosowaniem
celu pomocy w identyfikacji raka
przeciwciała anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4)
kolczystokomórkowego i w
odróżnianiu międzybłoniaka złośliwego od gruczolakoraka płuca. Wykrywanie cytokeratiny
5 w komórkach mięśniowo-nabłonkowych przy użyciu przeciwciała może być także
wykorzystane do określania nowotworów sutka i stercza. Przeciwciało jest przeznaczone
do jakościowego barwienia skrawków tkankowych, utrwalonych w formalinie i zatopionych
w parafinie.
Wynik powinien zostać zinterpretowany przez wykwalifikowanego patologa w połączeniu z
badaniem histologicznym, odnośnymi danymi klinicznymi i właściwymi badaniami
kontrolnymi.
Na każdym dozowniku podana jest data ważności. Prawidłowo przechowywany odczynnik
zachowuje stabilność do daty określonej na etykiecie. Nie należy stosować odczynnika z
przekroczoną datą ważności.
PRZYGOTOWANIE PREPARATU
Do stosowania z tym pierwszorzędowym przeciwciałem nadają się rutynowo
przygotowane tkanki, utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie, pod warunkiem
stosowania zestawu do wykrywania Ventana i automatu do barwienia Ventana BenchMark
Series. Zalecanym środkiem do utrwalania tkanek jest 10% obojętna zbuforowana
formalina.8 Preparaty należy niezwłocznie wybarwić, ponieważ antygenowość ciętych
skrawków tkanek może z czasem ulegać osłabieniu.
Zaleca się jednoczesne przeprowadzanie kontroli pozytywnej i negatywnej przy badaniu
nieznanych preparatów.
OSTRZEŻENIA I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1.
2.
Przeciwciało to jest przeznaczone do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
3.
PODSUMOWANIE I OBJAŚNIENIA
Anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) jest mysim przeciwciałem monoklonalnym wytwarzanym
wobec immunizowania ludzkiego białka cytokeratyny 5; jednakże, to przeciwciało także
wchodzi silnie w reakcję z cytokeratiną 6 i słabo z cytokeratiną 4. Cytokeratina 5 ulega
ekspresji w różnych komórkach nabłonka i mezotelium, podczas gdy cytokeratina 6 ulega
ekspresji na proliferującym nabłonku płaskim.1 Wykrywanie cytokeratiny 5 w komórkach
mezotelium w przeciwieństwie do gruczolakoraka, może pomóc w odróżnianiu
międzybłoniaka złośliwego od gruczolakoraka płuca.2,3,4 Reaktywność anti-Cytokeratin
5/6 (D5/16B4) z komórkami warstwy podstawowej ludzkiego stercza i komórkami
mięśniowo-nabłonkowymi sutka może pomóc w odróżnieniu tkanki prawidłowej od
złośliwej stercza i sutka.5,6 Ponadto przy użyciu tego przeciwciała uzyskuje się wynik
dodatni dla większości przypadków raka kolczystokomórkowego.7
DOSTARCZANY ODCZYNNIK
Anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) zawiera odczynnik w ilości wystarczającej do
przeprowadzenia 50 badań.
Jeden dozownik 5 mL anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) zawiera w przybliżeniu 52 μg
przeciwciała monoklonalnego myszy.
Przeciwciała są rozcieńczone w soli fizjologicznej z buforem fosforanowym, zawierającej
białko nośnikowe i środek konserwujący ProClin 300.
4.
5.
6.
7.
Do stosowania w diagnostyce in vitro (IVD).
W tym preparacie zastosowano jako konserwant substancję ProClin 300. Został on
sklasyfikowany jako drażniący i w wyniku kontaktu ze skórą może powodować
uczulenie. W trakcie pracy należy stosować środki ostrożności. Unikać kontaktu
odczynników z oczami, skórą i błonami śluzowymi. Stosować odzież i rękawice
ochronne.
Materiały pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego należy traktować jak materiały
niebezpieczne biologicznie i usuwać z zachowaniem właściwych środków
ostrożności.
Unikać kontaktu odczynników z oczami i błonami śluzowymi. W przypadku kontaktu
z wrażliwymi miejscami, spłukiwać obfitą ilością wody.
Unikać zakażenia mikrobiologicznego odczynników. Może ono powodować
nieprawidłowe wyniki.
Aby uzyskać informacje na temat zalecanej metody pozbywania się produktu,
należy skontaktować się z władzami lokalnymi i/lub wojewódzkimi.
Dodatkowe środki ostrożności i ostrzeżenia można znaleźć w karcie charakterystyki
MSDS.
PROCEDURA BARWIENIA
Przeciwciała pierwszorzędowe firmy Ventana zostały przygotowane do stosowania w
automatach do barwienia Ventana BenchMark Series razem z zestawami do detekcji i
akcesoriami firmy Ventana. Zalecane protokoły barwienia dla urządzeń BenchMark XT
i BenchMark ULTRA z zestawami do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit są
wymienione w Tabeli 1.
Parametry procedur zautomatyzowanych mogą być wyświetlane, drukowane i edytowane
zgodnie z procedurą opisaną w Instrukcji obsługi urządzenia. Więcej informacji na temat
procedury barwienia immunohistochemicznego znajduje się w ulotce dołączonej do
opakowania odpowiedniego zestawu do detekcji firmy Ventana.
Całkowite stężenie białek w odczynniku wynosi około 3 mg/mL. Stężenie swoistego
przeciwciała wynosi około 10,4 μg/mL. Nie występuje żadna znana, nieswoista
reaktywność przeciwciała zawartego w tym produkcie.
Anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) jest przeciwciałem monoklonalnym, otrzymywanym jako
supernatant z hodowli komórkowej.
Należy zapoznać się z treścią właściwej ulotki firmy Ventana dołączonej do opakowania,
aby uzyskać szczegółowy opis następujących kwestii: (1) Zasady przeprowadzania
procedury, (2) Potrzebne materiały i odczynniki niedołączone do zestawu, (3) Pobranie
próbki i przygotowanie do analizy, (4) Procedury kontroli jakości, (5) Rozwiązywanie
problemów, (6) Interpretacja wyników i (7) Ogólne ograniczenia.
2010-10-15
1/4
1009945PL Rev D
Specyficzność
Tabela 1. Zalecane protokoły barwienia dla produktu anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) z
użyciem zestawu do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit oraz urządzeń
BenchMark XT i BenchMark ULTRA.
Typ procedury
Metoda
Odparafinowanie
Wybrane
Cell Conditioning
(Antigen Unmasking)
Tabela 3. Swoistość preparatu anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) oceniano na podstawie
badania próbek tkanek zdrowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w parafinie.
Niewymagane
Przeciwciała (pierwszorzędowe)
Urządzenie BenchMark XT
Około 16 minut, 37°C
Urządzenie BenchMark ULTRA, Około
20 minut, 36°C
Barwienie negatywne
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
Tabela 2. Zalecane protokoły barwienia dla produktu anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) z
użyciem zestawu do detekcji iVIEW DAB Detection Kit oraz urządzenia BenchMark XT.
Typ procedury
Metoda
Odparafinowanie
Wybrane
Tkanka
# dodatnich
/ wszystkich
przypadków
Mózg
0/3
Grasica
3/3
Móżdżek
0/3
Szpik kostny
0/3
Nadnercze
0/3
Płuco
2/6
Jajnik
0/3
Serce
0/3
Trzustka
0/3
Przełyk
3/3
Przytarczyce
0/3
Żołądek
0/3
Przysadka
0/3
Jelito cienkie
0/3
Jądra
0/3
Okrężnica
0/3
Tarczyca
0/3
Wątroba
0/3
41/51
Ślinianki
0/3
0/2
Tkanka
Standardowa metoda Cell Conditioning 1
Enzym (proteaza)
# dodatnich
/ wszystkich
przypadków
Sutek
Śledziona
0/3
Nerka
Migdałek
3/3
Gruczoł krokowy
Standardowa metoda Cell Conditioning 1
Błona śluzowa trzonu
macicy
0/3
Szyjka macicy
3/3
Enzym (proteaza)
Niewymagane
Mięśnie szkieletowe
0/3
Skóra
3/3
Przeciwciała (pierwszorzędowe)
Urządzenie BenchMark XT
Około 32 minut, 37°C
Nerwy (nieliczne)
0/3
Mezotelium i płuco
0/2
Barwienie negatywne
Hematoxylin II, 4 minuty
Po barwieniu kontrastowym
Bluing, 4 minuty
Cell Conditioning
(odsłanianie antygenu)
22/23
Czułość
Tabela 4. Czułość anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) została określona w wyniku badania
licznych próbek tkanek nowotworowych, po ich utrwaleniu w formalinie i zatopieniu w
parafinie.
Ze względu na zmienność utrwalania i obróbki tkanek, a także ze względu na warunki
środowiskowe i ogólne wyposażenie laboratoryjne, konieczne może być zwiększenie lub
zmniejszenie inkubacji przeciwciała pierwszorzędowego i kondycjonowania komórek lub
wstępna obróbka proteazą dla poszczególnych próbek, w zależności od zastosowanej
metody detekcji i preferencji badacza. Więcej informacji na temat zmiennych związanych z
utrwalaniem można znaleźć w pracy „Immunohistochemistry Principles and Advances”
(Podstawy i postępy immunohistochemii).9
Nowotwór
# dodatnich /
wszystkich
przypadków
Glejak
0/1
Wyściółczak złośliwy
0/1
Skąpodrzewiak złośliwy
0/1
Przykładami pozytywnej kontroli tkankowej dla tego przeciwciała są zdrowe stercze i
zdrowy migdałek.
Surowiczy gruczolakorak brodawkowaty
0/1
Śluzowy gruczolakorak brodawkowaty
0/1
INTERPRETACJA BARWIENIA
Rak z komórek wyspowych
0/1
POZYTYWNA KONTROLA TKANKOWA
Przeciwciała przeciwko anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) dają odczyn cytoplazmatyczny.
Gruczolakorak trzustki
0/1
SZCZEGÓLNE OGRANICZENIA
Nasieniak
0/1
Niniejsze przeciwciała zostały zoptymalizowane do określonego czasu inkubacji, jednakże
użytkownik jest zobowiązany do walidacji wyników uzyskanych z zastosowaniem tego
odczynnika.
Rak zarodkowy
0/1
Rak rdzeniowy
0/1
CHARAKTERYSTYKA DZIAŁANIA
Rak brodawkowaty
0/1
Rak wewnątrzprzewodowy sutka
0/3
Rak zrazikowy sutka in situ
0/1
Inwazyjny rak przewodowy sutka
0/1
Przeprowadzono badania barwienia preparatem anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) z użyciem
zestawu do detekcji ultraView Universal DAB Detection Kit oraz urządzeń BenchMark XT
i BenchMark ULTRA pod kątem jego swoistości, czułości i odtwarzalności.
2010-10-15
2/4
1009945PL Rev D
Nowotwór
# dodatnich /
wszystkich
przypadków
Przewodowy oraz naciekowy rak sutka
2/18
Chłoniak rozlany z limfocytów B
0/1
Niskozróżnicowany rak drobnokomórkowy płuc
0/1
Nowotwór
Międzybłoniak łagodny postaci mieszanej
# dodatnich /
wszystkich
przypadków
0/2
Powtarzalność
Rak kolczystokomórkowy płuc
42/50
Przeprowadzono badania powtarzalności dla preparatu anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4),
aby określić:
Gruczolakorak płuc
0/15
•
Odtwarzalność przeciwciała w obrębie jednej partii.
Rak brodawkowaty płuc
0/1
•
Rak jasnokomórkowy płuc
0/1
Odtwarzalność wyników w jednym badaniu i między badaniami za pomocą
urządzenia BenchMark XT.
Rakowiak płuc
0/1
•
Odtwarzalność wyników w obrębie jednej platformy za pomocą urządzeń
BenchMark XT i BenchMark ULTRA.
Guz neuroendokrynny płuc
0/4
•
Odtwarzalność wyników między platformami za pomocą urządzeń BenchMark XT i
BenchMark ULTRA.
Rak pęcherzyków oskrzelików płuc
0/11
Wyniki wszystkich badań mieściły się w zakresie dopuszczalnej normy.
Rak gruczołowo-płaskonabłonkowy płuc
6/11
Wykazanie kompatybilności
Niskozróżnicowany rak płuc
4/5
Wątrobiak zarodkowy
0/1
Anti-Cytokeratin 5/6 (D5/16B4) wykazał kompatybilność z preparatem ultraView Universal
DAB Detection Kit oraz urządzeniami BenchMark XT i BenchMark ULTRA.
Rak jasnokomórkowy nerek
0/1
Gruczolakorak prostaty
1/41
Rak z komórek przejściowych prostaty
1/1
Mięśniak gładkokomórkowy
0/1
Rak gruczołowy endometrium
1/1
Rak jasnokomórkowy endometrium
0/1
Rak płaskonabłonkowy macicy
1/2
Mięśniakomięsak prążkowany zarodkowy
0/1
Czerniak złośliwy odbytu
0/1
Rak komórek podstawnych
1/1
Rak płaskonabłonkowy
0/1
Nerwiakowłókniak
0/1
Nerwiak niedojrzały zaotrzewnowy
0/1
Międzybłoniak złośliwy
0/1
Chłoniak złośliwy rozlany
0/3
Chłoniak Hodgkina
0/1
Rak z komórek przejściowych pęcherza moczowego
1/1
Mięsak gładkokomórkowy o niskim stopniu złośliwości
0/1
BENCHMARK, ultraView, VENTANA oraz logo Ventana są znakami towarowymi firmy
Roche.
Kostniakomięsak
0/1
Pozostałe znaki towarowe stanowią własność odnośnych właścicieli.
Mięśniakomięsak z komórek wrzecionowatych
0/1
Mięsak gładkokomórkowy o umiarkowanym stopniu złośliwości
0/1
Ventana udziela użytkownikowi licencji na jednorazowe wykorzystanie rozwiązań objętych
patentami U.S. Pat. Nos. 6045759, 6192945, 6945128 oraz 7378058, jak i
odpowiednikami w innych krajach.
Międzybłoniak nabłonkowy złośliwy
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Moll R, Franke WW, Schiller DL. The catalog of human cytokeratins: Patterns of
expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982;31:11-24.
Clover J, Oates J, Edwards C. Anti-cytokeratin 5/6: a positive marker for epithelioid
mesothelioma. Histopathol. 1997;31:140-143.
Pu RT, Pang Y, and Michael CW. Utility of WT-1, p63, MOC31, mesothelin, and
cytokeratin (K903 and CK5/6) immunostains in differentiating adenocarcinoma,
squamous cell carcinoma, and malignant mesothelioma in effusions. Diagn.
Cytopathol. 2008;36:20-25.
Cury PM, Butcher DN, Fisher C, et al. Value of the mesothelium-associated
antibodies thrombomodulin, cytokeratin 5/6, calretinin, and CD44H in distinguishing
epithelioid pleural mesothelioma from adenocarcinoma metastatic to the pleura.
Mod. Pathol. 2000;13:107-112.
Otterbach F, Buankfalvi A, Bergner S, et al. Cytokeratin 5/6 immunohistochemistry
assists the differential diagnosis of atypical proliferations of the breast. Histopathol
2000;37:232-240.
Trokov K, Bartczak-McKay J, Yilmaz A. Usefulness of Cytokeratin 5/6 and AMACR
applied as double sequential immunostains for diagnostic assessment of
problematic prostate specimens. Am J Clin Pathol 2009;132:211-220.
Chu PG, and Weiss, LM. Expression of cytokeratin 5/6 in epithelial neoplasms: An
immunohistochemical study of 509 cases. Mod. Pathol. 2002;15:6-10.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong
Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of
Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. In: NR Rose, ed. ASM Press; 2002.
WŁASNOŚĆ INTELEKTUALNA
12/25
Międzybłoniak złośliwy postaci mieszanej
0/6
Międzybłoniak złośliwy z komórek wrzecionowatych
0/6
2010-10-15
PIŚMIENNICTWO
3/4
1009945PL Rev D
DANE TELEADRESOWE
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventanamed.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
2010-10-15
4/4
1009945PL Rev D