Informacja techniczna_Odczynniki do rozdziału polipeptydów w

InformacjaTechniczna
Wysoka czystość niezbędna do rozdziału
polipeptydów w odwróconym układzie faz.
Wysokosprawna chromatografia w odwróconym
układzie faz (RP-HPLC) to najszerzej stosowana technika
chromatograficzna do rozdziału i badań peptydów.
Peptydy odgrywają ważną rolę w badaniach i rozwoju
w zakresie proteomiki dotyczących fizjologii komórki
i chorób. Te krótkie polimery aminokwasów mogą działać
jako podstawowa jednostka rozpoznająca dla receptorów
i innych białek wiążących substancje biologiczne. Peptydy
są związkami ważnymi biologicznie, które mogą służyć
np. jako hormony, czynnik wzrostu, neuroprzekaźniki, itd.
Peptydy są także ważnymi strukturalnymi i funkcjonalnymi
elementami białek. Z tego powodu analiza produktów
trawienia białek stanowi krytyczny element poznania
struktury białka i stanowi obecnie ważną metodę kontroli
jakości w laboratorium biofarmaceutycznym.
Peptydy występują często w bardzo niskich stężeniach,
w złożonej macierzy wielu innych białek, kwasów
nukleinowych i małych cząsteczek. Aby uzyskać pełny
funkcjonalny profil peptydu, ważne jest zaklasyfikowanie
wszystkich łańcuchów bocznych aminokwasów na cztery
grupy (zasadowe, kwasowe, obojętne, hydrofobowe).
Na charakter jonowy w dużym stopniu może wpływać
skład fazy ruchomej, jak np. organiczny modyfikator fazy,
siła jonowa, pH, temperatura i zdolność do tworzenia par
jonowych.
Kwas trifluorooctowy (TFA) jako modyfikator fazy
ruchomej
Najczęściej stosowanym odczynnikiem do chromatografii
par jonowych w przypadku RP-HPLC (poli)peptydów
i białek jest kwas trifluorooctowy (TFA).
Tradycyjny gradientowy układ fazy ruchomej stosowany
w przypadku RP-HPLC peptydów i białek składa się z:
•
0,1% (v/v) TFA w wodzie (faza ruchoma A)
•
0,1% (v/v) TFA w acetonitrylu (faza ruchoma B)
TFA jest słabym hydrofobowym odczynnikiem
do chromatografii par jonowych, który utrzymuje
jednocześnie niskie pH. Niskie pH (~ 2) jest niezbędne do
protonacji peptydu i wzmocnienia jego hydrofobowości.
Odczynnik do chromatografii par jonowych maskuje
dodatnie ładunki zarówno w przypadku fazy stacjonarnej,
jak i peptydu. Do dodatkowych zalet TFA należą: duża
lotność (usuwanie rozpuszczalnika jest łatwe) i doskonałe
właściwości optyczne.
Parametry krytyczne w trakcie analizy
TFA powinien być jak najczystszy, ponieważ nawet
niewielkie zanieczyszczenia mogą ulec zatężeniu w fazie
stacjonarnej, a następnie wymyte poprzez gradient.
Praktyczny przykład przedstawiono na Rysunku 1
na kolejnej stronie. Przedstawiono dwa chromatogramy
uzyskane za pomocą TFA dwóch różnych jakości
(do zastosowań HPLC i do zastosowań analitycznych).
Rys 1. wyraźnie pokazał wpływ czystości TFA na badaną
próbkę.
Aby uzyskać wysoką powtarzalność rozdziałów pomiędzy
analizami, np. w przypadku identyfikacji metodą
fingerprintingu, lub pomiędzy laboratoriami, konieczne
jest także zapewnienie powtarzalnej jakości TFA
pomiędzy seriami i stałego stężenia tego związku w fazie
ruchomej.
I n f o r m a c j a t e c h n i c z n a | www.avantormaterials.com
Roztwór J.T.BAKER® odpowiedni do wysokich
wymagań aplikacyjnych
Warunki analizy
Kolumna
BAKERBOND™ Wide Pore C18, 5µm, 250 mm (dł.) × 4,6 mm
(śr. wewn.) (PN 7104-00)
Faza ruchoma
0,1%(v/v) TFA (PN 9470) w H2O (PN 4218) (A); 0,1%(v/v) TFA
(PN 9470) w acetonitrylu (PN 9017) (B)
Natężenie
przepływu
1 ml/min
Gradient
5% A (10 min), do 60% A w 30 min (gradient liniowy), 60%
A (10 min)
Temperatura
25°C
Wykrywanie
UV przy 215 nm
(a)
(b)
Rysunek 1 W
pływ czystości TFA na wyjściową absorbancję po zastosowaniu
0,1% (v/v) TFA
a. 0,1% TFA do zastosowań analitycznych
b. 0,1% TFA J.T.Baker® HPLC Analyzed (PN 9470)
J.T.Baker® wykorzystuje wysokiej jakości TFA o zawartości
głównego składnika min. 99,5%. Certyfikowane procesy
w trakcie produkcji gwarantują wysoką czystość
i powtarzalność pomiędzy seriami.
Ponadto każda seria TFA przeznaczona do zastosowań
HPLC J.T.BAKER® (9470) jest badana i specyfikowana
pod kątem elucji gradientowej. Wynik profilu elucji
gradientowej zostaje przedstawiony na świadectwie
jakości.
Ampułki o poj. 1 ml do TFA: łatwe w użyciu,
precyzyjne, oszczędzające czas pracy
TFA do zastosowań HPLC J.T.BAKER® (9470) jest także
dostępny w ampułkach o poj. 1 ml. Zawartość ampułki
wystarczy rozcieńczyć jednym litrem wody do HPLC (4218)
lub acetonitrylu (9017), aby uzyskać gotowy do użycia
roztwór TFA o stężeniu 0,1% (v/v).
Poręczne ampułki są pakowane po 2 lub 10 w opakowanie
zawierające także świadectwo jakości i urządzenie
do otwierania ampułki. Pudełko zawierające 10 ampułek
o poj. 1 ml w oczywisty sposób pozwala zaoszczędzić dużo
miejsca magazynowego w porównaniu do 10 l roztworu.
Numer produktu
Opis
Wielkości opakowań
9470
Kwas Trifluorooctowy, HPLC
1 × 70 ml Ampułka; 10 × 1 ml Ampułki
9810
Kwas Trifluorooctowy,LCMS
10 × 1 ml Ampułki; 2 × 1 ml Ampułki
9820
Kwas Mrówkowy, LCMS
10 × 1 ml Ampułki; 2 × 1 ml Ampułki
Phillipsburg, NJ 9001:2008 & 14001:2004
Paryż, KY 9001:2008
Meksyk, Meksyk 9001:2008
Deventer, Holandia 9001:2008, 14001:2004 & 13485:2003
Gliwice, Polska 9001:2008 & 17025:2005
Selangor, Malezja 9001:2008
Dehradun, Indie 9001:2008, 14001:2004 & 13485:2003
Mumbai, Indie 9001:2008 & 17025:2005
O firmie Avantor™ Performance Materials
Firma Avantor Performance Materials produkuje i wprowadza na rynek na całym świecie wysokosprawne
odczynniki chemiczne i materiały pod kilkoma markami, w tym J. T. Baker®, Macron Fine Chemicals™,
Rankem™, Diagnova™ i POCH™.
Produkty firmy Avantor są używane w wielu gałęziach przemysłu. Nasze rozwiązania z zakresu
biomedycyny i nauk przyrodniczych są wykorzystywane w laboratoriach uczelnianych, przemysłowych
i zajmujących się kontrolą jakości, a także używane do badań naukowych, produkcji leków i badań
w laboratoriach medycznych, podczas gdy nasze rozwiązania elektroniczne są stosowane do produkcji
półprzewodników.
Dodatkowe informacje można znaleźć na stronie internetowej www.avantormaterials.com lub pod adresem
www.twitter.com/avantor_news
Informacje dotyczące zamówień i pomoc
Obsługa klienta i pomoc techniczna
tel: + 48 32 239 20 00
fax: +48 32 239 23 70
e- mail: [email protected]
www.avantormaterials.com
www.poch.com.pl
AskAvantor™
Na naszej stronie internetowej dostępna
jest funkcja ASK Avantor™, która
obejmuje możliwość czatu na żywo
z przedstawicielami działu obsługi klienta.
www.avantormaterials.com/askavantor
Siedziba główna firmy
Biura na świecie
Avantor Performance Materials, Inc.
3477 Corporate Parkway
Suite #200
Center Valley, PA 18034
USA
• Chiny
• Malezja
• Ameryka Północna
• Indie
• Meksyk
• Polska
• Korea
• Holandia
• Tajwan
Dane kontaktowe w tych miejscach można
znaleźć na stronie www.avantormaterials.com/
Support/Contact-us/Worldwide-Directory.aspx
Nr poz. 9072_E_TN_Chromatography-Reversed-Phase_Separation_Polypeptides_TFA_13vs3_PL
©2013 Avantor Performance Materials, Inc. Wszelkie prawa zastrzeżone.
O ile nie zaznaczono inaczej, znaki towarowe są własnością firmy Avantor Performance Materials, Inc. lub jej podmiotów stowarzyszonych.