Spis treści
Transkrypt
Spis treści
Spis treści 1.MEDIA BEZSUROWICZE ................................................................................................................ 7 1.1.WSTĘP .................................................................................................................................. 7 1.2 NOWE TECHNOLOGIE ...................................................................................................... 9 1.3 SPIS MEDIÓW ................................................................................................................... 11 1.4. MEDIA O ZDEFINIOWANYM SKŁADZIE CHEMICZNYM ....................................... 13 1.4.1. PANEXIN NTA ............................................................................................................... 13 1.4.2. PANEXIN NTS ........................................................................................................... 17 1.4.3. PANEXIN BMM............................................................................................................. 21 1.5. MEDIA BEZSUROWICZE (HIGH EFFICIENCY MEDIA) ........................................................... 22 1.5.1. PANSERIN 401.............................................................................................................. 22 1.5.2 PANSERIN 604............................................................................................................... 25 1.5.3. PANSERIN 293A ........................................................................................................... 27 1.5.4. PANSERIN 293S ............................................................................................................ 28 1.5.5. PANSERIN H4000 ......................................................................................................... 30 1.5.6. PANSERIN C6000 ......................................................................................................... 32 1.5.7. PANSERIN H8000 ......................................................................................................... 35 1.5.8. PANSERIN T3................................................................................................................ 37 1.5.9. PANSERIN ProVero ...................................................................................................... 38 1.5.10. PANSERIN S2 .............................................................................................................. 40 1.5.11. SPODOPAN ................................................................................................................ 42 1.5.12. ENDOPAN 300 SL ....................................................................................................... 44 1.6. INNE MEDIA BEZSUROWICZE ............................................................................................. 46 1.6.1. PANSERIN 411.............................................................................................................. 46 1.6.2. Panserin 411S .............................................................................................................. 48 1.6.3. PANSERIN 412.............................................................................................................. 49 1.6.4. PANSERIN 413.............................................................................................................. 51 1.6.5. PANSERIN 416.............................................................................................................. 53 1.6.6. PANSERIN 604ST .......................................................................................................... 56 1.6.7. PANSERIN 604SPF ........................................................................................................ 58 1.6.8. PANSERIN 701 ............................................................................................................. 60 1.6.9. PANSERIN 801.............................................................................................................. 62 1.6.10. PANSERIN PX10 ......................................................................................................... 63 1.6.11. PANSERIN PX40......................................................................................................... 66 1.7.MEDIA BEZSUROWICZE DO HODOWLI KOMÓREK MACIERZYSTYCH .................................. 68 1.7.1. POWERStem ESPro1 .................................................................................................... 68 1.7.2. POWERStem ESPro2 .................................................................................................... 71 1.7.3. POWERStem HE1 ......................................................................................................... 73 1.7.4. POWERStem HE2 ......................................................................................................... 76 1.7.5. POWERStem EST.......................................................................................................... 78 1.7.6. PowerStem MSC1 ........................................................................................................ 80 1.7.7. PowerStem HPSC ......................................................................................................... 82 1.7.8. POWERStem PEC1 ....................................................................................................... 84 1.8 DRZEWKA DECYZYJNE .......................................................................................................... 86 2. SUROWICE ................................................................................................................................. 88 2.1 WSTĘP.................................................................................................................................. 88 2.1.1. CERTYFIKAT COS .......................................................................................................... 91 2.2. SUROWICE BYDLĘCE ........................................................................................................... 93 2.2.1.SUROWICE PODDANE OBRÓBCE .................................................................................. 93 2.3 INNE SUROWICE ZWIERZĘCE ............................................................................................... 97 2.4. SERA PLUS ........................................................................................................................... 98 2.5 SUROWICA LUDZKA ............................................................................................................. 99 2.6. CERTYFIKAT ANALIZY ........................................................................................................ 100 3. MEDIA DO KULTUR KOMÓRKOWYCH ..................................................................................... 101 3.1. WSTĘP............................................................................................................................... 101 3.2. MEDIA ............................................................................................................................... 102 3.2.1. ALPHA MEM .............................................................................................................. 102 3.2.2. BME Z SOLAMI EARLE’A ............................................................................................. 106 3.2.3. POŻYWKA BSK-H ....................................................................................................... 110 3.2.4. POŻYWKA CLICKA ...................................................................................................... 110 3.2.5. POŻYWKA CMRL-1066 .............................................................................................. 111 3.2.6. DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) .......................................................... 113 3.2.7. DMEM F12 ................................................................................................................ 123 3.2.8. GLASGOW MEM (BHK 21) ......................................................................................... 127 3.2.9. POŻYWKA GRACE’A (Grace’s Insect Medium) .......................................................... 129 3.2.10. POŻYWKA HAM’S F12 ............................................................................................. 131 3.2.11. POŻYWKA HAM’S F10 ............................................................................................. 133 3.2.12. ISCOVE‘S MODIFIES DULBECO‘S MEDIA (IMDM) ................................................... 136 3.2.13. POŻYWSKA IPL-41 do komórek owadzich .............................................................. 139 3.2.14. JOKLIK- MEM .......................................................................................................... 141 3.2.15. L-15 (Leibovitz’s L-15 Medium) .............................................................................. 143 3.2.16. POŻYWKA Mc COY’S 5A ........................................................................................... 145 3.2.17. POŻYWKA MCDB 131............................................................................................... 147 3.2.18. POŻYWKA 199 z SOLAMI EARLE’A (M199) ............................................................. 149 3.2.19. MEM Z SOLAMI EARLE’A......................................................................................... 155 3.2.20. RPMI 1640 .............................................................................................................. 161 3.2.21. POŻYWKA SCHNEIDER’A (Schneider’s Drosophila Medium) .................................. 167 3.2.22. POŻYWKA TC 100 DO KOMÓREK OWADZICH ......................................................... 168 3.2.23. TNM-FH ................................................................................................................... 170 3.2.24. WAYMOUTH’S MB 752/1 ....................................................................................... 172 3.2.25. Pożywka E William’a (William’s Medium E) ............................................................ 174 3.2. MEDIA SPECYFICZNE ......................................................................................................... 176 3.2.1. ENDOPAN 3................................................................................................................ 176 3.2.2. ENDOPAN PRO ........................................................................................................... 177 3.2.3. HAEMANGIOPAN (pożywka do hem angioblastu) .................................................... 179 3.2.4. HEPATOPAN (pożywka dla hepatocytów ludzkich) ................................................... 179 3.2.5. MELANOPAN (pożywka dla melanocytów) ............................................................... 180 3.2.6 EHCPAN (pożywka dla komórek EHC)........................................................................ 180 3.2.7 NEUROPAN (Pożywka dla komórek neuronalnych) ................................................... 180 3.2.8 STEMPAN (Pożywka dla komórek ES) ........................................................................ 181 3.2.9. EMEM Fibroblasts (pożywka dla fibroblastów) ......................................................... 181 3.2.10. AMNIOPAN (pożywka do cytogenetyki prenatalnej) ............................................. 182 3.2.11. MARROWPAN (pożywka do komórek szpiku) ........................................................ 182 4. DODATKI DO POŻYWEK ........................................................................................................... 184 4.1 DODATKI DO MEDIÓW ...................................................................................................... 184 4.2 BUFOROWANE ROZTWORY SOLI ...................................................................................... 185 4.2.1 BUFOROWANY ROZTWÓR DPBS ................................................................................ 185 4.2.2. ROZTWÓR SOLI EARLA .............................................................................................. 186 4.2.3. ZBALANSOWANY ROZTWÓR SOLI GEY’A ................................................................... 187 4.2.4. ZBALANSOWANY ROZTWÓR SOLI HANK’A ................................................................ 188 4.2.5.ROZTWÓR A SOLI PUCK’A .......................................................................................... 189 4.2.6.ROZTWÓR SOLI TYRODE’A......................................................................................... 189 4.3 AMINOKWASY i WITAMINY ................................................................................................ 190 4.4. ANTYBIOTYKI I ŚRODKI PRZECIWGRZYBICZE...................................................................... 190 4.5. ENZYMY DO DYSOCJACJI KOMÓREK .................................................................................. 192 4.5.1 KOLAGENAZA TYPU I .................................................................................................. 192 4.5.2. KOLAGENAZA TYPU II ................................................................................................ 193 4.5.3. KOLAGENAZA TYPU III ............................................................................................... 193 4.5.4. TRYPSYNA I INNE ....................................................................................................... 193 4.6. CZYNNIKI PRZYLEGANIA.................................................................................................... 195 4.6.1. KOLAGEN A ................................................................................................................ 195 4.6.2. KOLAGEN R (TYP I) ..................................................................................................... 195 4.6.3. LAMININA MYSIA ....................................................................................................... 196 4.6.4. ALBUMINY ................................................................................................................. 197 4.6.5. ROZTWÓR ŻELATYNY ................................................................................................. 197 4.7. ROZTWORY DO SEPARACJI .............................................................................................. 198 4.7.1.PANCOLL i POWERCOLL .............................................................................................. 198 4.7.2. POŻYWKA DO IZOLACJI LIMFOCYTÓW ..................................................................... 199 4.8. KRIOKONSERWACJA ......................................................................................................... 200 4.8.1. DMSO (dimetylosulfotlenek) ..................................................................................... 200 4.8.2. POŻYWKA MROŻENIOWA.......................................................................................... 200 4.8.3. CRYOPAN ................................................................................................................... 200 4.9. LINIA PRODUKTÓW PAN SL-S ........................................................................................... 201 5. USŁUGI ..................................................................................................................................... 203 5.1.WPROWADZENIE .............................................................................................................. 203 5.2.SPECJALNA OBRÓBKA RÓŻNYCH PARTII SUROWICY ......................................................... 203 5.3.BADANIA BIOCHEMICZNE.................................................................................................. 204 5.4. TESTY NA CZYNNIKI PATOGENNE ..................................................................................... 205 5.5.TESTY FUNKCJONALNE ...................................................................................................... 206 5.6.KOMÓRKI PODDAWANE OBRÓBCE ................................................................................... 207 6. ODCZYNNIKI DO BADAŃ BIOLOGICZNYCH ............................................................................. 208 6.1. CZYNNIKI WZROSTU ......................................................................................................... 209 6.1.1. LUDZKIE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU ................................................................. 209 6.1.2. MYSIE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU ................................................................... 224 6.1.3. SZCZURZE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU ............................................................. 228 6.1.4. INNE CYTOKINY .......................................................................................................... 230 6.2. CHEMOKINY ...................................................................................................................... 233 6.2.1. LUDZKIE CHEMOKINY ................................................................................................ 233 6.2.2. MYSIE CHEMIKINY ..................................................................................................... 236 6.2.3. Pozostałe cytokiny .................................................................................................... 237 7. BIOLOGIA MOLEKULARNA ....................................................................................................... 238 7.1.POLIMERAZY ...................................................................................................................... 238 7.1.1..Taq Polimeraza DNA .................................................................................................. 238 7.1.2. PANScript Polimeraza DNA ........................................................................................ 239 7.1.3. PANScript red Polimerazy DNA ................................................................................. 240 7.1.4.Polimeraza DNA PANPhusion ..................................................................................... 241 7.1.5.Polimerazy DNA PAN Hot Start .................................................................................. 242 7.1.6. PowerScript DNA-Polymerases short range (Polimeraza DNA PowerScript do krótkich fragmentów DNA)................................................................................................................ 244 7.1.7. PowerScript long DNA Polymerase (Polimeraza do długich fragmentów DNA) ....... 245 7.1.8. Polimerazy DNA TrueScript™..................................................................................... 246 7.1.9.Polimerazy DNA PAN Mix ........................................................................................... 247 7.1.10.Polimerazy DNA PAN Mix red ................................................................................... 248 7.1.11.PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red ............................................................................... 249 7.2 ENZYMY MODYFIKUJĄCE ................................................................................................... 251 7.2.1. PAN Ligation Kit (Zestaw do ligacji) ........................................................................... 251 7.2.2. Proteinaza K ............................................................................................................... 252 7.3. MARKERY MASY CZĄSTECZKOWEJ ................................................................................... 253 7.3.1.PANLadder™ I ............................................................................................................. 253 7.3.2.PANLadder™ IV ........................................................................................................... 254 7.3.3. PANLadder™ V ........................................................................................................... 255 7.3.4.PANLadder™ VI ........................................................................................................... 256 7.4.ODCZYNNIKI DO BIOLOGII MOLEKULARNEJ ..................................................................... 257 7.4.1.PAN DNA Clean ........................................................................................................... 257 7.4.2.PAN Dye Enhancer ...................................................................................................... 258 7.4.3.X-Gal ........................................................................................................................... 259 7.4.4.IPTG ............................................................................................................................ 260 7.4.5.Agaroza (molecular grade) ......................................................................................... 260 7.5. DODATKI I BUFORY ........................................................................................................... 261 7.5.1.Bufor MgCl2................................................................................................................ 261 7.5.2.Bufor KCl (10x) ............................................................................................................ 261 7.5.3.Dodatek HiSpec Additive ............................................................................................ 262 7.5.4.Dodatek PAN Mate Additive ...................................................................................... 262 7.6.NUKLEOTYDY ..................................................................................................................... 263 7.6.1.dNTP Sets (Zestawy dNTP) ......................................................................................... 263 7.6.2.dNTP Mix (mieszanina deoksyrybonukleotydów) ...................................................... 265 7.6.3. dNTPs (Deoksyrybonukleotydy) ................................................................................ 266 8. MATERIAŁY LABORATORYJNE.................................................................................................. 268 8.1.DETEKCJA MYKOLPLAZMY ................................................................................................. 268 8.1.1.RIDASCREEN ®, Mycoplasma IFA * ............................................................................. 269 8.2. ŚRODKI ODKAŻAJĄCE........................................................................................................ 269 8.2.1.Barrycidal 36 ............................................................................................................... 269 8.2.2. Desipure C-100 .......................................................................................................... 272 8.2.3.Barrydin ...................................................................................................................... 273 1. MEDIA BEZSUROWICZE 1.1.WSTĘP Informacje podstawowe: Hodowla komórkowa, czyli hodowanie in vitro (w probówce) komórek wyizolowanych z żywej tkanki, jest uznanym i wartościowym narzędziem w badaniach biomedycznych, pozwalającym na uzyskanie powtarzalnych wyników. Hodowle komórkowe pozwalają również na coraz wydajniejszą produkcję skutecznych substancji na wielką skalę w medycynie i badaniach (np. insulina, czynniki wzrostu, przeciwciała monoklonalne i czynniki krzepnięcia). Hodowla komórek z surowicą: Komórki w warunkach in vitro wymagają roztworów substancji odżywczych, nazywanych pożywkami, które naśladują środowisko in vivo (w żywym organizmie). Z drugiej strony pożywki te, będące mieszanką czynników odżywczych, soli, pierwiastków śladowych, czynników buforujących, czynników wzrostu, substancji ochronnych i wielu innych składników, muszą być uzupełnione naturalnymi, wysoce złożonymi dodatkami. Do niedawna nie tylko zwierzęca, ale również ludzka surowica była środkiem używanym w technologii produkcji, między innymi z braku innych możliwości. Funkcja surowicy w hodowli komórkowej: Czynniki hormonalne stymulują wzrost, namnażanie i różnicowanie. Czynniki przylegania umożliwiają lub ułatwiają przyczepianie komórek do naczyń hodowlanych (Biomatrix). Białka transportowe i wiążące dostarczają między innymi hormonów, minerałów i lipidów. Białka surowicy wiążą substancje toksyczne. Jednak surowica, głównie płodowa surowica bydlęca (FBS), może być przyczyną problemów z wielu powodów. Wady stosowania surowicy w hodowli komórkowej: Skład surowicy nie jest stały i zmienia się wraz z wiekiem płodu, pochodzeniem i sposobem żywienia zwierząt oraz porą roku. Poszczególne partie surowicy muszą być testowane pod kątem odpowiednich zastosowań przed użyciem. Wyniki doświadczeń często nie są przekonujące i porównywalne z powodu niezdefiniowanego i zmiennego składu surowicy. Ryzyko zakażenia bakteriami, grzybami, mykoplazmą i wirusami pochodzącymi z surowicy. Możliwość zanieczyszczenia produktu końcowego białkami i pirogenami pochodzącymi z surowicy. Czasochłonne oczyszczanie produktu końcowego z pożywki hodowlanej zawierającej surowicę. Dostępność i koszt surowicy. Hodowla bezsurowicza: Z powodu wielu wad hodowli komórkowej w pożywkach zawierających surowicę, od pewnego czasu prowadzono testy zmierzające do opracowania warunków hodowli komórkowych bez surowicy. Zalety bezsurowiczej hodowli komórkowej: Niskie ryzyko zakażenia bakteriami, grzybami lub wirusami. Lepiej zdefiniowany i powtarzalny skład pozwala na bardziej przekonujące i porównywalne wyniki badań. Nie jest konieczne czasochłonne testowanie poszczególnych partii produktu. Eliminacja źródła czynników potencjalnie infekcyjnych (wirusy, priony). Ułatwienie oczyszczania produktu końcowego. Spełnienie wymagań prawnych dotyczących produktów stosowanych w medycynie. Ograniczenie zanieczyszczeń produktu końcowego przez pozostałości pożywki hodowlanej. Definicje: Pożywki bezsurowicze: Pożywki bezsurowicze mogą być używane bez żadnych suplementów lub dodatku surowicy. W niektórych przypadkach mogą zawierać zdefiniowane i oczyszczone składniki lub subfrakcje surowicy (n.p. albumina, transferyna lub insulina), lub użyte hydrolizaty białek lub wydzielin gruczołów (BPE, BBE). Pożywki bezbiałkowe: Pożywki bezbiałkowe wspomagają wzrost komórek nie zawierając przy tym żadnych białek. Mają wyższą zawartość aminokwasów i hydrolizatów roślinnych. Pożywki chemicznie zdefiniowane: Pożywki chemicznie zdefiniowane są całkowicie wolne od składników zwierzęcych i ludzkich. Wszystkie składniki maja znaną, chemicznie zdefiniowaną budowę i skład. To prowadzi do bardzo stałego i stabilnego składu o pozytywnym wpływie na jakość, powtarzalność i zmniejszenie zmienności pomiędzy partiami. Zapewnienie jakości: Każda partia jest produkowana wyłącznie z uprzednio przetestowanych składników aby zapewnić stałą i najwyższą jakość. Jakość naszej wody wolnej od pirogenów jest regularnie badana aby zapewnić najwyższy poziom czystości (0,055 µS/cm), gdyż nawet najmniejsza zmiana jakości może mieć szkodliwy wpływ na komórki w hodowli bezsurowiczej. Wszystkie partie produktów Panserin są kierowane do sprzedaży dopiero po zakończeniu procesu kontroli jakości i otrzymaniu wymaganych specyfikacji. 1.2 NOWE TECHNOLOGIE Podczas wielu lat badań firma PAN-Biotech rozwinęła, zoptymalizowała i wprowadziła na rynek dużą liczbę bezsurowiczych mediów odpowiednich dla wielu typów komórek. Cały proces rozwoju i optymalizacji wymaga dużego nakładu pracy czasu. Od momentu rozpoczęcia procesu wytwarzania nowego produktu do jego wypuszczenia na rynek może minąć nawet kilka lat. Firma przy każdym nowym projekcie stara się spoglądać na dany problem z bardzo szerokiej perspektywy, starając się wykorzystać najlepsze, innowacyjne rozwiązania wybiegając, tym samym naprzeciw potrzebom klientów. Dzięki temu właśnie, stworzony został przez PANSystech (filia PAN-Biotech) w pełni zautomatyzowany system do hodowli komórkowych. PAN-SysTech został wydzielony jako technologiczny odłam z Pan-Biotech- biotechnologicznej firmy o długoletnim stażu i wyrobionej pozycji na rynku niemieckim. Aktulanie PAN-Systech GmbH jest głównym producentem, uwzględniającym najnowsze osiągnięcia nauki i techniki, rozprowadzającym swoje wyroby na całym świecie. PAN-Systech rozwija, produkuje i wprowadza na rynek szeroką paletę innowacyjnych biotechnologicznych systemów, ukierunkowanych głównie na hodowle komórkowe, włączając w to najnowsze aplikacje technologiczne dotyczące procesów biologicznych. Z pełni zautomatyzowanymi systemami do hodowli komórkowych można realizować całkowicie nowe technologie. Dzięki systemom możliwym stało się prowadzenie hodowli różnych komórek jednocześnie w kompletnie odbiegających od siebie warunkach i pod stałą obserwacją mikroskopową. Wszystkie wykonywane przez użytkownika czynności np. : dodawanie indywidualnych składników, ewentualnie zmiana ich koncentracji, wywoływanie pozytywnego (usprawnienie wzrostu) bądź negatywnego efektu (zahamowanie wzrostu) na wzrost komórek, mogą być bezpośrednio mierzone w tym systemie. Wszystkie otrzymane przez nas wyniki, dane mogą być przechowywane i później ponownie odtwarzane. Pojawiające się w komórkach zmiany morfologiczne są natychmiast identyfikowane i oceniane w zależności od składu medium. PANsys300 PANsys4000 Szczegółowe informacje dotyczące systemów zautomatyzowanej hodowli komórek PANsys3000 i PANsys4000 znajdują się na stronie www.pan-systech.com Zautomatyzowany system hodowli komórek oferuje wyjątkowe funkcje i wiele zalet do opracowania pożywek bezsurowiczych: Redukcję czasu rozwoju poprzez bardziej przekonujące rezultaty Dopasowywanie optymalnych stężeń indywidualnych substancji Porównanie pomiarów produktów konkurencyjnych i zapisywanie wyników Warunki hodowli(temperatura, CO2) mogą być zmieniane w dowolnym momencie Całkowita kontrola indywidualnych serii, partii Dzięki systemowi byliśmy w stanie nie tylko rozwinąć gotowe do użycia media (z serii PANSERIN) ale także media o chemicznie zdefiniowanym składzie (Panexin NTA i Panexin NTS), jak również szeroką gamę bezsurowiczych mediów do hodowli komórek macierzystych (serię –PowerStem). Rys.1 Komórki hodowane w Systemie PanSys Bezsurowcze, odżywcze media bez dodatku składników pochodzenia ludzkiego bądź zwierzęcego, podobnie bezbiałkowe media są również dostępne w asortymencie firmy PANBiotech. W odniesieniu do nowoczesnych i unikalnych technologii stosowanych do rozwoju bezsurowiczych mediów 2 generacji, nie jest wymagany proces adaptacji; jeśli chodzi o komórki wymagające ( np.komórki macierzyste), proces adaptacji do warunków bezsurowiczych trwa dłużej aczkolwiek nie jest problematyczny ze względu na istniejące szczegółowe zapisy i protokoły. W razie pojawienia się jakichkolwiek pytań, problemów, proszę kontaktować się z naszymi konsultantami. 1.3 SPIS MEDIÓW Media o chemicznie zdefiniowanym składzie Panexin NTA 100 ml 500 ml P04-95700 P04-95750 Panexin NTS 100 ml 500 ml P04-95800 P04-95850 Panexin BMM 100 ml P04-951SA2 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 500 ml 500 ml P04-710401M P04-710401 P04-710604M P04-710604 P04-710608M P04-710608 P04-710609M P04-710609 P04-714000M P04-714000 P04-716000M P04-716000 P04-718000M P04-718000 P04-710100 P04-710110 P04-710613M P04-710613 P04-710210 P04-710200 P04-850100 P04-850500 P04-00650 P04-0065K PANSERIN 411 100 ml 500 ml P04-710411M P04-710411 PANSERIN 411S 500 ml 1000 ml P04-7411S1 P04-71411S PANSERIN 412 PANSERIN 413 with one supplement PANSERIN 416 with one supplement PANSERIN 604ST PANSERIN 604SPF 100 ml 500 ml 500 ml 500 ml 500 ml 500 ml P04-710412M P04-710412 P04-710413 P04-710416 P04-604ST P04-604SPF PANSERIN 701 PANSERIN 801 with 6 supplements PANSERIN PX10 100 ml 500 ml 500 ml 500 ml P04-710701M P04-710701 P04-710801 P04-710PX10 PANSERIN PX40 500 ml P04-710PX40 Media bezsurowicze ,,High Efficiency’’ PANSERIN 401 PANSERIN 604 PANSERIN 293A PANSERIN 293S PANSERIN H4000 PANSERIN C6000 PANSERIN H8000 PANSERIN T3 PANSERIN ProVero PANSERIN S2 SPODOPAN Endopan 300 SL ready-to-use Endopan 300 SL kit Inne media bezsurowicze Media bezsurowicze do hodowli komórek macierzystych PowerStem ESPro 1 with LIF 100 ml Kit 500 ml Kit P04-7701K P04-77010K PowerStem ESPro 1 without LIF 100 ml Kit 500 ml Kit P04-7751K P04-77510K PowerStem ESPro 2 with LIF 100 ml Kit 500 ml Kit P04-7702K P04-77020K PowerStem ESPro 2 without LIF 100 ml Kit 500 ml Kit P04-7762K P04-77620K PowerStem HE1 100 ml Kit 500 ml Kit P04-7711K P04-77110K PowerStem EST 100 ml Kit 500 ml Kit 100 ml Kit 500 ml Kit P04-7712K P04-77120K P04-77210K P04-77250K PowerStem MSC 100 ml Kit 500 ml Kit P04-77310K P04-77350K PowerStem HPSC 100 ml Kit 500 ml Kit P04-77410K P04-77450K PowerStem HE2 1.4. MEDIA O ZDEFINIOWANYM SKŁADZIE CHEMICZNYM 1.4.1. PANEXIN NTA Panexin NTA jest kompletnym, chemicznie zdefiniowanym substytutem surowicy do hodowli komórek adherentnych w pożywce bez surowicy. PANEXIN NTA został opracowany w unikalnej technologii i zawiera 3-wymiarowy system uwalniania (3D-SRS) dla optymalnego zapewnienia komórkom składników odżywczych i stymulatorów wzrostu. Gotowy do użytku, przygotowany sterylnie roztwór dodaje się do pożywki w końcowym stężeniu 10%. W sposób optymalny wspiera on rozwój wielu typów komórek adherentnych. Skład: Panexin NTA zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, hormony i czynniki przylegania w zoptymalizowanym stężeniu, oraz nowy 3-wymiarowy system uwalniania (3D-SRS). Nie zawiera czynników wzrostu lub nieokreślonych hydrolizatów i peptonów. Przydatność: Panexin NTA jest odpowiedni do hodowli różnych komórek adherentnych bez surowicy. Szczególne zalety: Panexin NTA może być wykorzystywany do różnych linii komórkowych, całkowicie zastępując FBS. Ze względu na starannie wybrane i przetestowane poszczególne składniki, partie Panexin NTA są bardzo jednorodne. W związku z tym złożone badania poszczególnych partii stosowane przy FBS mogą być pominięte w przypadku wykorzystania Panexin NTA. Dotychczas stosowane pożywki podstawowe mogą być nadal używane. Panexin NTA jest całkowicie zdefiniowany chemicznie i nie zawiera nieokreślonych peptonów lub hydrolizatów. Dzięki temu w hodowli bezsurowiczej interpretacja wyników badań nad efektami dodawanych czynników wzrostu jest łatwiejsza i bardziej rzetelna. W przypadku linii komórkowych, które wymagają specyficznych czynników wzrostu, należy je dodać w zwykłym stężeniu jak dotychczas. Stosowanie: W wielu przypadkach hodowla bez surowicy może być prowadzona bez złożonych procedur adaptacyjnych dla linii komórek adherentnych, takich jak HEK293, CHO, L929, 3T3A. • Rozmroź Panexin NTA w łaźni wodnej, w temperaturze 37°C. Unikaj wielokrotnego powtórnego zamrażania i rozmrażania. • Pokryj komórki trypsyną/EDTA (np. roztworem 0,25%). Kiedy komórki staną się kuliste i odczepią się od podłoża dodaj inhibitor w celu inaktywacji trypsyny (trawienie zachodzi szybciej w temperaturze 37°C). • Przenieś komórki do DPBS (bez Ca/Mg) i zwiruj je. Usuń supernatant sterylnie. • Zawieś komórki w pożywce podstawowej (RPMI 1640, DMEM lub innej) i policz liczbę komórek. • Dodaj sterylnie 10% Panexin NTA do pożywki podstawowej zamiast FBS. • Dodaj zawiesinę komórek do pożywki podstawowej uzupełnionej Panexin NTA . •Posiej komórki w zagęszczeniu 5’000-20’000 komórek/cm2. • Inkubuj komórki w zwykły sposób w inkubatorze w obecności CO2, w temperaturze 37°C. W zależności od rodzaju komórek optymalne stężenie Panexin NTA może się wahać pomiędzy 5 a 15%, porównywalnie do stężenia FBS stosowanego zazwyczaj. Optymalne stężenie Panexin NTA powinno być ustalone dla każdej linii komórkowej. Próby najlepiej rozpoczynać od 10%, ponieważ takie stężenie daje najlepsze wyniki w większości komórek. Jako podstawowej pożywki można użyć klasycznych pożywek, takich jak RPMI 1640, DMEM (z wysoką lub niską zawartością glukozy), DMEM/F12, IMDM itd. Należy upewnić się, że Lglutamina jest obecna w wystarczającym stężeniu (ewentualnie uzupełnić L-glutaminę). W zależności od rodzaju komórek, mogą wystąpić pewne różnice w morfologii lub tempie wzrostu w porównaniu do różnych standardowych pożywek. W hodowli komórek adherentnych w wielu przypadkach stosuje się pożywkę DMEM lub DMEM/F12. Dla tych kombinacji uzyskano najlepsze wyniki przy dodatku 5% 15% Panexin NTA. W przypadku bardziej wymagających komórek może być konieczna adaptacja do Panexin NTA. Instrukcje adaptacji do Panexin NTA: Głównym warunkiem pomyślnej adaptacji do hodowli bez surowicy są zdrowe komórki (wykazujące żywotność >90% w wykluczającym barwieniu błękitem trypanu), które powinny być zbierane w logarytmicznej fazie wzrostu. • Komórki zbierz w zwykły sposób. • Uzupełnij pożywkę podstawową 10% Panexin NTA = MedPAN (ostateczny roztwór pozostaje stabilny przez co najmniej 4 tygodnie w temperaturze 4°C ) • Uzupełnij pożywkę podstawową 10% FBS = MedFBS. 1) 75% MedFBS : 25% MedPAN • Posiej komórki 5’000 - 20’000 komórek/cm2. • Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj przy 90% konfluencji. • pasażuj komórki 2 - 3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 2) 50% MedFBS: 50% MedPAN • Posiej komórki w zagęszczeniu 5’000 - 20’000 komórek/cm2. • Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj przy 90% konfluencji. • pasażuj komórki 2 - 3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 3) 25% MedFBS: 75% MedPAN • Posiej komórki w zagęszczeniu 5’000 - 20’000 komórek/cm2. • Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj przy 90% konfluencji. • pasażuj komórki 2 - 3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 4) 100% MedPAN • Posiej komórki w zagęszczeniu 5’000 - 20’000 komórek/cm2. • Obserwuj komórki pod mikroskopem. W przypadku niektórych komórek adaptacja do warunków bez surowicy może być utrudniona lub wręcz niemożliwa. Następujące środki mogą ułatwić pomyślną adaptację: • Posiew większej ilości komórek (2 - 4 krotnie większa gęstość niż standardowo) • Dodanie czynników wzrostu (jeżeli wiadomo, jakie czynniki mają pozytywny wpływ na odpowiednie komórki). • Pokrycie szalek lub butelek hodowlanych czynnikami przylegania (takimi jak fibronektyna, laminina, kolagen, żelatyna lub inne). • Zmiana podstawowej pożywki. Warto zauważyć, że zmiana pożywki na bogatszą lub bardziej złożoną może całkowicie rozwiązać problemy związane z hodowlą bez surowicy. Rys.1 Wydajność i stymulacja wzrostu komórek pod wpływem PANEXIN NTA w porówaniu do FBS (każdy 10% w DMEM/F12) \tre bn CHO Cells 10% PANEXIN NTA in DMEM/F12 MDCK Cells 10% PANEXIN NTA in DMEM/F12 HEK 293 Cells 10% PANEXIN NTA in DMEM/F12 Primary human Fibroblasts 10% PANEXIN NTA in DMEM/F12 Rys.2 Różne typy linii komórkowych w DMEM/F12 z dodatkiem 10% PANEXIN NTA REFERENCJE: a) Hashimoto J et al. (2006) Regulation of Proliferation and Chondrogenic Differentation of Human Mesenchymal Stem Cells by Laminin-5 (Laminin-332). Stem Cells 24:2346 b) Traeger T et al. (2008) Detrimental Role of CC Chemokine Receptor 4 in Murine Polymicrobial Sepsis. Infection and Immunity 11:5285 PANEXIN NTA 100 ml 500 ml P04-95700 P04-95750 1.4.2. PANEXIN NTS Panexin NTS jest kompletnym, chemicznie zdefiniowanym substytutem surowicy do hodowli komórek w zawiesinie w pożywce bez surowicy. PANEXIN NTS został opracowany w unikalnej technologii i zawiera 3-wymiarowy system uwalniania (3D-SRS) dla optymalnego zapewnienia komórkom składników odżywczych i stymulatorów wzrostu. Gotowy do użytku, przygotowany sterylnie roztwór dodaje się do pożywki w końcowym stężeniu 10%. W sposób optymalny wspiera on rozwój wielu typów komórek. Skład: Zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe i hormony w zoptymalizowanym stężeniu oraz nowy 3-wymiarowy system uwalniania (3D-SRS). Nie zawiera czynników wzrostu lub nieokreślonych hydrolizatów i peptonów. Przydatność: Hodowla różnych komórek w zawiesinie bez surowicy. Szczególne zalety: Panexin NTS może być wykorzystywany do różnych linii komórkowych, całkowicie zastępując FBS. Ze względu na wybrane i przetestowane poszczególne składniki, partie Panexin NTS są bardzo jednorodne. W związku z tym złożone badania poszczególnych partii stosowane przy FBS mogą być pominięte w przypadku wykorzystania Panexin NTS. Dotychczas stosowane pożywki podstawowe mogą być nadal używane. Panexin NTS jest całkowicie zdefiniowany chemicznie i nie zawiera żadnych czynników wzrostu, nieokreślonych peptonów lub hydrolizatów. Dzięki temu w hodowli bezsurowiczej interpretacja wyników badań nad efektami dodawanych czynników wzrostu jest łatwiejsza i bardziej rzetelna. W przypadku linii komórkowych, które wymagają specyficznych czynników wzrostu, należy je dodać w zwykłym stężeniu tak jak dotychczas. Stosowanie: W wielu przypadkach hodowla bez surowicy może być zastosowana bez złożonych procedur adaptacyjnych (w wielu ustalonych liniach komórkowych hodowanych w zawiesinie, takich jak HL60, K562 i komórkach hybrydoma). • Rozmroź Panexin NTS w łaźni wodnej, w temperaturze 37°C. Unikaj wielokrotnego powtórnego zamrażania i rozmrażania. • Komórki nieadherentne mogą być bezpośrednio przeniesione do pożywki (np. RPMI 1640, IMDM) uzupełnionej 10% Panexin NTS. • Posiej komórki w zagęszczeniu 5 x 104 - 1 x 105 komórek/ml. W zależności od rodzaju komórek optymalne stężenie Panexin NTS może się wahać pomiędzy 5 a 15%, porównywalnie do stężenia FBS stosowanego zazwyczaj. Optymalne stężenie Panexin NTS powinno być ustalone dla każdej linii komórkowej. Próby najlepiej rozpoczynać od 10%, ponieważ takie stężenie daje najlepsze wyniki w większości komórek. Jako podstawowej pożywki można użyć klasycznych pożywek, takich jak RPMI 1640, DMEM (z wysoką lub niską zawartoscią glukozy), DMEM/F12, IMDM itd. Należy upewnić się, że Lglutamina jest obecna w wystarczającym stężeniu (ewentualnie uzupełnić L-glutaminę). W zależności od rodzaju komórek, mogą wystąpić pewne różnice w morfologii lub tempie wzrostu w przypadku różnych standardowych pożywek. W hodowli komórek nieadherentnych w wielu przypadkach stosuje się pożywkę RPMI 1640 lub IMDM. Dla tych kombinacji uzyskano najlepsze wyniki przy dodatku 5% 15% Panexin NTS. W przypadku bardziej wymagających komórek może być konieczna adaptacja do Panexin NTS. Instrukcje adaptacji do Panexin NTS: Głównym warunkiem pomyślnej adaptacji do hodowli bez surowicy są zdrowe komórki (wykazujące żywotność >90% w wykluczającym barwieniu błękitem trypanu), które powinny być zbierane w logarytmicznej fazie wzrostu. • Komórki zbierz w zwykły sposób. • Uzupełnij pożywkę podstawową 10% Panexin NTS = MedPAN (ostateczny roztwór pozostaje stabilny przez co najmniej 4 tygodnie w temperaturze 4°C ). • Uzupełnij pożywkę podstawową 10% FBS = MedFBS. 1) 75% MedFBS : 25% MedPAN • Posiej komórki 5 x 104 - 1 x 105 komórek/ml (np. 10 ml w butelce T25). • Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj w przypadku dobrej proliferacji (np. >1 x 106/ml). • Pasażuj komórki 2 - 3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 2) 50% MedFBS: 50% MedPAN • Posiej komórki 5 x 104 - 1 x 105 komórek/ml (np. 10 ml w butelce T25). • Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj w przypadku dobrej proliferacji (np. >1 x 106/ml). • Pasażuj komórki 2 - 3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 3) 25% MedFBS: 75% MedPAN • Posiej komórki 5 x 104 - 1 x 105 komórek/ml (np. 10 ml w butelce T25). • Obserwuj komórki pod mikroskopem, pasażuj w przypadku dobrej proliferacji (np. >1 x 106/ml). • Pasażuj komórki 2 - 3 krotnie w pożywce o takim samym składzie. Jeśli komórki wzrastają normalnie przenieś je do: 4) 100% MedPAN • Posiej komórki 5 x 104 - 1 x 105 komórek/ml (np. 10 ml w butelce T25). • Obserwuj komórki pod mikroskopem. W przypadku niektórych komórek adaptacja do warunków bez surowicy może być utrudniona lub wręcz niemożliwa. Następujące środki mogą ułatwić pomyślną adaptację: • Posiew większej ilości komórek (2 - 4 krotnie większa gęstość niż standardowo) • Zmiana podstawowej pożywki. Warto zauważyć, że zmiana pożywki na bogatszą lub bardziej złożoną może całkowicie rozwiązać problemy związane z hodowlą bez surowicy. Rys 1. Wydajność i stymulacja wzrostu komórek pod wpływem PANEXIN NTS w porównaniu do FBS (każdy w 10% RPMI) Ag8 Cells 10 % PANEXIN NTS in RPMI 1F7 Cells 10 % PANEXIN NTS in RPMI Rys.2 Różne linie komórkowe zawieszone w RPMI z dodatkiem 10% PANEXIN NTS SP2 Cells 10 % PANEXIN NTS in RPMI Referencje: a) Breitbach K et al. (2009) Caspase-1 Mediates Resistance in Murine Melioidosis. Infection and Immunity 4:1589 b) Into T et al. (2008) Regulation of MyD88-Dependent Signaling Events by S Nitrosylation Retards Toll-Like Receptor Signal Transduction and Initiation of Acute-Phase Immune Responses. Molecular and Cellular Biology 4:1338 PANEXIN NTS 100 ml 500 ml P04-95800 P04-95850 1.4.3. PANEXIN BMM Panexin BMM jest chemicznie zdefiniowanym substytutem surowicy do hodowli makrofagów ze szpiku kostnego myszy (makrofagi pochodzące z mysiego szpiku kostnego, murine bone marrow derived macrophages, BMM) w pożywce bez surowicy. Gotowy do użycia sterylny roztwór jest dodawany do pożywki podstawowej w końcowym stężeniu 5% (pożywka RPMI 1640, z dodatkiem 50µm Merkaptoetanolu i 2ng/ml GM-CSF). Skład: Zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, hormony i czynniki przylegania w zoptymalizowanym stężeniu. Nie zawiera czynników wzrostu lub nieokreślonych hydrolizatów i lizatów (np. peptonów). Przydatność: Panexin BMM został opracowany do hodowli mysich makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego w pożywce bez surowicy. Pozwala to na uzyskanie ustalonych warunków hodowli i powtarzalnych wyników. Szczególne korzyści: Panexin BMM został opracowany do hodowli mysich makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego w pożywce bez surowicy, w ustandaryzowanych warunkach. Wyniki będą bardziej porównywalne gdyż niezdefiniowane składniki obecne w hodowlach z surowicą są wyeliminowane. W Panexin BMM dojrzałe makrofagi wykazują doskonałą przyczepność do podłoża. Zastosowanie: Do hodowli w pożywce bez surowicy należy dodać 5% Panexin BMM do RPMI 1640, uzupełniony o 50µm merkaptoetanol i 2ng/ml GM-CSF (rekombinowane, mysie). Po izolacji szpiku myszy, zawiesić pojedyncze komórki w pożywce poprzez częste pipetowanie, następnie odwirować komórki przez 10 minut, 200 xg. Ponownie zawiesić wyizolowane komórki w pożywce bez surowicy i posiać komórki w 20 ml pożywki, w trzech 75 mm2 butelkach hodowlanych. Hodować w inkubatorze w temperaturze 37°C i 5% CO2. Odżywianie komórek powinno być przeprowadzone 5 i 7 dnia hodowli przez wymianę 10 ml pożywki na świeżą pożywkę. Po upływie 10 dni komórki mogą być zebrane. Referencje: a) Kristin Eske, Katrin Breitbach, Jens Kohler, Patimaporn Wongprompitak and Ivo Steinmetz (2008) Genartion of murine bone marrow derived macrophages in a standard serum-,free cell culture system,Journal of immunological Methods. 100 ml PANEXIN BMM P04-951SA2 1.5. MEDIA BEZSUROWICZE (HIGH EFFICIENCY MEDIA) 1.5.1. PANSERIN 401 Panserin 401 jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli wielu adherentnych i nieadherentnych komórek bez surowicy. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2°C do +8°C Stabilność: 10 miesięcy Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Na bazie MEM Iscove (IMEM), z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych i witamin. Nie zawiera żadnych czynników wzrostu ani przylegania. Przydatność: Panserin 401 jest uniwersalną pożywką odpowiednią dla różnych typów komórek. W Panserin 401 mogą być hodowane komórki adherentne i nieadherentne. Dzięki temu że nie zawiera czynników wzrostu, istnieje możliwość zbadania efektu specjalnie dodanych czynników wzrostu na hodowle komórek. Panserin 401 nie zawiera żadnych czynników przylegania. W przypadku niektórych typów komórek wstępne przygotowanie naczyń hodowlanych przez pokrycie żelatyną, kolagenem, poli-D-lizyną lub fibronektyną może umożliwić wzrost komórek w tej pożywce lub znacznie ułatwić ich wzrost. Wstępne przygotowanie naczyń hodowlanych jest szczególnie ważne przy zakładaniu hodowli o małej gęstości. Przy każdym dostosowywaniu do pożywki bez surowicy, należy brać pod uwagę zmiany w komórkach. Zmiany te mogą dotyczyć morfologii, kariotypu, markerów powierzchniowych itd. Komórki rosnące w pożywce bez surowicy nie zawsze wyglądają tak samo jak te same komórki rosnące w pożywce z dodatkiem surowicy z których wyprowadziliśmy hodowle. Między innymi następujące komórki były pomyślnie hodowane w pożywkach bez surowicy: • Hybrydoma • Limfocyty • Makrofagi • Fibroblasty • Melanocyty • Komórki rakowe • Komórki HEK • Komórki HeLa • Komórki CHO Zastosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki jej nie zawierającej można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce z surowicą, a następnie stopniowe jej zamienianie na jej substytuty bezsurowicze. Możemy dostarczyć Państwu wiele protokołów adaptacyjnych dla wielu typów komórek. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości oraz jeśli zmiana pożywki na tę o niższej zawartości surowicy będzie przeprowadzona po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami daje to większe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny). Dla pewnych typów komórek najlepszym rozwiązaniem może być adaptacja przez stopniowe zmniejszanie stężenia nie tylko surowicy, ale również pożywki w której komórki były dotychczas hodowane. Pożywki Panserin zostały opracowane w celu wsparcia wzrostu komórek bez użycia surowicy. Z tego powodu uniwersalna pożywka (Panserin 401) nie zawiera żadnych czynników wzrostu. Dla komórek, które są uzależnione od konkretnych czynników wzrostu należy dodać te czynniki w wymaganym stężeniu. SP2/0-Ag-14 in Panserin 401 Bez wcześniejszej adaptacji L 929 in Panserin 401 Bez wcześniejszej adaptacji Referencje: a) Pilar S et al. (2002) Contribution of CD3γ to TCR regulation and signaling in human mature T lymphocytes. International Immunology 11:1357 b) Toptan T et al. (2010) Rhadinovirus vector-derived human telomerase reverse transcriptase expression in primary T cells. Gene Therapy 17:653 c) Martin F et al. (2005) Lentiviral vectors transcriptionally targeted to hematopoietic cells by WASP gene proximal promotor sequences. Gene Therapy 12:715 d) Montzka K et al. (2010) Expansion of human bone marrow-derived mesenchymal stromal cells: serum-reduced medium is better than conventional medium. Cytotherapy 5:587 Jeśli potrzebujesz więcej referencji zapraszamy na stronę: www.pan-biotech.de. PANSERIN 401 100 ml 500 ml P04-710401M P04-710401 1.5.2 PANSERIN 604 Panserin 604 jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli transfekowanych i nie transfekowanych komórek CHO (jajnik chomika chińskiego) w hodowli adherentnej. Skład: Na bazie pożywki Glasgow, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin, hormonów i czynników przylegania. Przydatność: Hodowla transfekowanych i nie transfekowanych komórek CHO w hodowli adherentnej. Zalety: Wysoko wzbogacona pożywka do szybkiego wzrostu i hodowli komórek adherentnych CHO. Stosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do Panserin 406 można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce z surowicą i stopniową jej zamianę na Panserin 406. To stopniowe dostosowanie komórek będzie szybciej zachodziło jeśli będziemy zakładać hodowle z większego stężenia komórek oraz gdy będziemy wymieniać pożywkę po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywki bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu. Zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych powinniśmy być pewni, że - jeśli używaliśmy trypsyny do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory trypsyny. W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin 604 można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zaleca się hodowlę pierwotną w pożywce Panserin 604 z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe jej zamienianie na czystą pożywkę Panserin 604. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości oraz jeśli zmiana pożywki na tę o niższej zawartości surowicy będzie przeprowadzona po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu -zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny . PANSERIN 604 100 ml P04-710604M 500 ml P04-710604 1.5.3. PANSERIN 293A Panserin 293A jest kompletną, gotową do użycia pożywką nie zawierającą surowicy do hodowli adherentnej komórek HEK-293 Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2°C do +8°C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Na bazie DMEM, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin, hormonów i czynników wzrostu. Przydatność: Panserin 293A jest szczególnie wzbogaconą, optymalną pożywką dla wzrostu komórek HEK-293 w hodowli adherentnej. Komórki HEK- 293 są często stosowane do ekspresji rekombinowanych białek i namnażania adenowirusów. Panserin 293A wspomaga szybką adhezję i gwarantuje wysokie tempo wzrostu komórek. Stosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin 293A można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zaleca się założenie hodowli pierwotnej w pożywce z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe jej zamienianie na pożywkę Panserin 293A bez surowicy. Hodowla komórek bez surowicy jest bardziej wydajna przy większej ich gęstości. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu zgodnie z naszymi doświadczeniami daje to większe szanse na sukces. W przypadku transferu komórek należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny. PANSERIN 293A 100 ml 500 ml P04-710608M P04-710608 1.5.4. PANSERIN 293S Panserin 293S jest kompletną, gotową do użycia pożywką nie zawierającą surowicy, odpowiednią do hodowli komórek HEK-293 w zawiesinie. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2°C do +8°C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Na bazie DMEM/F12, z dodatkiem pierwiastków śladowych, cholesterolu, i hydrolizatów roślinnych. Panserin 239S nie zawiera żadnych białek ani składników pochodzenia ludzkiego ani zwierzęcego. Przydatność: Panserin 293S jest szczególnie wzbogaconą optymalną pożywką dla wzrostu komórek HEK-293 w zawiesinie i szybko prowadzi do ich dużej gęstości. Dzięki specjalnemu bezbiałkowemu składowi oczyszczanie końcowego produktu (rekombinowane białka, wirusy) może być wykonane łatwiej i taniej. Zlepianie się komórek zachodzi znacznie rzadziej niż w przypadku innych pożywek bezsurowiczych. Stosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin 293S można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zaleca się założenie hodowli pierwotnej w pożywce z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe jej zamienianie na pożywkę Panserin 293S bez surowicy. Hodowla komórek bez surowicy jest bardziej wydajna przy większej ich gęstości. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu zgodnie z naszymi doświadczeniami daje to większe szanse na sukces. Rys 1. Wykres ukazujący wzrost komórek HEK293 w PANSERIN 293S. PANSERIN 293S 100 ml 500 ml P04-710609M P04-710609 1.5.5. PANSERIN H4000 Panserin H4000 jest to pożywka bezbiałkowa gotowa do użycia, zoptymalizowana do wzrostu szpiczaka i komórek hybrydoma w hodowli zawiesinowej do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Panserin H4000 jest przeznaczona do hodowli tkankowych i komórkowych w bioreaktorach. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2°C do +8°C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Panserin H4000 zawiera zrównoważoną mieszankę soli, aminokwasów, witamin, pierwiastków śladowych, hormonów i jest wzbogacona o wybrane hydrolizaty roślinne w celu optymalizacji wzrostu szpiczaka i linii komórkowych hybrydoma. Ponieważ pożywka Panserin H4000 jest wolna od składników pochodzenia ludzkiego i zwierzęcego, jest szczególnie przeznaczona do użytku w newralgicznych obszarach produkcyjnych (np. produkcja narzędzi diagnostycznych lub terapeutycznych), gdzie wymogi bezpieczeństwa zakazują stosowania składników ludzkich lub zwierzęcych. Przydatność: Hodowla szpiczaka i lini komórkowych hybrydoma do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Szczególne zalety: Skład bezbiałkowy Panserin H4000 z niskim stężeniem hydrolizatów roślinnych umożliwia wysokie zbiory komórek w połączeniu z doskonałą wydajnością produkcji przeciwciał monoklonalnych. Gotowa do użycia, wolna od białek pożywka pozwala na łatwość użytkowania, a w związku z tym zmniejsza ryzyko zanieczyszczenia i zapewnia proste i niedrogie oczyszczanie produktów końcowych w dalszych procesach. Stosowanie: Dostosowanie do hodowli bezbiałkowej. Większość linii komórkowych hybrydoma może być bezpośrednio przenoszona z pożywki zawierającej surowicę do Panserin H4000. Należy zauważyć, że gęstość posiewu powinna wynosić co najmniej 1 - 3 x 105 komórek. Dla cholesterolozależnych komórek (np. X63AG8.653) należy zastosować Panserin H8000 (nr kat.: P04-718000). Bezpośrednia adaptacja do Panserin H4000: • Użyj komórek w fazie logarytmicznej (80% maksymalnej gęstości) rosnących na pożywce z dodatkiem surowicy (np. RPMI 1640 z dodatkiem 10% FBS). • Określ liczbę komórek i ich żywotność wybarwiając komórki błękitem trypanu. • Posiej ok. 1 - 3 x 105 komórek/ml w ogrzanej pożywce Panserin H4000. • Inkubuj komórki w inkubatorze w temperaturze 37°C i 5% CO2. • Po osiągnięciu ok. 80% maksymalnego zagęszczenia komórek przenieś je do świeżej pożywki Panserin H4000. Początkowo utrzymuj wysoką gęstości posiewu aż komórki dostosują się do pożywki bezbiałkowej. • Gdy tempo wzrostu jest porównywalne z hodowlą z dodatkiem surowicy, komórki należy przenosić do świeżej pożywki Panserin H4000 co 3 - 4 dni. • Jeśli tempo wzrostu nie jest wystarczające lub maksymalna gęstość komórek nie została osiągnięta, należy wykonać opisaną poniżej pośrednią adaptację. Pośrednia adaptacja do Panserin H4000: • Użyj komórek w fazie logarytmicznej (80% maksymalnej gęstości) rosnących w pożywce z dodatkiem surowicy (na przykład RPMI 1640 z 10% FBS). • Określ liczbę komórek i ich żywotność wybarwiając komórki błękitem trypanu. • Posiej ok. 1 - 3 x 105 komórek/ml w ogrzanej pożywce Panserin H4000 z dodatkiem 5% FBS. • Inkubuj komórki w inkubatorze w temperaturze 37°C i 5% CO2. • Po osiągnięciu ok. 80% maksymalnego zagęszczenia komórek przenieś je do świeżej pożywki Panserin H4000 z dodatkiem 2% FBS. • Podczas następnego transferu użyj Panserin H4000 z dodatkiem 1% FBS, a ostatecznie Panserin H4000 z dodatkiem 0,1% FBS (w taki sam sposób jak opisano powyżej). Gdy tempo wzrostu jest porównywalne z hodowlą z dodatkiem surowicy, należy przenosić komórki do świeżej pożywki Panserin H4000 bez dodatku FBS co 3 - 4 dni. PANSERIN H4000 100 ml 500 ml P04-714000M P04-714000 1.5.6. PANSERIN C6000 Panserin C6000 jest gotową do użycia pożywką bezbiałkową do zoptymalizowanego wzrostu komórek CHO i ich rekombinowanych pochodnych w hodowli zawiesinowej. Komórki te są często wykorzystywane do produkcji rekombinowanych białek dla celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Panserin C6000 jest odpowiednia do hodowli w butelkach hodowlanych i w bioreaktorach. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2°C do +8°C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Panserin C6000 jest zrównoważoną mieszanką soli, aminokwasów, witamin, pierwiastków śladowych, hormonów i jest wzbogacona o wybrane hydrolizaty roślinne w celu optymalizacji wzrostu komórek CHO w hodowli zawiesinowej. Ponieważ pożywka Panserin C6000 jest wolna od składników pochodzenia ludzkiego i zwierzęcego, jest szczególnie przeznaczona do użytku w newralgicznych obszarach produkcyjnych (np. produkcja narzędzi diagnostycznych lub terapeutycznych), gdzie wymogi bezpieczeństwa zakazują stosowania składników ludzkich lub zwierzęcych. Przydatność: Hodowla bezbiałkowa komórek CHO i ich rekombinowanych pochodnych w hodowli zawiesinowej, do produkcji rekombinowanych białek dla celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Szczególne zalety: Opracowana przez naszą firmę pożywka bezbiałkowa Panserin C6000 z niskim stężeniem hydrolizatów roślinnych umożliwia wysoką całkowitą liczbę komórek w połączeniu z doskonałą szybkością produkcji rekombinowanych białek. Gotowa do użycia kompletna pożywka bezbiałkowa pozwala na łatwą obsługę hodowli, w związku z tym zmniejsza ryzyko zanieczyszczenia i zapewnia proste i niedrogie oczyszczanie produktów końcowych. Ze względu na zoptymalizowany skład Panserin C6000 komórki rozwijają się i wzrastają w zawiesinie nie tworząc agregatów. Stosowanie: Dostosowanie do hodowli w pożywce bezbiałkowej. Większość adherentnych komórek CHO może być bezpośrednio przenoszona z pożywki zawierającej surowicę do hodowli zawiesinowej w pożywce bezbiałkowej. W większości przypadków hodowla komórek w zawiesinie rozwija się w przeciągu 2 tygodni. Bezpośrednia adaptacja do Panserin C6000: • Użyj adherentnych komórek w fazie logarytmicznej rosnących na pożywce z dodatkiem surowicy (na przykład DMEM z wysoką zawartością glukozy i 10% FBS). • Usuń pożywkę zawierającą surowicę za pomocą pipety. • Komórki przemyj PBS (bez Ca/Mg). • Pokryj komórki trypsyną/EDTA (0,25%, 0,02%), (około 2 ml na butelkę T25). • Usuń trypsynę po około 1 minucie. • Inkubuj komórki dopóki nie zrobią się kuliste i nie odczepią się od podłoża (po około 5 minutach). • Komórki przenieś do PBS i policzyć liczbę komórek. • Posiej 5 x 104 - 1 x 105 komórek/ml w ogrzanej pożywce Panserin C6000. Użyj naczyń do hodowli komórek w zawiesinie (np. Greiner Bio-One Code 690 190). • Inkubuj w temperaturze 37°C i 5% CO2 w inkubatorze. W ciągu kilku pierwszych dni komórki pozostaną w fazie spoczynku, gdzie często nie zachodzi proliferacja komórek. Po około 7 dniach komórki przyzwyczają się do pożywki bezbiałkowej i rozmnożą się do 1 x 106 komórek/ml. Przenoś komórki co 3 do 4 dni do świeżej pożywki. (Gęstość zasiewu 3 - 5 x 104 komórek/ml). Okres podwojenia komórek CHO w Panserin C6000: 16.5 godziny. PANSERIN C6000 100 ml 500 ml P04-716000M P04-716000 1.5.7. PANSERIN H8000 Panserin H8000 jest gotową do użycia pożywką bezbiałkową do zoptymalizowanego cholesterolozależnego wzrostu szpiczaka i komórek hybrydoma w hodowli zawiesinowej do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Panserin H8000 jest odpowiedni do prowadzenia hodowli w bioreaktorach tkankowych i komórkowych. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2°C do +8°C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Panserin H8000 składa się ze zrównoważonej mieszanki soli, aminokwasów, witamin, pierwiastków śladowych, hormonów, biodostępnego cholesterolu i jest wzbogacona o wybrane roślinne hydrolizaty w celu optymalizacji wzrostu cholesterolozależnych komórek szpiczaka i hybrydomy. Przydatność: Hodowla cholesterolozależnych komórek szpiczaka i hybrydomy do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Szczególne zalety: Specjalnie opracowana pożywka bezbiałkowa Panserin H8000 o niskim stężeniu hydrolizatów roślinnych umożliwia wysoką całkowita liczbę komórek w połączeniu z doskonałą wydajnością produkcji przeciwciał monoklonalnych. Panserin H8000 nie zawiera składników pochodzenia zwierzęcego i ludzkiego i jest przeznaczony do użytku w newralgicznych obszarach produkcyjnych (np. produkcja narzędzi diagnostycznych lub terapeutycznych), gdzie wymogi bezpieczeństwa zakazują stosowania składników pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego. Gotowa do użycia kompletna pożywka bezbiałkowa pozwala na łatwą obsługę hodowli, w związku z czym zmniejsza ryzyko zakażenia i zapewnia proste i niedrogie oczyszczanie produktów końcowych. Stosowanie: Dostosowanie do hodowli w pożywce bezbiałkowej. Większość linii komórkowych hybrydoma może być bezpośrednio przenoszona z pożywki zawierającej surowicę do hodowli zawiesinowej w pożywce bezbiałkowej. Należy zauważyć, że gęstość posiewu powinna wynosić co najmniej 1 – 3 x 105 komórek. Bezpośrednia adaptacja do Panserin H8000: • Użyj komórek hodowanych pożywce z surowicą, (np. RPMI 1640 z 10% FBS) w logarytmicznej fazie wzrostu (80% maksymalnej gęstość komórek). • Określ liczbę komórek i żywotność za pomocą barwienia wykluczającego błękitem trypanu. • Posiej 1 - 3 x 105 komórek / ml w ogrzanej pożywce Panserin H8000. • Inkubuj komórki w inkubatorze w temperaturze 37°C i 5% CO2. • Po osiągnięciu około 80% maksymalnego zagęszczenia przenieś komórki do świeżej pożywki Panserin H8000. Utrzymuj wysoką gęstość posiewu aż komórki dostosują się do pożywki bezbiałkowej. • Gdy tempo wzrostu jest porównywalne z hodowlą w pożywce z surowicą należy przenosić komórki do świeżej pożywki Panserin H8000 co 3 - 4 dni. • Jeśli tempo wzrostu nie jest wystarczające lub maksymalna gęstość komórek nie została osiągnięta, należy wykonać opisaną poniżej pośrednią adaptację do pożywki bezbiałkowej. Pośrednia adaptacja do Panserin H8000: • Użyj komórek hodowanych pożywce z surowicą, (np. RPMI 1640 z 10% FBS) w logarytmicznej fazie wzrostu (80% maksymalnej gęstość komórek). • Określ liczbę komórek i żywotność za pomocą barwienia wykluczającego błękitem trypanu. • Posiej 1 - 3 x 105 komórek / ml w ogrzanej pożywce Panserin H8000 z dodatkiem 5% FBS. • Inkubuj komórki w inkubatorze w temperaturze 37°C i 5% CO2. • Po osiągnięciu około 80% maksymalnego zagęszczenia przenieś komórki do świeżej pożywki Panserin H8000 z dodatkiem 2% FBS. • Podczas następnego transferu użyj Panserin H8000 z dodatkiem 1% FBS, a ostatecznie Panserin H8000 z dodatkiem 0,1% FBS (w taki sam sposób jak opisano powyżej). • Gdy tempo wzrostu jest porównywalne z hodowlą w pożywce z surowicą należy przenosić komórki do świeżej pożywki Panserin H8000 bez dodatku FBS co 3 - 4 dni. PANSERIN H8000 100 ml 500 ml P04-718000M P04-718000 1.5.8. PANSERIN T3 Panserin T3 jest gotową do użycia pożywką bez surowicy do hodowli komórek 3T3A w hodowli zawiesinowej. Skład: Panserin T3 jest w pełni zdefiniowaną, kompletną pożywką bez surowicy. Na bazie MEM Iscove (IMEM), z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych i witamin. Nie zawiera żadnych czynników wzrostu lub przylegania. Przydatność: Panserin T3 została opracowana do hodowli fibroblastów mysich (3T3A) w zawiesinie bez surowicy. Stosowanie: Przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin T3 jest zwykle możliwe bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Proces ten zachodzi łatwiej jeśli komórki są wysiewane w dużej gęstości (około 105 komórek/ml). Ważne jest, aby hodowle prowadzić w butelkach hodowlanych. Przez kilka pierwszych pasaży w hodowli bezsurowiczej tempo wzrostu jest niskie, ale później osiąga wysoki poziom. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli do pożywki bez surowicy. Tak więc komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu. Zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. 600000 500000 Zellen/ml 400000 300000 200000 100000 0 0 1 2 3 4 5 6 7 Fig. 2 Komórki 3T3 w Panserin T3 Tage Rys. 1: Wzrost komórek 3T3 w Panserin T3 PANSERIN T3 100 ml 500 ml P04-710100 P04-710110 1.5.9. PANSERIN ProVero Panserin ProVero jest kompletną, gotową do użycia pożywką bez surowicy do hodowli komórek adherentnych Vero (komórki nabłonka z nerki koczkodana zielonego). Skład: Na bazie DMEM/F12, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin, hormonów i czynników przylegania. Przydatność: Panserin ProVero został opracowany do hodowli komórek adherentnych Vero. Stosowanie: W wielu przypadku przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin ProVero może być przeprowadzone bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce Panserin ProVero z dodatkiem surowicy, a następnie jej stopniowe zastępowanie pożywką bez surowicy. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości oraz jeśli zmiana pożywki na tę o niższej zawartości surowicy będzie przeprowadzona po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywki bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu. Zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny). cell/ml Growth of Vero cells in Panserin ProVero 6,00E+05 5,00E+05 4,00E+05 3,00E+05 2,00E+05 1,00E+05 0,00E+00 Panserin ProVero DMEM/F12 + 10% FBS 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Days Rys.1 Wzrost komórek Vero w Panserin ProVero PANSERIN ProVero Rys. 2 Komórki Vero w Panserin ProVero 100 ml 500 ml P04-710613M P04-710613 1.5.10. PANSERIN S2 Panserin S2 jest pożywką bezbiałkową optymalną dla wzrostu owadzich komórek S2 (muszki owocowej Drosophila) w kulturze zawiesinowej. Komórki owadów są szeroko stosowane w produkcji przemysłowej rekombinowanych białek. Skład: Panserin S2 zawiera aminokwasy, witaminy, sole, pierwiastki śladowe, lipidy i czynniki wspomagające wzrost w stężeniu zoptymalizowanym dla wzrostu komórek owadzich. Nie zawiera białek lub innych składników pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego. Przydatność: Panserin S2 jest odpowiednia do hodowli komórek Drosophila S2 i produkcji rekombinowanych białek (np. Baculovirus expression vector system, BEVS). Szczególne zalety: Panserin S2 jako pożywka bezbiałkowa jest wolna od składników pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego. Pozwala to na wytwarzanie rekombinowanych białek do celów medycznych i terapeutycznych. Ułatwia również łatwiejsze i tańsze oczyszczanie produktów końcowych z hodowli komórkowej. Panserin S2 gwarantuje wysoką gęstość i żywotność komórek ze zwiększoną produkcją białek rekombinowanych (BEVS). Zastosowanie: Dostosowanie do hodowli bezbiałkowych Optymalny zakres temperatur dla większości owadzich komórek to 25°C - 30°C (inkubacja 27°C ± 0,5°C). pH hodowli komórek Lepidoptera powinno wynosić od pH 6,0 do pH 6,4. Ciśnienie osmotyczne powinno być w zakresie 345 - 380 mOsm/kg. Dla optymalnego zaopatrzenia w tlen, należy lekko odkręcić zakrętki naczyń hodowlanych. Dostosowanie do hodowli bezbiałkowej Komórki owadzie które rosną na pożywce z surowicą powinny być zaadaptowane do pożywki bezbiałkowej. Można to zrobić przez dostosowanie bezpośrednie lub stopniowe. Komórki do hodowli zawiesinowej powinny pochodzić z połowy wykładniczej fazy wzrostu, o żywotności ponad 90% (barwienie wykluczające błękitem trypanu). Adaptacja bezpośrednia do Panserin S2: • Przenieś komórki (w gęstości 1-2 x 106 komórek/ml) z pożywki zawierającej surowicę (np. Schneider’s Drosophila Medium, FBS 5 - 10%) bezpośrednio do ogrzanej (27°C) pożywki bezbiałkowej Panserin S2. • Kiedy hodowla osiągnie gęstość > 4 x 106 komórek/ml (po 4 - 7 dniach) przepasażuj komórki (w gęstości 5 x 105 - 1 x 106 komórek/ml) do świeżej pożywki. •Powtarzaj aż do uzyskanie żywotności co najmniej 80%. Uwaga: Komórki S2 rosną słabo przy gęstości mniejszej niż 5 x 105 komórek/ml Adaptacja pośrednia do Panserin S2 : • Hoduj komórki w mieszaninie pożywki zawierającej surowicę i Panserin S2 w stosunku 1:1, w gęstości 1-2 x 106 komórek/ml. • Gdy hodowla osiągnie gęstość > 4 x 106 komórek/ml załóż hodowlę dodając do używanej mieszaniny pożywek świeżej pożywki Panserin S2 w stosunku 1 : 1 • Powtarzaj tę procedurę, aż stężenie surowicy spadnie poniżej 0,1% a żywotność komórek osiągnie >80%. Liczba komórek powinna przekraczać 5 x 106 komórek/ml. • W celu utrzymania hodowli pasażuj komórki S2 w stosunku 1:2-1:5 kiedy gęstość osiągnie pomiędzy 6 a 20 x 106 komórek/ml. Rys 1. Komórki Drosophila S2 w Panserin S2 Drosophila S2 6 cell/ml (x10E6) 5 4 Drosophila Medium +FBS 3 Panserin S2 2 1 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 days PANSERIN S2 100 ml 500 ml P04-710210 P04-710200 1.5.11. SPODOPAN Spodopan jest bezbiałkową pożywką dla optymalnego wzrostu komórek owadzich takich jak Sf9 i Sf21 (Spodoptera frugiperda) w hodowli zawiesinowej. Komórki owadów są często wykorzystywane do celów przemysłowych do produkcji białek rekombinowanych. Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2°C do +8°C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Spodopan zawiera aminokwasy, witaminy, sole, pierwiastki śladowe, lipidy i czynniki wspomagające wzrost komórek owadzich. Nie zawiera białek i innych składników pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego. Przydatność: Spodopan nadaje się do hodowli komórek owadów i produkcji białek (np. Baculovirus expression vector system, BEVS). Szczególne zalety: Spodopan jako pożywką bezbiałkową wolną od składników pochodzenia ludzkiego lub zwierzęcego. To pozwala na wytwarzanie rekombinowanych białek do celów medycznych i terapeutycznych. Ułatwia również łatwiejsze i tańsze oczyszczanie produktów końcowych hodowli komórkowej. Spodopan gwarantuje wysoką gęstość komórek ze zwiększoną produkcją białek rekombinowanych (BEVS). Stosowanie: Dostosowanie do hodowli bezbiałkowych Optymalny zakres temperatur dla większości komórek owadzich to 25°C - 30°C (inkubacja 27°C ± 0,5°C). pH hodowli komórek Lepidoptera powinno wynosić od pH 6,0 do pH 6,4. Ciśnienie osmotyczne powinno wynosić w zakresie 345 - 380 mOsm/kg. Dla optymalnego zaopatrzenia w tlen, należy lekko odkręcić zakrętki naczyń hodowlanych. Komórki owadzie, które rosną na pożywce z surowicą powinny być zaadaptowane do pożywki bezbiałkowej. Można to zrobić przez dostosowanie bezpośrednie lub stopniowe. Komórki do hodowli zawiesinowej powinny pochodzić z połowy wykładniczej fazy wzrostu o żywotności ponad 90% (barwienie wykluczające błekitem trypanu). Adaptacja bezpośrednia do Spodopan: • Przenieś komórki (o gęstości 5 x 105 komórek/ml) z pożywki zawierającej surowicę (np. TNMFH, FBS 5 - 10%) bezpośrednio do odgrzanej (27°C) pożywki bezbiałkowej Spodopan. • Kiedy hodowla osiągnie gęstość > 2 x 106 komórek/ml (po 4 - 7 dniach) przepasażuj komórki (o gęstości 5 x 105 komórek/ml) do świeżej pożywki. • Powtarzaj aż do uzyskania żywotności co najmniej 80% . Adaptacja pośrednia do Spodopan: • Hoduj komórki w pożywce zawierającej surowicę i Spodopan w stosunku 1:1. Wysiewaj komórki w gęstości 5 x 105 komórek/ml. • Gdy hodowla osiągnie gęstość komórek > 1 x 106 załóż hodowlę dodając do używanej mieszaniny pożywek świeżej pożywki Spodopan w stosunku 1 : 1 • Powtarzaj tę procedurę, aż stężenie surowicy spadnie poniżej 0,1% a żywotność komórek osiągnie >80%. Liczba komórek powinna przekraczać 1 x 106 komórek/ml. SPODOPAN 100 ml 500 ml P04-850100 P04-850500 1.5.12. ENDOPAN 300 SL ENDOPAN 300 SL jest pierwszą kompletną bezsurowiczą pożywką specjalnie opracowaną do hodowli in vitro ludzkich komórek śródbłonka, zawierającą wszystkie składniki niezbędne do optymalnego wzrostu tych komórek. Komórki śródbłonkowe wyściełają naczynia krwionośne i limfatyczne oraz wewnętrzną jamę serca. Mają silnie spłaszczony, wielokątny kształt i zazwyczaj spoczywają na błonie podstawnej. Przylegają do siebie nawzajem dzięki desmosomom i połączeniom ścisłym. Śródbłonek, składający się z około biliona (1012) komórek, jest jednym z największych organów ciała i odgrywa kluczową rolę w wielu procesach fizjologicznych i patofizjologicznych (m.in. komórkowej odpowiedzi immunologicznej, gojeniu ran, stanach zapalnych, alergii, chorobach sercowo-naczyniowych, wzroście nowotworów). Ogromna liczba czynników rozpuszczalnych krążących we krwi lub uwalnianych przez sąsiadujące komórki kontroluje proliferację i apoptozę komórek śródbłonkowych oraz inwazję i migrację leukocytów do śródbłonka, regulując w ten sposób utrzymanie, degenerację i regenerację naczyń krwionośnych. Skład i zastosowanie: ENDOPAN 300 SL jest gotową do użycia kompleksową pożywką bezsurowiczą, opracowaną specjalnie do hodowli in vitro ludzkich komórek śródbłonka i zawiera wszystkie składniki niezbędne dla optymalnego wzrostu tych komórek. Jest przeznaczona do stosowania w inkubatorze w temperaturze 37°C w atmosferze 5% CO2. Zestaw ENDOPAN 300 SL wyposażony jest w substytut surowicy (PANEXIN SL-S) i suplementy w oddzielnych sterylnych opakowaniach. ENDOPAN 300 SL został zaprojektowany do hodowli bez surowicy komórek śródbłonka bezpośrednio po izolacji. Ta wyjątkowa pożywka jest zoptymalizowana pod kątem utrzymania i rozwoju komórek śródbłonka w warunkach hodowli bez surowicy. Komórki HUVEC hodowane w ENDOPAN 300 SL wykazują typową morfologię komórek śródbłonka i eksprymują swoiste markery komórek śródbłonka takie jak CD31 lub czynnik von Willebranda, a także wiążą lektynę UEA-1. Dodatkowo, w warunkach hodowli ENDOPAN 300 SL komórki HUVEC utrzymują szlaki transdukcji sygnału komórkowego typowe dla śródbłonka. Podczas stosowania ENDOPAN 300 SL tempo wzrostu komórek HUVEC jest podobne do uzyskanego dla komórek hodowanych w pożywkach typowych dla komórek śródbłonkowych z dodatkiem surowicy bydlęcej. Przydatność: ENDOPAN 300 SL jest odpowiedni do hodowli: Ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej Ludzkich komórek śródbłonka tętnicy pępowinowej Ludzkich komórek śródbłonka tętnicy płucnej Ludzkich komórek śródbłonka żyły odpiszczelowej Wykazano również, że ENDOPAN 300 SL można również stosować do hodowli komórek śródbłonka bydła, świń, szczurów, królików. Szczególne zalety: Biologia komórki śródbłonka poczyniła znaczne postępy dzięki badaniom komórek śródbłonka naczyń hodowanych in vitro. Tradycyjne pożywki hodowlane zawierają surowicę zwierząt. Postęp w dziedzinie pożywek o niskiej zawartości surowicy dla komórek śródbłonka poprawił jakość danych doświadczalnych uzyskiwanych w ostatnich latach. Jednakże komórki śródbłonka mogą syntetyzować substancje, które nie mogą być wykryte ze względu na ich niskie stężenie lub efekt maskujący surowicy. W przeszłości szlaki sygnałowe w komórkach śródbłonka nie były możliwe do odczytania doświadczalnie, gdyż nawet niskie stężenie surowicy obecne w tradycyjnych pożywkach wywołuje nieokreślone i niepożądane stymulacje receptorów powierzchniowych komórek, jednak można to dopiero zauważyć w warunkach hodowli wolnej od surowicy. Jako że komórki śródbłonka znajdują się obecnie w centrum zainteresowania inżynierii tkankowej naczyń ze względu na potencjalne zastosowania terapeutyczne, obecność surowicy zwierzęcej jest w takich zastosowaniach niepożądana Stosowanie: Zaleca się stosowanie pożywek bez surowicy od początku hodowli. W przypadku tej pożywki nie jest wymagane stopniowe przechodzenie z pożywki z surowicą do warunków bezsurowiczych. Nie jest zalecane, aby przenosić komórki z pożywki z surowicą do ENDOPAN 300 SL bezpośrednio po pasażu komórek. Należy pozwolić komórkom po trypsynizacji na adhezję (ok. 24 godziny) przed zmianą na pożywkę bez surowicy. ENDOPAN 300 SL można również stosować do komórek uprzednio hodowanych w pożywce z surowicą. Początkowo niektóre komórki mogą obumierać w hodowli bezsurowiczej, wykazywać wolniejszy wzrost lub zmiany morfologii. Drobne zmiany w wyglądzie komórek nie powinny przeszkadzać w hodowli o ile żywotność i proliferacja pozostaje na stałym poziomie. Problemy te można przezwyciężyć dzięki wyższym gęstościom posiewu (bliskim konfluencji). Endopan 300 SL ready-to-use Endopan 300 SK kit with supplements 500 ml 500 ml P04-00650 P04-0065K 25 ml 50 ml 50 ml 500 ml 25 ml 25 ml P04-90065S P10-0231SF P10-0331SF P04-300500 P06-20650 P07-94050 Reagenty: PANEXIN SL-S Serum Substitute for HUVEC cultures SL-S Trypsin/EDTA SL-S Trypsin-Inhibitor SL-S Medium (Working Medium) SL-S Collagen 0.01 % SL-S Cryopan 1.6. INNE MEDIA BEZSUROWICZE 1.6.1. PANSERIN 411 Panserin 411 jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli wielu adherentnych i nieadherentnych komórek insulinozależnych bez surowicy (np. komórek CHO). Warunki przechowywania: Przechowywanie: +2°C do +8°C Stabilność: 8 miesięcy Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Na bazie MEM Iscove (IMEM), z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin i insuliny. Nie zawiera żadnych czynników wzrostu ani przylegania. Przydatność: Panserin 411 jest uniwersalną pożywką odpowiednią dla różnych typów komórek. W Panserin 411 mogą być hodowane komórki adherentne i nieadherentne. Dzięki temu że nie zawiera czynników wzrostu, istnieje możliwość zbadania efektu specjalnie dodanych czynników wzrostu na hodowle komórek. Panserin 411 nie zawiera żadnych czynników przylegania. W przypadku niektórych typów komórek wstępne przygotowanie naczyń hodowlanych przez pokrycie żelatyną, kolagenem, poli-D-lizyną lub fibronektyną może umożliwić lub znacznie ułatwić wzrost komórek w tej pożywce. Wstępne przygotowanie naczyń hodowlanych jest szczególnie ważne przy zakładaniu hodowli o małej gęstości. Przy każdym dostosowywaniu do pożywki bez surowicy, należy brać pod uwagę zmiany w komórkach. Zmiany te mogą dotyczyć morfologii, kariotypu, markerów powierzchniowych itd. Komórki rosnące w pożywce bez surowicy nie zawsze wyglądają tak samo jak te same komórki rosnące w pożywce z dodatkiem surowic, z których wyprowadziliśmy hodowle. Zastosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki jej nie zawierającej można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce z surowicą, a następnie stopniowe jej zamienianie na jej substytuty bezsurowicze. Możemy dostarczyć Państwu wiele protokołów adaptacyjnych dla wielu typów komórek. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej, jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości oraz jeśli zmiana pożywki na tę o niższej zawartości surowicy będzie przeprowadzona po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami daje to większe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny). Dla pewnych typów komórek najlepszym rozwiązaniem może być adaptacja nie tylko przez stopniowe zmniejszanie stężenia surowicy, ale również pożywki, w której komórki były dotychczas hodowane. Pożywka Panserin 411 nie zawiera żadnych czynników wzrostu. Dla komórek, które są uzależnione od konkretnych czynników wzrostu należy dodać te czynniki w wymaganym stężeniu. PANSERIN 411 100 ml 500 ml P04-710411M P04-710411 1.6.2. PANSERIN 411S Panserin 411S jest kompletną, gotową do użycia pożywką do bezsurowiczej hodowli komórek szpiku i komórek limfatycznych w celu badania cytologicznego Skład: Na bazie RPMI 1640, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin i hormonów. Przydatność: Panserin 411S jest kompletną pożywką bezsurowiczą do hodowli komórek szpiku i komórek limfatycznych z krwi obwodowej lub szpiku kostnego. Dlatego nadaje się do szybkiego namnażania komórek krwi w badaniach różnych typów białaczek (ALL, AML, CLL, CML, MPN, MDS). Techniki diagnostyczne stosowane w badaniu białaczki obejmują między innymi badania cytochemiczne, prążków chromosomowych, genetyki molekularnej, FISH. W Panserin 411S liczba i jakość podziałów metafazowych jest znacznie wyższa i niezależna od poszczególnych partii produktu, w porównaniu do pożywek zawierających surowicę. Przydatność: Komórki (1x107) wysiewa się w 5 ml Panserin 411S. W zależności od rodzaju testu i jakości badanego materiału przygotowuje się hodowlę pierwotną oraz 1-3 hodowle z opowiednimi czynnikami wzrostu. Czas hodowli to 24 do 72 godzin w temperaturze 37°C w inkubatorze z 5% CO2. Preparaty chromosomowe przygotowuje się przy użyciu hipotonicznego roztworu KCl i utrwalacza Carnoy'a. PANSERIN 411S 500 ml 1000 ml P04-7411S1 P04-71411S 1.6.3. PANSERIN 412 Panserin 412 jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli wielu rodzajów komórek adherentnych bez surowicy. Skład: Na bazie MEM Iscove (IMEM), z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin i insuliny. Nie zawiera żadnych czynników wzrostu ani przylegania. Przydatność: Panserin 412 jest uniwersalną pożywką odpowiednią dla różnych typów komórek adherentnych. Panserin 412 zawiera specjalne czynniki przylegania które umożliwiają pomyślną hodowlę komórek które w normalnych warunkach są słabo adherentne. Dzięki temu że nie zawiera czynników wzrostu, istnieje możliwość zbadania efektu specjalnie dodanych czynników wzrostu na hodowle komórek. Przy każdym dostosowywaniu do pożywki bez surowicy, należy brać pod uwagę zmiany w komórkach. Zmiany te mogą dotyczyć morfologii, kariotypu, markerów powierzchniowych itd. Komórki rosnące w pożywce bez surowicy nie zawsze wyglądają tak samo jak te same komórki rosnące w pożywce z dodatkiem surowicy, z których wyprowadziliśmy hodowle. Zastosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki jej nie zawierającej można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce z surowicą, a następnie stopniowe jej zamienianie na jej substytuty bezsurowicze. Możemy dostarczyć Państwu wiele protokołów adaptacyjnych dla wielu typów komórek. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości oraz jeśli zmiana pożywki na tę o niższej zawartości surowicy będzie przeprowadzona po przyczepieniu się komórek do podłoża. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami daje to większe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny). Dla pewnych typów komórek najlepszym rozwiązaniem może być adaptacja nie tylko przez stopniowe zmniejszanie stężenia surowicy, ale również pożywki w której komórki były dotychczas hodowane. Pożywki Panserin zostały opracowane w celu wsparcia wzrostu komórek bez użycia surowicy. Z tego powodu pożywka Panserin 412 nie zawiera żadnych czynników wzrostu, co pozwala na dokładniejszą analizę działania czynników wzrostu dodanych do hodowli. Dla komórek, które są uzależnione od konkretnych czynników wzrostu należy dodać te czynniki w wymaganym stężeniu. PANSERIN 412 100 ml 500 ml P04-710412M P04-710412 1.6.4. PANSERIN 413 Panserin 413 jest gotową do użycia pożywką do hodowli limfocytów z krwi pełnej. Skład: Na bazie RPMI 1640/DMEM-F12, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych i witamin. Wraz z pożywką jest również dostarczana mieszanina czynników wzrostu, którą należy ją dodać do pożywki bezpośrednio przed rozpoczęciem hodowli. Przydatność: Pożywka Panserin 413 została opracowana w celu hodowli limfocytów z krwi pełnej. Komórki krwi zazwyczaj obumierają w hodowli dość szybko, jedynie limfocyty można hodować przez kilka podziałów. Aby uzyskać podziały komórek nieproliferujących muszą być one zastymulowane za pomocą mitogenów, głównie lektyn roślinnych (fitohemaglutynina, PHA). Stosowanie: 1. Izolacja limfocytów z krwi pełnej przez wirowanie w gradiencie gęstości. • Zmieszaj krew heparynizowaną z DPBS w stosunku 1:1, i dodaj ostrożnie (tak aby uniknąć wymieszania faz) do probówki wirówkowej wypełnionej pożywką do separacji limfocytów (Pancoll o gęstości 1,077g/ml). • Zwiruj przez 30 min, 400 x g, w temperaturze pokojowej (przy wyłączonym hamulcu wirówki). Widoczne będą 4 fazy: - górna: osocze - biaława, nieprzejrzysta: limfocyty - pożywka separacyjna - osad z erytrocytów i granulocytów • Zbierz osocze pipetą i przenieś limfocyty świeżą pipetą do nowej probówki wirówkowej. • Przemyj limfocyty DPBS (bez Ca/Mg) i zwiruj przez 10 min, 100 x g. Przemyj ponownie. 2. Hodowla i stymulacja limfocytów • Zawieś limfocyty w Panserin 413. • W celu stymulacji proliferacji limfocytów doprowadź gęstość komórek do około 1x105 i dodaj fitohemaglutyninę w stężeniu 2-10 µg/ml; czas hodowli to 48 do 72 godzin, w zależności od rodzaju i pochodzenia limfocytów oraz późniejszego zastosowania. • Prowadź hodowlę w pożywce Panserin 413. Po około 14 dniach należy przeprowadzić ponowną stymulację komórek. PANSERIN 413 with one supplement 500 ml P04-710413 1.6.5. PANSERIN 416 Panserin 416 to pożywka bezsurowicza (pożywka podstawowa) która po suplementacji czynnikami wzrostu jest odpowiednia do hodowli komórek dendrytycznych. Skład: Na bazie RPMI 1640/DMEM-F12, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych i witamin. Wraz z pożywką jest również dostarczana mieszanina czynników wzrostu, którą należy dodać do pożywki bezpośrednio przed rozpoczęciem hodowli. Przydatność: Komórki dendrytyczne są to wysoce wyspecjalizowane komórki prezentujące antygen, które mogą inicjować i regulować antygenowo specyficzną odpowiedź immunologiczną. Zdolność ta może być wykorzystywana w celu wygenerowania odpowiedzi immunologicznej wobec pewnych białek komórek nowotworowych, dzięki czemu system odpornościowy sam może być w stanie walczyć przeciwko nowotworom. Komórki dendrytyczne zostały wyizolowane z wielu tkanek limfatycznych jak i nielimfatycznych u ludzi, myszy i innych gatunków. W celu wytworzenia szczepionek nowotworowych, komórki dendrytyczne mogą być produkowane z krwi obwodowej pacjentów chorych na nowotwór. Skuteczność szczepionek z komórek dendrytycznych została wykazana w badaniach klinicznych. Wychwyt antygenów: W niemal każdej tkance organizmu komórki dendrytyczne formują gęstą sieć komórek opiekuńczych, które pobierają składniki zewnątrzkomórkowe przez fagocytozę i endocytozę, i w ten sposób analizują swoje środowisko. Pobrane białka są poddawane rozkładowi wewnątrzkomórkowemu do peptydów, przyłączane do cząsteczek MHC (głównego układu zgodności tkankowej) i transportowane na powierzchnię komórek. Dzieki temu determinanty antygenowe z peptydów są rozpoznawalne dla komórek T. Podczas regeneracji komórki dendrytyczne mogą opuścić tkanki obwodowe i przenieść się do regionalnych węzłów chłonnych, gdzie wchodzą w interakcje z komórkami T. Z nienaruszonej tkanki komórki dendrytyczne docierają do węzłów chłonnych w inaktywowanym stanie. Funkcjonujący system monitorowania wyróżnia się zdolnością do szybkiego i specyficznego rozpoznania szkodliwych procesów oraz do podjęcia odpowiednich kroków przeciwko nim. W tym celu komórki dendrytyczne mają na swojej powierzchni receptory dla wielu sygnałów ostrzegawczych które mogą być emitowane z mikroorganizmów, dla przekaźników znajdujących się w ciele lub aktywowanych komórek T. Przykładem struktur pochodzenia bakteryjnego aktywujących komórki dendrytyczne są lipopolisacharydy z bakterii Gram-ujemnych, DNA bakteryjny bogaty w cytydyno-dinukleotydguanozyny (cpG), wirusowe dwuniciowe RNA. Endogennymi przekaźnikami dla których komórki dendrytyczne mają specjalne receptory i które wysyłają sygnał aktywujący są cytokiny, prostanoidy i nukleotydy adeninowe. Aktywowane limfocyty T mogą stymulować komórki dendrytyczne za pomocą liganda - CD40 zintegrowanego w błonie komórkowej. Aktywacja tych różnych receptorów powoduje istotne zmiany komórkowe, które można podsumować terminem dojrzewanie. Zdolność fagocytozy zostaje utracona. Peptydy związane z cząsteczkami MHC występują w większym zagęszczeniu i są bardziej stabilne. Struktura cytoszkieletu zostaje zreorganizowana i zmienia się ekspresja receptorów chemokin co umożliwia komórkom dendrytycznym dostanie się z ogniska zapalenia do węzła limfatycznego. Jednoczesne pobudzanie cząsteczek na powierzchni komórki dendrytycznej oraz uwalnianie cytokin, np. interleukiny-12, pozwala komórkom dendrytycznym na efektywniejszą interakcję z limfocytami T. Indukcja odpowiedzi immunologicznej: W węzłach chłonnych komórki dendrytyczne wchodzą w interakcje z różnymi populacjami limfocytów. Przede wszystkim z komórkami T, które nie jeszcze nie miały kontaktu z antygenem: jeżeli receptor komórek T rozpoznaje przedstawiony antygen, komórki T są aktywowane. Ten główny proces odpowiedzialny za nabycie specyficzności odpowiedzi immunologicznej nazywany jest „Priming”. Cytotoksyczne komórki T rozwijają się z komórek CD8 i są w stanie zabić te komórki, które są rozpoznawane przez receptor komórek T. Szczepionki na nowotwór z komórkami dendrytycznymi: W komórkach nowotworowych zachodzi specyficzna ekspresja białek które mogą posłużyć jako antygen dla komórek T. Z reguły jednak nie jest to wystarczające dla układu odpornościowego do wytworzenia skutecznej odpowiedzi immunologicznej przeciw komórkom nowotworowym. Z jednej strony jest to spowodowane tym, że antygeny te są często również obecne w zdorowych tkankach w niskim zagęszczeniu, z drugiej strony komórki nowotworowe mają wiele strategii ucieczki przed odpowiedzią immunologiczną. Jednakże w licznych eksperymentach na zwierzętach wyraźnie pokazano, że tolerancja na nowotwory może być złamana przez szczepionki z komórek dendrytycznych. Tworzenie komórek dendrytycznych: Komórki dendrytyczne pochodzą z hematopoetycznych komórek prekursorowych w szpiku kostnym. Trzy różne subpopulacje, każda z charakterystycznymi funkcjami, zostały opisane u człowieka: szpikowe komórki dendrytyczne, komórki plazmocytoidalne i komórki Langerhansa skóry. Do szczepionek na nowotwór głównie używane są szpikowe komórki dendrytyczne, ponieważ są szczególnie zdolne do podejmowania i prezentacji antygenów. Komórki dendrytyczne charakterystyczne dla szpiku mogą być wytwarzane przez kultury in vitro monocytów hodowanych w obecności cytokin interleukiny – 4 (IL – 4) oraz czynnika stymulującego kolonie granulocytów – makrofagów (GM-CSF). Alternatywnie komórki dendrytyczne mogą być generowane z hematopoetycznych komórek macierzystych CD34+ z krwi obwodowej. Przez dodanie czynników wzrostu, np. ligandu–Klt3, udział komórek dendrytycznych we krwi, które zwykle stanowią tylko ok. 0,1 - 0,5% komórek jednojądrzastych, może być wielokrotnie zwiększony. Po aktywacji komórki dendrytyczne osiągają pełnię możliwości stymulacji komórek T. Do dojrzewania komórek dendrytycznych używana jest pożywka z dodatkiem cytokin (TNF-alfa), LPS lub warunkowana monocytami. Produkcja i hodowla bez surowicy komórek dendrytycznych z jednojądrzastych komórek z krwi obwodowej (PBMC). Stosowanie: Separacja krwi przy użyciu pożywki do separacji (Pancoll 1.077 g/ml) Próbki krwi powinny być przetwarzane jak najszybciej po pobraniu w celu osiągnięcia optymalnych rezultatów. Składowanie próbek krwi przez 24 godziny w temperaturze otoczenia powoduje między innymi zmniejszony odzysk limfocytów, zmianę markerów powierzchniowych i zmniejszoną odpowiedź na stymulację mitogenem. 1) Dodaj Pancoll (3 ml) do odpowiedniej probówki wirówkowej w sterylnych warunkach. 2) Ostrożnie pokryj pożywkę do rozdzielania rozcieńczoną próbką krwi (4 ml). Ważne: Nie mieszać próbki krwi z Pancoll! 3) Wiruj przy 400 x g przez 30 - 40 minut w 18 - 20°C 4) Po odwirowaniu, ostrożnie zdejmij górną fazę (zawierającą surowicę i płytki krwi) za pomocą pipety, bez mieszania warstwy z limfocytami. 5) Przenieś warstwę z limfocytami do nowej probówki wirówkowej nową pipetą. Ważne jest, aby całość zebrać w jak najmniejszej objętości. 6) Dodaj co najmniej 3 objętości roztworu soli fizjologicznej (6 ml) do limfocytów. 7) Ostrożnie zawieś limfocyty pipetą. 8) Wirowanie przy 60 - 100 x g przez 10 minut w 18 - 20°C. 9) Usuń supernatant. Powtórz płukanie (pkt. 6 - 9). Hodowla komórek dendrytycznych w pożywce bez surowicy Panserin 416: Po ostatnim etapie płukania jednojądrzaste komórki są przenoszone w gęstości 1 x 10 7 komórek/ml do pożywki Panserin 416. W celu usunięcia nieprzylegających komórek, hodowle są umieszczane w inkubatorze na 2 godziny. Następnie supernatant jest starannie usuwany i zastąpiony nową pożywką Panserin 416. GM-CSF (800 U/ml) i interleukina 4 (500 U/ml) są dodawane jako czynniki wzrostu. Naczynia hodowlane są inkubowane przez kolejne 6 dni w inkubatorze i co pół dnia pożywka jest wymieniana na nową, którą uzupełnia się GMCSF i IL-4. PANSERIN 416 with one supplement 500 ml P04-710416 1.6.6. PANSERIN 604ST Panserin 604ST jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO (jajnik chomika chińskiego) w hodowli zawiesinowej. Skład: Panserin 604ST jest całkowicie zdefiniowaną pożywką do hodowli transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO w zawiesinie. Nie zawiera żadnych składników pochodzenia zwierzęcego lub ludzkiego. Pożywka jest uzupełniona rekombinowanymi białkami w niskim stężeniu. Umożliwia to proste oczyszczanie produktu końcowego. Przydatność: Hodowla transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO w hodowli zawiesinowej (bioreaktor) do produkcji rekombinowanych białek. Szczególne zalety: Panserin 604ST nie zawiera niezdefiniowanych lizatów lub roślinnych hydrolizatów. Panserin 604ST umożliwia skrócenie fazy adaptacji i bardzo dobre tempo wzrostu. Dzięki optymalnemu i zrównoważonemu składowi pożywki można w dużym stopniu uniknąć powstawania agregatów komórek. Szczególnie nadaje się do produkcji białek rekombinowanych w połączeniu z ułatwionym oczyszczaniem produktów końcowych ze względu na niską zawartość białka w pożywce. Stosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin 604ST można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w Panserin 604ST z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe zmniejszanie stężenia surowicy aż do podjęcia hodowli w czystej pożywce Panserin 604ST. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości. Komórki powinny być wysiewane w gęstości co najmniej 5 x 104 komórek / ml. Po kilku pasażach w hodowli bezsurowiczej przy obniżonym wzroście komórki zaczynają osiągać wysokie wskaźniki wzrostu. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny). PANSERIN 604ST 500 ml P04-604ST 1.6.7. PANSERIN 604SPF Panserin 604SPF jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO (jajnik chomika chińskiego) w hodowli zawiesinowej. Skład: Panserin 604SPF jest całkowicie zdefiniowaną pożywką do hodowli transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO w zawiesinie. Nie zawiera żadnych składników pochodzenia zwierzęcego lub ludzkiego. Pożywka jest uzupełniona rekombinowanymi białkami w niskim stężeniu. Umożliwia to proste oczyszczanie produktu końcowego i zastosowanie w skomplikowanych procedurach np. w produkcji leków. Przydatność: Hodowla transfekowanych i nietransfekowanych komórek CHO w hodowli zawiesinowej (bioreaktor) do produkcji rekombinowanych białek. Szczególne zalety: Panserin 604SPF nie zawiera niezdefiniowanych lizatów lub roślinnych hydrolizatów. Panserin 604SPF umożliwia skrócenie fazy adaptacji i bardzo dobre tempo wzrostu. Dzięki optymalnemu i zrównoważonemu składowi pożywki można w dużym stopniu uniknąć powstawania agregatów komórek. Szczególnie nadaje się do produkcji białek rekombinowanych w połączeniu z ułatwionym oczyszczaniem produktów końcowych ze względu na niską zawartość białka w pożywce. Stosowanie: W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin 604SPF można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w Panserin 604SPF z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe zmniejszanie stężenia surowicy aż do podjęcia hodowli w czystej pożywce Panserin 604SPF. Stopniowe dostosowanie komórek będzie zachodziło szybciej jeśli będziemy zakładać hodowle o większej gęstości. Komórki powinny być wysiewane w gęstości co najmniej 5 x 104 komórek / ml. Po kilku pasażach w hodowli bezsurowiczej przy obniżonym wzroście komórki zaczynają osiągać wysokie wskaźniki wzrostu. Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. W przypadku komórek adherentnych należy się upewnić, że - jeśli zastosowano trypsynę do oderwania komórek - enzym jest całkowicie odmyty lub jest zablokowany przez inhibitory (sama pożywka nie zawiera surowicy, zatem nie blokuje działania trypsyny). PANSERIN 604ST 500 ml P04-604SPF 1.6.8. PANSERIN 701 Panserin 701 jest kompletną, gotową do użycia pożywką do hodowli limfocytów z krwi pełnej. Warunki przechowywania: Przechowywanie: -20°C Stabilność: 1 rok Opakowania: 100ml, 500ml, inne objętości dostępne na zamówienie Skład: Na bazie MEM Iscove (IMEM), wzbogacone o dodatkowe pierwiastki śladowe, albuminę, cholesterol, lipidy i witaminy. Zawiera mitogen fitohemaglutyninę (PHA) do stymulacji wzrostu limfocytów. Przydatność: Pożywka Panserin 701 została opracowana w celu hodowli limfocytów z krwi pełnej bez surowicy. Zawiera roślinne lektyny (PHA) które stymulują podziały komórek. Stosowanie: 1. Izolacja limfocytów z krwi pełnej przez wirowanie w gradiencie gęstości. • Zmieszaj krew heparynizowaną z DPBS w stosunku 1:1, i dodaj ostrożnie do probówki wirówkowej wypełnionej pożywką do separacji limfocytów (Pancoll o gęstości 1,077g/ml). Uwaga: pipetuj ostrożnie, aby uniknąć zmieszania faz! • Zwiruj przez 30 min, 400 x g, w temperaturze otoczenia (hamulec powinien być wyłączony). Widoczne będą 4 fazy: - górna: osocze - biaława, nieprzejrzysta: limfocyty - pożywka separacyjna - osad z erytrocytów i granulocytów • Zbierz osocze pipetą i nową pipetą przenieś limfocyty do nowej probówki wirówkowej. • Przemyj limfocyty DPBS (bez Ca/Mg) i zwiruj przez 10 min, 100 x g. Powtórz przemywanie ponownie. 2. Hodowla i stymulacja limfocytów • Zawieś limfocyty w Panserin 701 w zagęszczeniu 1 x 105. Fitohemaglutynina (PHA) w Panserin 701 stymuluje podział limfocytów. • Czas inkubacji wynosi od 48 do 72 godzin, w zależności od rodzaju i pochodzenia limfocytów i w zależności od dalszego wykorzystania. • Dalszą hodowle można przeprowadzać w Panserin 413. Po około 14 dniach należy przeprowadzić ponowną stymulację komórek przy użyciu Panserin 701. PANSERIN 701 100 ml 500 ml P04-710701M P04-710701 1.6.9. PANSERIN 801 Panserin 801 to gotowa do użycia pożywka bez surowicy do hodowli ludzkich keratynocytów. Skład: Pożywka MCDB-153 jest stosowana jako podstawa, która musi być uzupełniona o dostarczone dodatki tuż przed użyciem. Te dodatki to: • Nabłonkowy czynnik wzrostu (EGF) • Insulina • Hydrokortyzon • Etanoloamina • Fosfoetanolamina • Wyciąg z przysadki (BPE) Przydatność: Pożywka Panserin 801 została opracowana do hodowli ludzkich keratynocytów w pożywce bez surowicy. Panserin 801 selektywnie wspomaga wzrost keratynocytów i jednocześnie zapobiega przerostowi fibroblastów. Zastosowanie: • Rozmroź dostarczone dodatki. • Dodaj do pożywki podstawowej w warunkach sterylnych. • Trypsynuj keratynocyty a następnie przepłucz komórki i zablokuj aktywność trypsyny inhibitorem trypsyny (10 mg/ml). • Przepłucz komórki ponownie i oznacz ich gęstość. • Doprowadź gęstość komórek do 3.000 - 5.000 komórek/ml w hodowli wtórnej (początkowa gęstość posiewu 1 - 5 x 106 komórek/cm2). Hoduj keratynocyty w pożywce Panserin 801 uzupełnionej dodatkami, w inkubatorze. • Naczynia hodowlane mogą być pokryte alternatywnie czynnikami przylegania (kolagen, fibronektyna lub naturalne/syntetyczne fragmenty tych czynników). PANSERIN 801 with 6 supplements 500 ml P04- 710801 1.6.10. PANSERIN PX10 Panserin PX10 jest gotową do użycia kompletną pożywka bez surowicy do hodowli szpiczaka i komórek hybrydoma do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Skład: Na bazie RPMI 1640/DMEM-F12, z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin i hormonów. Podłoże nie zawiera żadnych hormonów wzrostu. Przydatność: Hodowla szpiczaka i komórek hybrydoma do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Szczególne zalety: Panserin PX10 jest gotową do użycia pożywką wolną od surowicy do produkcji przeciwciał monoklonalnych. Nie zawiera niezdefiniowanych lizatów ani hydrolizatów peptonów. Ze względu na zoptymalizowany skład Panserin PX10 znacząco stymuluje wzrostu nawet przy niskiej gęstości posiewu. Oprócz doskonałych właściwości wzrostu komórek Panserin PX10 wykazuje doskonałe właściwości klonowania. Konwencjonalne systemy bezsurowicze często wymaga długich i pracochłonnych procedur oraz gęstego wysiewu do 105 komórek/ml. W przeciwieństwie do nich większość klonów może być bezpośrednio przeniesiona do hodowli w Panserin PX10. W Panserin PX10 klony można uzyskać bez większych trudności. Komórki Sp2/0-Ag-14 zostały przeniesione z pożywki zawierającej surowicę (RPMI 1640 z 10% FBS) bezpośrednio do Panserin PX10. Wysiew o gęstości 1,000 komórek / ml. Dla porównania hodowla Sp2/0-Ag-14 w RPMI 1640 z 10% FBS. Rys. 1 Typowa krzywa wzrostu dla komórek SP2/O-Ag-14 w Panserin PX10 Stosowanie: • Ogrzej Panserin PX10 do 37°C. • Przenieś komórki hybrydomy bezpośrednio do Panserin PX10. W większości przypadków gęstość 1000 komórek/ml jest wystarczająca. • Hoduj komórki w zwykły sposób w inkubatorze z 5% CO2 w temperaturze 37°C, lub w bioreaktorze • Izoluj przeciwciała monoklonalne z supernatantu. W wielu przypadkach przejście z pożywki zawierającej surowicę do pożywki Panserin PX10 można przeprowadzić bez specjalnej procedury adaptacyjnej. Dla tych komórek, które nie tolerują natychmiastowej zmiany zalecamy hodowle początkowo w pożywce Panserin PX10 z dodatkiem surowicy, a następnie stopniowe zmniejszanie stężenia surowicy aż do podjęcia hodowli w czystej pożywce Panserin PX10. Chociaż Panserin PX10 podtrzymuje wzrost komórek nawet przy małych gęstościach, to w trakcie dostosowania do pożywki bezsurowiczej komórki powinny być wysiewane w większej gęstości (5 x 103 - 5 x 104 komórek/ml). Żywotność komórek jest istotnym czynnikiem dla skutecznego przeniesienia hodowli na pożywkę bez surowicy. W związku z tym komórki powinny być przesiewane w logarytmicznej fazie wzrostu - zgodnie z naszymi doświadczeniami transfer w stacjonarnej fazie wzrostu daje niższe szanse na sukces. PANSERIN PX10 500 ml P04-710PX10 1.6.11. PANSERIN PX40 Panserin PX40 jest gotową do użycia kompletną do pożywką bez surowicy do hodowli wielu rodzajów komórek. Skład: Na bazie RPMI 1640/DMEM-F12 z dodatkiem pierwiastków śladowych, albuminy, cholesterolu, lipidów sojowych, witamin, hormonów i czynników przylegania. Podłoże nie zawiera żadnych hormonów wzrostu. Przydatność: Hodowla komórek adherentnych bez surowicy (np. HEK, L929, CHO, MDCK, MDBK, 3T3A). Szczególne zalety: Panserin PX40 jest gotową do użycia, wolną od surowicy pożywką do hodowli wielu rodzajów komórek adherentnych. Ponadto dzięki dodaniu czynników przylegania Panserin PX40 pozwala na hodowlę nawet bardzo wymagających komórek po krótkiej fazie adaptacji. Nie zawiera niezdefiniowanych peptonów ani hydrolizatów. Stosowanie: Dostosowanie do pożywki bez surowicy. Wiele linii komórkowych może być bezpośrednio przeniesionych z hodowli adherentnej w pożywce zawierającej surowicę do pożywki Panserin PX40 bez surowicy. Po kilku pasażach w hodowli bezsurowiczej przy obniżonym wzroście komórki zaczynają osiągać wysokie wskaźniki wzrostu porównywalne z osiąganymi w pożywce zawierającej surowicę. Bezpośrednia adaptacja do Panserin PX40: • Użyj adherentnych komórek w fazie logarytmicznej rosnących na pożywce z dodatkiem surowicy (na przykład DMEM z wysokim stężeniem glukozy i 10% FCS). • Usuń pożywkę zawierającą surowicę za pomocą pipety. • Komórki przemyj PBS (bez Ca/Mg). • Pokryj komórki trypsyną/EDTA (0,25%, 0,02%), (około 2 ml na butelkę T25). • Usuń trypsynę po około 1 minucie. • Inkubuj komórki dopóki nie zrobią się kuliste i nie odczepią się od podłoża (po około 5 minutach). • Zablokuj aktywność pozostałej trypsyny za pomocą inhibitora trypsyny (stężenie 1 mg/ml, 1-2 ml roztworu inhibitora na butelkę T25). • Przenieś komórki do Panserin PX40 i odwiruj ponownie. • Przenieś komórki do Panserin PX40 i policz liczbę komórek. • Posiej 5 x 104 - 1 x 105 komórek/ml w ogrzanej wcześniej Panserin PX40. Inkubacja w 37°C i 5% CO2. • Przenieś komórki do świeżej pożywki Panserin PX40 przy około 80% konfluencji. Pośrednia adaptacja do Panserin PX40: • Użyj adherentnych komórek w fazie logarytmicznej rosnących na pożywce z dodatkiem surowicy (na przykład DMEM z wysokim stężeniem glukozy i 10% FCS). • Usuń pożywkę zawierającą surowicę za pomocą pipety. • Komórki przemyj PBS (bez Ca/Mg). • Pokryj komórki trypsyną/EDTA (0,25%, 0,02%), (około 2 ml na butelkę T25). • Usuń trypsynę po około 1 minucie. • Inkubuj komórki dopóki nie zrobią się kuliste i nie odczepią się od podłoża (po około 5 minutach). • Zablokuj aktywność pozostałej trypsyny za pomocą inhibitora trypsyny (stężenie 1 mg/ml, 1-2 ml roztworu inhibitora na butelkę T25). • Przenieś komórki do Panserin PX40 i odwiruj ponownie. • Przenieś komórki do Panserin PX40 i policz liczbę komórek. • Posiej 5 x 104 - 1 x 105 komórek/ml w ogrzanej wcześniej Panserin PX40 z dodatkiem 5% FCS. Inkubacja w 37°C i 5% CO2. • Przenieś komórki do świeżej pożywki Panserin PX40 z dodatkiem 2% FCS przy około 80% konfluencji. • Przy kolejnych pasażach przenieś komórki do Panserin PX40 z 1% FCS i wreszcie 0,1% FCS (zgodnie z tą samą procedurą). PANSERIN PX40 500 ml P04-710PX40 1.7.MEDIA BEZSUROWICZE DO HODOWLI KOMÓREK MACIERZYSTYCH 1.7.1. POWERStem ESPro1 PowerStem ESPro1 jest łatwą w użyciu pożywką bez surowicy do hodowli zarodkowych komórek macierzystych myszy (mESc). Te pluripotentne komórki są wyprowadzane z blastocyst i mogą być ustabilizowane do linii komórkowej. Po wstrzyknięciu do blastocysty mogą tworzyć wszystkie typy tkanek w chimerach, w tym komórki płciowe. W pożywce PowerStem ESPro1, mysie zarodkowe komórki macierzyste w większości zachowują stan niezróżnicowany i mogą uczestniczyć w tworzeniu linii płciowej. Zawartość: Pożywka PowerStem ESPro1 składa się z: • PowerStem ESPro1 basal medium (pożywka podstawowa) • PowerStem ESPro1 growth supplement (suplement wzrostu), który dodaje się w czasie użytkowania. • PowerStem ESPro1 LIF supplement, który dodaje się w czasie użytkowania. Warunki przechowywania: • PowerStem ESPro1 basal medium: przechowywać w ciemności, w temperaturze od +2 do +8°C. • PowerStem ESPro1 growth supplement: przechowywać w ciemności, w temperaturze -20°C. • PowerStem ESPro1 LIF supplement: przechowywać w ciemności, w temperaturze -20°C. Skład: PowerStem ESPro1 zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, czynniki przylegania, hormony i czynniki wzrostu w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem ESPro1 jest w pełni zdefiniowane chemicznie i nie zawiera peptonów lub hydrolizatów. Uwaga: Uzupełniona PowerStem ESPro1 zawiera LIF w stężeniu 10 µg/L. Jeśli w układzie doświadczalnym wymagane jest wyższe stężenie LIF, należy dodać LIF dodatkowo do pożywki. Przydatność: Do hodowli zarodkowych komórek macierzystych myszy (mESc) bez surowicy, przy jednoczesnym zachowaniu stanu niezróżnicowania komórek. PowerStem ESPro1 jest specjalnie zaprojektowane do tworzenia myszy knock-out z modyfikowanych genetycznie zarodkowych komórek macierzystych w pożywce bez surowicy. Dowiedziono również, że pożywka PowerStem ESPro1 jest odpowiednia do hodowli i namnażania komórek progenitorowych nowotworów. Uwaga: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie do celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Szczególne zalety: PowerStem ESPro1 pozwala na hodowlę i namnażanie mysich zarodkowych komórek macierzystych (mES) w warunkach bez surowicy. Skład pożywki jest w pełni zdefiniowany, tym samym umożliwiając niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. Hodowla mysich zarodkowych komórek macierzystych może być zainicjowana bez zazwyczaj stosowanej warstwy odżywczej (fibroblastów pierwotnych), komórki wykazują wysoki poziom proliferacji, i w większości pozostają w stanie niezróżnicowanym. Poprzez dodanie specyficznych czynników różnicowania, komórki te można poddać różnicowaniu in vitro w pożądany typ tkanki (n.p. komórki nerwowe, mięśniowe, nabłonkowe itp.). Po wstrzyknięciu komórek do blastocysty mogą one tworzyć chimery, dzięki czemu można tworzyć zwierzęta, których genom został uprzednio poddany manipulacjom w hodowli komórkowej (n.p. myszy knock-in lub knock-out). Przygotowanie pożywki PowerStem ESPro1: Podstawowa pożywka PowerStem ESPro1 basal medium wymaga uzupełnienia suplementami PowerStem ESPro1 growth supplement i PowerStem ESPro1 LIF supplement. Aby uzyskać 500 ml kompletnej pożywki PowerStem ESPro1 należy dodać 50 ml rozmrożonego PowerStem growth supplement ESPro1 i 1 ml PowerStem ESPro1 LIF supplement do 450 ml pożywki podstawowej PowerStem ESPro1 basal medium. Stosowanie: • Przygotować szalki powleczone żelatyną, pokrywając je 0,2% roztworem żelatyny przez co najmniej 10 min w inkubatorze. • Mysie zarodkowe komórki macierzyste powinny być zawsze utrzymywane w stosunkowo dużym zagęszczeniu w celu utrzymania ich pluripotencji. • Najlepiej zakładać hodowlę wtórną z hodowli sub-konfluentnej (o konfluencji 70% - 80%) • Poszczególne kolonie nie powinny się wzajemnie dotykać. • Zbyt gęsty wzrost promuje różnicowanie komórek, co może spowodować utratę pluripotencji. • Mysie zarodkowe komórki macierzyste powinny być trypsynowane w zwykły sposób (np. 0,25% roztworem trypsyny). • Kiedy komórki staną się kuliste i odłączą się od powierzchni (proces ten można przyspieszyć w temperaturze 37°C), należy zawiesić je w DPBS przez dokładne wielokrotne przepipetowanie, a następnie zwirować przez 5 minut w 180 xg w temperaturze pokojowej. • Usunąć supernatant w sposób sterylny. • Ponownie zawiesić osad komórek w DPBS przez wielokrotne przepipetowanie. • Dobre zawieszenie komórek jest ważne w celu uzyskania pojedynczych komórek lub bardzo małych agregatów (2-3 komórki). Większe skupiska komórek nie powinny występować. • Ze względu na brak surowicy, PowerStem ESPro1 nie powoduje inaktywacji trypsyny; aby zatrzymać aktywność trypsyny należy zastosować jej inhibitory. • Po przeliczeniu komórek należy wysiać je na szalki hodowlane pokryte żelatyną w pożywce PowerStem ESPro1. • Inkubować komórki w zwykły sposób w inkubatorze w temperaturze 37°C i atmosferze 5% CO2. • Wymieniać pożywkę PowerStem ESPro1 na świeżą co drugi dzień. • Komórki powinny być rozdzielane w stosunku między 1:4 a 1:8 w zależności od tempa wzrostu. Uwaga: W przypadku badań wymagających różnicowania komórek nie należy dodawać LIF. mES-cells in PowerStem ESPro1 PowerStem ESPro 1 z LIF PowerStem ESPro 1 bez LIF JM8-cells in PowerStem ESPro1 100 ml Kit 500 ml Kit 100 ml Kit 500 ml Kit mES-cells in medium with 10% FBS P04-7701K P04-77010K P04-7751K P04-77510K 1.7.2. POWERStem ESPro2 PowerStem ESPro2 jest pożywką bez surowicy do hodowli i namnażania zarodkowych komórek macierzystych myszy (mESc). Pożywka PowerStem ESPro2 jest specjalnie zaprojektowana do namnażania zarodkowych komórek macierzystych myszy bez różnicowania. Aby poddać namnożone komórki różnicowaniu należy zastosować odpowiednie procedury i czynniki różnicowania. Zawartość: Pożywka PowerStem ESPro2 składa się z: • PowerStem ESPro2 basal medium (pożywka podstawowa) • PowerStem ESPro2 growth supplement (suplement wzrostu), który dodaje się w czasie użytkowania. • PowerStem ESPro2 LIF supplement, który dodaje się w czasie użytkowania. Warunki przechowywania: • PowerStem ESPro2 basal medium: przechowywać w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C • PowerStem ESPro2 growth supplement: przechowywać w ciemności, w temperaturze -20°C • PowerStem ESPro2 LIF supplement: przechowywać w ciemności, w temperaturze -20°C Skład: PowerStem ESPro2 zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, czynniki przylegania, hormony i czynniki wzrostu w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem ESPro2 jest w pełni zdefiniowana chemicznie i nie zawiera peptonów ani hydrolizatów. Uwaga: Uzupełniona PowerStem ESPro2 zawiera LIF w stężeniu 10 µg/L. Jeśli w układzie doświadczalnym wymagane jest wyższe stężenie LIF, należy dodać LIF dodatkowo do pożywki. Przydatność: PowerStem ESPro2 jest pożywką specjalnie zaprojektowaną do hodowli mysich zarodkowych komórek macierzystych (mESc) bez surowicy, przy jednoczesnym zachowaniu stanu niezróżnicowania komórek. PowerStem ESPro2 jest odpowiednie do tworzenia myszy knock-out z modyfikowanych genetycznie zarodkowych komórek macierzystych w pożywce bez surowicy. Dowiedziono również, że pożywka PowerStem ESPro2 jest odpowiednia do hodowli i namnażania komórek progenitorowych nowotworów. Uwaga: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie do celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Szczególne zalety: PowerStem ESPro2 pozwala na hodowlę i namnażanie mysich zarodkowych komórek macierzystych (mESc) w warunkach bez surowicy. Skład pożywki jest w pełni zdefiniowany, tym samym umożliwiając niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. Hodowla mysich zarodkowych komórek macierzystych może być zainicjowana bez zazwyczaj stosowanej warstwy odżywczej (fibroblastów pierwotnych), komórki wykazują wysoki poziom proliferacji i w większości pozostają w stanie niezróżnicowanym. Poprzez dodanie specyficznych czynników różnicowania, komórki te można poddać różnicowaniu in vitro w pożądany typ tkanki (n.p. komórki nerwowe, mięśniowe, śródbłonkowe itp.). Przygotowanie pożywki PowerStem ESPro2: Podstawowa pożywka PowerStem ESPro2 basal medium wymaga uzupełnienia suplementami PowerStem ESPro2 growth supplement i PowerStem ESPro2 LIF supplement. Kompletna pożywka PowerStem ESPro2 (pożywka podstawowa z dodatkiem suplementów) jest stabilna przez 1 miesiąc jeżeli przechowywana jest w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C. Stosowanie: • Przygotować szalki powleczone żelatyną, pokrywając je 0,2% roztworem żelatyny przez co najmniej 10 min w inkubatorze. • Mysie zarodkowe komórki macierzyste powinny być zawsze utrzymywane w stosunkowo dużym zagęszczeniu w celu utrzymania ich pluripotencji. • Najlepiej zakładać hodowlę wtórną z hodowli sub-konfluentnej (o konfluencji 70% - 80%) • Poszczególne kolonie nie powinny się wzajemnie dotykać. • Zbyt gęsty wzrost promuje różnicowanie komórek, co może spowodować utratę pluripotencji. • Mysie zarodkowe komórki macierzyste powinny być trypsynowane w zwykły sposób (np. 0,25% roztworem trypsyny). • Kiedy komórki staną się kuliste i odłączą się od podłoża (proces ten można przyspieszyć w temperaturze 37°C), należy zawiesić je w DPBS przez dokładne wielokrotne przepipetowanie, a następnie zwirować przez 5 minut w 180 xg w temperaturze pokojowej. • Usunąć supernatant w sposób sterylny. • Ponownie zawiesić osad komórek w DPBS przez wielokrotne przepipetowanie • Dobre zawieszenie komórek jest ważne w celu uzyskania pojedynczych komórek lub bardzo małych agregatów (2-3 komórki). Większe skupiska komórek nie powinny występować. • Ze względu na brak surowicy, PowerStem ESPro2 nie powoduje inaktywacji trypsyny; aby zablokować aktywność trypsyny należy zastosować jej inhibitory • Po przeliczeniu komórek należy wysiać je na szalki hodowlane pokryte żelatyną, w pożywce PowerStem ESPro2. • Inkubować komórki w zwykły sposób w inkubatorze w temperaturze 37°C i atmosferze 5% CO2. • Wymieniać pożywkę PowerStem ESPro2 na świeżą co drugi dzień. • Komórki powinny być rozdzielane w stosunku między 1:4 a 1:8 w zależności od tempa wzrostu. Uwaga: W przypadku badań wymagających różnicowania komórek nie należy dodawać LIF. mES-cells in PowerStem ESPro2 mES-cells in PowerStem ESPro2 ES-cells in medium with 10% FBS PowerStem ESPro 2 z LIF PowerStem ESPro 2 bez LIF 100 ml Kit 500 ml Kit 100 mlKit 500 ml Kit P04-7702K P04-77020K P04-7762K P04-77620K 1.7.3. POWERStem HE1 PowerStem HE1 jest wyspecjalizowaną pożywką bez surowicy do hodowli i namnażania ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hESc) i indukowanych pluripotentnych komórek macierzystych (induced pluripotent stem cells, iPSc). Pluripotentne ludzkie zarodkowe komórki macierzyste oraz komórki iPS mają zdolność różnicowania się we wszystkie typy komórek somatycznych, dlatego wiążą sie z nimi wielkie nadzieje medycyny regeneracyjnej. Nawet po długotrwałej hodowli komórki utrzymywane na matrigelu lub lamininie utrzymują normalny kariotyp i stałe tempo proliferacji. Zawartość: Pożywka PowerStem HE1 składa się z: • PowerStem HE1 basal medium (pożywka podstawowa) • PowerStem HE1 growth supplement (suplement wzrostu), który jest dodawany w czasie użytkowania Warunki przechowywania: • PowerStem HE1 basal medium: przechowywać w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C • PowerStem HE1 growth supplement: przechowywać w ciemności, w temperaturze -20°C Skład: PowerStem HE1 zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, czynniki przylegania, hormony i czynniki wzrostu w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem HE1 jest w pełni zdefiniowana chemicznie i nie zawiera peptonów ani hydrolizatów. Uwaga: PowerStem HE1 zawiera b-FGF w stężeniu 20 µg/L. Jeśli w układzie doświadczalnym wymagane jest wyższe stężenie b-FGF, należy dodać b-FGF dodatkowo do pożywki. Przydatność: Do hodowli ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hESc) i indukowanych komórek pluripotentnych (iPSc) bez surowicy, przy jednoczesnym zachowaniu stanu niezróżnicowania komórek. Uwaga: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie do celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Szczególne zalety: PowerStem HE1 pozwala na hodowlę i namnażanie ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hESc) i indukowanych komórek pluripotentnych (iPSc) w warunkach bez surowicy. Skład pożywki jest w pełni zdefiniowany, tym samym umożliwiając niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. Komórki hES i iPS mogą być hodowane bez zazwyczaj stosowanej warstwy odżywczej (fibroblastów pierwotnych), wykazując wysoki poziom proliferacji, i w większości pozostając w stanie niezróżnicowanym. Poprzez dodanie specyficznych czynników różnicowania, komórki te można poddać różnicowaniu in vitro w pożądany typ tkanki (n.p. komórki nerwowe, mięśniowe, śródbłonkowe itp.). Przygotowanie pożywki PowerStem HE1: Podstawowa pożywka PowerStem HE1 basal medium wymaga uzupełnienia suplementem wzrostu PowerStem HE1 growth supplement. Przed użyciem rozmroź PowerStem HE1 growth supplement. Rozmrożony materiał powiniem być natychmiast zużyty lub rozporcjowany i przechowywany w temperaturze -20°C. Aby uzyskać 500 ml kompletnej pożywki PowerStem HE1 należy dodać 80 ml rozmrożonego suplementu wzrostu PowerStem HE1 growth supplement do 420 ml pożywki podstawowej PowerStem HE1 basal medium. Kompletna pożywka PowerStem HE1 (pożywka podstawowa z dodatkiem suplementów) jest stabilna przez 1 miesiąc jeżeli przechowywana jest w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C Stosowanie: • Przygotować szalki powleczone fibronektyną, pokrywając je roztworem fibronektyny (0.5 mg/ml sterylnej wody) przez co najmniej 30 min w inkubatorze. Zalecane ostateczne stężenie fibronektyny to 50 µg/10 cm2. Fibronektynę można zastąpić macierzą zawnątrzkomórkową (Matrigel); zalecane rozcieńczenie to 1:40. Matrigel należy przygotować zgodnie z instrukcją producenta. • Hodowla starterowa musi być wysokiej jakości i o dużym zagęszczeniu niezróżnicowanych komórek • Czas zakładania hodowli wtórnej jest kluczowy. Nie należy pasażować komórek zbyt wcześnie, ponieważ spowoduje to słabsze wyniki wysiewania i komórki ulegną różnicowaniu. Hodowle powinny osiągnąć stan bliski konfluencji • Poszczególne kolonie nie powinny się wzajemnie dotykać. • Zbyt gęsty wzrost promuje różnicowanie komórek, co może spowodować utratę pluripotencji. • Do pasażowania komórek użyć kolagenazy. • Ogrzać odpowiednią ilość roztworu kolagenazy IV (10 mg/ml), pożywkę do płukania (DPBS) oraz pożywkę kompletną PowerStem HE1 do 37°C w łaźni wodnej • Usunąć pożywkę i dodać 1-3 ml roztworu kolagenazy tak aby pokryć komórki • Pozostawić na 3 min aby odczepić kolonie od podłoża. Nie pozostawiać na dłużej niż 3 min, gdyż może to spowodować słabe wyniki wysiewania i wywołać różnicowanie. • Dodać 3 ml pożywki hodowlanej i delikatnie zebrać komórki pipetą 5 ml. • Zebrać zawiesinę komórek, umieścić w stożkowej probówce i zwirować przez 5 min w 300 xg w temperaturze pokojowej • Ponownie zawiesić komórki w pożywce PowerStem HE1 i wysiać bezpośrednio na szalkę pokrytą fibronektyną • Komórki powinny być rozdzielane w stosunku 1:2 co 4-5 dni. Pożywka powinna być zmieniana codziennie. hES-cells in PowerStem HE1 PowerStem HE1 hES-cells colony in PowerStem HE1 hES-cells in medium with 10 % FBS 100 ml Kit 500 ml Kit P04-7711K P04-77110K 1.7.4. POWERStem HE2 PowerStem HE2 jest wyspecjalizowaną pożywką bez surowicy do hodowli i namnażania ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hESc) i indukowanych pluripotentnych komórek macierzystych (induced pluripotent stem cells, iPSc). Pluripotentne ludzkie zarodkowe komórki macierzyste oraz komórki iPS mają zdolność różnicowania się we wszystkie typy komórek somatycznych, dlatego wiążą się z nimi wielkie nadzieje medycyny regeneracyjnej. Nawet po długotrwałej hodowli komórki utrzymywane na matrigelu lub lamininie utrzymują normalny kariotyp i stałe tempo proliferacji. Zawartość: Pożywka PowerStem HE2 składa się z: • PowerStem HE2 basal medium (pożywka podstawowa) • PowerStem HE2 growth supplement (suplement wzrostu), który jest dodawany w czasie użytkowania. Warunki przechowywania: • PowerStem HE2 basal medium: przechowywać w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C • PowerStem HE2 growth supplement: przechowywać w ciemności w temperaturze -20°C Skład: PowerStem HE2 zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, czynniki przylegania, hormony i czynniki wzrostu w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem HE2 jest w pełni zdefiniowana chemicznie i nie zawiera peptonów ani hydrolizatów. Uwaga: PowerStem HE2 zawiera b-FGF w stężeniu 20 µg/L. Jeśli w układzie doświadczalnym wymagane jest wyższe stężenie b-FGF, należy dodać b-FGF dodatkowo do pożywki. Przydatność: Do hodowli ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hESc) i indukowanych komórek pluripotentnych (iPSc) bez surowicy, przy jednoczesnym zachowaniu stanu niezróżnicowania komórek. Uwaga: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie do celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Szczególne zalety: PowerStem HE2 pozwala na hodowlę i namnażanie ludzkich zarodkowych komórek macierzystych (hESc) i indukowanych pluripotentnych komórek macierzystych (iPSc) w warunkach bez surowicy. Skład pożywki jest w pełni zdefiniowany, tym samym umożliwiając niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. Komórki hES i iPS mogą być hodowane bez zazwyczaj stosowanej warstwy odżywczej (fibroblastów pierwotnych), wykazując wysoki poziom proliferacji i w większości pozostając w stanie niezróżnicowanym. Poprzez dodanie specyficznych czynników różnicowania, komórki te można poddać różnicowaniu in vitro w pożądany typ tkanki (n.p. komórki nerwowe, mięśniowe, śródbłonkowe itp.). Przygotowanie pożywki PowerStem HE2: Podstawowa pożywka PowerStem HE2 basal medium wymaga uzupełnienia suplementem wzrostu PowerStem HE2 growth supplement. Przed użyciem rozmroź PowerStem HE2 growth supplement. Rozmrożony materiał powiniem być natychmiast zużyty lub rozporcjowany i przechowywany w temperaturze -20°C. Aby uzyskać 500 ml kompletnej pożywki PowerStem HE2 należy dodać 80 ml rozmrożonego suplementu wzrostu PowerStem HE2 growth supplement do 420 ml pożywki podstawowej PowerStem HE2 basal medium. Kompletna pożywka PowerStem HE2 (pożywka podstawowa z dodatkiem suplementów) jest stabilna przez 1 miesiąc jeżeli przechowywana jest w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C Stosowanie: • Przygotować szalki powleczone fibronektyną, pokrywając je roztworem fibronektyny (0.5 mg/ml sterylnej wody) przez co najmniej 30 min w inkubatorze. Zalecane ostateczne stężenie fibronektyny to 50 µg/10 cm2. Fibronektynę można zastąpić matrigelem; zalecane rozcieńczenie to 1:40. Matrigel należy przygotować zgodnie z instrukcją producenta. • Hodowla starterowa musi być wysokiej jakości i o dużym zagęszczeniu niezróżnicowanych komórek. • Czas zakładania hodowli wtórnej jest kluczowy. Nie należy pasażować komórek zbyt wcześnie, ponieważ spowoduje to słabsze wyniki wysiewania i komórki ulegną różnicowaniu. Hodowle powinny osiągnąć stan bliski konfluencji. • Poszczególne kolonie nie powinny się wzajemnie dotykać. • Zbyt gęsty wzrost promuje różnicowanie komórek, co może spowodować utratę pluripotencji. • Do pasażowania komórek użyć kolagenazy. • Ogrzać odpowiednią ilość roztworu kolagenazy IV (10 mg/ml), pożywkę do płukania (DPBS) oraz pożywkę kompletną PowerStem HE2 do 37°C w łaźni wodnej • Usunąć pożywkę i dodać 1-3 ml roztworu kolagenazy tak aby pokryć komórki . • Pozostawić na 3 min aby odczepić kolonie od podłoża. Nie pozostawiać na dłużej niż 3 min, gdyż może to spowodować słabe wyniki wysiewania i wywołać różnicowanie. • Dodać 3 ml pożywki hodowlanej i delikatnie zebrać komórki pipetą 5 ml. • Zebrać zawiesinę komórek, umieścić w stożkowej probówce i zwirować przez 5 min w 300 xg w temperaturze pokojowej. • Ponownie zawiesić komórki w pożywce PowerStem HE2 i wysiać bezpośrednio na szalkę pokrytą fibronektyną. • Komórki powinny być rozdzielane w stosunku 1:2 co 4-5 dni. Pożywka powinna być zmieniana codziennie. hES-cells in PowerStem HE2 hES-cells in PowerStem HE2 hES-cells in medium with 10 % FBS PowerStem HE2 100 ml Kit 500 ml Kit P04-7712K P04-77120K 1.7.5. POWERStem EST PowerStem EST to wolny od surowicy system do hodowli i namnażania zarodkowych komórek macierzystych myszy (mESc), a także ich późniejszego różnicowania w bijące kardiomiocyty (n.p. do testu EST zarodkowych komórek macierzystych). Test EST został formalnie zatwierdzony przez Europejskie Centrum Legalizacji Metod Alternatywnych (ECVAM) jako akceptowalny test embriotoksyczności in vitro. Test in vitro zarodkowych komórek macierzystych (EST) pozwala na zaklasyfikowanie potencjału embriotoksycznego odczynników i potencjalnych leków. W celu zbadania nowoopracowanych odczynników i leków, opracowano model prognostyczny na podstawie zahamowania różnicowania mysich zarodkowych komórek macierzystych w kardiomiocyty. Zastosowanie testu EST do testowania odczynników skraca czas, obniża koszty i pozwala zmniejszyć liczbę zwierząt w testach embriotoksyczności. Zawartość: Zestaw PowerStem EST składa się ze złożonej pożywki postawowej zawierającej sole, aminokwasy, witaminy i mikroelementy, do której tuż przed użyciem dodaje sie suplement (PowerStem EST growth supplement), składający się z mieszaniny białek, czynników wzrostu i hormonów. Aby utrzymać zarodkowe komórki macierzyste w stanie niezróżnicowanym i podtrzymać ich wzrost, do suplementowanej pożywki podstawowej (PowerStem EST basal medium) dodaje się mysi czynnik przeciwbiałaczkowy (mLIF, 1000 U/ml, w postaci PowerStem EST LIF-supplement). W celu różnicowania w bijące kardiomiocyty, do suplementowanej pożywki podstawowej (PowerStem EST basal medium; bez dodatku mLIF) dodaje się mieszankę czynników różnicowania (PowerStem EST differentiation supplement). Przydatność: Kardiomiocyty uzyskane przez różnicowanie komórek macierzystych mogą być użyte w wielu różnych zastosowaniach: • w badaniach podstawowych w badaniu wczesnych procesów rozwojowych koniecznych do funkcjonalnej kardiogenezy in vitro • w testach składników leków i odczynników chemicznych na mutagenność, cytotoksyczność I embriotoksyczność (test EST) • w badaniach na obecność czynników blokujących angiogenezę (tworzenie naczyń włosowatych) • analiza elektrokardiologiczna w badaniu leków nasercowych • rozwój nowych substancji aktywnych Pożywka podstawowa (PowerStem EST basal medium) jest używana zarówno do namnażania jak i różnicowania komórek; zdefiniowane czynniki są dodawane w zależności od celu doświadczenia (podtrzymanie i wzrost lub różnicowanie komórek ES). Szczególne zalety: Różnicowanie mysich zarodkowych komórek macierzystych in vitro zachodzi dzięki użyciu płodowej surowicy bydlęcej (FBS). Wykazano, że użycie FBS jest czynnikiem ograniczającym skuteczne różnicowanie zarodkowych komórek macierzystych w kardiomiocyty. Niektóre partie FBS powodują słabe różnicowanie, a inne mogą je nawet całkowicie zablokować. Poszukiwanie odpowiedniej partii FBS i znaczące różnice między nimi powodują, że różnicowanie komórek w pożywce z surowicą pochłania wiele czasu i pieniędzy. W przeciwieństwie do hodowli z FBS, w warunkach bezsurowiczych liczba różnicujących komórek znacznie się zwiększa, przy dość stabilnym tempie różnicowania. Zestaw PowerStem EST skutecznie pobudza wzrost niezróżnicowanych komórek ES i wspomaga ich różnicowanie w bijące kardiomiocyty w warunkach bezsurowiczych, dzięki czemu w standardowych warunkach uzyskuje się łatwo porównywalne wyniki. Przygotowanie: PowerStem EST po uzupełnieniu dodatkami należy przechowywać temperaturze od +2 do +8°C chroniąc przed światłem. Po otwarciu butelki należy zużyć zawatość w ciągu 1 tygodnia. Wszystkie dodatkowe czynniki, takie jak mLIF (Proliferation Supplement), jak i czynniki rożnicujące (Differentiation Supplement) powinny być dodane do pożywki podstawowej (Basal Medium, uzupełnione Growth Supplement) bezpośrednio przed użyciem. Należy unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania dodatków i zamrażania pełnej pożywki! Stosowanie: Adaptacja, hodowla i namnażanie niezróżnicowanych komórek ES Jeżeli hodowla była początkowo prowadzona w pożywce zawierającej surowicę komórki ES powinny być stopniowo adaptowane do pożywki bezsurowiczej uzupełnionej przez Growth Supplement i LIF Supplement. Zawartość FBS w pożywce jest powoli obniżana (w kolejnych pasażach) a zawartość PowerStem EST - podwyższana. Dzięki dodatkowi LIF (1000U/ml) komórki utrzymywane są w stanie niezróżnicowanym. Hodowla jest prowadzona w naczyniach pokrytych żelatyną 0.1%. Początkowa hodowla zarodkowych komórek macierzystych (ES) P1: 100% pożywki zawierającej surowicę - 0% PowerStem EST P2: 75% pożywki zawierającej surowicę - 25% PowerStem EST P3: 50% pożywki zawierającej surowicę - 50% PowerStem EST P4: 25% pożywki zawierającej surowicę - 75% PowerStem EST P5: 0% pożywki zawierającej surowicę - 100% PowerStem EST Test różnicowania: W celu przeprowadzenia różnicowania komórek należy dodać mieszaninę różnych czynników różnicujących (PowerStem EST differentiation supplement) do pożywki podstawowej uzupełnionej innymi dodatkami. Szczegółowa procedura testu różnicowania jest zamieszczona w ulotce dołączonej do PowerStem EST. Rys.1 Komórki ES hodowane w PowerStem EST z LIF PowerStem EST 100 ml Kit 500 ml Kit P04-77210K P04-77250K 1.7.6. POWERStem MSC1 PowerStem MSC1 jest łatwą do użycia pożywką pozbawioną składników pochodzenia zwierzęcego (ADCF) do hodowli i namnażania ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych (hMSC). PowerStem MSC1 jest zaprojektowana specjalnie do namnażania ludzkich komórek MSC bez ich różnicowania. PowerStem MSC1 podtrzymuje długoterminowy wzrost komórek MSC zachowując ich potencjał do różnicowania w różne linie komórkowe. Dodatkowo komórki MSC hodowane w PowerStem MSC1 namnażają się szybciej i wykazują ograniczenie zanieczyszczeń komórkami krwiotwórczymi na wczesnych pasażach w porównaniu do pożywek opartych na surowicy. Aby namnożone komórki MSC poddać różnicowaniu należy zastosować odpowiednie procedury i czynniki różnicowania. Zawartość: Pożywka PowerStem MSC1 składa się z: • PowerStem MSC1 basal medium (pożywka podstawowa) • PowerStem MSC1 growth supplement (suplement wzrostu), który jest dodawany w czasie użytkowania. Warunki przechowywania: • PowerStem MSC1 basal medium: przechowywać w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C • PowerStem MSC1 growth supplement: przechowywać w ciemności w temperaturze -20°C (dostarczany w lodzie lub suchym lodzie, powinien być zużyty natychmiast po otrzymaniu lub może być ponownie zamrożony do późniejszego użytku) Zarówno PowerStem MSC1 basal medium jak i PowerStem MSC1 growth supplement mają gwarantowaną stabilność 6 miesięcy jeżeli są przechowywane w odpowiedni sposób. Pełna pożywka PowerStem MSC1 (basal medium + growth supplement) są stabilne przez 1 miesiąc jeżeli są przechowywane w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C. Nie zaleca się używania pożywki pełnej przez dłużej niż 1 miesiąc. Nie należy zamrażać pełnej pożywki PowerStem MSC1. Skład: PowerStem MSC1 zawiera sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, hormony i czynniki wzrostu, i wzbogacone ludzkie białka i lipidy w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem MSC1 jest wolne od czynników pochodzenia zwierzęcego (ADCF, xeno-free) i nie zawiera niezdefiniowanych peptonów ani hydrolizatów. Przydatność: Do hodowli ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych (hMSC) bez surowicy, przy jednoczesnym zachowaniu stanu niezróżnicowania komórek i zdolności do dalszego różnicowania. Uwaga: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie do celów terapeutycznych lub diagnostycznych. Szczególne zalety: PowerStem MSC1 pozwala na hodowlę ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych (hMSC) w warunkach wolnych od czynników pochodzenia zwierzęcego (xeno-free). Ponieważ nie zawiera surowicy ludzkiej ani zwierzęcej tym samym umożliwia niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. PowerStem MSC1 jest całkowicie wolne od składników zwierzęcych (ADCF, xeno-free) i w związku z tym nadaje się do badań w medycynie regeneracyjnej i inżynierii tkankowej. Poprzez dodanie odpowiednich czynników, MSC mogą być poddane różnicowaniu in vitro w pożądany typ tkanki (np. tkanka kostna, chrzęstna, tłuszczowa itp.). Przygotowanie pożywki PowerStem MSC1: Podstawowa pożywka PowerStem MSC1 basal medium wymaga uzupełnienia suplementem wzrostu PowerStem EST growth supplement. PowerStem EST growth supplement należy rozmrozić przed użyciem, a następnie natychmiast dodać do pożywki podstawowej (basal medium). Pełna pożywka PowerStem MSC1 (basal medium + growth supplement) jest stabilna przez 1 miesiąc jeżeli przechowywana jest w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C. Użytkowanie: Szczegółowe instrukcje dotyczące izolacji i hodowli komórek MSC można znaleźć na stronie www.pan-biotech.de. hMSC in PowerStem MSC hMSC in PowerStem MSC hMSC in medium with 10% FBS The culture-expanded cell population expresses CD90 (Thy-1), CD105 (SH2) and CD73 (SH3/SH4), but lacks expression of CD34 and CD45. PowerStem MSC 100 ml Kit 500 ml Kit P04-77310K P04-77350K 1.7.7. POWERStem HPSC PowerStem HPSC jest specjalistyczną pożywką bezsurowiczą do hodowli i namnażania ludzkich krwiotwiórczych komórek macierzystych (komórek macierzystych hematopoezy, HPSC) i komórek linii mieloidalnej w hodowli zawiesinowej. Krwiotwórcze komórki macierzyste są CD34-pozytywne, i są najwcześniejszymi komórkami hematopoetycznymi które można zidentyfikować w szpiku kostnym, krwi obwodowej i krwi pępowinowej. Poprzez dodanie jednego lub więcej czynników różnicowania lub zmianę warunków hodowli można wywołać różnicowanie HPSC w różne rodzaje komórek linii krwiotwórczej. Zawartość: Pożywka PowerStem HPSC składa się z: • PowerStem HPSC basal medium (pożywka podstawowa) • PowerStem HPSC growth supplement (suplement wzrostu), który jest dodawany w czasie użytkowania. • PowerStem HPSC cytokine supplement (suplement cytokin), który jest dodawany w czasie użytkowania. Warunki przechowywania: • PowerStem HPSC basal medium: przechowywać w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C • PowerStem HPSC growth supplement: przechowywać w ciemności w temperaturze -20°C • PowerStem HPSC cytokine supplement: przechowywać w ciemności w temperaturze -20°C PowerStem HPSC basal medium, PowerStem HPSC growth supplement oraz PowerStem HPSC cytokine supplement mają gwarantowaną stabilność 12 miesięcy jeżeli są przechowywane w odpowiedni sposób. Pełna pożywka PowerStem HPSC (basal medium + growth supplement + cytokine supplement) jest stabilna przez 3 miesiące jeżeli jest przechowywana w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C. Nie zaleca się używania pożywki pełnej przez dłużej niż 3 miesiące. Skład: PowerStem HPSC zawiera oczyszczone białka, lipidy, sole, aminokwasy, pierwiastki śladowe, czynniki przylegania, hormony i czynniki wzrostu w zoptymalizowanej kompozycji. PowerStem HPSC jest w pełni chemicznie zdefiniowane i nie zawiera FBS ani innych składników pochodzenia zwierzęcego. Przydatność: Do hodowli i namnażania ludzkich krwiotwórczych komórek macierzystych CD34-pozytywnych ze szpiku kostnego, krwi obwodowej i krwi pępowinowej. Szczególne zalety: PowerStem HPSC pozwala na hodowlę ludzkich krwiotwórczych komórek macierzystych CD34pozytywnych i komórek linii mieloidalnej w warunkach bezsurowiczych. Skład pożywki jest w pełni zdefiniowany, tym samym umożliwiając niezmienne i porównywalne warunki doświadczalne oraz wysoce powtarzalne wyniki. Krwiotwórcze komórki macierzyste mogą być hodowane bez komórek zrębu, wykazują wysokie tempo proliferacji i w większości pozostają w stanie niezróżnicowanym. Poprzez dodanie odpowiednich czynników różnicowania, komórki krwiotwórcze mogą być różnicowane in vitro w różne typy komórek linii hematopoetycznej. Przygotowanie pożywki PowerStem HPSC: Podstawowa pożywka PowerStem HPSC basal medium wymaga uzupełnienia suplementem wzrostu PowerStem HPSC growth supplement i suplementem cytokin PowerStem HPSC cytokine supplement. PowerStem HPSC growth supplement i PowerStem HPSC cytokine supplement należy rozmrozić przed użyciem, a następnie natychmiast zużyć lub rozporcjować i zamrozić w temperaturze -20°C. Aby otrzymać 500 ml pełnej pożywki PowerStem HPSC należy dodać 13 ml rozmrożonego PowerStem HPSC growth supplement i 1 ml PowerStem HPSC cytokine supplement do 486 ml pożywki podstawowej PowerStem HPSC basal medium. Pełna pożywka PowerStem HPSC (basal medium + oba suplementy) jest stabilna przez 3 miesiące jeżeli przechowywana jest w ciemności w temperaturze od +2 do +8°C. Użytkowanie: Namnażanie -Przygotować komórki jednojądrzaste (np. PBMC) z Pancoll human (P04-60500). W celu dalszego wzbogacenia komórek CD34-pozytywnych użyj np. MiniMACS (Miltenyi) lub porównywalnego systemu zgodnie z instrukcjami producenta. • Komórki CD34-pozytywne posiać w gęstości 2 x 104 komórek/ml w pełnej pożywce PowerStem HPSC, w inkubatorze w temperaturze 37°C i atmosferze 5% CO2 w powietrzu. • Przez około 3 dni obserwuje się wstępną fazę spoczynkową (lag) ponieważ większość hematopoetycznych komórek macierzystych znajduje się w fazie G0 (quiescent) • Pożywkę wymienić na świeżą (pełną) co 3-4 dni Różnicowanie • Erytropoetyna (EPO) i interleukina 6 (IL-6) stymulują różnicowanie komórek krwiotwórczych CD34-pozytywnych w prekursory czerwonych ciałek krwi (komórki BFU-E, ang. burst forming unit erythroid) • W celu rozwoju komorek BFU-E należy dodać EPO 10 U/ml i IL-6 10 µg/ml (ostateczne stężenie) do pożywki hodowlanej. Hematopoetic stem cells from neonatal cord blood in PowerStem HPSC Referencje: Horschitz S et al. (2010) Generation of neuronal cells from human peripheral blood mononuclear cells. NeuroReport 21:185 Jeśli potrzebujesz więcej referencji zapraszamy na stronę www.pan-biotech.de. PowerStem HPSC 100 ml Kit 500 ml Kit P04-77410K P04-77450K 1.7.8. POWERStem PEC1 Komórki śródbłonkowe wyściełają naczynia krwionośne i limfatyczne oraz wewnętrzną jamę serca. Mają silnie spłaszczony, wielokątny kształt i zazwyczaj spoczywają na błonie podstawnej. Przylegają do siebie nawzajem dzięki desmosomom i połączeniom ścisłym. Śródbłonek, składający się z około biliona (1012) komórek, jest jednym z najwiekszych organów ciała i odgrywa kluczową rolę w wielu procesach fizjologicznych i patofizjologicznych. Wiele czynników kontroluje proliferację i apoptozę komórek śródbłonkowych, regulując w ten sposób utrzymanie, degenerację i regenerację naczyń krwionośnych. Tworzenie nowych naczyń krwionośnych odbywa się na drodze angiogenezy i waskulogenezy procesu który ograniczony jest jedynie do rozwoju zarodkowego. W roku 1997 zaproponowano, że waskulogeneza pourodzeniowa może być ważnym machanizmem angiogenezy poprzez krążące we krwi komórki progenitorowe śródbłonka (PEC) pochodzące z krwi lub ze szpiku kostnego (Asahara i wsp., Science 1997). Wskutek tego komórki PEC przeszły wiele badań jako potencjalne źródło terapii komórkowej w celu naprawy zniszczonych naczyń krwionośnych. Badania na zwierzętach w sposób jasny pokazują, że podanie komórek PEC częściowo leczy zaburzenia sercowo-naczyniowe i uszkodzenia mięśnia sercowego (komórki PEC uczestniczą w tworzeniu nowych naczyń). Chociaż istnieje spór co do tożsamości progenitorów komórek śródbłonkowych, ostatnio zidentyfikowano populację komórek PEC która wykazuje ekspresję markerów zarówno śródbłonkowych jak i progenitorowych (Ingram i wsp., Blood. 2004; 104: 2752). Co istotne, te komórki badano na wysoki potencjał proliferacji w testach klonogeniczności, i dodatkowo zidentyfikowano poprzez tworzenie funkcjonalnych naczyń krwionośnych in vivo (Yoder i wsp., Blood. 2007; 109: 1801). Jako że komórki śródbłonka znajdują się obecnie w centrum zainteresowania inżynierii tkankowej naczyń ze względu na potencjalne zastosowania terapeutyczne, obecność pełnej surowicy zwierzęcej lub składników pochodzenia zwierzęcego jest w takich zastosowaniach niepożądana. Opis produktu: PowerStem PEC1 ready-to-use (P04-777500) jest specjalnie opracowaną pożywką wolną od surowicy i składników pochodzenia zwierzęcego do hodowli in vitro ludzkich komórek progenitorowych śródbłonka (hPEC), która zawiera wszystkie składniki niezbędne dla optymalnego tworzenia kolonii, wzrostu klonogenicznego i szybkiej proliferacji tych komórek. Jest przeznaczona do stosowania w inkubatorze w temperaturze 37°C w atmosferze 5% CO2. Należy unikać wielokrotnego podgrzewania pożywki pełnej (z dodatkami), przygotowywać jedynie ilość potrzebną do doświadczenia w osobnej sterylnej probówce. Zaleca się używanie 5 ml PowerStem PEC1 na butelkę T25. W przypadku większej lub mniejszej powierzchni hodowli należy odpowiednio dostosować objętość używanej pożywki. Po 24 godzinach od rozmrożenia komórek wymienić pożywkę i usunąć komórki które nie przyczepiły się do podłoża. W celu utrzymania hodowli i namnażania komórek należy wymieniać pożywkę co dwa lub trzy dni; dla hodowli bliskich konfluencji lub dla jak najlepszej proliferacji sugerowane jest dodanie większej ilości pożywki lub jej częstsza wymiana. Przechowywać w ciemności w temperaturze +2°C do +8°C. Okres trwałości: 3 miesiące. Zestaw PowerStem PEC1 kit (P04-77750K) wyposażony jest w suplementy (przebadane dla komórek progenitorowych) w oddzielnych sterylnych opakowaniach. Pozwala to użytkownikowi na przygotowanie pożywki do specjalnych zastosowań. Na przykład VEGF, FGF-2 lub inne składniki mogą być pominięte w pełnej pożywce w przypadku szczególnych układów doświadczalnych. Należy jednak pamiętać, że taki skład nie zapewni optymalnego wzrostu komórek, dlatego nie można używać takiej pożywki do długoterminowej, rutynowej hodowli komórek PEC. Należy również zadbać aby podczas dodawania poszczególnych składników do pożywki zachowana była całkowita sterylność. Pożywka powinna być delikatnie ale dokładnie wymieszana po dodaniu wszystkich składników. Pożywkę podstawową (basal medium) i pożywkę pełną (z dodatkami) należy przechowywać w temperaturze +2°C do +8°C, a dodatki (suplementy) w temperaturze -20°C. Okres trwałości: 6 miesięcy. Pożywka podstawowa (basal medium), pożywka pełna (z dodatkami) ani pożywka ready-touse nie powinny być zamrażane! OSTRZEŻENIE: PowerStem PEC1 nie powoduje inaktywacji trypsyny; aby zatrzymać aktywność trypsyny należy zastosować jej inhibitory (roztwór inhibitora trypsyny P10-033100). Aby uniknąć uszkodzenia komórki PEC powinny być wystawione na działanie trypsyny przez jak najkrótszy okres czasu. UWAGA: Wyłącznie do wykorzystywania w badaniach, nie zatwierdzona do celów terapeutycznych ani diagnostycznych u zwierząt ani ludzi. PowerStem PEC1 jest pożywką odpowiednią do hodowli: Ludzkich śródbłonkowych komórek progenitorowych z krwi pępowinowej Ludzkich śródbłonkowych komórek progenitorowych z krwi obwodowej Ludzkich śródbłonkowych komórek progenitorowych ze szpiku kostnego Kontrola jakości: Każda partia PowerStem PEC1 jest badana na zdolność wspomagania proliferacji komórek na świeżo wyizolowanych ludzkich śródbłonkowych komórkach pierwotnych krwi pępowinowej aby zapewnić optymalne działanie i niezawodność. Dodatkowo pożywka jest badana na brak zakażeń mikrobiologicznych (bakterie, drożdże, grzyby, mykoplazma). PowerStem PEC1 ready to use PowerStem PEC1 kit 500 ml 500 ml P04-777500 P04-77750K 1.8 DRZEWKA DECYZYJNE Różne typy komórek (limfocyty, komórki szpiczaka, komórki nowotworowe, hybrydoma, makrofagi, fibroblasty, melanocyty, komórki HEK i HeLa) Adherentne Nieadherentne Łatwo ulegające adhezji Trudno ulegające adhezji Niezależne od insuliny Zależne od insuliny Panserin 401 Panserin 412 Panserin 401 Panserin 411 Panserin PX40 Panserin PX40 Komórki szpiczaka (myeloma)/ Komórki hybrydoma Z białkiem Bez białka Niska gęstość wysiewania Średnia gęstość wysiewania Niezależne od cholesterolu Zależne od cholesterolu Panserin PX10 Panserin 401 Panserin H4000 Panserin H8000 Komórki HEK (293) Limfocyty Badania cytogenetyczne Z PHA Panserin 411S Panserin 413 Bez PHA adherentne Panserin Panserin 701 293A nieadherentne Panserin 293S Komórki owadzie Sf9 Schneider’s Drosophila S2 Sf21 Spodopan Keratynocyty - Panserin 801 Panserin S2 Komórki dendrytyczne - Panserin 416 Komórki śródbłonka HUVEC - Endopan 300L Zastępniki (substytuty) surowicy Dla komórek nieadherentnych Z dodatkiem czynników przylegania, dla komórek adherentnych Specjalny skład, bez składników pochodzenia zwierzęcego, dla komórek adherentnych Specjalny skład, bez składników pochodzenia zwierzęcego, dla komórek nieadherentnych Panexin NTS Panexin NTA Panexin NTA Pharma Grade Panexin NTS Pharma Grade Komórki CHO Adherentne Panexin 604 Nieadherentne Chemicznie zdefiniowane, bez składników pochodzenia zwierzęcego i ludzkiego, zawierające białko Chemicznie zdefiniowane, bez składników pochodzenia zwierzęcego i ludzkiego, nie zawierające białka Bez składników pochodzenia zwierzęcego i ludzkiego, nie zawierające białka, bardzo wysoka wydajność Panexin 604ST Panexin 604SPF Panexin C6000 Komórki Vero - Panserin ProVero Komórki NIH 3T3A - Nieadherentne - Panserin T3 2. SUROWICE 2.1 WSTĘP Funkcja surowicy w hodowli komórkowej • Stymulacja wzrostu komórek, proliferacji i różnicowania przez czynniki hormonalne. • Czynniki przylegania ułatwiają i usprawniają przyłączanie komórek do płytek hodowlanych (biomatrix). • Białka transportowe i wiążące między innymi dostarczają hormony, minerały i lipidy. • Wiązanie substancji toksycznych przez białka surowicy. Surowice zwierzęce Niezależnie od linii komórkowej (tj. typu lub klasy komórek) surowica w dawce około 10 - 15% (całkowitej objętości cieczy) jest dodawana do hodowli komórkowej jako substancja odżywcza. Surowica produkowana z krwi zwierząt oraz tzw. FBS jest obecnie najbardziej rozpowszechniona, ponieważ zawiera szczególnie dużo czynników pobudzających wzrost, ze względu na swoje pochodzenie z krwi płodowej (płodów pozostałych po uboju bydła). Zalety PAN Biotech GmbH • Własny surowiec z różnych krajów: Australia (atestowany dla USA), Południowa Afryka, Ameryka Południowa (Brazylia). • Certyfikat zgodności nr: R1-2002-167 CEP-Rev 00. • Na licencji zgodnie z nowym rozporządzeniem UE nr 1774 / 2002 z wet. nr: DE 09 275 0001 14. • Każda partia jest w pełni udokumentowana - od kraju pochodzenia do filtracji końcowego produktu. Nasze standardowe instrukcje obsługi mogą być okazane w dowolnym momencie. • Wszystkie procedury, od pobierania surowicy do sterylnej filtracji produktu końcowego, są określone w SOP (standardowe procedury operacyjne) i zawsze mogą zostać przedstawione. • Oferujemy specjalne rodzaje surowicy: dializowane, inaktywowane, filtrowane węglem aktywowanym, gamma-napromieniowane, pozbawione lipidów, ze zmniejszonym stężeniem gamma-globulin. • Najwyższe standardy produkcji i bezpieczeństwa w produkcji surowicy. • Najlepsze referencje od przemysłu i ośrodków naukowych. • Bardzo dokładne testy i analizy (patrz certyfikat). Dokumentacje • Certyfikat COS • Sprawozdanie z produkcji • Świadectwo analizy (CoA) • Dokumenty weterynaryjne • Dokumenty importowe • Świadectwo pochodzenia • Walidacja ekstrakcji surowicy i jej przetwarzania • Dokumenty eksportowe i importowe zgodne z obowiązującymi dyrektywami EU • Protokół produkcji Wykorzystujemy wyłącznie surowice z obszaru gwarantującego brak BSE. Ponadto możemy także potwierdzić, że Republika Południowej Afryki, jako kraj pochodzenia surowicy, jest wolna od trzęsawki. Żadna partia surowicy z PAN-Biotech nie jest otrzymywana z Wielkiej Brytanii jako kraju pochodzenia. Nalegamy na składanie kompletnej dokumentacji, zawierającej certyfikat pochodzenia i świadectwa weterynaryjne, dokumenty przewozowe, świadectwa analizy, szczegółowy protokół produkcji. Każdy proces jest monitorowany indywidualnie dla każdej partii a następnie podsumowywany w protokole produkcyjnym. Proces produkcyjny Nieprzetworzona surowica jest pobierana z wybranych rzeźni poddawanych kontroli. Po otrzymaniu produkt jest sprawdzany, grupowany oraz sterylnie filtrowany (przez serię filtrów o coraz mniejszej wielkości porów). Po dekantacji surowica jest przechowywana w wysokiej jakości butelkach ze sterylnych tworzyw sztucznych (lub butelkach Nalgene), a kompleksowe badania są przeprowadzane w laboratorium kontroli jakości. Kontrola sterylności 5 ml każdej próbki jest zaszczepiona 20 ml pożywki bulionowej z caso - i tioglikolanami i inkubowana w 32°C i w temperaturze pokojowej. Ocena sterylności następuje po okresie 21 dni. Test na mykoplasmę 1. Metoda fluorochromowa DNA: Hodowle komórkowe są poddane obróbce zgodnie z metodą fluorochromową DNA z H33258 (bis-benzimid) i badane pod mikroskopem fluorescencyjnym w celu wykrycia zanieczyszczenia mykoplazmą. 2. Kultury bakterii: Porcje osadów z próbki surowicy w pożywce namnażajacej (dwufazowy bulion z surowicą końską) są inkubowane przez 14 dni w temperaturze 37°C w inkubatorze. Wzbogacony bulion jest następnie zaszczepiany na płytki agarowe. Ocenę pod mikroskopem przeprowadza się po 14 dniach inkubacji w warunkach beztlenowych w 37°C. L-formy bakteryjne (CWD) Specjalne wzbogacona pożywka jest używana do wykrywania L-form bakteryjnych. Test na obecność wirusów (antygen-przeciwciało) Wszystkie partie surowicy płodowej są badane pod kątem zakażenia wirusem BVD-MD, IBRIPV, a także mikroorganizmami PI 3 w uznanym i niezależnym laboratorium. Wzrost komórek Próbka surowicy jest stosowana jako dodatek do pożywki wzrostowej (10% surowicy) do hodowli fibroblastów mysich (L 929) i komórek mysiego szpiczaka (SP 2). Wykreśla się krzywą wzrostu przez okres 7 dni i dokonuje się oceny tempa podziałów, liczby i morfologii komórek. Zdolność tworzenia klonów 500 komórek hoduje się w 90 mm szalkach hodowlanych i inkubuje przez 14 dni w temperaturze 37°C, po czym komórki utrwala się i wybarwia. Rejestruje się następujące dane: liczebność koloni, wielkość klonów i morfologia komórek. Surowica jest badana z fibroblastami L 929 na wydajność zasiedlania oraz z SP 2 na wydajność klonowania. Wszystkie wartości określone w układach biologicznych stosuje się tylko do wskazanego systemu komórkowego. Oprócz tych rutynowych badań podejmujemy dalsze badania w różnych systemach komórkowych na życzenie klienta. Będzie nam miło spełnić państwa życzenia w tym zakresie. Badania chemii klinicznej Oznaczenia rutynowe, takie jak stężenie glukozy i zawartość białka całkowitego, wartość pH, osmolalność, pirogenność, hemoglobina i inne badania mogą oczywiście być również przeprowadzane. 2.1.1. Certyfikat COS Historia: Firma PAN-Biotech GmbH powstała w 1988 roku i od roku 1994 produkuje i sprzedaje surowice zwierzęce. System jakości dla wytwarzania tych produktów to Certyfikat ISO 9001. (Dla jakość obsługi certyfikat ISO 9001 odnosi się do dodatku 1 i 2) Wytwarzana surowica była stosowanych jako surowiec do produkcji produktów biofarmaceutycznych. Procesy i urządzenia stosowane do produkcji surowicy są przyjazne dla środowiska, są walidowane, kontrolowane i gwarantują sterylną produkcję. Od zamówień surowego materiału do powstania surowicy gotowej do sprzedaży firma zapewnia pełną dokumentację i kontrolę. Deklaracja: Proces produkcji i kontroli jakości są prowadzone zgodnie z zaprezentowaną dokumentacją i przedstawiają odpowiedni system zapewnienia jakości zgodnie z normą jakości ISO 9001. Ten system zapewnia jakość i spójność partii. PAN-Biotech prowadzi wewnętrzny i zewnętrzny audyt systemu jakości w skali rocznej. Ponadto, PAN-Biotech regularnie kontroluje dostawców surowca oraz kontroluje obiekty, procesy produkcyjne i dokumentację w zakresie zbierania, transportu i przechowywania surowicy. PAN-Biotech jest gotów do kontroli, zgodnie z odpowiednimi aktami prawnymi, na wniosek właściwego organu przed i / lub po udzieleniu certyfikatu zgodności. Aidenbach, 01 stycznia 2009 Andreas Friedrich, Michael Wichmann Dyrektorzy PAN Biotech GmbH Nazwa posiadacza / PAN Biotech GmbH Miejsce produkcji: Gewerbepark 13 94501 Aidenbach / Niemcy 2.2. SUROWICE BYDLĘCE COS: CEP 2002-167 Płodowa surowica bydlęca: Afryka Południowa Testowana na mikoplazmę i wirusy, klasa zdrowotna 1a COS: CEP 2002-167 Płodowa surowica bydlęca: Ameryka Południowa Testowana na mikoplazmę i wirusy, klasa zdrowotna 1a COS: CEP 2002-167 Płodowa surowica bydlęca: Australia Testowana na mykolpazmę i wirusy Płodowa surowica bydlęca: pochodzenie USA Testowana na mykolpazmę i wirusy Płodowa surowica bydlęca: dopuszczona przez US Testowana na mykolpazmę i wirusy (zgodnie z listą Aphis) Cielęca surowica (od noworodka) Testowana na mykolpazmę i wirusy Surowica bydlęca 100 ml 500 ml 1501-Lot# 1502-Lot# 100ml 500 ml 3301-Lot# 3301-Lot# 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 1301-Lot# 1302-Lot# 1401-Lot# 1402-Lot# 1701-Lot# 1702-Lot# 0401-Lot# 0402-Lot# P30-0601 P30-0602 2.2.1.Surowice poddane obróbce Surowica dializowana: METODA: Surowica jest dializowana przez błony z wykluczeniem 10 kDa przeciwstawnie do roztworu soli fizjologicznej (alternatywnie: PBS), aż zawartość glukozy jest mniejsza niż 10 mg/dl. ZASTOSOWANIE: • Badania integracji radioaktywnej. • Zastosowania wolne od hormonów • Badania nietolerujące drobnych cząsteczek, takich jak nukleotydy (hipoksantyna, tymidyna), aminokwasy (seryna, alanina, itp.), cukry lub metabolity. Płodowa surowica bydlęca dializowana Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P30-2101 P30-2102 Surowica oczyszczana aktywnym węglem METODA: Surowicę ogrzewa się w łaźni wodnej z dekstranem i aktywowanym węglem drzewnym. Węgiel aktywowany, wraz ze związanymi substancjami, usuwa się następnie przez wirowanie i filtrację. ZASTOSOWANIE: • Praca przy obniżonej zawartości hormonów (sterydów). • Praca przy ograniczeniu czynników wzrostu (zapobieganie różnicowaniu się komórek). • Badania receptorów (np. estrogenów). • Minimalizuje zmienność pomiędzy partiami surowicy. Płodowa surowica bydlęca oczyszczana weglęm aktywnym Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P30-2301 P30-2302 Surowica inaktywowana termicznie METODA: Surowica jest podgrzewana przez 30 minut do 56°C w łaźni wodnej. ZASTOSOWANIE: • Pomiary dehydrogenazy mleczanowej w supernatancie hodowli jako markera uszkodzenia komórek (LDH w surowicy jest niszczony poprzez inaktywację cieplną). • Minimalizuje zmienność pomiędzy partiami surowicy (wszystkie termicznie wrażliwe składniki są zniszczone). • Badania witamin i czynników wzrostu (są niszczone w całości lub częściowo, lub zmniejszone jest ich stężenie poprzez inaktywację cieplną). • Zwiększenie ochrony przed wirusami, ponieważ inaktywowane są wirusy wrażliwe na temperaturę. • Badania w których nie jest tolerowana obecność dopełniacza. Płodowa surowica bydlęca inaktywowana termicznie Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml 1901-Lot# 1902-Lot# Surowica wolna od tetracyklin METODA: Surowica jest testowana na brak tetracyklin przy użyciu systemu TEToff (lucyferaza). ZASTOSOWANIE: • Ekspresja genów regulowana TET-on / TET-off • Transfekcje • Badania ekspresji Płodowa surowica bydlęca wolna od tetracyklin Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P30-3601 P30-3602 Surowica pozbawiona lipidów METODA: Lipidy są usuwane z surowicy krwi metodą chromatografii powinowactwa. ZASTOSOWANIE: • Badania metabolizmu lipidów • Badania miażdżycy Płodowa surowica bydlęca pozbawiona lipidów Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P30-3401 P30-3402 100 ml 500 ml P30-2001 P30-2002 Surowica sterylizowana promieniami gamma METODA: Surowica jest wystawiona na promieniowanie co najmniej 25 kGy. ZASTOSOWANIE: • Produkcja biofarmaceutyczna • Produkcja wirusów • Produkcja szczepionek • Produkcja elementów diagnostycznych Płodowa surowica bydlęca sterylizowana promieniami gamma Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica o bardzo niskiej zawartości IgG METODA: Zawartość IgG (w FBS średnio 190 µg/ml) jest obniżona metodą chromatografii powinowactwa (kolumna powinowactwa białka G) do co najwyżej 5 µg/ml. ZASTOSOWANIE: • Produkcja przeciwciał • Przeciwciała monoklonalne • Znaczniki radioaktywne Płodowa surowica bydlęca o niskiej zawartości IgG Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P30-2801 P30-2802 PANSera ES Opracowaliśmy nowy sposób przetwarzania surowicy płodowej do hodowli komórek zarodkowych. ZALETY: • Powtarzalne, stałe właściwości wzrostu. • Większa wydajność klonowania. • Więcej niezróżnicowanych klonów. • Stała ścisła kontrola jakości. • Nie ma potrzeby badania poszczególnych partii PANSera ES FBS,dedykowana do komórek ES Testowana na mykoplazmę i wirusy i testowana na komórkach ES 100 ml 500 ml 2601-Lot# 2602-Lot# 2.3 INNE SUROWICE ZWIERZĘCE Surowica kurczęca Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica ośla Testowana na mykoplazmę i wirusy 100 ml 500 ml P30-0301 P30-0302 100ml 500 ml P30-0101 P30-0102 100 ml 500 ml P30-1001 P30-1002 10 ml P30-0210 100 ml 500 ml P30-0701 P30-0702 100 ml 500 ml P30-0801 P30-0802 10 ml 100 ml P30-0200 P30-0201 100 ml 500 ml P30-0901 P30-0902 100 ml 500 ml P30-1101 P30-1102 10 ml 100 ml P30-01901 P30-01901E 100 ml 500 ml P30-4101 P30-4102 Surowica koźla Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica Chomicza Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica końska Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica jagnięca Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica mysia Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica świńska Testowana na mykoplazmę Surowica królicza Testowana na mykoplazmę i wirusy Surowica szczurza Testowana na mikoplazmę i wirusy Surowica owcza Testowana na mykoplazmę i wirusy 2.4. SERA PLUS Surowica specjalna Dla celów badawczych Do produkcji szczepionek Do produkcji bioaktywnych białek (np. insulina) Do produkcji innych cząsteczek białek Sera Plus – ZALETY: • Powtarzalny, stały wzrost • Stała - niska zawartości endotoksyn • Większe bezpieczeństwo (wirusy, mykoplazma) • Wiele linii komórkowych wykazuje lepsze właściwości wzrostu • Nadaje się do wielu różnych komórek • Stała ścisła kontrola jakości Powtarzalny, stały wzrost! Większe bezpieczeństwo w odniesieniu do braku wirusów! Sera Plus jest specjalnie przetwarzaną surowicą. Surowice wybranych partii są rozdzielane na poszczególne składniki za pomocą wyrafinowanych metod chromatograficznych, które są następnie mieszane razem zgodnie z określoną metodą. Celem jest produkcja surowicy o stałych właściwościach wzrostu (zdefiniowany skład) oraz o wyższym poziomie bezpieczeństwa w odniesieniu do braku wirusów. Badania wykazały, że nasze specjalne surowice są lepsze w testach przeprowadzonych przez klientów. W porównaniu z normalnymi surowicami FKS nasza specjalna surowica wspiera wzrost wielu typów komórek, równie dobrze a często jeszcze lepiej niż tradycyjne surowice. SeraPlus przetworzona FBS SeraPlus S przetworzona FBS 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml P30-3701 P30-3702 P30-4801 P30-4802 2.5 SUROWICA LUDZKA Surowica ludzka jest wytwarzana z ludzkiego osocza przez dodanie chlorku wapnia. Po usunięciu skrzepu surowica ludzka jest przemywana i zagęszczana przez ultrafiltrację, a w końcu filtrowana przez kombinację filtrów membranowych i innych. Mamy w swojej ofercie surowice ludzkie różnego rodzaju, między innymi pozbawione lipidów, surowice AB, oczyszczone za pomocą sepharozy A, węgla, żywic. SUROWICE bez koagulantów („Off the clot”) Surowice „Off the clot” są przygotowywane z pełnej krwi ludzkiej pobranej bez użycia koagulantów, która skrzepła w sposób naturalny w temperaturze pokojowej, a następnie została pozbawiona powstałego skrzepu przez wirowanie. Oferujemy jednostki pochodzące od jednego dawcy, jak również partie zmieszanej surowicy od różnych dawców. Surowica Off the clot jest filtrowana przez filtry membranowe i inne. Dostępne są surowice AB, męskie, żeńskie, mieszane, pochodzące od jednego dawcy, jak również zmieszane od różnych dawców. Ludzka surowica Ludzka AB surowica Ludzka AB surowica (męska) Ludzka surowica (of the clot) 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100ml 500 ml 100 ml 500 ml P30-2401 P30-2401 P30-2501 P30-2502 P30-2901 P30-2902 P30-2701 P30-2702 2.6. CERTYFIKAT ANALIZY 3. MEDIA DO KULTUR KOMÓRKOWYCH 3.1. WSTĘP Chcesz tylko najwyższej jakości pożywek do hodowli komórek? W PAN-Biotech, doskonałe surowce i najwyższa technologia gwarantują pierwszorzędną jakość pożywek. Woda jest najważniejszym składnikiem płynnych pożywek, dlatego czystość wody jest niezwykle ważna dla jakości produktów. Woda której używamy ma poziom endotoksyn <0,005 EU/ml, a zatem jest najwyższej czystości. Nasze pożywki są umieszczane w kwarantannie do czasu zakończenia procedury kontroli jakości. To gwarantuje doskonałą jakość produktu. Zalety naszych pożywek do hodowli komórkowych: • Wszystkie materiały używane przez naszą firmę są testowane zgodnie z najwyższymi standardami jakości. • Standardowo używane są wysokiej klasy butelki Nalge - PET. • Partie od 10 litrów do 4000 litrów. • Usługa: optymalizacja produktu / dalszy rozwój dotychczas stosowanej pożywki na życzenie klienta. • Oznaczenie CE zgodne z prawem produktów medycznych dostępne na życzenie. Pożywki z niestandardowymi składnikami: Jeśli potrzebujesz pożywki, które nie ma w naszym katalogu to prosimy o kontakt. Możemy wyprodukować każdy wariant składu pożywki, minimalna ilość zamówienia 20 x 500 ml. Okres trwałości Pożywki w proszku: 2 lata Pożywki płynne bez glutaminy: 2 lata Pożywki płynne z stabilną glutaminą: 2 lata Pożywki płynne z L-Glutaminą: 1 rok Pożywki płynne z L-glutaminą mogą być stosowane również po dacie ważności, ale muszą zostać uzupełnione o nową L-glutaminę. Okres trwałości zaczyna się od daty produkcji! Przechowywanie: Pożywki w proszku: + 2°C do + 8°C Pożywki płynne: + 2°C do + 8°C, chronić przed światłem Zapraszamy do skorzystania z doświadczenia PAN-Biotech GmbH. Nasza infrastruktura i doświadczenie umożliwia produkowanie specjalnie skomponowanych pożywek nawet przez dłuższy okres czasu w indywidualnie dobranych ilościach w zależności od zapotrzebowania klienta. 3.2. MEDIA 3.2.1. ALPHA MEM Alpha MEM jest inną wersją MEM Eagle i zawiera większe stężenie aminokwasów. Ma również większe stężenie kwasu liponowego, witamin i pirogronianu. Pierwotnie opracowany do hodowli komórek nerki chomika, dziś jest używany w szerokim zakresie do hodowli komórek ssaczych. Alpha MEM zaspokaja między innymi potrzeby komórek szpiku kostnego w hodowli zawiesinowej i jako pojedyncza warstwa komórek (monolayer). Kolejną możliwością jest zastosowanie jako pożywki do separacji komórek lub do hodowli komórek owodni. Pożywki Płynne: Alpha MEM Eagle Bez L-glutaminy Bez rybonukleozydów Bez deoksyrybonukleozydów Z 2,2 g/l NaHCO3 Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Bez rybonukleozydów Bez deoksyrybonukleozydów Z 2,2 g/l NaHCO3 Alpha MEM Eagle Z stabil. glutaminą Bez rybonukleozydów Bez deoksyrybonukleozydów Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml PO4-21050 500 ml PO4-21060 500 ml PO4-21350 Alpha MEM Eagle Bez L- glutaminy Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO3 Alpha MEM Eagle Z L- glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO3 Alpha MEM Eagle Z stabil. Glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml PO4-21150 500 ml PO4-21500 500 ml PO4-21250 Specjalne media płynne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): Alpha MEM Eagle Z 4 mM L- Glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml PO4-21550 Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO3 Bez glukozy PO4-21502 Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Z 2,2 g/l NaHCO3 Z 10 mM glukozą PO4-21501 Alpha MEM Eagle Bez glutaminy Bez rybonukleozydów Bez deoksyrybonukleozydów Z 2,2 g/l NaHCO3 Bez czerwieni fenolowej Alpha MEM Skład: Skład Sole nieorganiczne Chlorek wapnia x 2H2O 264,92 Siarczan magnezu, bezwodny Chlorek potasu 139,52 400,.00 Chlorek sodu 6800,00 Diwodorofosforan(V) sodu (NaH2PO4) Inne składniki 140,00 D(+)-glukoza bezwodna 1000,00 HEPES 5958,00 Kwas liponowy Czerwień fenolowa Pirogronian sodu Aminokwasy Zawartość mg/l L-alanina L-arginina x HCl 0,2 10,00 110,00 25,00 126,64 L-asparagina x H2O 50,00 Kwas asparaginowy 30,00 L-cysteina x HCl x H2O L-cysteina L-glutamina 100,00 24,00 292,00 Kwas L-glutaminowy 75,00 Glicyna 50,00 PO4-21051 Witaminy Rybonukleozydy Deoksyrybonukleozydy L-histydyna x HCl x H2O 42,00 L-Izoleucyna 52,40 L-leucyna 52,40 L-lizyna x HCl 72,47 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 32,00 L-prolina 40,00 L-seryna 25,00 L-treonina 48,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 36,20 L-valina 46,00 Kwas askorbinowy 50,00 D(+) biotyna 0,10 D-pantotenian wapnia 1,00 Chlorek choliny 1,00 Kwas foliowy 1,00 myo-Inozytol 2,00 Amid kwasu nikotynowego 1,00 Pyridoxine x HCl 1,00 Ryboflawina 0,10 Tiamina x HCl 1,00 Wiatmina B12 1,33 Adenozyna 10,00 Cytydyna 10,00 Guanozyna 10,00 Urydyna 10,00 2’- deoksyadenozyna 10,00 2’-deoksycytydyna 11,00 2’-deoksyguanozyna 10,00 2’-deoksytymindyna 10,00 W przypadku gdy medium znajduje się HEPES- o stężeniu 5958 mg/l , wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 6300 mg/l Media w proszku: Alpha MEM Eagle Bez L-glutaminy Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Bez NaHCO3 10 L PO3-2410 50 L PO3-2450 Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Bez NaHCO3 10 L PO3-2510 50 L PO3-2550 Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Bez rybonukleozydami Bez deoksyrybonukleozydami Bez NaHCO3 10 L PO3-2310 50 L PO3-2350 Alpha MEM Eagle Z L-glutaminą Z rybonukleozydami Z deoksyrybonukleozydami Bez NaHCO3 Z 25mM HEPES 10 L PO3-2610 50 L PO3-2650 Podsumowanie: L-glutamina 21050 21060 21150 21250 21350 21500 21550 21501 21502 21051 stab.glutamina rybonukleozydy deoksyrybonukleozydy dodatki x x x x x x x x x x x x x x x x x x x Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej 3.2.2. BME Z SOLAMI EARLE’A W latach pięćdziesiątych ubiegłego wieku stało się jasne, że u ssaków komórki potrzebują nie tylko 10 podstawowych aminokwasów, ale także cystyny, tyrozyny i glutaminy. W uzupełnieniu do tych trzech aminokwasów BME zawiera również osiem witamin z grupy B. Pierwotnie BME było wykorzystywane do hodowli mysich komórek L i komórek HeLa. Dzisiaj w wielu odmianach jest używane w wielu dziedzinach nauki . Poza hodowlą normalnych komórek ssaczych BME jest bardzo przydatne do hodowli komórek transformowanych. BME z EBSS Bez L-glutaminy Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml PO4-25050 BME z solami Earle’s Skład: Skład Sole nieorganiczne Zawartość mg/l Chlorek wapnia x 2H2O 264,92 Siarczan magnezu, bezwodny 139,52 Chlorek potasu 400.00 Chlorek sodu 6 800,00 Diwodorofosforan(V) sodu (NaH2PO4) Inne składniki 140,00 D(+)-glukoza bezwodna 1 000,00 HEPES 5 958,00 Czerwień fenolowa 10,00 Aminokwasy L-arginina x HCl 21,00 L-cysteina L-glutamina 12,00 292,00 L-histydyna base 8,00 L-Izoleucyna 26,00 BME z EBSS Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml PO4-25500 L-leucyna 26,00 L-lizyna x HCl 36,47 L-metionina 7,50 L-fenyloalanina 16,50 L-treonina 24,00 L-tryptofan 4,00 L-tyrozyna 18,00 L-valina 23,50 Witaminy D(+) biotyna 1,00 D-pantotenian wapnia 1,00 Chlorek choliny 1,00 Kwas foliowy 1,00 myo-Inozytol 2,00 Amid kwasu nikotynowego 1,00 Pyridoksal x HCl 1,00 Ryboflawina 0,10 Tiamina x HCl 1,00 W przypadku gdy medium znajduje się HEPES- o stężeniu 5958 mg/l , wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 6300 mg/l Media w proszku: BME z EBSS 10 L Bez L-glutaminy 50 L Bez NaHCO3 BME z EBSS 10 L Bez L-glutaminy 50 L Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 P03-5610 P03-5650 P03-5710 P03-5750 BME z EBSS Z L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L 50 L BME z EBSS 10 L Z L-glutaminą 50 L Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 P03-0110 P03-0150 P03-0210 P03-0250 Podsumowanie: L-glutamina 25050 25500 stab.glutamina x czerwień fenolowa x x HEPES Dodatki BME z solami Hanks’a Media płynne: BME z HBSS Bez L-glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml BME z HBSS Z L-glutaminą Z 0,35 g/l NaHCO3 PO4-26050 Skład: Skład Chlorek wapnia x 2H2O Sole nieorganiczne mg/l 185, 44 Siarczan magnezu, bezwodny 139,52 Wodorofosforan di sodu 47,88 Chlorek potasu 400.00 Chlorek sodu 8 000,00 Diwodorofosforan potasu 60,00 Inne składniki D(+)-glukoza 1 000,00 HEPES 5 958,00 Czerwień fenolowa 10,00 Aminokwasy L-arginina x HCl 21,00 L-cysteina 12,00 L-glutamina 292,00 L-histydyna base 8,00 L-Izoleucyna 26,00 L-leucyna 26,00 L-lizyna x HCl 36,47 L-metionina 7,50 L-fenyloalanina 16,50 L-treonina 24,00 L-tryptofan 4,00 500 ml PO4-26500 L-tyrozyna 18,00 L-valina 23,50 Witaminy D(+) biotyna 1,00 D-pantotenian wapnia 1,00 Chlorek choliny 1,00 Kwas foliowy 1,00 myo-Inozytol 2,00 Amid kwasu nikotynowego 1,00 Pyridoksal x HCl 1,00 Ryboflawina 0,10 Tiamina x HCl 1,00 W przypadku gdy medium znajduje się HEPES- o stężeniu 5958 mg/l , wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 6300 mg/l Media w proszku: BME z HBSS 10 L Bez L-glutaminy 50 L Bez NaHCO3 BME z HBSS 10 L Bez L-glutaminy 50 L Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 P03-5810 P03-5850 P03-0410 P03-0450 BME z HBSS Z L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L 50 L BME z HBSS 10 L Z L-glutaminą 50 L Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 P03-0310 P03-0350 P03-5910 P03-5950 3.2.3. POŻYWKA BSK-H Mikrobiologiczna pożywka do hodowli Borrelia burgdorferi. Media płynne: BSK-H Medium Bez L-glutaminy Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-25300 BSK-H Medium 500 ml Z 6% surowicą króliczą Z 2,2 g/l NaHCO3 Bez L-glutaminy P04-25300S1 3.2.4. POŻYWKA CLICKA Pożywka Clicka to zmodyfikowana pożywka Eagle's Essential z dodatkiem soli Hanka (HMEM). Podłoże to zawiera większe stężenia aminokwasów EAA, z dodatkiem aminokwasów NEAA, pirogronianu sodu i prekursorów kwasów nukleinowych. Medium płynne: Click’s Medium Z L-glutaminą Z 1,35 g/l NaHCO3 500 ml P04-16999 10 L 50 L P03-8910 P03-8950 Medium w proszku: Click’s Medium Z L-glutaminą Bez NaHCO3 3.2.5. POŻYWKA CMRL-1066 CMRL jest pożywką bogatą w nukleozydy i witaminy. W przeszłości została opracowana do klonowania komórek nerki małpy oraz do długotrwałej hodowli komórek L. Nadaje się do wielu typów komórek ludzkich i małpich, a także dla innych komórek ssaczych, zwłaszcza przy użyciu surowicy końskiej i cielęcej. Skład Sole nieorganiczne Chlorek wapnia x 2H2O mg/l 264,92 chlorek potasu 400,00 magnesium anhydros 97,78 octan sodu x 3 H2O Chlorek sodu wodorofosforan disodu x 2H2O Inne składniki 83,00 6 799,00 139,75 cholesterol D(+)-glukoza bezwodna 0,20 1 000,00 glutation (red.) HEPES 10,00 5 958,00 metylodeoksycytydyna 1,00 glukuronian sodu x H2O 4,00 tween 80 5,00 Aminokwasy L-alanina 25,00 L-arginina x HCl 76,00 Kwas asparaginowy 30,00 L-cysteina free base 199,66 L-cysteina 20,00 L-glutamina 100,00 Kwas L-glutaminowy 75,00 Glicyna 50,00 L-histydyna x HCl x H2O 20,00 L-hydroksyprolina 10,00 L-Izoleucyna 20,00 L-leucyna 60,00 L-lizyna x HCl 70,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 25,00 L-prolina 40,00 L-seryna 25,00 L-treonina 30,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 40,00 L-valina 25,00 Witaminy kwas paminobenzoesowy 0,050 Kwas askorbinowy 50,000 D(+) biotyna 0,010 D-pantotenian wapnia 0,010 Chlorek choliny 0,500 Kwas foliowy 0,010 myo-Inozytol 0,050 Amid kwasu nikotynowego 0,025 kwas nikotynowy 0,025 pirydoksal x HCL 0,025 Pyridoxide x HCl 0,03 Ryboflawina 0,01 Tiamina x HCl 0,01 tiamina x HCl 0,01 koenzymy kokarboksylaza x HCL 1,00 koenzym A trilithiumsalt x H2O 2,67 FAD 1,00 NAD 7,00 NADP 1,00 UTP 1,00 Deoksyrybonukleozydy 2’- deoksyadenozyna 2’-deoksycytydyna x HCL 10,00 11.6 2’-deoksyguanozyna 10,00 2’-deoksytymindyna 10,00 Płynne media: CMRL-1066 Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-84600 CMRL-1066 Z L-glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-84500 3.2.6. DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) Pierwotnie opracowane do hodowli mysich komórek zarodkowych, DMEM jest dostosowany do hodowli szerokiego zakresu komórek, zwłaszcza jeśli pożywka jest uzupełniona przez dodanie FBS. DMEM jest modyfikacją pożywki Eagle z czterokrotnie zwiększoną zawartością aminokwasów i witamin. DMEM z 1.0 g / l glukozy jest standardową pożywką, natomiast DMEM z 4,5 g / l glukozy jest przeznaczony dla komórek o dużym zapotrzebowaniu energetycznym. Płynne media bez glukozy: DMEM bez glukozy Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-01548S1 DMEM bez glukozy Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-01549 DMEM bez glukozy Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml DMEM bez glukozy 500 ml Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu z 3,7 g/l NaHCO3 Bez czerwieni fenolowej P04-01551 P04-01548 DMEM bez glukozy Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-01506 Media w proszku: DMEM bez glukozy 10 L Bez L-glutaminy 50 L Bez pirogronianu sodu Bez NaHCO3 Bez czerwieni fenolowej P03-0010 P03-0050 Media płynne z 1,0 g/l glukozy: DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu z 3,7 g/l NaHCO3 P04-01500 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 P04-01550 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Z stab. Glutaminą Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 P04-02500 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Z stab. glutaminą Z pirogronianem sodu z 3,7 g/l NaHCO3 Bez czerwieni fenolowej P04-02500S1 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Z L- glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 Bez czerwieni fenolowej P04-01516 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml P04-01250 Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu z 3,7 g/l NaHCO3 Z 25mM HEPES DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Bez L- glutaminy Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 Bez czerwieni fenolowej P04-03556 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Z L-glutaminą Z pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 Z 25 mM HEPES P04-05551 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Bez L-glutaminy Z pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 Bez czerwieni fenolowej P04-01159 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 P04-01555 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 Bez czerwieni fenolowej P04-01515 Media specjalne z 1,0 g/l glukozy (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 Bez L-izoleucyny P04-01160 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Bez L-glutaminy Z pirogronianu sodu z 3,7 g/l NaHCO3 Bez wapnia P04-01501 DMEM z 1,0 g/l glukozy 500 ml Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 Bez fosforanów SILAC-DMEM Z 1,0 g/l glukozy Z stab. glutaminą Z 3,7 g/l NaHCO3 Z pirogronianem sodu Bez L-argininy Bez L-lizyny 500 ml P04-01505 P04-02501 DMEM Z 1,0 g/l glukozy Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Bez L-seryny Bez chlorku choliny Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-01550S1 10 L 50 L P03-0510 P03-0550 Media w proszku: DMEM z 1,0 g/l glukozy Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Bez NaHCO3 DMEM z 1,0 g/l glukozy Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu Z 25 nM HEPES Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-6410 P03-6450 DMEM z 1,0 g/l glukozy Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Z 25 nM HEPES Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-0610 P03-0650 DMEM z 1,0 g/l glukozy Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-01510 P03-01550 Płynne media z 4,5 g/l glukozy: DMEM z 4,5 g/l glukozy Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 DMEM z 4,5 g/l glukozy Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-03500 500 ml P04-03600 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Bez czerwieni fenolowej Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml DMEM z 4,5 g/l glukozy Z stab. Glutaminą Z pirogronianem sodu Bez czerwieni fenolowej Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-03591 P04-03588 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-03550 DMEM z 4,5 g/l glukozy Bez L-glutaminy Z 25 mM HEPES Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-01597 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-03590 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-05540 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z stab. glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z stab.glutaminą Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-04500 500 ml DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu Bez czerwnieni fenolowej Z 3,7 g/l NaHCO3 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 25 mM HEPES Bez czerwieni fenolowej Z 3,7 NaHCO3 500 ml P04-05545 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Z pirogronianem sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-05550 P04-04510 P04-01161 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z stab. L-glutaminą Z 25 mM HEPES Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-04550 DMEM z 4,5 g/l glukozy Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu Bez czerwieni fenolowej Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-01158 DMEM z 4,5 g/l glukozy Bez L-glutaminy Z pirogronianem sodu Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-03609 Media specjalne z 4,5 g/l glukozy (minimalne zamówienie – 20 x 500 ml): DMEM z 4,5 g/l glukozy Bez L-glutaminy Bez pirogronaniu sodu Bez chlorku wapnia Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml DMEM (10x) Z 4,5 g/l glukozy Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu Z NEAA Bez NaHCO3 500 ml DMEM z 4,5 g/l glukozy Z stab. glutaminą Z 12,5 mM HEPES Z pirogronianem sodu Bez czerwieni fenolowej Z 3,7 g/l NaHCO3 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Bez L-argininy Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml 500 ml P04-03520 P04-03510 P04-01162 P04-03598 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu Bez chlorku sodu Bez NaHCO3 P04-03560 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu z 1,5 g/l NaHCO3 P04-03596 DMEM z 5,5 g/l glukozy 500 ml Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 3,7 g/l NaHCO3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml Z stab. Glutaminą Z pirogronianem sodu Z 25 mM HEPES Bez czerwieni fenolowej Z 0,5 g/l NaHCO3 P04-03551 P04-01163 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Bez pirogronianu sodu Z 2,2g/l NaHCO3 500 ml P04-04057 DMEM z 4,5 g/l glukozy Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu Bez L-cysteiny Bez L-metioniny Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml P04-04055 DMEM z 4,5 g/l glukozy 500 ml Bez L-glutaminy Bez pirogronianu sodu Bez L-izoleucyny Z 3,7 g/l NaHCO3 P04-03503 Skład mg/L Chlorek wapnia bezwodny Sole nieorganiczne Azotan żelaza (III) x 9 H2O Siarczan magnezu, bezwodny Chlorek potasu Chlorek sodu Diwodorofosforan(V) sodu (NaH2PO4) Inne składniki 200,00 0,10 97,66 400.00 6400,00 108,69 D(+)-glukoza bezwodna 1000,00 HEPES 5958,00 Czerwień fenolowa 10,00 pirogronian sodu Aminokwasy L-arginina x HCl L-cysteina x 2HCL L-glutamina 62,58 584,00 kwa L-glutaminowy 75,00 glicyna 30,00 L-histydyna x HCL x H2O 42,00 L-hydroksyprolina 10,00 L-Izoleucyna 104,80 L-leucyna 104,80 L-lizyna x HCl 146,20 L-metionina 30,00 L-fenyloalanina 66,00 L-seryna 42,00 L-treonina 95,20 L-tryptofan 16,00 L-tyrozyna x 2 Na L-valina witaminy 110,00 84,00 103,79 93,60 kwas D-pantotenowy 4,00 Chlorek choliny 4,00 Kwas foliowy 4,00 myo-Inozytol 7,00 Amid kwasu nikotynowego 4,00 Pyridoxinel x HCl 4,00 Ryboflawina 0,40 Tiamina x HCl 4,00 W przypadku gdy medium znajduje się HEPES- o stężeniu 5958 mg/l , wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 6300 mg/l . Media w proszku: DMEM z 4,5 g/l glukozy 10 L Bez L-glutaminy 50 L Bez pirogronianu sodu Bez NaHCO3 P03-6510 P03-6550 DMEM z 4,5 g/l glukozy 10 L P03-0710 Z L-glutaminą 50 L P03-0750 Bez pirogronianu sodu Bez NaHCO3 DMEM z 4,5 g/l glukozy 10 L Z L-glutaminą 50 L Z pirogronianem sodu Bez NaHCO3 P03-0810 P03-0850 DMEMM z 4,5 g/l glukozy 10 L P03-6610 Bez L-glutaminy 50 L P03-6650 Bez pirogronianu sodu Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z L-glutaminą Bez pirogronianu sodu Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-0910 P03-0950 DMEM z 4,5 g/l glukozy Z L-glutaminą Z pirogronianem sodu Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 10 L P03-1010 50 L P03-1050 Podsumowanie dla DMEM bez glukozy: L-glutamina 01548S1 01549 01506 01551 01548 stab. Glutamina czerwień fenolowa x x x x pirogronian sodu x x x x dodatki Podsumowanie dla DMEM z zawartością 1,0 g/l glukozy: L-glutamina 01500 01550 02500 03556 01159 01515 02500S1 01516 01250 05551 01555 stab. Glutamina x x pirogronian sodu x x x czerwnień fenolowa x x x HEPES dodatki x x x x x x x x x x x x x 25 mM 25mM Podsumowanie dla DMEM z zawartością 4,5 g/l glukozy: L-glutamina 03500 03600 03550 03590 04500 04510 01161 01158 03591 03588 01597 05540 05545 05550 04550 03520 stab. Glutamina pirogronian sodu x x x x x x x x x x x x x x x x x x czerwień fenolowa X X X X X X HEPES X X x x X X X x x x dodatki Patrz wyżej 03510 01162 03598 04057 04055 03560 03596 03551 01163 03503 X x x x x x x x x x x x Patrz wyżej Patrz wyżej X X X X X X x x x x x x x Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej X x Patrz wyżej 3.2.7. DMEM F12 Podłoże to wspiera wzrost prawie wszystkich lini komórkowych. Na przykład jest używany dla komórek trzustki, komórek Sertoliego lub do linii komórkowych, które są stosowane w produkcji białek ludzkich. Łączy w sobie zalety obu pożywek - DMEM (wysokie stężenie aminokwasów i witamin) i Ham’s F12 (wyższe stężenie siarczanu cynku, putrescyny i kwasu linolowego). DMEM /F12 (1:1) Bez L-glutaminy Z 1,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-41450 DMEM /F12 (1:1) Z L-glutaminą Z 1,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-41500 DMEM /F12 (1:1) Z stab. glutaminą Z 1,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-41150 DMEM/ F12 (1:1) Bez L-glutaminy Z 15 mM HEPES Bez NaHCO3 DMEM/ F12 (1:1) Z L-glutaminą Z 15 mM HEPES Z 1,2 g/l NaHCO3 DMEM/ F12 (1:1) Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Z 1,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-41550 500 ml P04-41250 500 ml P04-41252 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500ml): DMEM/F12 (1:1) Bez L-glutaminy Z D-Valiną Z 1,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-03800 DMEM/F12 (1:1) bez L-glutaminy Bez glukozy Z 1,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-41151 DMEM/F12 (1:1) Z -glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 1,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-41650 DMEM/F12 (1:1) Z stab. L-glutaminą Z 15 mM HEPES Z 2,2 g/l NaHCO3 DMEM z 4,5 g/l glukozy z stab. glutaminą Bez chlorku wapnia Z 15 mM HEPES Z 1,2 g/l NaHCO3 Skład: Skład Zawartość mg/L Sole nieorganiczne Chlorek wapnia, bezwodny 116,00 azotan (V) żelaza (III) x 9 H2O 0,05 Siarczan (VI) żelaza (II) x7 H2O 0,42 chlorek potasu 311,80 siarczan miedzi x 5H2O 0,00 Chlorek magnezu x6 H2O 61,00 siarczan magnezu x 7 H2O 100,00 Chlorek sodu 6 999,50 wodorofosforan disodu, bezwodny 71,02 diwodorofosforan sodu x H2O 62,50 siarczan cynku x 7 H2O 0,43 Inne składniki D(+)-glukoza bezwodna 3 151,00 Hipoksantyna 2,04 500 ml P04-41753 500 ml P04-41251 Kwas linolowy 0,04 DL-α kwas liponowy 0,11 Czerwień fenolowa 8,10 Putrescyna x2HCL 0,08 Pirogronian sodu 110,00 Tymidyna 0,36 Aminokwasy L-alanina 4,46 L-arginina x HCl 147,35 L-asparagina x H2O 7,50 Kwas asparaginowy 6,66 L-cysteina x 2 HCl x H2O 24,00 L-cysteina x 2 HCl x H2O 17,56 L-glutamina 365,00 Kwas L-glutaminowy 7,36 Glicyna 18,76 L-histydyna x HCl x H2O 31,48 L-Izoleucyna 54,37 L-leucyna 58,96 L-lizyna x HCl 91,37 L-metionina 17,24 L-fenyloalanina 35,48 L-prolina 17,27 L-seryna 26,26 L-treonina 53,56 L-tryptofan 9,02 L-tyrozyna 38,72 L-valina 52,66 Witaminy Kwas D-pantotenowy 2,12 D (+) biotyna 0,004 Chlorek choliny 8,98 Kwas foliowy 2,66 myo-Inozytol 12,51 Amid kwasu nikotynowego 2,02 Pyridoxine x HCl 2,03 Ryboflawina 0,22 Tiamina x HCl 2,17 Witamina B12 0,68 Media w proszku: DMEM /F12 (1:1 ) 10 L bez L-glutaminy 50 L bez NaHCO3 DMEM /F12 (1:1 ) bez L-glutaminy bez NaHCO3 z 15 nM HEPES 10 L 50 L P03-6010 P03-6050 DMEM /F12 (1:1 ) 10 L Z L-glutaminą 50 L bez NaHCO3 P03-6210 P03-6250 DMEM /F12 (1:1 ) Z L-glutaminą bez NaHCO3 z 25 mM HEPES DMEM /F12 (1:1 ) Z L-glutaminą bez NaHCO3 z 15 nM HEPES 10 L 50 L P03-1210 P03-1250 10 L 50 L P03-1110 P03-1150 P03-6110 P03-6150 Podsumowanie: L-glutamina 41450 41500 41150 41550 41250 41252 3800 41151 41650 41753 41251 stab. Glutamina x x x x x x x czerwień fenolowa x x x x x x x x pirogronian sodu X X X X X X X X X X X HEPES dodatki 15 mM 15 mM 25 nM Patrz wyżej Patrz wyżęj Patrz wyżej x x 15 nM 15 mM Patrz wyżęj Patrz wyżej 3.2.8. GLASGOW MEM (BHK 21) GMEM zostało opracowane jako modyfikacja BME dla hodowli pierwotnych komórek nerki noworodka chomika. Ta wersja posiada dwukrotnie większe stężenie witamin i aminokwasów. Skład Sole nieorganiczne Chlorek wapnia x 2 H2O 238,43 0,10 0,09 siarczan magnezu bezwodny 139,57 125,64 chlorek potasu 400,00 360,00 6 400,00 6 260,00 - 250,00 124,00 111,60 4 500,00 4 250,00 azotan (V) żelaza (III) x 9 H2O wodorofosforan disodu diwodorofosforan sodu x H2O D(+)-glukoza bezwodna Czerwień fenolowa 15,00 13,50 pepton z kazeiny - 1 000,00 pepton z mięsa - 500,00 ekstrakt z drożdzy - 500,00 L-arginina x HCl 42,00 37,80 L-cysteina 24,00 21,60 292,00 262,80 21,00 18,90 L-glutamina Aminokwasy z fosforanem tryptozy, mg/L 264,92 Chlorek sodu Inne składniki bez fosforanu tryptozy mg/L L-histydyna x HCl x H2O Witaminy L-Izoleucyna 52,40 47,16 L-leucyna 52,40 47,16 L-lizyna x HCl 73,10 65,79 L-metionina 15,00 13,50 L-fenyloalanina 33,00 29,70 L-treonina 47,60 42,84 L-tryptofan 8,00 7,20 L-tyrozyna 36,20 32,52 L-valina 46,80 42,12 Kwas D-pantotenowy 2,00 1,80 Chlorek choliny 2,00 1,80 Kwas foliowy 2,00 1,80 myo-Inozytol 3,60 3,24 Amid kwasu nikotynowego 2,00 1,80 Pyridoxal x HCL 2,00 1,80 Ryboflawina 0,20 0,18 Tiamina x HCl 2,00 1,80 Media płynne: Glasgow MEM (BHK 21) 500 ml bez L- glutaminy bez fosforanu tryptozy z 2,75 g/l NaHCO3 P04-97500 Glasgow MEM (BHK 21) 500 ml bez L-glutaminy z fosforanem tryptozy z 2,75 g/l NaHCO3 P04-98500 Glasgow MEM (BHK 21) 500 ml z L-glutaminą bez fosforanu tryptozy z 2,75 g/l NaHCO3 P04-95500 Glasgow MEM (BHK 21) 500 ml z L-glutaminą z fosforanem tryptozy z 2,75 g/l NaHCO3 P04-96500 P03-3110 P03-3150 Glasgow MEM (BHK 21) 10 L Bez L-glutaminy 50 L Z fosforanem tryptozy Bez NaHCO3 P03-3210 P03-3250 Media w proszku: Glasgow MEM (BHK 21) 10 L Bez L-glutaminy 50 L Bez fosforanu tryptozy Bez NaHCO3 Glasgow MEM (BHK 21) 10 L Z L-glutaminą 50 L Bez fosforanu tryptozy Bez NaHCO3 P03-6810 P03-6850 Glasgow MEM (BHK 21) 10 L Z L-glutaminą 50 L Z fosforanem tryptozy Bez NaHCO3 3.2.9. POŻYWKA GRACE’A (Grace’s Insect Medium) Pożywka Grace została pierwotnie opracowana w celu hodowli komórek owadzich, w tym komórek SF9 i SF21. Ponadto jest odpowiednia do szerokiego spektrum komórek motyli (Lepidoptera) . Skład Sole nieorganiczne mg/L Chlorek wapnia x 2 H2O 1324,62 Chlorek potasu 2240,00 Chlorek magnezu x 6 H2O 2278,86 Siarczan magnezu, bezwodny Chlorek sodu 1765.23 6 400,00 wodorofosforan sodu 876,92 Inne składniki Kwsa jabłkowy 670,00 Kwas bursztynowy 60,00 Fruktoza Kwas fumarowy 400,00 55,00 D(+)-glukoza bezwodna 700,00 Α-kwas ketglutarowy 425,66 Sacharoza 26680,00 Β-alanina 200,00 L-alanina 225,00 L-arginina x HCL 700,00 L-asparagina x H20 350,00 Kwas asparaginowy 350,00 L-cysteina P03-6910 P03-6950 19,18 L-glutamina 600,00 L- kwas glutaminowy 600,00 Glicyna 650,00 L-histydyna base 2500,00 L-izoleucyna 50,00 75,00 L-leucyna L-lizyna x HCL 625,00 L-metionina L-fenyloalanina 50,00 150,00 L-prolina 350,00 L-seryna 550,00 L-treonina 175,00 L-tryptofan 100,00 L-tyrozyna 50,00 L - valina 100,00 Witaminy Kwas aminobenzoesowy 0,02 D(+) biotyna 0,01 Pantotenian wapnia 0,02 Chlorek choliny 0,20 Kwas filiowy 0,02 Myo-inozytol Kwas nikotynowy 0,02 0,02 Piridoxine x HCL 0,02 Ryboflawina 0,02 Tiamina x HCL 0,02 Media płynne: Grace's Insect Medium Bez L-glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml P04-81500 Grace's Insect Medium Z L-glutaminą z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml P04-82500 Media w proszku: Grace's Insect Medium Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-9010 P03-9050 Grace's Insect Medium Z L-glutaminy Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-9110 P03-9150 3.2.10. POŻYWKA HAM’S F12 W przeszłości pożywka Ham F12 była podstawową opcją do hodowli komórek CHO bez surowicy, a obecnie została zastąpiona przez lepsze pożywki bezsurowicze, takie jak oferowana przez nas C6000, która jest równocześnie bezbiałkowa. Jednak jest to odpowiednia pożywka dla komórek ssaczych, gdy jest uzupełniona przez FBS. Zawiera wysokie stężenie witamin, aminokwasów i pierwiastków śladowych. Zawartość siarczanu cynku jest zwiększona, zawiera również putrescynę i kwas linolowy. Ham’s F12 Medium 500 ml P04-14550 bez L-glutaminy Z 1,176 g/l NaHCO3 Ham’s F12 Medium 500 ml P04-14500 Z L-glutaminą Z 1,176 g/l NaHCO3 Ham’s F12 Medium Z L-glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 25 mM HEPES Z 1,176 g/l NaHCO3 500 ml P04-14501 Ham's F12 Medium 500 ml P04-15500 Z stab.glutaminą Z 1,176 g/l NaHCO3 Ham's F12 Medium Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 1,176 g/l NaHCO3 Ham's F12 Medium Z L-glutaminą Z 2,5 g/l NaHCO3 500 ml 500 ml P04-14559 P04-15600 Skład: Skład Sole nieorganiczne mg/L Chlorek wapnia bezwodny Siarczan miedzi x 5 H20 33,3 0,003 Siarczan żelaza x 7 H20 0,834 Chlorek magnezu x 6 H20 122,00 Chlorek potasu Chlorek sodu Inne składniki 223,60 7099,00 Wodorofosforan di sodu, bezwodny Siarczan cynki x 7 H20 142,04 D(+) glukoza bezwodna 1801,60 HEPES 5958,00 0,86 Hipoksantyna 5,46 Kwas linolowy 0,084 DL-α-kwas liponowy 0,21 Czerwień fenolowa 1,20 Putrescyna x 2 HCL Pirogronian sodu tymidyna Β-alanina L-arginina x HCL 0,16 110,10 0,73 8,91 210,70 L-asparagina x H20 15,01 Kwas asparaginowy 13,31 L-cysteina x HCL x H20 L-glutamina L- kwas glutaminowy Glicyna L-histydyna x HCL x H20 L-izoleucyna 35,12 146,20 14,71 7,51 20,96 3,94 L-leucyna 13,12 L-lizyna x HCL 36,54 L-metionina 4,48 L-fenyloalanina L-prolina 4,96 34,53 L-seryna 10,51 L-treonina 11,91 L-tryptofan 2,04 L-tyrozyna 2Na x 2H20 7,84 L-valina 11,71 aminokwasy D(+) biotyna 0,007 Pantotenian wapnia Chlorek choliny 0,24 13,96 Kwas foliowy 1,32 Myo-inozytol 18,02 Amid kwasu amidowego 0,037 Piridoxine x HCL 0,062 Ryboflawina 0,038 Tiamina x HCL 0,34 Witamina B12 1,36 Media w proszku: Ham's F12 Medium Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-4910 P03-4950 Ham's F12 Medium Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-4210 P03-4250 Ham's F12 Medium Z glutaminą Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-4110 P03-4150 Podsumowanie: L-glutamina 14550 14500 14501 15500 14559 15600 Stab. Glutamina x x x pirogronian sodu X X X x x x czerwień fenolowa x x HEPES dodatki 25 mM x x 3.2.11. POŻYWKA HAM’S F10 Ham’s F10 jest alternatywą Ham’s F12 i była używana przede wszystkim do hodowli komórek CHO. Obecnie Ham’s F10 może być używana do różnych hodowli komórkowych- z lub bez FBS. Znajduje zastosowanie na przykład w hodowli komórek pierwotnych szczurów i kurcząt, a także ludzkich komórek diploidalnych. Patrz wyżej Skład Sole nieorganiczne Chlorek wapnia x 2H20 44,09 Siarczan miedzi x 5 H20 0,003 Siarczan żelaza x 7 H20 0,834 siarczan magnezu bezwodny 74,62 Chlorek potasu diwodorofosforan potasu chloerk sodu Inne składniki mg/L 285,00 83,00 7400,00 Wodorofosforan di sodu, bezwodny 153,7 siarczan cynku x 7 H20 0,029 D(+) glukoza bezwodna 1100,00 Hipoksantyna 4,08 DL-α-kwas liponowy 0,21 HEPES 5958 Czerwień fenolowa Pirogronian sodu 1,2 110,00 2-deoksytymidyna 0,73 Β-alanina 8,91 L-arginina x HCL 211,00 L-asparagina x H20 15,00 Kwas asparaginowy 13,3 L-cysteina x HCL x H20 35,12 L-glutamina 146,2 L- kwas glutaminowy 14,7 Glicyna 7,51 L-histydyna x HCL x H20 L-izoleucyna 21,00 2,60 L-leucyna 13,10 L-lizyna x HCL 29,30 L-metionina 4,48 L-fenyloalanina 4,96 L-prolina 11,5 L-seryna 10,5 L-treonina 3,57 L-tryptofan 0,60 L-tyrozyna 1,81 L-Valina 3,50 D(+) biotyna 0,024 Pantotenian wapnia 0,715 Chlorek choliny 0,698 Kwas foliowy 1,32 Myo-inozytol 0,541 Amid kwasu amidowego 0,615 Piridoxine x HCL 0,21 Ryboflawina 0,376 Tiamina x HCL 1,01 Witamina B12 1,36 Kiedy w medium znajduje się 5958 mg/l HEPES, stęż, chlorku sodu wynosi 6900 mg/l. Media płynne: Hams F10 Medium Bez L-glutaminy Z 1,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-12050 Hams F10 Medium Z stab. L-glutaminą Z 1,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-13500 Hams F10 Medium Z L-glutaminą Z 1,2 g/l NaHCO3 Hams F10 Medium Bez L-glutaminy Z 1,2 g/l NaHCO3 Z 25 mM HEPES 500 ml 500 ml P04-12500 P04-13050 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): Hams F10 Medium Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 1,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-12049 Hams F10 Medium Z stab. L-glutaminą Bez glukozy Z 1,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-13501 10 L 50 L P03-5010 P03-5050 Media w proszku: Hams F10 Medium Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-5010 P03-5050 Hams F10 Medium Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 Podsumowanie: l-glutamina 12050 12500 13500 13050 12049 13501 stab.glutamina x x x czerwień fenolowa X X X X x HEPES dodatki 25 mM X 3.2.12. ISCOVE‘S MODIFIES DULBECO‘S MEDIA (IMDM) IMDM jest modyfikacją pożywki DMEM, o wyższej zawartości witamin, selenu i aminokwasów. Ponieważ jest suplementowana albuminą, transferyną i lipidami sojowymi, doskonale nadaje się do hodowli limfocytów, komórek szpiku i hybrydomy. Uwaga: dla komórek hybrydoma są dostępne bardziej wydajne pożywki bezbiałkowe, na przykład nasze PANSERIN H4000. Media płynne: IMDM bez L-glutaminy 500 ml Z 3,024 g/l NaHCO3 P04-20250 IMDM z L-glutaminą Z 3,024 g/l NaHCO3 P04-20350 500 ml IMDM bez L-glutaminy 500 ml Z 25 mM HEPES Z 3,024 g/l NaHCO3 IMDM z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Z 3,024 g/l NaHCO3 IMDM z stab. Lglutaminą Z 25 mM HEPES Z 3,024 g/l NaHCO3 500 ml P04-20050 IMDM z stab.glutaminą 500 ml Z 25 mM HEPES Bez czerwieni fenolowej Z 3,024 g/l NaHCO3 P04-20451 500 ml P04-20150 P04-20450 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): IMDM bez Lglutaminy Z 1,0 g/l glukozy Z 3,024 g/l NaHCO3 500 ml IMDM z stab.glutaminą 500 ml Z 25 mM HEPES Bez czerwieni fenolowej 315 mOsm Z 3,024 g/l NaHCO3 IMDM z L-glutaminą z 1,5 g/l NaHCO3 500 ml P04-20259 P04-20451S1 P04-20351 Skład: Skład Sole nieorganiczne Chlorek wapnia x 2H20 218,56 chlorek potasu 330,00 azotan potasu 0,076 siarczan magnezu bezwodny 139,52 siarczan magnezu bezwodny 5005,00 diwodorofosforan sodu x H20 selenian sodu Inne składniki mg/L 125,00 0,011 D(+) glukoza bezwodna 4500,00 HEPES 5958,00 Czerwień fenolowa 110,00 Pirogronian sodu 15,00 Β-alanina 25,00 Aminokwasy L-arginina x HCL 84,00 IMDM z stab.glutaminą Z 3,7 g/l NaHCO3 500 ml IMDM z stab.glutaminą 500 ml Z 25 mM HEPES 320 mOsm Z 3,024 g/l NaHCO3 P04-20260 P04-20150S2 L-asparagina x H20 28,40 Kwas asparaginowy 30,00 L-cysteina 70,00 L-glutamina 584,00 L- kwas glutaminowy 75,00 Glicyna 30,00 L-histydyna x HCL x H20 42,00 L-izoleucyna 105,00 L-leucyna 105,00 L-lizyna x HCL 146,00 L-metionina 30,00 L-fenyloalanina 66,00 L-prolina 40,00 L-seryna 42,00 L-treonina 95,00 L-tryptofan 16,00 L-tyrozyna 74,86 L-Valina 94,00 D(+) biotyna 0,013 Pantotenian wapnia 4,00 Chlorek choliny 4,00 Kwas foliowy 4,00 Myo-inozytol 7,20 Amid kwasu amidowego 4,00 Piridoxal x HCL 4,00 Ryboflawina 0,40 Tiamina x HCL 4,00 Witamina B12 0,013 Media w proszku: IMDM bez L-glutaminy 10 L Bez NaHCO3 50 L P03-5210 P03-5250 IMDM bez L-glutaminy 10 L Bez NaHCO3 50 L Z 25 mM HEPES P03-1410 P03-1450 IMDM z L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L P03-1310 50 L P03-1350 Podsumowanie: L-glutamina 20250 20350 20260 20050 20150 20450 20451 20259 20451S1 20150S2 20351 stab. Glutamina x x x x x czerwień fenolowa X X X X X X HEPES Patrz wyżej 25 mM 25 mM 25 mM 25 mM X x x x X X dodatki Patrz wyżej Patrz wyżej 25 mM 25 mM Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej 3.2.13. POŻYWSKA IPL-41 do komórek owadzich IPL-41 jest wykorzystania do hodowli komórek motyli i namnażania wirusów w tych liniach komórkowych. Pożywka ta jest na przykład używana do długoterminowych hodowli komórek spodotera zakażonych bakulowirusem. Skład: Skład Sole nieorganiczne heptamolibdenian amonu x 4 H20 0,04 chlorek wapnia x 2 H20 662,31 chlorek kobaltu x 6 H20 0,05 chlorek miedzi x 2H20 0,20 siarczan żelaza (II) x 7 H20 0,55 siarczan magnezu bezwodny chlorek magnezu x 4 H20 Inne składniki mg/L 1193,4 0,02 chlorek potasu 1200,00 chlorek sodu 2850,00 diwodorofosforan sodu x H20 1160,00 chlorek cynku 0,04 kwas fumarowy 4,40 D (+) glukoza bezwodna 2500,00 sodowa sól kwasu αketoglutarowego 34,05 kwas jabłkowy 53,60 D-maltoza x H20 kwas bursztynowy 1052,58 4,80 sacharoza 1650,00 Β-alanina 300,00 L-arginina x HCL 800,00 kwas asparaginowy 1300,00 L-asparagina x H2O 1477,14 L-cysteina 100,00 L-glutamina 1000,00 L- kwas glutaminowy 1500,00 Glicyna 200,00 L-histydyna base 200,00 L-hydroksyprolina 800,00 L-izoleucyna 750,00 L-leucyna 250,00 L-lizyna x HCL 700,00 L-metionina 1000,00 L-fenyloalanina 1000,00 L-prolina 500,00 L-seryna 200,00 L-treonina 200,00 L-tryptofan 100,00 L-tyrozyna 250,02 L-valina 500,00 kwas aminobenzoesowy 0,32 D (+) biotyna 0,16 D-pantotenian wapnia 0,008 chlorek choliny 20,00 kwasfoliowy 0,08 myo-inozytol 0,40 kwas nikotynowy 0,16 amid kwasu nikotynowego 0,16 pyridoxine x HCL 0,40 ryboflawina 0,08 Tiamina x HCL 0,08 Witamina B12 0,24 Media płynne: IPL-41 Insect Medium Bez L-glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml P04-85500 IPL-41 Insect Medium Z L-glutaminą Z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml P04-85600 10 L 50 L P03-9210 P03-9250 Media w proszku: IPL-41 Insect Medium Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 3.2.14. JOKLIK- MEM Modyfikacja MEM do hodowli zawiesinowych. Ze względu na brak chlorku wapnia w tym preparacie adhezja komórek jest zmniejszona. Skład: Skład Sole nieorganiczne inne składniki chlorek magnezu x 6 H20 200,00 chlorek potasu 400,00 chlorek sodu 6500,00 diwodorofosforan sodu x H20 1327,00 D (+) glukoza bezwodna 2000,00 czerwień fenolowa 10,00 L-arginina x HCL 126,00 L-cysteina L-glutamina Aminokwasy mg/L 24,00 294,00 L-histydyna base 31,00 L-izoleucyna 52,00 L-leucyna 52,00 L-lizyna x H2O 65,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 32,00 L-treonina 48,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 32,60 L-valina 46,00 D-pantotenian wapnia 1,00 chlorek choliny 1,00 kwas foliowy 1,00 myo-inozytol 2,00 amid kwasu nikotynowego 1,00 pyridoxal x HCL 1,00 ryboflawina 0,10 Tiamina x HCL 1,00 Media płynne: Joklik-MEM 500 ml P04-21200 10 L P03-02010P 50 L P03-02050P Zmodyfikowane dla hodowli w spinnerze z EBSS (zmodyfikowany) Bez L-glutaminy Bez antybiotyku Bez chlorku wapnia Z 2,0 g/l NaHCO3 Media w proszku: Joklik-MEM Zmodyfikowane dla hodowli w spinnerze Z EBSS (zmodyfikowany) Bez L-glutaminy Bez antybiotyku Bez chlorku wapnia Bez NaHCO3 Joklik-MEM HEPES Medium Z L-glutaminą Z 3,6 g/l NaHCO3 500 ml P04-21300 3.2.15. L-15 (Leibovitz’s L-15 Medium) L-15 nie zawiera wodorowęglanu sodu gdyż jest buforowane przez wysokie stężenie aminokwasów. Pożywka L-15 wspomaga wzrost komórek ustabilizowanych takich jak Hep-2, a także ludzkich komórek nerwowych i pierwotnych hodowli tkankowych. Z dodatkiem 10% bulionu (tryptose phosphate broth) nadaje się idealnie do hodowli owadzich linii komórkowych. Skład Chlorek wapnia x 2H2O Sole nieorganiczne chlorek magnezu x 6 H2O 185, 44 200,00 siarczan magnzeu suchy 139,52 Chlorek potasu 400,00 diwodorfosforan potasu chlorek sodu wodorofosforan disodu Inne składniki D(+)-glukoza bezwodna HEPES Czerwień fenolowa Aminokwasy Zawartość mg/l 60,00 8000,00 190,00 900,00 5 958,00 10,00 pirogronian sodu 550,00 L-alanina 225,00 L-arginina base 500,00 L-asparagina x H2O 250,00 L-cysteina 120,00 L-glutamina 300,00 glicyna 200,00 L-histydyna base 250,00 L-izoleucyna 250,00 L-leucyna 125,00 L-lizyna x HCL 93,75 L-metionina 75,00 L-fenyloalanina 125,00 L-seryna 200,00 L-treonina 300,00 L-tryptofan 20,00 L-tyrozyna 300,00 L-valina 100,00 D-pantotenian wapnia 1,00 Chlorek choliny 1,00 Kwas foliowy 1,00 myo-Inozytol 2,00 Amid kwasu nikotynowego 1,00 Pyridoxolx HCl 1,00 5' fosforan ryboflawiny 0,1075 thiamine monophosphate chloride 1,00 Media płynne: Leibovitz L-15 Medium 500 ml Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 P04-27055 Leibovitz L-15 Medium 500 ml Z stab. L-glutaminą Bez NaHCO3 P04-27050 Leibovitz L-15 Medium 500 ml Z L-glutaminą Bez NaHCO3 P04-27500 Media specjalne (minimalne zamówienie– 20 x 500 ml): Leibovitz L-15 Medium 500 ml Z L-glutaminą Z 2,0 g/l NaHCO3 P04-27053 Leibovitz L-15 Medium 500 ml Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO3 P04-27054 Media w proszku: Leibovitz L-15 Medium 10 L Z L-glutaminą 50 L Bez NaHCO3 P03-1510 P03-1550 Leibovitz L-15 Medium 10 L Z L-glutamina 50 L Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 P03-1610 P03-1650 3.2.16. POŻYWKA Mc COY’S 5A Pożywka Mc Coy’s jest pełną pożywką zawierającą wszystkie aminokwasy i witaminy. Jest ona używana do hodowli pierwotnych, takich jak komórki szpiku, dziąseł, nadnerczy, śledziony, płuc, zarodki szczurów i inne typy komórek. Skład Chlorek wapnia x 2H2O Sole nieorganiczne siarczan magnzeu suchy chlorek potasu chlorek sodu diwodorofosforan sodu x H2O Inne składniki D(+)-glukoza bezwodna glutation (red.) HEPES Bacto-Pepton Aminokwasy 132,46 139,52 400,00 6460 580,00 3 000,00 0,50 5 958,00 600,00 Czerwień fenolowa 10,00 L-alanina 13,36 L-arginina x HCL 42,10 L-asparagina x H2O 45,00 kwas asparaginowy 19,97 L-cysteina 24,24 L-glutamina L-kwas glutaminowy Glicyna witaminy Zawartość mg/l 219,20 22,10 7,50 L-histydyna x HCL x H2O 20,76 L-hydroksyprolina 19,70 L-izoleucyna 39,36 L-leucyna 39,36 L-lizyna x HCL 36,50 L-metionina 14,90 L-fenyloalanina 16,50 L-prolina 17,30 L-seryna 26,30 L-treonina 17,90 L-tryptofan 3,10 L-tyrozyna 18,10 L-valina 17,60 kwas aminobenzoesowy 1,0 kwas askorbinowy 0,50 D (+) biotyna 0,20 D-Pantotenian wapnia 0,20 chlorek choliny 5,00 kwas foliowy 10,00 myo-inozytol 36,00 amid kwasu nikotynowego 0,50 kwas nikotynowy 0,50 pyridoxal x HCL 0,50 Pyridoxol x HCL 0,50 ryboflawina 0,20 tiamina x HCL 0,20 Witamina B12 2,00 Kiedy w medium znajduje się 5958 mg/ l HEPES , wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 5960 mg/l. Media płynne: Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-05500 Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) Z stab.L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-06500 Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 Z 25 mM HEPES 500 ml P04-05050 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): Mc Coy's 5A Medium Bez glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) Z L-glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO3 P04-05610 500 ml P04-05611 Media w proszku: Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) Z L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-1710 P03-1750 Mc Coy's 5A Medium (zmodyfikowane) Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-1810 P03-1850 Podsumowanie: l-glutamina 05500 x 06500 05050 x 05610 05611 x stab.glutamina x czerwień fenolowa x x x HEPES dodatki 25 mM Patrz wyżej Patrz wyżej 3.2.17. POŻYWKA MCDB 131 MCDB 131 jest pożywką o zmniejszonym dodatku surowicy do hodowli ludzkich komórek śródbłonka naczyń włosowatych. Musi być uzupełniona dializowaną surowicą oraz EGF i hydrokortyzonem. MCDB 153 jest pożywką o zdefiniowanym składzie optymalnym dla klonalnego wzrostu keranocytów ludzkich. Musi być uzupełniona o EGF, insulinę, hydrokortyzon, etanoloaminy i phosphoethanolaminy lub o surowicę. Do hodowli keratynocytów oferujemy naszą pożywkę Panserin 801 jako wolną od surowicy alternatywę. Płynne media: MCDB 131 Bez L-glutaminy Z 1,8 g/l NaHCO3 MCDB 131 Bez L-glutaminy Z 1,176 g/l NaHCO3 Z 25 mM HEPES 500 ml 500 ml P04-80057 P04-80054 MCDB 131 500 ml Z L-glutaminą Z 1,176 g/l NaHCO3 P04-80053 Specjalne media (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): MCDB 151 Bez L-glutaminy Z 1,176 g/l NaHCO3 500 ml MCDB 153 Bez L-glutaminy Bez wapnia Z 1,176 g/l NaHCO3 500 ml P04-80056 MCDB 170 Z L-glutaminą z 2,5 g/l NaHCO3 500 ml P04-80058 P04-80055 Skład: sole nieorganiczne inne składniki MCDB MEDIA składniki: metawanadan sodu chlorek wapnia x 2 H2O siarczek miedzi x 5 H2O siarczan żelaza chlorek magnezu x 6 H2O siarczan magnezu suchy siarczan manganu x H2O molibdenian amonu x 4 H2O chlorek niklu x 6 H2O chlorek potasu fosforan potasu bezwodny octan sodowy x 3 H2O chlorek sodu metakrzemian sodu x 9 H2O wodorofosforan disodu selenian sodowy bezwodny chlorek cyny x H2O siarczan cynku x 7 H2O adenina D-glukoza HEPES DL-α kwas liponowy MCDB 131 MCDB 151 MCDB 153 MCDB 170 mg/L mg/L mg/L mg/L 0,0006 0,000585 0,000585 235,05 4,411 4,411 222 0,0012 0,0025 0,00275 0,0002497 0,283 0,417 1,39 122 122 1565,2 0,00012 180,57 0,0002 0,000151 0,0001205 0,0037 0,00124 0,0012359 0,0007 0,00012 0,000001188 298 111,83 111,83 186,25 68,05 500,21 500,21 6430 7599 7599 7008 2,09 0,142 0,1421 71 284,088 284,088 0,0039 0,0038 0,0052 0,000113 0,000001128 0,0003 0,863 0,144 0,14375 0,135 30,88 24,32 0,1351 1000 1081 1081 1441,6 6600 6600 0,0021 0,206 0,206 0,002063 aminokwasy witaminy czerwień fenolowa -Na putrescyna x 2 HCL pirogroninan sodu tymidyna L-alanina L-arginina xHCL L-asparagina x H2O kwas asparaginowy L-cysteina x HCL x H2O Kwas glutaminiwy L-glutamina glicyna L-histydyna x HCL x H2O L-izoleucyna L-leucyna L-lizyna x HCL L-metionina L-fenyloalanina L-prolina L-seryna L-treonina L-tryptofan L-tyrozyna L-valina D-biotyna chlorek choliny kwas foliowy kwas folinowy x Ca myo-inozytol amid kwasu nikotynowego D-pantotenian wapnia Pyridoxine x HCL ryboflawina Tiamina x HCL witamina B12 10 0,002 110 0,024 2,7 63,2 15 13,3 35 4 1461 2,3 42 66 131 182 15 33 11,5 32 12 4,1 18,1 0,0073 1,4 0,6 7,2 6,1 12 2,1 0,0038 3,4 0,0036 1,242 0,1611 55 0,727 8,91 210,7 15 3,99 42,04 14,71 877,2 7,51 16,77 1,968 65,6 18,27 4,476 4,956 34,53 63,06 11,91 3,06 22,52 117,1 0,0146 13,96 0,79 18,02 0,0366 0,238 0,0617 0,0376 0,337 0,407 1,242 0,161 55 0,727 8,91 210,7 15 3,99 42,04 14,71 877,2 7,51 16,77 1,968 65,6 18,27 4,48 4,96 34,53 63,06 11,91 3,06 3,41 35,13 0,0146 13,96 0,79 18,02 0,03663 0,258 0,06171 0,0376 0,337 0,407 3.2.18. POŻYWKA 199 z SOLAMI EARLE’A (M199) M199 zostało pierwotnie opracowane do oznaczania zapotrzebowania fibroblastów zarodkowych kurczęcia na składnik odżywcze. Jednak pożywka ta działa bardzo dobrze w przypadku wielu 1,242 0,0001611 110 0,07266 8,9 52,26 150,14 13,31 8,55 14,71 292 7,5 15,52 13,12 39,36 29,24 4,48 4,96 5,76 31,53 35,73 6,126 9,06 35,1 0,007329 13,96 0,006016 18,02 6,105 0,02056 0,11292 0,3373 0,13554 innych gatunków zwierząt. Na przykład jest używana do produkcji szczepionek w wirusologii. Do hodowli długoterminowych należy dodać surowicę. Media płynne: M199 z EBSS Bez L-glutaminy Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-07500 M199 z EBSS Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-07050 M199 z EBSS Z satb. glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml M199 z EBSS Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Z 2,2 g/l NaHCO3 P04-07250 500 ml P04-07150 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): M199 z EBSS Bez L-glutaminy Z 25 mM HEPES Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-07550 M199 z EBSS Bez L-glutaminy Z 25 mM HEPES Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO3 500 ml P04-07560 Medium 199 z solami Earle’a Skład: Skład Zawartość mg/l chlorek wapnia x 2 H2O Sole nieorganiczne azotan żelaza III 264,92 Siarczan magnzuu suchy 139,52 0,72 M199 z EBSS Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-07561 Chlorek potasu Octan sodu x 3 H2O chlorek sodu diwodorofosforan sodu x H2O Inne składniki siarczan adeniny 6800,00 140,00 10,00 0,20 ATP 1,00 cholesterol 0,20 2-deoksyryboza 0,50 1 000,00 glutation (red.) 0,05 guanina x HCL 0,30 HEPES Hipoksantyna czerwień fenolowa D-ryboza 5958.00 0,30 10,00 0,5 tymina 0,30 Tween 80 4,90 uracyl 0,30 Ksantyna 0,30 L-alanina 25,00 L-arginina x HCL 70,00 kwas asparaginowy 30,00 L-cysteina x HCL x H2O L-cysteina L-glutamina witaminy 82,95 AMP D(+) glukoza bezwodna Aminokwasy 400,00 0,10 20,00 100,00 L-kwas glutaminowy 67,00 Glicyna 50,00 L-histydyna x HCL x H2O 21,88 L-hydroksyprolina 10,00 L-izoleucyna 20,00 L-leucyna 60,00 L-lizyna x HCL 70,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 25,00 L-prolina 40,00 L-seryna 25,00 L-treonina 30,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 40,00 L-valina 25,00 kwas aminobenzoesowy 0,05 kwas askorbinowy 0,05 D (+) biotyna 0,01 Kalcyferol 0,10 D-pantotenian wapnia 0,010 chlorek choliny 0,50 kwas foliowy 0,01 myo-inozytol 0,05 menadion 0,01 kwas nikotynowy 0,025 amid kwsu amidowego 0,025 pyridoxal x HCL 0,025 Pyridoxol x HCL 0,025 ryboflawina 0,01 DL-α- fosforan tokoferoluNa2 0,01 tiamina x HCL 0,01 witamina A octan 0,14 Media w proszku: M199 z EBSS z L- glutaminą bez NaHCO3 10 L 50 L P03-1910 P03-1950 M199 z EBSS 10 L P03-2010 z L-glutaminą 50 L P03-2050 z 25 mM HEPES bez NaHCO3 Podsumowanie: L-glutamina 07500 07050 07250 07150 07550 07560 07561 stab. Glutamina x x x x czerwień fenolowa x x x x HEPES 25 mM 25 mM 25 mM 25 mM dodatki Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Medium 199 z solami Hank’a Skład: Skład chlorek wapnia x 2 H2O Sole nieorganiczne azotan żelaza III x 9 H2O Inne składniki Zawartość mg/l 185,44 0,72 Siarczan magnezu suchy 139,68 chlorek potasu 400,00 octan sodu x 3 H2O 83,00 chlorek sodu 8000 diwodorofosforan disodu 47,68 siarczan adeniny 10,00 AMP 0,20 ATP 1,00 cholesterol 0,20 2-deoksyryboza D(+) glukoza bezwodna 0,50 1 000,00 glutation (red.) 0,05 guanina x HCL 0,30 HEPES Hipoksantyna czerwień fenolowa 5958.00 0,30 10,00 D-ryboza 0,50 tymina 0,30 Tween 80 4,90 uracyl 0,30 Ksantyna 0,30 Aminokwasy L-alanina 25,00 L-arginina x HCL 70,00 kwas asparaginowy 30,00 L-cysteina x HCL x H2O L-cysteina L-glutamina 0,10 20,00 100,00 L-kwas glutaminowy 67,00 Glicyna 50,00 L-histydyna x HCL x H2O 21,88 L-hydroksyprolina 10,00 L-izoleucyna 20,00 L-leucyna 60,00 L-lizyna x HCL 70,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 25,00 witaminy L-prolina 40,00 L-seryna 25,00 L-treonina 30,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 40,00 L-valina 25,00 kwas aminobenzoesowy 0,05 kwas askorbinowy 0,05 D (+) biotyna 0,01 Kalcyferol 0,10 D-pantotenian wapnia 0,01 chlorek choliny 0,50 kwas foliowy 0,01 myo-inozytol 0,05 menadion 0,01 kwas nikotynowy 0,025 amid kwsu amidowego 0,025 pyridoxal x HCL 0,025 Pyridoxol x HCL 0,025 ryboflawina 0,01 DL-α- fosforan tokoferoluNa2 0,01 tiamina x HCL 0,01 witamina A octan 0,14 Media płynne: M199 z HBSS Bez glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml M199 z HBSS Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml P04-07753 M199 z HBSS 500 ml Z L-glutaminą Z 0,35 g/l NaHCO3 P04-07450 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): M199 z HBSS (10X) 500 ml Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 P04-07600 P04-07350 Media w proszku: M199 z HBSS Z L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-2110 P03-2150 M199 z HBSS Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-2210 P03-2250 3.2.19. MEM Z SOLAMI EARLE’A MEM jest unowocześnioną pożywką BME i podstawą wielu modyfikacji. Ponieważ BME nie spełniała wszystkich wymagań niektórych komórek ssaczych i komórek HeLa musiała zostać opracowana nowa wersja pożywki. Dzisiaj MEM jest jedną z najczęściej używanych pożywek syntetycznych i pokazuje swoją wszechstronność przy uzupełnieniu aminokwasami i solami Hank’a lub Earle'a . Nawet niewielka ilość FBS ma pozytywny wpływ na wzrost komórek. Media płynne bez glutaminy: MEM Eagle z EBSS 500 ml Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 P04-09050 MEM Eagle z EBSS 500 ml Bez L-glutaminy Z 2,2 g/l NaHCO3 P04-08050 MEM Eagle z EBSS Bez L- glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml MEM Eagle z EBSS Bez glutaminy Z 25 mM HEPES Z 2,2 g/l NaHCO3 MEM Eagle z EBSS Bez glutaminy Z NEAA Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml 500 ml P04-08150 P04-08509 P04-00507 Media specjalne bez glutaminy (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): MEM Eagle z EBSS Bez L- glutaminy Z D-valiną Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-08055 OPTIPAN MEM Eagle z EBSS Bez L-glutaminy Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-08502 Media w proszku bez glutaminy: MEM Eagle z EBSS Bez L- glutaminy Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-7410 P03-7450 Media płynne z L-glutaminą: MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-08500 MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Z 1,5 g/l NaHCO3 500 ml P04-00509 MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 1,5 g/l NaHCO3 500 ml P04-00508 MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Z 20 mM HEPES Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Z NEAA Z 2,2 g/l NaHCO3 OPTIPAN MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml 500 ml P04-08549 P04-08510 P04-08501 Media specjalne z L-glutaminą (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Bez glukozy Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-08520 MEM Eagle z EBSS Z 2 mM glutaminy Z 1 mM pirogronianu Z NEAA Z 1,5 g/l NaHCO3 500 ml P04-08056 MEM Eagle z EBSS (2x) Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-08151 Media w proszku z L-glutaminą: MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Z NEAA Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-2910 P03-2950 MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-2710 P03-2750 MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Z NEAA Z 25 mM HEPES Z NaHCO3 10 L 50 L P03-3010 P03-3050 MEM Eagle z EBSS Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-2810 P03-2850 MEM z solami Earla Skład: Skład chlorek wapnia x 2 H2O Sole nieorganiczne Siarczan magnezu suchy chlorek potasu chlorek sodu diwodorofosforan dosu x H2O Inne składniki Zawartość mg/l 264,92 139,52 400,00 6800,00 140,00 D(+) glukoza bezwodna 1 000,00 HEPES 5 958,00 czerwień fenolowa Aminokwasy L-alanina L-arginina x HCL 10,00 8,90 126,00 L-asparagina x H2O 13,20 L-kwas asparaginowy 13,30 L-cysteina 24,00 L-glutamina L-kwas glutaminowy Glicyna 292,00 14,70 7,50 L-histydyna x HCL x H2O 42,00 L-izoleucyna 52,00 Witaminy L-leucyna 52,00 L-lizyna x HCL 72,50 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 32,00 L-prolina 11,50 L-seryna 10,50 L-treonina 48,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 36,00 L-valina 46,00 D-pantotenian wapnia 1,00 chlorek choliny 1,00 kwas foliowy 1,00 myo-inozytol 2,00 amid kwsu amidowego 1,00 pyridoxal x HCL 1,00 ryboflawina 0,10 tiamina x HCL 1,00 Kiedy w medium znajduje się 5958 mg/l HEPES, wtedy stężenenie chlorku sodu wynosi 6300 mg/l Płynne media z stab. Glutaminą: MEM Eagle z EBSS Z satb. L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-09500 MEM Eagle z EBSS Z stab. Glutaminą Z 25 mM HEPES Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-08250 Podsumowanie dla Pożywki MEM EBSS bez glutaminy: L-glutamina 09050 08050 00507 08150 08509 08502 08055 stab. Glutamina NEAA X czerwień fenolowa x x x x x x HEPES dodatki Patrz wyżej 25 mM Patrz wyżej Patrz wyżej Podsumowanie dla MEM EBSS z L-glutaminą: 08500 00509 00508 08549 08151 08510 08501 08520 08056 L-glutamina x x x x x x x x x stab. Glutamina NEAA X x czerwień fenolowa x x x x x x x x x HEPES special Patrz wyżej Patrz wyżej 20 mM 25 mM Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Podsumowanie dla MEM EBSS z stab.glutaminą: L-glutamina 09500 08250 stab. Glutamina x x NEAA MEM z solami Hank’a Skład: Skład chlorek wapnia x 2 H2O Sole nieorganiczne chlorek potasu diwodorofosforan potasu bezwodny siarczan magnezu suchy chlorek sodu wodorofosforan disodu Inne składniki Zawartość mg/l 184,44 400,00 60,00 139,52 8000,00 47,88 D(+) glukoza bezwodna 1 000,00 HEPES 5 958,00 czerwień fenolowa Aminokwasy L-alanina L-arginina x HCL L-asparagina x H2O 10,00 8,90 126,00 13,20 czerwień fenolowa x x HEPES 25 mM dodatki L-kwas asparaginowy 13,30 L-cysteina 24,00 L-glutamina 292,00 L-kwas glutaminowy Glicyna Witaminy 14,70 7,50 L-histydyna x HCL x H2O 42,00 L-izoleucyna 52,00 L-leucyna 52,00 L-lizyna x HCL 72,50 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 32,00 L-prolina 11,50 L-seryna 10,50 L-treonina 48,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 36,00 L-valina 46,00 D-pantotenian wapnia 1,00 chlorek choliny 1,00 kwas foliowy 1,00 myo-inozytol 2,00 amid kwsu amidowego 1,00 pyridoxal x HCL 1,00 ryboflawina 0,10 tiamina x HCL 1,00 Kiedy w medium znajduje się 5958,00 mg/l, wtedy stężenie chlorku ssodu wynosi 7500 mg/ l Media płynne z L-glutaminą MEM Eagle z HBSS Bez L-glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO3 MEM Eagle z HBSS Z L-glutaminą z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml 500 ml P04-10050 P04-10500 MEM Eagle z HBSS Z stab. glutaminą Bez NaHCO3 MEM Eagle z HBSS Z glutaminą Z 0,60 g/l NaHCO3 500 ml 500 ml P04-11500 P04-10599 Media w proszku: MEM Eagle z HBSS Bez L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-8110 P03-8150 MEM Eagle z HBSS Z L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-3310 P03-3350 3.2.20. RPMI 1640 Pożywka ta została opracowana do hodowli prawidłowych i nowotworowych leukocytów, a także komórek szpiku i hybrydomy. Obecnie istnieją lepsze, wolne od surowicy pożywki do hodowli komórek hybrydomy, takie jak nasze Panserin H4000. Dodanie do RPMI różnych ilości FBS wystarczy aby otrzymać bardzo dobrą pożywkę dla wielu różnych linii komórkowych. Media płynne bez glutaminy: RPMI 1640 Bez L-glutaminy Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml P04-17500 RPMI 1640 Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml P04-16516 RPMI 1640 Bez L-glutaminy Z 25 mM HEPES Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml P04-18000 RPMI 1640 Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 500 ml P04-17510 RPMI 1640 Bez L-glutaminy Bez 25 mM HEPES Bez NaHCO3 RPMI 1640 Bez L-glutaminy Z 25 mM HEPES Z 2,2 g/l NaHCO3 RPMI 1640 Bez L-glutaminy Z 20 mM HEPES Z 0,85 g/l NaHCO3 500 ml 500 ml P04-17850 P04-22500 500 ml P04-19500 Media specjalne bez glutaminy (minimalne zmówienie: 20 x 500 ml): RPMI 1640 Bez L-glutaminy Z 20 mM HEPES Bez NaHCO3 500 ml P04-19056 RPMI 1640 Bez L-glutaminy Bez glukozy Z 2,2 g/l NaHCO3 RPMI 1640 Bez L-glutaminy Bez wapnia Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-16151 RPMI 1640 Bez L-glutaminy Bez L-tryptofanu Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml RPMI 1640 Bez L-glutaminy Z 15 mM HEPES Z 2,0 g/l NaHCO3 Bez fosforanów 500 ml 500 ml P04-17550 P04-21049 P04-17599 RPMI 1640 Bez L-glutaminy Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 Media w proszku: RPMI 1640 Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-7210 P03-7250 RPMI 1640 Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-7710 P03-7750 10 L 50 L P03-4410 P03-4450 RPMI 1640 Media płynne z L-glutaminą: RPMI 1640 Z L-glutaminą Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml RPMI 1640 Z L-glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 2,0 g/l NaHCO3 P04-16500 500 ml P04-16515 RPMI 1640 500 ml Z 2 mM L-glutaminą Z 1 mM pirogronianem sodu z 4,5 g/l glukozy Z 1,5 g/l NaHCO3 P04-18047 RPMI 1640 Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Z 2,2 g/l NaHCO3 RPMI 1640 Z L-glutaminą Z 20 mM HEPES Z 0,85 g/l NaHCO3 RPMI 1640 Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml P04-22100 500 ml P04-19550 500 ml P04-22550 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): RPMI 1640 Z L-glutaminą Z 110 mg/l pirogronianu Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml RPMI 1640 Z L-glutaminą Bez glukozy Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml P04-16190 P04-17545 RPMI 1640 Z L-glutaminą Bez L-argininy Z 2,0 g/l NaHCO3 RPMI 1640 Z L-glutaminą Bez L-trypofanu Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml 500 ml P04-16598 P04-17598 Media w proszku: RPMI 1640 Z L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L P03-4310 50 L P03-4350 RPMI 1640 Z L-glutaminą Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO3 10 L P03-7610 50 L P03-7650 Skład: Skład Azotan wapnia x 4 H2O Sole nieorganiczne Chlorek potasu Siarczan magnezu, bezwodny Chlorek sodu Inne składniki Zawartość mg/l 100,00 400,00 48,84 6000,00 Wodorofosforan disodu (Na2HPO4) 800,49 D(+) glukoza bezwodna 1 000,00 glutation (red.) HEPES czerwień fenolowa Aminokwasy L-arginina x HCl 1,00 5 958,00 10,00 241,86 L-aspargina x H2O 50,00 L-aspartamowy kwas 20,00 L-cystyna x 2HCl 65,19 L-glutaminowy Kwas 20,00 Glicyna 10,00 L-histydyna x HCl x H2O 20,27 L-hydroksyprolina 20,00 L-Izoleucyna 50,00 L-leucyna 50,00 L-lizyna x HCl 40,00 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 15,00 L-prolina 20,00 L-seryna 30,00 RPMI 1640 Z L-glutaminą Z 25 mM HEPES Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-7310 P03-7350 Witaminy L-treonina 20,00 L-tryptofan 5,00 L-tyrozyna x Na 28,83 L-valina 20,00 Kwas p-aminobenzoesowy 1,00 D-(+)-Biotyna 0,20 Kwas D-pantotenowy (Vit. B5) 0,25 Chlorek choliny 3,00 Kwas foliowy 1,00 myo-Inozytol 35,00 Amid kwasu nikotynowego 1,00 Pyridoxol x HCl 1,00 Ryboflawina 0,20 Thiaminex HCl 1,00 Vitamina B12 0,005 Media płynne z stab. Glutaminą: RPMI 1640 Z stab. Glutaminą Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml RPMI 1640 Z stab. Glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 Z 25 mM HEPES 500 ml P04-18500 P04-18050 Media specjalne z stab. glutaminą: RPMI 1640 Z stab. Glutaminą Bez czerwieni fenolowej Bez glukozy Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml P04-16530 RPMI 1640 Z stab. Glutaminą Bez glukozy Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml P04-17546 RPMI 1640 Z stab. Glutaminą Bez czerwieni fenolowej Z 2,0 g/l NaHCO3 500 ml P04-16520 Podsumowanie dla RPMI bez glutaminy: L-glutamina stab.glutamina pirogronian sodu 17500 16516 18000 17510 17850 22500 19056 19500 16151 17599 17550 21049 czerwień fenolowa x HEPES x x x x x x x x x x 25 mM dodatki Patrz wyżej 25 mM 25 mM 20 mM 20 mM Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej 15 mM Patrz wyżej Podsumowanie dla RPMI z L-glutaminą: 16500 16515 18047 22100 19550 16190 17545 16598 17598 L-glutamina x x x x x x x x x stab.glutamina pirogronian sodu czerwień fenolowa x HEPES dodatki x x x x x x x x 10 mM 25 mM 20 mM Patrz wyżej czerwień fenolowa x HEPES dodatki x x 25 mM Patrz wyżej x Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Patrz wyżej Podsumowanie dla RPMI z stab. Glutaminą: L-glutamina 18500 16520 18050 17546 16530 stab.glutamina x x x x x pirogronian sodu Patrz wyżej Patrz wyżej 3.2.21. POŻYWKA SCHNEIDER’A (Schneider’s Drosophila Medium) Pierwotnie opracowana dla komórek Drosophila, nadaje się również do hodowli innych linii komórkowych muchówek. Skład chlorek potasu Sole nieorganiczne diwodorofosforan potasu chlorek wapnia Inne składniki Zawartość mg/l 1600,00 450,00 600,00 Siarczan magnezu, bezwodny 2585,71 chlorek sodu 2100,00 wodorofosforan disodu 700,00 DL-kwas jabłkowy 600,00 kwas bursztynowy 60,00 kwas fumarowy 60,00 D (+) glukoza bezwodna 2 000,00 ekstrakt drożdżowy 2000,00 sól sodowa kwasu α ketoglutarowego D (+) trehaloza x H2O Aminokwasy L-alanina 402,66 2210,00 500,00 L-arginina base 600,00 L-kwas asparaginowy 400,00 L-cysteina free base 60,00 L-cysteina 16,60 L-glutamina 1800,00 L-kwas glutaminowy 800,00 Glicyna 250,00 L-histydyna base 400,00 L-izoleucyna 150,00 L-leucyna 150,00 L-lizyna x HCL L-metinina 1650,00 150,00 L-prolina 1700,00 L-seryna 250,00 L-treonina 350,00 L-tryptofan 1000,00 L-tyrozyna 500,00 L-valina 300,00 Media płynne: Schneider’s Drosophila Medium Bez L-glutaminy Z 0,40 g/l NaHCO3 500 ml P04-90500 Schneider’s Drosophila Medium Z L- Glutaminą Z 0,40 g/l NaHCO3 500 ml P04-91500 Schneider’s Drosophila Medium Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 Chlorek wapnia odseparowany 10 L 50 L P03-9310 P03-9350 Schneider’s Drosophila Medium Z L-glutaminą Bez NaHCO3 Chlorek wapnia oddzielnie 10 L 50 L P03-9410 P03-9450 Media w proszku: 3.2.22. POŻYWKA TC 100 DO KOMÓREK OWADZICH TC 100 jest całkowicie wolną od surowicy pożywką (Oxford formulation) do hodowli komórek owadzich, zwłaszcza dla komórek SF9 i do hodowli wirusów. Jeśli chcieliby Państwo pracować z nowoczesnyą pożywką bezbiałkową do komórek owadzich SPODOPAN jest idealnym wyborem. Skład: Skład Chlorek wapnia x 2 H2O Sole nieorganiczne Chlorek potasu Zawartość mg/l 1298,13 2900,00 Inne składniki Chlorek magnezu x 6 H2O 2282,59 Siarczan magnezu suchy 1957,14 Diwodorofosforan sodu x H2O 970,00 D(+) glukoza bezwodna 1000,00 Bacto-tryptoza 2600,00 Aminokwasy L-alanina 550,00 L-aspartamowy kwas 350,00 L-asaragina x H2O 391,97 L-cysteina 20,00 L-glutamina 600,00 L-kwas glutaminowy 600,00 Glicyna 650,00 L-histydyna x HCL x H2O 3400,00 L-izoleucyna 50,00 L-leucyna 75,00 L-lizyna x HCL L-metionina 630,00 50,00 L-fenyloalanina 150,00 L-prolina 350,00 L-seryna 550,00 L-treonina 180,00 L-tryptofan 100,00 L-tyrozyna L-valina Witaminy 225,00 L-arginina base 55,00 100,00 Kwas p-aminobenzoesowy 0,02 D-(+)-Biotyna 0,01 Kwas D-pantotenowy (Vit. B5) 0,11 Kwas foliowy 0,02 myo-Inozytol 0,02 Kwas nikotynowy 0,02 Pyridoxol x HCl 0,02 Ryboflawina 0,02 Thiamina x HCl 0,02 Vitamina B12 0,01 Media płynne: TC 100 INSECT MEDIUM Bez L-glutaminy Z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml P04-93500 TC 100 INSECT MEDIUM Z L-glutaminą Z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml P04-92500 TC 100 INSECT MEDIUM Bez L-glutaminy Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-9510 P03-9550 TC 100 INSECT MEDIUM Z L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-9610 P03-9650 Media w proszku: 3.2.23. TNM-FH TNM-FH jest odmianą pożywka Grace. Ta zmiana, jeśli jest prawidłowo suplementowana, jest odpowiednia do hodowli wielu komórek motyli. Skład Chlorek wapnia x 2 H2O Sole nieorganiczne Chlorek potasu Inne składniki Zawartość mg/l 1324,62 2240,00 Chlorek magnezu x 6 H2O 2278,86 Siarczan magnezu suchy 1765,23 wodorofosforandi sodu 876,92 DL-kwas jabłkowy 670,00 Kwas bursztynowy 60,00 D-fruktoza Kwas fumarowy D(+) glukoza bezwodna Ekstrakt z drożdży Sól sodowa kwasu αketoglutarowego Hydrolizat laktalbuminy 400,00 55,00 700,00 3333,33 425,66 3333,33 sacharoza 26680,00 Aminokwasy β-alanina 200,00 L-alanina 225,00 L-arginex x HCL 700,00 L-asaraginex x HCL 350,00 L-cysteina 19,18 L-glutamina 600,00 L-kwas glutaminowy 600,00 Glicyna 650,00 L-histydyna base 2500,00 L-izoleucyna 50,00 L-leucyna 75,00 L-lizyna x HCL 625,00 L-metionina 50,00 L-fenyloalanina 150,00 L-prolina 350,00 L-seryna 550,00 L-treonina 175,00 L-tryptofan 100,00 L-tyrozyna 50,00 L-valina Witaminy 100,00 Kwas p-aminobenzoesowy 0,02 D-(+)-Biotyna 0,01 Kwas D-pantotenowy (Vit. B5) 0,02 Kwas foliowy 0,20 myo-Inozytol 0,02 Kwas nikotynowy 0,02 Pyridoxol x HCl 0,02 Ryboflawina 0,02 Thiamina x HCl 0,02 Media płynne: TNM-FH Medium Bez L-glutaminy Z hydrolizatem laktalbuminy Z ekstraktrm z drożdży Z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml P04-86500 TNM-FH Medium Z L-glutaminą Z hydrolizatem laktalbuminy Z ekstraktrm z drożdży Z 0,35 g/l NaHCO3 500 ml P04-80500 Media specjalne (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): TNM-FH Medium Z L-glutaminą Z hydrolizatem laktalbuminy Z ekstraktrm z drożdży Z 0,35 g/l NaHCO3 Z 10 % FBS 500 ml P04-83500 10 L 50 L P03-9710 P03-9750 Media w proszku: TNM-FH Medium Bez L-glutaminy Z hydrolizatem laktalbuminy Z ekstraktrm z drożdży Bez NaHCO3 3.2.24. WAYMOUTH’S MB 752/1 Pożywka Waymouth’s MB 752/1 została opracowana do badań dotyczących żywienia i metabolizmu. Może być również wykorzystywana do hodowli linii komórek L, NCTC klon 929. Skład: Skład Chlorek wapnia x 2 H2O Sole nieorganiczne Chlorek magnezu x 6 H2O Zawartość mg/l 120,00 240,00 Siarczan magnezu suchy 130,96 Chlorek potasu 150,00 Diwodorofosforan potasu Chlorek sodu Wodorofosforan di sodu bezwodny 80,00 6000,00 300,00 Inne składniki D(+) glukoza bezwodna Glutation (red.) HEPES 15,00 4766,40 Hipoksantyna 25,00 Czerwień fenolowa 10,00 L-arginina x HCL 75,00 L-kwas asparaginowy L-cysteina x HCL xH2O 60,00 100,26 L-cysteina 15,00 L-glutamina 350,00 L-kwas glutaminowy 150,00 glicyna L-histydyna x HCL x H2O 50,00 164,10 L-izoleucyna 25,00 L-leucyna 50,00 L-lizyna x HCL Witaminy 5000,00 240,00 L-metioinina 50,00 L-fenyloalanina 50,00 L-prolina 50,00 L-teronina 75,00 L-tryptofan 40,00 L-tyrozyna 40,00 L-valina 65,00 Kwas askorbinowy 17,50 D-(+)-Biotyna 0,02 Kwas D-pantotenowy (Vit. B5) Chlorek choliny 1,00 250,00 Kwas foliowy 0,40 myo-Inozytol 1,00 Amid kwasu amidowego 1,00 Pyridoxol x HCl 1,00 Ryboflawina 1,00 Thiamina x HCl 10,00 Witamina B12 0,20 W przypadku gdy w medium znajduje się 5958 mg/l HEPES, wtedy stężenie chlorku sodu wynosi 5500 mg/l. Media płynne: Waymouth’s MB 752/1 Medium Z L-glutaminą Z 2,2 g/l NaHCO3 500 ml P04-28500 Media w proszku: Waymouth’s MB 752/1 Medium Z L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-4510 P03-4550 3.2.25. Pożywka E William’a (William’s Medium E) Pożywka E William’sa jest wykorzystywana do hodowli długoterminowej dorosłych komórek nabłonka wątroby szczura. Media płynne: William’s Medium E Bez L-glutaminy Z 2,24 g/l NaHCO3 500 ml William’s Medium E Z L-glutaminą Z 2,24 g/l NaHCO3 P04-29050 500 ml P04-29500 William’s Medium E Z stab. glutaminą Z 2,24 g/l NaHCO3 William’s Medium E Bez L-glutaminy Bez czerwieni fenolowej Z 2,24 g/l NaHCO3 Media specjalne (minimalne zamówienie: 20 x 500 ml): William’s Medium E Bez L-glutaminy Bez glukozy Z 2,24 g/l NaHCO3 500 ml P04-29050S1 Skład: Skład Chlorek wapnia x 2 H2O Sole nieorganiczne Azotan żelaza (III) Zawartość mg/l 264,92 0,0001 Chlorek potasu 400,00 Siarczan miedzi (II) x 5 H2O 0,0001 Siarczan magnezu suchy 139,57 500 ml P04-29150 500 ml P04-29510 Chlorek magnezu x 4 HCL Chlorek sodu Diwodorofosforan sodu x H2O Inne składniki 140,00 0,002 D(+) glukoza bezwodna 2000,00 Glutation (red.) methyllinoleat 0,03 5958,00 0,03 Pirogronian sodu 25,00 Czerwień fenolowa 10,00 L-alanina 90,00 L-arginina free base 50,00 L-asparagina x H2O L-kwas asparaginowa 20,00 30,00 L-cysteina 40,00 L-cystyna 20,00 L-glutamina Witaminy 6800,00 Siarczan cynku x 7 H2) HEPES aminokwasy 0,0001 292,00 L-kwas glutaminowy 50,00 glicyna 50,00 L-histydyna base 15,00 L-izoleucyna 50,00 L-leucyna 75,00 L-lizyna x HCL 87,50 L-metionina 15,00 L-fenyloalanina 25,00 L-prolina 30,00 L-seryna 10,00 L-teronina 40,00 L-tryptofan 10,00 L-tyrozyna 35,00 L-valina 50,00 L-kwas askorbinowy 2,00 D(+)-biotyna 0,50 Kalcyferol 0,10 D-pantotenian wapnia 1,00 Chlorek choliny 1,50 Kwas foliowy 1,00 Myo-inozytol 2,00 Menadion sodium bissulfitr Amid kwasu nikotynowego Pyridoxal x HCL 0,01 1,00 1,00 Ryboflawina 0,1 Tiamina x HCL 1,00 DL-α-fosforan tokoferoluNa2 Witamina A 0,01 Witamina B12 0,20 0,10 Media w proszku: William's Medium E Z L-glutaminą Bez NaHCO3 10 L 50 L P03-4710 P03-4750 William's Medium E Z L-glutaminą Bez NaHCO3 Z 25 mM HEPES 10 L 50 L P03-4810 P03-4850 Podsumowanie: L-glutamina 29050 29500 x 29150 29510 20950S1 stab.glutamina x pirogronian sodu x x x x x czerwień fenolowa dodatki x x x x Patrz wyżej 3.2. MEDIA SPECYFICZNE 3.2.1. ENDOPAN 3 Komórki śródbłonkowe wyściełają naczynia krwionośne i limfatyczne oraz wewnętrzną jamę serca. Mają silnie spłaszczony, wielokątny kształt i zazwyczaj spoczywają na błonie podstawnej. Przylegają do siebie nawzajem dzięki desmosomom i połączeniom ścisłym. Śródbłonek, składający się z około biliona (1012) komórek, jest jednym z najwiekszych organów ciała i odgrywa kluczową rolę w wielu procesach fizjologicznych i patofizjologicznych (m.in. komórkowej odpowiedzi immunologicznej, gojeniu ran, stanach zapalnych, alergii, chorobach sercowo-naczyniowych, wzroście nowotworów). Ogromna liczba czynników rozpuszczalnych krążących we krwi lub uwalnianych przez sąsiadujące komórki kontroluje proliferację i apoptozę komórek śródbłonkowych oraz inwazję i migrację leukocytów do śródbłonka, regulując w ten sposób utrzymanie, degenerację i regenerację naczyń krwionośnych. Skład: ENDOPAN 3 ready-to-use jest gotową do użycia kompleksową pożywką bezsurowiczą, opracowaną specjalnie do hodowli in vitro ludzkich komórek śródbłonka i zawiera wszystkie składniki niezbędne dla optymalnego wzrostu tych komórek. Jest przeznaczony do stosowania w inkubatorze w temperaturze 37°C w atmosferze 5% CO2. Zestaw ENDOPAN 3 kit wyposażony jest w FBS i suplementy w oddzielnych sterylnych opakowaniach. Pozwala to użytkownikowi na przygotowanie pożywki do specjalnych zastosowań. Na przykład FBS, VEGF, FGF-2 lub inne składniki mogą być pominięte w pełnej pożywce w przypadku szczególnych układów doświadczalnych. Sub-confluent HUVEC in Confluent HUVEC in ENDOPAN 3 ENDOPAN 3 ENDOPAN ready to use ENDOPAN 3 kit z 6 suplementami 500 ml 500 ml P04-00100 P04-0010K 100 ml P06-20350 Reagenty: Kolagen G roztwór 0,01% 3.2.2. ENDOPAN PRO Komórki śródbłonkowe wyściełają naczynia krwionośne i limfatyczne oraz wewnętrzną jamę serca. Mają silnie spłaszczony, wielokątny kształt i zazwyczaj spoczywają na błonie podstawnej. Przylegają do siebie nawzajem dzięki desmosomom i połączeniom ścisłym. Śródbłonek, składający się z około biliona (1012) komórek, jest jednym z najwiekszych organów ciała i odgrywa kluczową rolę w wielu procesach fizjologicznych i patofizjologicznych (m.in. komórkowej odpowiedzi immunologicznej, gojeniu ran, stanach zapalnych, alergii, chorobach sercowo-naczyniowych, wzroście nowotworów). Ogromna liczba czynników rozpuszczalnych krążących we krwi lub uwalnianych przez sąsiadujące komórki kontroluje proliferację i apoptozę komórek śródbłonkowych oraz inwazję i migrację leukocytów do śródbłonka, regulując w ten sposób utrzymanie, degenerację i regenerację naczyń krwionośnych. Tworzenie nowych naczyń krwionośnych odbywa się poprzez angiogenezę i waskulogenezę proces który uważano za zachodzący jedynie w rozwoju zarodkowym. W roku 1997 zaproponowano, że waskulogeneza pourodzeniowa może by ć ważnym machanizmem angiogenezy poprzez krążące we krwi komórki progenitorowe śródbłonka (PEC) pochodzące z krwi lub ze szpiku kostnego (Asahara i wsp., Science 1997). Wskutek tego komórki PEC przeszły wiele badań jako potencjalne źródło terapii komórkowej w celu naprawy zniszczonych naczyń krwionośnych. Badania na zwierzętach w sposób jasny pokazują, że podanie komórek PEC częściowo leczy zaburzenia sercowo-naczyniowe i uszkodzenia mięśnia sercowego (komórki PEC uczestniczą w tworzeniu nowych naczyń). W większości badań komórki PEC rozpoznaje się dzięki ekspresji CD34, CD133 lub VEGF-R2 (KDR). Ponieważ te cząsteczki są również obecne na powierzchni hematopoetycznych komórek progenitorowych, poleganie jedynie na markerach powierzchniowych nie może wykluczyć zanieczyszczenia komórkami krwiotwórczymi. Niedawno zidentyfikowano populację komórek PEC która wykazuje markery zarówno śródbłonkowe jak i progenitorowe, ale nie markery komórek krwiotwórczych (Ingram i wsp., Blood. 2004; 104: 2752). Co istotne, te komórki badano na wysoki potencjał proliferacji w testach klonogeniczności, i dodatkowo zidentyfikowano poprzez tworzenie funkcjonalnych naczyń krwionośnych in vivo (Yoder i wsp., Blood. 2007; 109: 1801). Skład: ENDOPAN PRO jest gotową do użycia pełną pożywką, opracowaną specjalnie do hodowli in vitro ludzkich komórek progenitorowych śródbłonka (hPEC) i zawiera wszystkie składniki niezbędne dla optymalnego tworzenia kolonii, wzrostu klonogenicznegi i szybkiej proliferacji. Zestaw ENDOPAN PRO kit wyposażony jest w FBS (wcześniej zbadany i przetestowany dla komórek progenitorowych) i suplementy w oddzielnych sterylnych opakowaniach. Pozwala to użytkownikowi na przygotowanie pożywki do specjalnych zastosowań. ENDOPAN PRO ready to use ENDOPAN PRO kit z 6 suplementami 500 ml 500 ml P04-00700 P04-0070K 3.2.3. HAEMANGIOPAN (pożywka do hem angioblastu) Opis: Rozwój pierwotnych naczyń krwionośnych z różnicujących in situ hematopoetycznych komórek macierzystych jest nazywany waskulogenezą. Zarodkowy rozwój układu naczyniowego rozpoczyna się od tworzenia tzw. wysp krwi, które tworzone są pod wpływem czynników z rodziny czynników wzrostu fibroblastów (FGF) z mezodermalnych komórek żółtka. Komórki te nazywane są Haemangioblastami. Tworzą one zaczątek hematopoetycznych komórek macierzystych oraz prekursorowych komórek śródbłonka, angioblastów. Skład: Pożywka Heamangiopan z PAN-Biotech jest kompletną, gotową do użycia pożywką wyposażoną we wszystkie niezbędne dodatki (glutamina, czynniki wzrostu, bydlęca surowica płodowa). Przechowywana w temperaturze 4°C zachowuje właściwości przez co najmniej sześć miesięcy. HAEMANGIOPAN 500 ml P04-88000 3.2.4. HEPATOPAN (pożywka dla hepatocytów ludzkich) Opis: Jak każdy ludzki narząd wątroba składa się z wielu rodzajów komórek o różnych funkcjach. Hepatocyty stanowią - pod względem liczby - 75% całkowitej liczby komórek wątroby i są najważniejszym elementem wątroby. Metabolizm, czyli przemiany chemiczne prawie wszystkich substancji które są przyjmowane w przez organizm, odbywa się w wątrobie. Skład: Pożywka do hodowli hepatocytów z PAN-Biotech jest dostarczana wraz z czterema dodatkami (suplementy powinny być przechowywane w temperaturze -20°C). Suplementy należy dodać do pożywki przed użyciem. Pożywka nie zawiera płodowej surowicy bydlęcej. HEPATOPAN z 4 suplementami 500 ml P04-00600 3.2.5. MELANOPAN (pożywka dla melanocytów) Opis: Melanocyty są osadzone w warstwie podstawnej i kolczystej naskórka. Wytwarzają one pigment melaninę i chronią skórę przed uszkodzeniem przez promienie UV. Jeżeli promieniowanie słoneczne jest zbyt silne melanocyty są uszkadzane i mogą się przekształcić w komórki rakowe. Skład: Pożywka do hodowli melanocytów z PAN-Biotech jest dostarczane wraz z siedmioma dodatkami (suplementy powinny być przechowywane w temperaturze -20°C). Suplementy należy dodać do pożywki przed użyciem. Pożywka nie zawierać płodowej surowicy bydlęcej. MELANOPAN z 7 suplemantami 500 ml P04-740500 3.2.6 EHCPAN (pożywka dla komórek EHC) Opis: Pożywka EHC nadaje się do hodowli wczesnych komórek hematopoetycznych (EHC) w diagnostyce cytogenetycznej (np. ostra białaczka limfatyczna). Skład: Pożywka podstawowa uzupełniona FBS oraz mieszaniną czynników Dostarczone suplementy dodaje się do pożywki na krótko przed użyciem. EHVPAN kit Basal Medium Z antybiotykami/związkami antygrzybiczymi – mix 20 ml Z suplementem A 25 x 1 ml 500 ml wzrostu. P04-97100 3.2.7 NEUROPAN (Pożywka dla komórek neuronalnych) NEUROPAN basal medium (pożywka podstawowa) NEUROPAN basal medium wspiera rozwój komórek hipokampu i wielu innych neuronów ośrodkowego układu nerwowego. Warstwa odżywcza z astrocytów nie jest wymagana. NEUROPAN basal medium nie zawiera glutaminianu, który należy dodać do początkowej hodowli komórkowej (25µl). Przed użyciem NEUROPAN basal medium musi być uzupełniona o surowicę lub w przypadku hodowli bezsurowiczej o NEUROPAN 27. NEUROPAN 27 NEUROPAN 27 jest koncentratem do hodowli bezsurowiczej komórek nerwowych w powiązaniu z NEUROPAN basal medium. NEUROPAN Basal Medium (Basismedium) 500 ml 100ml 10ml 100ml 10ml 100ml 10ml 100ml 10ml 100ml 10ml NEUROPAN 27 suplement 20x NEUROPAN 27 suplement 50x NEUROPAN 27 suplement 20x z HSA NEUROPAN 27 suplement 20x bez antyoksydantów NEUROPAN 2 suplement 100x P04-00900 P07-071100 P07-07010 P07-07200 P07-07210 P07-09100 P07-09010 P07-10100 P07-10010 P07-11100 P07-11010 3.2.8 STEMPAN (Pożywka dla komórek ES) Komórki macierzyste są niewyspecjalizowane, z możliwością (potencjałem) do rozwoju w różne typy komórek (np. komórki serca, chrząstki, nerwy, krew, mięśnie). Komórki macierzyste są zdolne do namnażania bez utraty pluripotencji i do przekształcania się w wyspecjalizowane komórki poszczególnych narządów. W zależności od ich pochodzenia, są one podzielone na zarodkowe i dorosłe komórki macierzyste. Do hodowli zarodkowych komórek macierzystych PAN-Biotech opracował kompletną gotową do użycia pożywkę. Pożywka ta zawiera bydlęcą surowicę płodową. STEMPAN DMEM Z L-glutaminą Z 3,7 g/l NaHCO3 Bez LiF STEMPAN GMEM Z L-glutaminą Z 2,75 g/l NaHCO3 Bez LIF 500 ml P08-50500 500 ml P08-50600 3.2.9. EMEM Fibroblasts (pożywka dla fibroblastów) Na podstawie EMEM, ta pożywka została uzupełniona o większe ilości aminokwasów i witamin i zoptymalizowana dla poprawy wzrostu fibroblastów. Do hodowli fibroblastów pożywka ta musi być uzupełniona przed użyciem o 10% FBS. EMEM Fibroblast 500 ml P04-08049 3.2.10. AMNIOPAN (pożywka do cytogenetyki prenatalnej) Do cytogenetyki prenatalnej AMNIOPAN jest gotową do użycia pożywką do optymalizacji pierwotnej hodowli płodowych komórek ludzkich z punkcji owodni i biopsji kosmówki. • Jest gotowa do użycia i może być używane natychmiast. • Wspomaga szybką adhezję komórek. • Gwarantowany szybki wzrost. • Zapewnia doskonałe struktury chromosomów. • Gwarantuje więcej niż zwykle metafaz . • Łączy prędkość z bezpieczeństwem. • Pomaga zaoszczędzić cenny czas (nie ma potrzeby testowania poszczególnych partii). • W wielu przypadkach przewyższa właściwości wzrostu analogicznych kompozycji. • Jest dostępna w postaci płynnej, w 100 ml pojemnikach. • Dostarczana jest w stanie głęboko zamrożonym. • Należy przechowywać w temperaturze -20°C. • Należy unikać kilkukrotnego rozmrażania i ponownego zamrażania. • Może być przechowywana przez ok. 1 tydzień w temperaturze +4°C. • Może być przechowywana przez dłuższy czas w temperaturze -20°C. • Okres przechowywania: 24 miesięcy. • Zawiera FBS, glutaminy, czynniki wzrostu i gentamycynę. AMNIOPAN 100 ml P04-70100 3.2.11. MARROWPAN (pożywka do komórek szpiku) Do cytogenetyki nowotworów komórek szpiku kostnego MARROWPAN jest gotową do użycia pożywką do optymalizacji hodowli komórek szpiku kostnego z punkcji. • Jest gotowa do użycia i może być używana natychmiast. • Gwarantowany szybki wzrost. • Zapewnia doskonałe struktury chromosomów. • Gwarantuje więcej metafaz niż zwykle . • Łączy prędkość z bezpieczeństwem. • Pomaga zaoszczędzić cenny czas (nie ma potrzeby testowania poszczególnych partii) • W wielu przypadkach przewyższa właściwości wzrostu analogicznych kompozycji. • Jest dostępna w postaci płynnej, w 100 ml pojemnikach. • Dostarczana jest w stanie głęboko zamrożonym. • Należy przechowywać w temperaturze -20°C. • Należy unikać kilkukrotnego rozmrażania i ponownego zamrażania. • Może być przechowywana przez ok. 1 tydzień w temperaturze +4°C. • Może być przechowywana przez dłuższy czas w temperaturze -20°C. • Okres przechowywania: 24 miesiące. • Zawiera FBS, glutaminę, czynniki wzrostu i gentamycynę. MARROWPAN 100 ml P04-70200 4. DODATKI DO POŻYWEK Maksymalna wydajność bez utraty jakości. Odczynniki PAN-Biotech są testowane zgodnie z najwyższymi możliwymi standardami jakości. Wszystkie odczynniki są przygotowywane zgodnie ze specyfikacją, sterylizowane i filtrowane przez filtry o średnicy porów do 0,2 µm. Przed dopuszczeniem do sprzedaży odczynniki poddawane są dokładnym testom jakości. Badana jest sterylność, wartość pH, osmo, endotoksyny, oraz przeprowadzanych jest wiele innych badań. 4.1 DODATKI DO MEDIÓW HAT suplement (50x) HT suplement (50x) 100 ml 100 ml P07-02100 P07-01100 HEPES sól sodowa 100ml 500 ml 100 g 500 g P05-01100 P05-01500 P05-01100P P05-01500P Wodorowęglan sodu 7,5% 100 ml P04-44100 Pirogronian sodu 100 mM 100 ml P04-43100 ITS III roztwór (100x)-zmodyfikowany skład ITS I 5 ml 10 ml 5 ml 10 ml 5 ml 10 ml P07-03100 P0703110 P07-03200 P07-03210 P07-03400 P07-03410 Insulina bydlęca 10mg/ml Insulina ludzka 10 mg/ml ,,rec.solution'' zrekominowana insulina ludzka 5 ml 10 ml 100 mg P07-04100 P07-04300 P07-04200 woda sterylana do hodowli komórkowych 500 ml 1L 20L P04-991500 P04-991000 P04-992000 β-merkaptoetanol 50 Mm w PBS 20 ml 100ml P07-05020 P07-05100 fosforan tryptozy (50x) 130 g/l fosforanu tryptozy w wodzie destylowanej 100 ml P10-031100 HEPES bufor 1 M ITS roztwór I (100x) ITS roztwór II (100x)-zmodyfikowany skład ITS I Pluronic F-68 10 % 100 ml P08-02100 Ludzka transferyna apo 100 mg 500 mg 1g P06-21100 P06-21500 P06-21000 Demecolcin roztwór 10 µg/ml 10 ml P07-91010 Roztwór soli izotoniczny 500 ml P05-39500 4.2 BUFOROWANE ROZTWORY SOLI 4.2.1 BUFOROWANY ROZTWÓR DPBS Płynne roztwory soli: DPBS Bez jonów Ca i Mg 500 ml P04-36500 DPBS (10x) Bez jonów Ca i Mg 500 ml P04-53500 DPBS niesterylny Bez jonów Ca i Mg 2,5 L P04-362500 DPBS z jonami Ca i Mg 500 ml P04-35500 DPBS (10x) Z jonami Ca i Mg 500 ml P04-37500 Skład: Sole nieorganiczne Składnik chlorek potasu diwodofosforan potasu chlorek sodu wodorofosforan disodu bezwodny chlorek wapnia x 2 H2O chlorek magnezu x 6 H2O mg/L 200,00 200,00 8000,00 1150,00 133,00 100,00 Proszek: DPBS (10x) Bez jonów Ca i Mg 50 L P04-36050P DPBS (10x) Oddzielnie jony Ca i Mg 50 L P04-35050P 4.2.2. ROZTWÓR SOLI EARLA Płynne: EBBS 500 ml P04-30500 EBBS Bez czerwinenifenolowej 500 ml P04-39500 EBBS Bez czerwinenifenolowej 500 ml P04-39500 EBBS Bez czerwinenifenolowej Bez jonów Ca i Mg 500 ml P04-46500 EBBS Z 2,2 g/l NaHCO3 Bez jonów Ca i Mg 500 ml P04-31500 Specjalne roztwory (minimalne zamówienie 20 x 500 ml): EBBS (10x) 500 ml P04-38500 EBBS (10x) Bez czerwinenifenolowej Bez jonów Ca i Mg 500 ml P04-47500 Skład: Skład Zawartość mg/l Chlorek potasu Sole nieorganiczne Chlorek sodu Inne składniki 400,00 6800,00 Diwodorofosforan sodu x H2O 140,00 Chlorek wapnia x 2 H2O 264,92 Siarczan magnezu 139,57 D(+) glukoza bezwodna Czerwień fenolowa 2000,00 Proszek: 10 L 50 L EBBS P04-30010P P04-30050P 4.2.3. ZBALANSOWANY ROZTWÓR SOLI GEY’A Skład Zawartość mg/l Chlorek potasu Sole nieorganiczne Chlorek sodu Inne składniki 370,00 7000,00 Wodorofosforan di sodu 120,00 Chlorek wapnia bezwodny 220,00 Chlorek magnezu x 6 H2O 210,00 Siarczan magnezu bezwodny Diwodorofosforan potasu bezwodny D(+) glukoza bezwodna 34,20 30,00 1000,00 Płynny roztwór: GBSS 100 ml 500 ml P04-48100 P04-48500 10 L 50 L P04-48010P P04-4850P Proszek: GBSS Bez NaHCO3 4.2.4. ZBALANSOWANY ROZTWÓR SOLI HANK’A HBSS Z 0,35 g/l NaHCO3 100 ml 500 ml P04-32100 P04-32500 HBSS Bez NaHCO3 100 ml 500 ml P04-49100 P04-49500 HBSS Bez jonów Ca i Mg Z 0,35 g/l NaHCO3 100 ml 500ml HBSS Bez jonów Ca i Mg Bez 0,35 g/l NaHCO3 100 ml 500ml P04-33100 P04-33500 P04-50100 P04-50500 Skład: Skład Chlorek potasu Sole nieorganiczne Chlorek sodu diwodorofosforan sodu suchy Chlorek wapnia x 2 H2O Inne składniki Zawartość mg/l 400,00 8000,00 47,88 186,58 Siarczan magnezu bezwodny Diwodorfosforan potasu 126,97 D(+) glukoza bezwodna Czerwień fenolowa 1000,00 10,00 60,00 HBSS Bez czerwieni fenolowej Z 0,35 g/l NaHCO3 HBSS Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO3 HBSS Bez czerwieni fenolowej Z 0,35 g/l NaHCO3 Bez jonów Ca i Mg HBSS Bez czerwieni fenolowej Bez NaHCO3 Bez jonów Ca i Mg 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml P04-32105 P04-32505 P04-49105 P04-49505 P04-34100 P04-34500 P04-50105 P04-50505 Proszek: HBSS Bez NaHCO3 10 L 50 L P04-32010P P04-32050P 4.2.5.ROZTWÓR A SOLI PUCK’A Skład: Skład Zawartość mg/l Chlorek potasu Sole nieorganiczne Chlorek sodu Inne składniki 400,00 8000,00 D(+) glukoza bezwodna Czerwień fenolowa 1000,00 5,00 Płynny roztwór: Roztwór A soli Puck’a 100 ml 500 ml P04-51100 P04-51500 4.2.6.ROZTWÓR SOLI TYRODE’A Skład: Skład Chlorek potasu Sole nieorganiczne Chlorek sodu 200,00 8000,00 Chlorek magnezu 100,00 Chlorek wapnia 200,00 Fosforan sodu Inne składniki Zawartość mg/l D(+) glukoza bezwodna 50,00 1000,00 HBSS Bez jonów Ca i Mg Bez NaHCO3 10 L P04-33010P 50 L P04-33050P Płynny roztwór: 100 ml Roztwór soli Tyrode’a 500 ml P04-54100 P04-54500 Proszek: Roztwór soli Tyrode’a 10 L Bez NaHCO3 50 L P04-54010P P04-54050P 4.3 Aminokwasy i witaminy BME bufor (50x), bez L-glutaminy BME bufor (50x), z L-glutaminą 100 ml 100 ml 1L 5L 10 L P08-2000 P08-21100 P08-2010P P08-20105P P08-20110P Glutamina w proszku Stab.glutamina w proszku 50 ml 100 ml 50 ml 100 ml 20 g 100g 500g 10g P04-80050 P04-80100 P04-82050 P04-82100 P04-80025P P04-80100P P04-80500P P04-82010P MEM (50x) bez L-glutaminy MEM (50x) z L-glutaminą MEM NEAA (100x) bez L-glutaminy 100 ml 100 ml 100 ml P08-30100 P08-31100 P08-32100 Witaminy BME witaminy MEM (100x) roztwór witamin 100 ml 100ml P08-40100 P08-41100 BME (50x)suplement, bez L-glutaminy proszek L-glutamina 200 mM Stab.glutamina 200 mM 4.4. ANTYBIOTYKI I ŚRODKI PRZECIWGRZYBICZE amphortercin B 250µg/ml 50 x 1ml 50 x 5 ml 50 ml 100 ml Amphotericin B proszek 50 mg P06-01001 P06-01005 P06-01050 P06-01100 P06-01050P Nystatyna roztwór 10.000 units/ml 100mg 25 mg 50 mg 10 g 25g 20 ml 100 ml 50mg 1g 50 x1ml 50 x 5ml 50ml 100ml 50 x1ml 50 x 5ml 50ml 100ml 1g 10g 25g 50 x1ml 50 x 5ml 50ml 100ml 50 x1ml 50 x 5ml 50ml 100ml 50 x1ml 50 x 5ml 50ml 100ml 10g 50g 50ml 100 ml 50ml 100ml 10g 25g 100g 100 ml Paneticin 420 50 mg/ml 20 ml Amphotericin B water soluble powder Bacitracin proszek Hygromycin B (50mg/ml) Hygromycin B proszek Gentamycyna siarczan 10 mg/ml Gentamycyna siarczan 50 mg/ml Gentamycyna siarczan proszek Kanamycyna siarczan 5mg/ml Kanamycyna siarczan 10mg/ml Kanamycyna siarczan 50mg/ml Kanamycyna siarczan proszek Minocyclin 0,5 mg/ml Neomycyna siarczan 10 mg/ml Neomycyna siarczan proszek P06-01100P P06-01225P P06-01250P P06-02010P P06-02025P P06-08020 P06-08100 P06-080050P P06-080100P P06-03001 P06-03005 P06-03050 P06-03100 P06-13001 P06-13005 P06-13050 P06-13100 P06-03001P P06-03010P P06-03025P P06-04001 P06-04005 P06-04050 P06-04100 P06-14001 P06-14005 P06-14050 P06-14100 P06-15001 P06-15005 P06-15050 P06-15100 P06-04010P P06-04050P P06-05050 P06-05100 P06-06050 P06-06100 P06-06010P P06-06025P P06-06100P P06-07800 P06-16020 Paneticin 420 100 mg/ml Paneticin 420 proszek Pencylina /streptomycyna 10.000 units Pencillin/ml 10 mg streptomycyny/ml Pencylina /streptmycyna/amfotercyna B mix 10.000 units Pencillin/ml 10 mg streptomycyny/ml 25 µg amfotercyny B/ml w 0,85% saline Penicilina G sól potasowa proszek streptomycyna siarczan proszek polymixin B siarczan 10.000 units/ml polymixin B siarczan proszek tiamulin 1 mg/ml zeocin 100 mg/ml 100 ml 20 ml 100 ml 1g 5g 10g 50 x 1ml 50 x 5 ml 50ml 100 ml 50 x 1ml 50 x 5 ml 50ml 100 ml P06-16100 P06-17020 P06-17100 P06-16001P P06-16005P P06-16010P P06-07001 P06-07005 P06-07050 P06-07100 P06-07301 P06-07305 P06-07350 P06-07300 25 g 100 g 25g 50g 100g 50 ml 100 ml 1g 5g 10g 50 x 1ml 50 x 5 ml 50ml 100 ml 10 ml P06-08025P P06-08100P P06-11025P P06-11050P P06-11100P P06-09050 P06-09100 P06-10001P P06-10005P P06-10010P P06-12001 P06-12005 P06-12050 P06-12100 P06-28010 4.5. ENZYMY DO DYSOCJACJI KOMÓREK 4.5.1 KOLAGENAZA TYPU I Naturalna równowaga aktywności enzymu. Zalecana dla komórek z tkanki nabłonkowej, płucnej i tłuszczowej. Przechowywać w temperaturze 2 - 8°C. 4.5.2. KOLAGENAZA TYPU II Ze szczególnie wysoką aktywnością klostrypainy i trypsyny. Polecana do przygotowania komórek z tkanki tkanki nabłonkowej, tłuszczowej, z wątroby, kości, płuc i nadnerczy. Przechowywać w temperaturze 2 - 8°C. 4.5.3. KOLAGENAZA TYPU III Normalna aktywność kolagenazy przy minimalnej dodatkowej aktywności proteolitycznej. Szczególnie polecana do tkanki gruczołu piersiowego. Przechowywać w temperaturze 2 - 8°C. 4.5.4. KOLAGENAZA TYPU IV Wybrana niska aktywność trypsyny przy wysokiej aktywności kolagenazy i normalnym poziomie klostrypainy. Zalecana do izolowania komórek z trzustki. Przechowywać w temperaturze 2 - 8°C. kolagenaza typ I (Worthington - USA orgin) kolagenaza typ II (Worthington - USA orgin) kolagenaza typ III (Worthington _USA orgin) kolagenaza typ IV (Worthington -USA orgin) 100 mg 1g 100 mg 1g 100 mg 1g 100 mg 1g LS0004194 LS0004196 LS0004174 LS0004176 LS0004180 LS0004182 LS0004186 LS0004188 4.5.5. TRYPSYNA I INNE Zastosowanie: Do dysocjacji tkanek i warstw jednokomórkowych (monolayer) Przechowywanie: Roztwory w temperaturze -20°C (zamrożone) / Proszek w temperaturze od +2°C - +8°C Okres trwałości: Roztwory 24 miesięcy / Proszek 36 miesięcy. Okres trwałości rozpoczyna się wraz z datą produkcji. Nasza trypsyna jest testowana na mykoplazmę! Trypsyna 0,25% w PBS bez jonów Ca 2+ i Mg 2+ (10X) trypsyna 2,5% w PBS bez jonów Ca 2+ i Mg 2+ 100 ml 500 ml P10-021100 P10-021500 100 ml P10-022100 Trypsyna 0,25%/EDTA 0,02% w PBS bez jonów Ca 2+ i Mg2+ Trypsyna 0,25% /EDTA 0,02% w PBS bez z jonów Ca 2+ i Mg2+ z czerwienią fenolową Trypsyna 0,05%/EDTA 0,02% w PBS bez Ca 2+ i Mg2+ Trypsyna 0,05%/EDTA 0,02% w PBS bez Ca 2+ i Mg2+z czerwienią fenolową (10X) trypsyna 0,5%/EDTA 0,2% bez jonów Ca 2+ i Mg 2+ 500 ml P10-022500 100 ml 500 ml P10-020100 P10-20500 100 ml 500 ml P10-019100 P10-019500 100 ml 500 ml P10-023100 P10-023500 100 ml 500 ml P10-0231SP P10-0235SP 100 ml 500 ml P10-024100 P10-024500 Trypsyna 0,05%/EDTA 0,1% w PBS bez CA2+ i Mg 2+ 100 ml 500 ml Trypsyna 0,25% 1 mM EDTA 4 w PBS bez Ca2+ i Mg2+ 100 ml 500 ml Trypsyna 0,05%/EDTA 0,02% i HBSS bez Ca2+ i Mg2+ 100 ml 500 ml Trypsyna 0,05%/EDTA 0,02% w HBSS bez Ca2+ i Mg2+z czerwienią fenolową 100 ml 500 ml Trypsyna 0,25%/1 mM EDTA w HBSS bez Ca2+ i Mg2+ z czerw.fenolową 100 ml 500 ml Trypsyna 0,05%/EDTA 4 Na 0,02% w HBSS z czerw.fenolową 100 ml 500 ml Roztwór specjalny trypsyny (dla komórek ES) 100 ml 500 ml (5X) roztwór specjalny trypsyny (dla komórek ES) 100 ml 500 ml (10X) trypsyna 0,5%/EDTA 4 Na 5,3 mM bez czerw.fenolowej bez Ca2+ i Mg2+ 100 ml 500 ml Inhibitor trypsyny 100 ml 500 ml Trypsyna w proszku(1:250)pochodzenia świńskiego 25 g 100 g P10-027100 P10-027500 P10-028100 P10-028500 P10-030100 P10-030500 P10-038100 P10-038500 P10-029100 P10-029500 P10-040100 P10-040500 P10-100100 P10-100500 P10-050100 P10-050500 P10-025100 P10-025500 P10-033100 P10-033500 P10-025025P P10-025100P EDTA 1% w PBS bez Ca2+ i Mg2+ Dispase II neutralne białka, grade II Dispase oczyszczona neytral prostase 500 g 100 ml 500 ml 100 ml 10 mg P10-025500P P10-026100 P10-026500 P10-032100 LS0002100 4.6. CZYNNIKI PRZYLEGANIA 4.6.1. KOLAGEN A Kolagen rozpuszczalny w kwasach pochodzący z bydlęcego łożyska • Dodać tę samą ilość sterylnego PBS do kolagenu. • Dodać 1 ml na 10 cm2 naczynia hodowlanego i inkubować w +35°C do +37°C przez 30 min. • Usunąć roztwór i przemyć jeden raz PBS; używać natychmiast. W kulturze jednowarstwowej normalnych ludzkich i mysich komórek wątroby z powodzeniem obserwuje się wzrost przez okres do jednego tygodnia, pod warunkiem że naczynia hodowlane zostały pokryte kolagenem A. Komórki świńskie w takich samych warunkach nie wymagają takiego przygotowania powierzchni. Wzrost komórek często można poprawić poprzez pokrycie powierzchni czynnikami przylegania takimi jak fibronektyna, kolagen, żelatyna czy polilizyna. Z powłoką kolagenu przeżywalność hepatocytów może wydłużyć się od jednego tygodnia do czterech tygodni. Przechowywanie: +2 - +8°C kolagen A 1 x (6x5ml) P06-20030 4.6.2. KOLAGEN R (TYP I) sterylny roztwór 0,2%: Kolagenu typu 1 z ogona szczurzego, 2 mg/ml w 0,1% kwasu octowego. Doskonałe podłoże do hodowli hepatocytów, fibroblastów i komórek nabłonka. sterylny roztwór 0,4%: Kolagenu typu 1 z ogona szczurzego, 4 mg / ml w 0,1% kwasu octowego. Doskonałe podłoża do hodowli hepatocytów, fibroblastów i komórek nabłonka. Kolagen R 0,2% sterylny roztwór Kolagen R 0,4% sterylny roztwór 20 ml 100 ml 20 ml P06-20166 P06-20020 P06-20020 4.6.3. LAMININA MYSIA Ten wysoce oczyszczony preparat lamininy mysiej zwieksza adhezję komórek, migrację, wzrost i różnicowanie. Składa się z 111 łańcuchów o łącznej masie cząsteczkowej (MW) 800 kD i jest używany do pokrywania naczyń hodowlanych. Źródło: Mysi guz Engelbreth-Holm-Swarm (EHS). Bufor do przechowywania: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) z 10 mg/ml siarczanu gentamycyny. Przechowywanie: Przechowywać w temperaturze -20°C lub w temperaturze -80°C. Czystość: Czystość> 90%, sprawdzana przez SDS-PAGE. Dane techniczne: Testy funkcjonalne: • Wspomaga powstawania filamentów neuronowych komórek NG108-15 w teście rozrostu neurytów. Badania jałowości: • Brak wzrostu bakterii lub grzybów po inkubacji w temperaturze 37°C przez 14 dni po testach sterylności USP XXIV, Rozdział 71. • Brak zakażenia przez mykoplazmę potwierdzony PCR. • Stężenia endotoksyn <20 EU/ml w teście LAL. Procedura powlekania: Zalecane stężenie podczas pracy wynosi 0,05 - 10 µg /cm2 powierzchni wzrostu (0,05 - 10 mg / ml) w zależności od typu komórek. a. Rozmrozić na lodzie przez kilka godzin. Umieścić płytki na lodzie i ochłodzić końcówki pipet. W komorze laminarnej rozcieńczyć odpowiednio używając schłodzonych szalek. Rozprowadzić roztwór aby całkowicie pokryć dna dołków. b. Poniższa tabela stanowi przewodnik dla proponowanych objętości: Rodzaj naczynia Objętość lamininy na dołek 6 dołków (lub 35 mm do naczyń) 1 ml 24 dołków 200 ml 48 dołków 50 ml 96 dołków 20 ml c. Inkubować płytki w temperaturze 37°C przez 1 godzinę. Pod stołem laminarnym usunąć nadmiar płynu z dołków. Wypłukać studzienki jeden raz pożywką hodowlaną, a następnie dodać komórki. Laminina mysia 1 mg P06-20501 4.6.4. ALBUMINY Postępowanie z albuminami jako dodatkiem białka do hodowli tkankowych. Są one głównym składnikiem w osoczu krwi i są dodawane do pożywki hodowlanej w celu zwiększenia stabilności błon komórkowych i związania możliwych toksycznych pierwiastków śladowych. Bydlęca albumina surowicy krwi Bydlęca albumina surowicy krwi wykrystalizowana Bydlęca albumina surowicy krwi microbiological grade Bydlęca albumina surowicy krwi H2 wolna od globulin Ludzka albumina krwi Królicza albumina krwi 25 g 50 g 100 g 250 g 500 g 1g 5g 25g 50g 10g 50g 250g 500g 5g 10g 25g 50g 10g P06-1391025 P06-1391050 P06-1391100 P06-1391250 P06-1391500 P06-0846001 P06-0846005 P06-0846025 P06-0846050 P06-0849010 P06-0849050 P06-0849250 P06-0849500 P06-0848005 P06-0848010 P06-26025 P06-26050 P06-210010 4.6.5. ROZTWÓR ŻELATYNY Roztwór żelatyny jest używany do pokrywania naczyń hodowlanych. Znajduje zastosowanie w hodowli komórek, w pracy z komórkami śródbłonka i zarodkowymi komórkami macierzystymi (ESc). roztwór żelatyny 0,1% w PBS roztwór żelatyny 2% w PBS 500 ml 100 ml P06-20410 P06-25200 4.7. ROZTWORY DO SEPARACJI 4.7.1.PANCOLL i POWERCOLL Izolacja komórek lub cząsteczek subkomórkowych jest często pierwszym krokiem w badaniach ekspresji genów lub w diagnostyce. Oprócz specyficznych metod separacji to metody fizyczne są najczęściej używane. W tych metodach różnice fizyczne, takie jak rozmiar i ładunek cząsteczek są wykorzystane w celu separacji. W tym celu stosowane są tzw. roztwory separacyjne (pożywki do wirowania). Pożywki te muszą spełniać następujące kryteria: • muszą być w stanie utworzyć gradient gęstości w pożądanym zakresie • żądana wartości pH i osmolalność musi być łatwo regulowana • roztwór nie może być zbyt lepki w przypadku wysokie gęstości • Nie mogą powodować funkcjonalnych lub morfologicznych zmian w materiale biologicznym • Nie mogą przenikać przez błony biologiczne Nasz roztwór rozdzielający - Pancoll - jest wykonany z neutralnego, wysoko usieciowanego hydrofilowego polimeru sacharozy o średniej masie cząsteczkowej 400000 D. Powercoll składa się z zawiesiny koloidalnej cząstek krzemionki, wypełnianej poliwinylopirolidonem (PVP). Przechowywanie: od +2°C do temperatury otoczenia Właściwie składowane mogą być przechowywane przez co najmniej 36 miesięcy. Okres przechowywania liczy się od daty produkcji. Pancoll human, density/Dichte 1,077 g/ml Pancoll mouse, density/Dichte 1,086 g/ml Pancoll rat, density/Dichte 1,091 g/ml Pancoll animal, density/Dichte 1,077 g/ml Pancoll monocytes, density/Dichte 1,068 g/ml Pancoll Platelets, density/Dichte 1,063 g/ml Powercoll, density/Dichte 1,077 g/ml Powercoll, density/Dichte 1,124 g/ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml 100 ml 500 ml P04-60100 P04-60500 P04-64100 P04-64500 P04-65100 P04-65500 P04-63100 P04-63500 P04-68100 P04-68500 P04-67100 P04-67500 P04-61100 P04-61500 P04-62100 P04-62500 4.7.2. POŻYWKA DO IZOLACJI LIMFOCYTÓW Opis: Gotowe do użycia probówki Zalety: • Zmniejszenie ryzyka zanieczyszczenia i mniej wymaganego czasu w związku z użyciem już wypełnionej fiolki z czynnikiem rozdzielającym. • Porowata membrana zapobiega wprowadzeniu krwi podczas mieszania. Prowadzi to do poprawy separacji przy jednoczesnym zmniejszeniu zanieczyszczeń. • Po odwirowaniu i oddzieleniu frakcji komórek membrana zapobiega zanieczyszczeniu limfocytów poprzez niepożądane typy komórek. • Wcześniejsze rozcieńczenie krwi nie jest konieczne, ale może poprawić wynik separacji. Przed użyciem zapoznaj się z ulotką dołączona do Pancollu. Referencje: a) Berge M et al. (2010) Small interfering RNAs induce target-independent inhibition of tumor growth and vasculature remodeling in a mouse model of hepatocellular carcinoma. American Journal of Pathology (Epub ahead of print) b) Derfuss T et al. (2009) Contactin-2/TAG-1-directed autoimmunity is identified in multiple sclerosis patients and mediates gray matter pathology in animals. Proceedings of National Academy of Science 106:8302 c) Ladhoff J et al. (2009) Low immunogenicity of endothelial derivatives from rat embryonic stem cell-like cells. Cell Research 19:507 d) Meixenberger K et al. (2010) Listeria monocytogenes-infected human peripheral blood mononuclear cells produce IL-1s, depending on listeriolysin O and NLRP3. Journal of Immunology 184:922 e) Leiherer A et al. (2009) Uncoupling human immunodeficiency virus type 1 gag and pol reading frames: role of the transframe protein p6 in viral replication. Journal of Virology 83:7210 f) Jo J et al. (2010) Analysis of CD8 T-cell-mediated inhibition of hepatitis C virus replication using a novel immunological model. Gastroenterology 136:1391 Pancoll human, density/Dichte 1,077 g/ml Pancoll mouse, density/Dichte 1,086 g/ml Pancoll rat, density/Dichte 1,091 g/ml Pancoll animal, density/Dichte 1,077 g/ml 25 x 50 ml 50 x 10 ml 25 x 50 ml 50 x 10 ml 25 x 50 ml 50 x 10 ml 25 x 50 ml 50 x 10 ml P04-60125 P04-60225 P04-64125 P04-64225 P04-65125 P04-65225 P04-63125 P04-63225 4.8. KRIOKONSERWACJA 4.8.1. DMSO (dimetylosulfotlenek) DMSO (dimetylosulfotlenek) to bezbarwny rozpuszczalnik organiczny który przenika całkowicie do komórki i zapobiega tworzeniu się szkodliwych kryształków lodu podczas zamrażania. Dimetylosulfotlenek (DMSO) Dimethylsulfoxide (DMSO) dla hodowli komórkowych 100 ml 100 ml P60-15840100 P60-36720100 4.8.2. POŻYWKA MROŻENIOWA Nasza pożywka mrożeniowa zalecana jest do głębokiego zamrażania. Podstawowym składnikiem jest DMEM uzupełniony mieszanką płodowej surowicy bydlęcej i DMSO. Skład ten gwarantuje wysoki wskaźnik przeżywalności i dobry wzrost komórek po rozmrożeniu. Medium mrożeniowe 50 ml P07-90050 4.8.3. CRYOPAN Użytkowanie: Zamrażanie komórek z wykorzystaniem odczynnika CRYOPAN (w zbiorniku ciekłego azotu). • Schłodzić (w lodówce) pożywkę mrożeniową, pożywkę hodowlaną i probówki mrożeniowe. • Ztrypsynować komórki, następnie przenieść do pożywki hodowlanej i odwirować. Usunąć supernatant i ponownie umieści ć komórki w pożywce hodowlanej. • Doprowadzić liczbę komórek do 1 - 5 x106/ml. Komórki muszą być ponownie zawieszone w celu uniknięcia tworzenia agregatów. • Wymieszać odwirowane komórki z taką samą objętością ochłodzonej pożywki mrożeniowej i przepipetować jednokrotnie w górę i w dół. Odpipetować 1 ml tej zawiesiny komórkowej do każdej probówki mrożeniowej. • Przenieść probówki do lodówki na 15 minut, gdyż pożywka mrożeniowa musi przeniknąć do komórek. Po tym etapie zamrozić probówki w temperaturze -20 ° C na dwie godziny. Przez noc trzymać w oparach azotu. • Następnie umieścić probówki w ciekłym azocie. Idealne tempo zamrażania: 1°C/minutę Cryopan I 10 ml 50 ml P07-92010 P07-92050 4.9. Linia produktów PAN SL-S (SERUM-FREE Endothelial Culture System; System do hodowli komórek śródbłonkowych wolny od surowicy) Biologia komórek śródbłonka rozwinęła się bardzo dzięki badaniom komórek śródbłonka naczyń krwionośnych hodowanych in vitro. Poza zrozumieniem wielu procesów patologicznych i fizjologicznych udało się poznać różnorodne procesy sygnałowe dzięki badaniu komórek śródblonka w hodowli. Tradycyjnie pełne pożywki w hodowli śródbłonkowej zawierają surowicę zwierzęcą. Pojawienie się pożywek o niskiej zawartości surowicy poprawiło jakość danych doświadczalnych uzyskiwanych w ostatnich latach. Jadnakowoż komórki sródblonka są w stanie syntetyzować substancje które nie mogą być wykryte ze względu na ich niską zawartość lub maskujący efekt surowicy. W przeszłości szlaki sygnałowe w komórkach śródbłonka nie były możliwe do odczytania eksperymentalnie ponieważ nawet niskie stężenie surowicy obecne w pożywkach tradycyjnych powoduje niezdefiniowaną i niepożądaną stymulację receptorów powierzchniowych lub sygnałów wewnątrzkomórkowych, które mogą być uwidocznione jedynie w warunkach wolnych od surowicy. Jako że komórki śródbłonka znajdują się obecnie w centrum zainteresowania inżynierii tkankowej naczyń ze względu na potencjalne zastosowania terapeutyczne, obecność pełnej surowicy zwierzęcej jest w takich zastosowaniach niepożądana. Wszystkie produkty opisane poniżej są przeznaczone do użytku w systemie hodowli komórek śródbłonkowych wolnym od surowicy (SERUM-FREE Endothelial Culture System). Można stosować komórki śródbłonka pochodzące z różnych źródeł. Dla wygody użycia w tym systemie PAN Biotech GmbH oferuje komórki śródbłonka z pępowiny ludzkiej izolowane i hodowane w ścisłych warunkach bezsurowiczych. Informacje dotyczące składu, zastosowań, specjalnych zalet oraz sposobów użytkowania są podane dla każdego produktu osobno. W celu uzyskania dodatkowych informacji na temat SERUM-FREE Endothelial Culture System z PAN Biotech GmbH proszę zapoznać się z dołączonymi ulotkami informacyjnymi. PANEXIN SL-S to prawdziwy zamiennik surowicy, który może w oełni zastąpić FBS w pożywce dla komórek śródbłonka będącej poza tym w pełni wyposażoną w inne dodatki. SL-S Trypsin/EDTA zostało specjalnie zaprojektowane do użytku w hodowlach bezsurowiczych. Stosunkowo niska aktywność trypsyny skutkuje delikatnym odklejaniem się komórek śródbłonka od podłoża; niskie stężenie czerwieni fenolowej służy jako wygodny wskaźnik jednocześnie zapewniając łagodne warunki dla komórek SL-S Medium jest pożywką do przepłukiwania naczyń hodowlanych po trypsynizacji aby zapewnić całkowity zbiór komórek, lub pożywką do krótkoterminowej inkubacji komórek śródbłonka w warunkach bezsurowiczych. Ta pożwka nie jest odpowiednia do wzrostu i długotrwałej hodowli komórek nabłonkowych. SL-S Trypsin Inhibitor (inhibitor trypsyny) jest zoptymalizowany aby zablokować aktywność trypsyny jednocześnie zapewniając komórkom śródbłonkowym idealne warunki aby odzyskały żywotność po działaniu trypsyny SL-S Collagen (kolagen) został opracowany jako gotowy do użytku roztwór do pokrywania nowych naczyń hodowlanych w subkulturach śródbłonkowych. SL-S Cryopan jest wolną od surowicy pożywką do kriokonserwacji śródbłonka umożliwiającą wysoką odzyskiwalność żywych komórek po rozmrożeniu. PANEXIN SL-S Serum Substitute for HUVEC cultures SL-S Trypsin/EDTA SL-S Trypsin-Inhibitor SL-S Medium (Working Medium) SL-S Collagen 0.01 % SL-S Cryopan 25 ml 50 ml 50 ml 500 ml 25 ml 25 ml P04-90065S P10-0231SF P10-0331SF P04-300500 P06-20650 P07-94050 5. USŁUGI 5.1.WPROWADZENIE PAN-Biotech oferuje szeroką gamę usług i procedur badawczych dla swoich produktów. Dostępne są następujące usługi i procedury testowe: • Specjalna obróbka różnych partii surowicy • Badania biochemiczne • Badania na czynniki chorobotwórcze (bakterie, wirusy, grzyby) • Testy funkcjonalne • Obróbka komórek Każda z tych usług dostarczana jest szybko, efektywnie, przy użyciu najnowszych na daną chwilę technik i przy zachowaniu najwyższej jakości Możesz skorzystać z naszej wiedzy! Jeśli potrzebujesz specjalnych testów lub określonych usług powiedz nam o tym. W większości przypadków potrafimy pomóc naszym klientom. 5.2.SPECJALNA OBRÓBKA RÓŻNYCH PARTII SUROWICY Filtracja sterylna Sterylna filtracja odbywa się poprzez zatwierdzony proces. Surowica przechodzi przez szereg filtrów o coraz to mniejszej średnicy porów. Na ostatnim etapie filtracji surowica przechodzi przez sterylny filtr o średnicy porów 0.2 µm Ekstrakcja IgG Wykorzystując metodę chromatograficzną (chromatografię powinowactwa) przeciwciała w surowicy są niemal całkowicie usuwane (<5 µg/ml). Aktywność biologiczna surowicy nie ulega zmianie. Filtracja poprzez węgiel aktywny Surowicę ogrzewa się w łaźni wodnej z dekstranem i aktywowanym węglem drzewnym. Węgiel aktywowany, wraz z substancjami związanymi jest usuwany przez wirowanie i filtrację. Usuwanie lipidów (Dilipidisation) Lipidy są usuwane z surowicy krwi metodą chromatografii powinowactwa. Dializa Surowica jest dializowana przez błonę 10.000 Da z roztworem soli fizjologicznej. Inaktywacja cieplna Surowica jest podgrzewana przez 30 minut w temperaturze 56°C w łaźni wodnej, w której to jest delikatnie wstrząsane kilka razy. Promieniowania gamma Surowica jest napromieniowywana przez co najmniej 25 kGy. 5.3.BADANIA BIOCHEMICZNE Białka Test kolorymetryczny (reakcja biuretowa). Biwalentna miedź reaguje w roztworze alkalicznym z wiązaniem peptydowym albuminy dając charakterystyczny fioletowy kompleks biuretu. Intensywność zabarwienia jest wprost proporcjonalna do stężenia albuminy, co jest analizowane fotometrycznie. Osmolalność Osmolalność analizowana jest przez obniżenie temperatury krzepnięcia. Kalibracja osmometru odbywa się przy użyciu roztworów wzorcowych. Wartość pH Sprawdzana przy użyciu elektrod pH. Hemoglobina Stężenie hemoglobiny mierzone jest spektrofotometrycznie przy trzech różnych długościach fali. IgG Przeciwciała w agarozowym osadzie przy zachowaniu równowagi w stosunku do antygenów, które pipetowane do dołków żelowych, dyfundują na zewnątrz. Średnica pierścienia osadu jest proporcjonalna do stężenia roztworu zawierającego stosowany antygen. Trójglicerydy Enzymatyczny test kolorymetryczny oparty na reakcji Trindera. Cholesterol Enzymatyczny test kolorymetryczny. Glukoza Enzymatyczny test kolorymetryczny oparty na reakcji Trindera. Tetracyklina Surowice testowane są pod kątem przydatności dla systemów indukowanych tetracykliną. Jeśli taki system jest stosowany, opowiednia ekspresja białek jest możliwa jedynie przy braku tetracykliny. W związku z tym używane pożywki hodowlane oraz surowice nie mogą zawierać tetracykliny. Do badań używana jest linia komórek CHO, zawierająca kontrolowany przez tetracyklinę gen lucyferazy (CHO-Luc) w reporterowej konstrukcji genowej. Kiedy komórki te hodowane są bez tetracykliny, zostaje zaindukowana ekspresja enzymu lucyferazy która jest określana poprzez test Promegas. Endotoksyny Endotoksyny są istotną częścią lipopolisacharydów zewnętrznej ściany komórkowej bakterii Gram-ujemnych. Zawartość endotoksyny określana jest metodą kinetyczną LAL (Limulus Amoebacytes Lysate). LAL składa się z wodnego ekstraktu z komórek krwi skrzypłocza (Limulus polyphemus). W obecności endotoksyny LAL powoduje zmętnienia pozwalające określić zawartość endotoksyny w próbce. 5.4. TESTY NA CZYNNIKI PATOGENNE Mykoplasma Mykoplazma należy do najmniejszych bakterii. Pozbawione ściany komórkowej mykoplazmy są bardzo zróżnicowane i mogą przechodzić przez jałowy filtr (0,2 µm). Zanieczyszczenia hodowli komórek mykoplazmą są częste i niełatwe do wykrycia, ponieważ nie zawsze powodują znaczące szkody. Stosowane są następujące systemy wykrywania: • Kultury bakterii. Po zagęszczeniu w specjalnych podłożach w warunkach tlenowych i beztlenowych testu dokonuje się płytkach agarozowych. Po dodatkowej inkubacji wykonuje się analizę mikroskopową. Skażenia mykoplazmą rozpoznaje się po kształcie kolonii przypominających jajka na twardo. • Barwnik fluorescencyjny wiążący DNA (DAPI, bisbenzimid). Zakażenia mogą być wykryte przez barwienie DNA mykoplazmy przy wykorzystaniu specjalnego fluorochromu wiążącego DNA DAPI (4-6-diamidino-2-phenylindol-di-hydrochloride). Pod mikroskopem fluorescencyjnym mykoplazma identyfikowana jest jako równe, małe, jasno świecące punkty lub ich zgrupowania na zewnątrz komórek (często na błonie komórkowej). Ponieważ DNA mitochondrialne zabarwione jest jedynie nieznacznie, fluorescencja tła jest niewielka. • Wykrywanie specyficznych enzymów mykoplazmy. Dzięki specjalnym zestawom testów mogą być wykrywane specyficzne enzymy. • PCR RNA rybosomalnego. Amplifikowanie specyficznych fragmentów rRNA mykoplazmy, rozdzielanie i identyfikacja elektroforetyczna. Testy wirusowe zgodne z wytycznymi EMEA Następujące badania wirusowe mogą być wykonywane zgodnie z wytycznymi EMEA CPMP/BWP/1793/02 (uwaga na wytyczne w sprawie stosowania surowicy bydlęcej w produkcji ludzkich biologicznych produktów leczniczych): • Wirus choroby niebieskiego języka i pokrewne orbiwirusy • Adenowirus bydlęcy • Parwowirus bydlęcy • Syncytialny wirus oddechowy, bydlęcy (BRSV) • Bydlęcy wirus biegunki (BVDV) • Wirus wścieklizny • Reowirus • Poliomawirus bydlęcy (BPyV) Sterylność Brak zanieczyszczeń bakteryjnych lub grzybiczych jest weryfikowany przez inkubację z CasoBulionem lub Thioglycolat-Bulionem zgodnie z Pharm. Eur. Miano bakterii Wykrycie ogólnej liczby żywych bakterii tlenowych dokonywane poprzez filtrowanie przez membranę lub metodę „plate-flush” czy też metodę powierzchniową. Mikroorganizmy są wykrywane jako jednostki tworzące kolonie w 1 ml (CBU/ml) na odpowiednych płytkach. 5.5.TESTY FUNKCJONALNE Efektywność wysiewania (plating efficiency) Aby zbadać ten parametr mysie fibroblasty (L929) wysiewane są na szalki Petriego w bardzo małej gęstości (500 komórek/szalkę) z 20% surowicą i DMEM jako pożywką podstawową. Po okresie inkubacji (14 dni w inkubatorze w 37°C i 5% CO2), kolonie komórek są liczone po uprzednim wybarwieniu (Giemsa). Wyniki normalizuje się w stosunku do surowicy referencyjnej. Efektywność klonowania (cloning efficiency) Wydajność klonowania pokazuje zdolność określonej partii surowicy do wspomagania procesu klonowania i wzrostu linii komórkowych szpiczaka mysiego i linii hybrydomy. Dlatego mysie komórki SP2/0-Ag14 wysiewa się na mikropłytkach (jedna komórka na studzienkę) z 20% w surowicy i RPMI 1640 jako pożywce podstawowej w bardzo małej gęstości. Po 7 dniach w inkubatorze w temperaturze 37°C i 5% CO2 przelicza się kolonie komórek (całkowita wydajność klonowania). Wyniki są normalizowane względem surowicy referencyjnej. Test wzrostu W tym teście badana jest zdolność określonej partii surowicy do wspomagania procesu proliferacji mysich fibroblastów (L929) i komórek szpiczaka mysiego (SP2/0-Ag14). Komórki wysiewane są przy stosunkowo niskiej gęstości 1,000 komórek/ml dla SP2 i 10.000 komórek/ml dla L929. Po inkubacji w temperaturze 37°C i 5% CO2 komórki zostają policzone w komorze liczącej na drugi, piąty i siódmy dzień. Jednocześnie prowadzi się hodowlę kontrolną. 5.6.KOMÓRKI PODDAWANE OBRÓBCE Zakładanie i rozwój specjalnych hodowli komórkowych Ludzkie komórki pierwotne z różnych tkanek są izolowane i hodowane w określonych warunkach. Rozwój pożywek hodowlanych wykorzystywanych w unikalnych aplikacjach Pożywki bezsurowicze i bezbiałkowe (wzrostowe i różnicujące) opracowane i zoptymalizowane zostały z myślą o różnych liniach komórkowych i komórkach pierwotnych odpowiednio dla różnych zastosowań. Zakup i przetwarzania komórek specjalnych Izolacja, hodowanie i inkubacji specjalnych komórek zgodnie z życzeniem klienta. 6. ODCZYNNIKI DO BADAŃ BIOLOGICZNYCH Cytokiny, chemokiny i czynniki wzrostu z PAN-Biotech Cytokiny zyskują coraz większe znaczenie w biologii komórki. Zawierające cukier białka mają funkcje regulujące wzrost i różnicowanie komórek organizmu. Wiele cytokin, ogólnie nazywanych mediatorami (przekaźnikami), odgrywa również ważną rolę w reakcjach immunologicznych. Cytokiny, które przede wszystkim inicjują i regulują proliferację i różnicowanie komórek zwane są czynnikami wzrostu. Białka te, które są przekazywane jako sygnały z jednej komórki do drugiej, a więc są przekaźnikami informacji, odgrywają istotną rolę przede wszystkim w rozwoju organizmów wielokomórkowych. Czynniki wzrostu są wydzielane przez komórki do środowiska lub związane są z błoną. Działają kiedy rozpoznane zostaną przez receptor na powierzchni komórki docelowej. Tylko komórki posiadające specyficzny receptor dla odpowiedniega czynnika wzrostu (liganda) mogą odpowiedzieć na sygnał. Kiedy następuje związanie z ligandem poprzez zmianę konformacji, receptor ten generuje sygnał wewnątrz komórki, który z kolej powoduje, że geny mogą być uaktywniane lub wyłączane poprzez transfer innych sygnałów. PAN-Biotech może zaoferować szereg wysokiej jakości cytokin, czynników wzrostu, jak i chemokin czy też tzw. cytokin chemotaktycznych (chemoatraktantów), które mogą być wydzielane przez wiele rodzajów komórek np. przez fagocyty i komórki dendryczne a także przez komórki w tkankach. Chemokiny mogą przyciągać i aktywować leukocyty. Stąd też odgrywają ważną rolę jako pośrednicy w ukierunkowanej regulacji migracji leukocytów i wynikającym z niej procesie zapalnym. 6.1. CZYNNIKI WZROSTU 6.1.1. LUDZKIE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU: 4-1BBr Hu 4-1BB Receptor rec. Acrp30 Glob Hu Adiponectin Globular rec. Acrp30 HEK Hu Adiponectin glycosilated, HEK rec. Acrp30 Hu Adiponectin rec. Acrp30 Tri Hu Adiponectin Trimeric Form rec. Acrp30 His Hu Adiponectin, His tag rec. AITRL Hu AITRL rec. ANG-1 Hu Angiopoietin-1 rec. ANG-2 Hu Angiopoietin-2 rec. ANGPTL-3 Hu Angiopoietin-like Protein 3 rec. ANGPTL-4 Hu Angiopoietin-like Protein 4 rec. APO-J Hu Apoliprotein-J rec. Artemin Hu Artemin rec. BAFF Hu BAFF (BLyS) rec. CB-1010100 CB-1010101 CB-1010102 CB-2800004 CB-2800005 CB-2800006 CB-2800007 CB-2800008 CB-2800009 CB-2800001 CB-2800002 CB-2800003 CB-2800010 CB-2800011 CB-2800012 CB-2800013 CB-2800014 CB-2800015 CB-1001000 CB-1001001 CB-1001002 CB-1001003 CB-1001004 CB-1001005 CB-1001006 CB-1001007 CB-1001008 CB-1001009 CB-1001010 CB-1001011 CB-1001012 CB-1001013 CB-1001014 CB-1001100 CB-1001101 CB-1001102 CB-1105002 CB-1105007 CB-1105008 CB-1010000 CB-1010001 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 0.1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg BAFF-R Hu BAFF (BlyS) Receptor rec. BD-3 Hu Beta Defensin -3 rec. BTC Hu Betacellulin rec. BMPR1A Hu Bone Morphogenetic protein Receptor-1A rec. BMP-2 Hu Bone Morphogenetic protein-2 rec. BMP-4 Hu Bone Morphogenetic protein-4 rec. BMP-6 Hu Bone Morphogenetic protein-6 rec. BMP-7 Hu Bone Morphogenetic protein-7 rec. BMP-7 CHO Hu Bone Morphogenetic protein-7, CHO rec. BDNF Hu Brain-Derived Neurotrophic Factor rec. BNP Hu B-type Natriuretic Protein BNP Hu B-type Natriuretic Protein rec. CT-1 Hu Cardiotrophin-1 rec. CD4 (1-150) Hu CD4 (1-150) rec. CB-1010002 CB-1010003 CB-1010004 CB-1010005 CB-1010006 CB-1010007 CB-1010008 CB-1117100 CB-1117101 CB-1117102 CB-1113000 CB-1113006 CB-1113007 CB-1113003 CB-1113004 CB-1113005 P-3610002 P-3610003 P-3610004 CB-1113008 CB-1113009 CB-1113010 CB-1113011 CB-1113012 CB-1113013 CB-1113014 CB-1113015 CB-1113016 CB-1115000 CB-1115001 CB-1115002 CB-1300019 CB-1300020 CB-1300021 CB-1115003 CB-1115004 CB-1115005 CB-1115006 CB-1115007 CB-1115008 CB-1000100 CB-1000115 CB-1000102 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 10 mg 25 mg 100 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 5 μg 10 μg CD4 (125-202) Hu CD4 (125-202) rec. CD4 (203-317) Hu CD4 (203-317) rec. CD4 (26-226) Hu CD4 (26-226) rec. CD4 (411-459) Hu CD4 (411-459) rec. CNTF Hu Ciliary Neurotrophic Factor rec. CTGF Hu Connective Tissue Growth Factor 182-250 a.a. rec. CTGF Hu Connective Tissue Growth Factor rec. CTLA-4 Hu Cytotoxic T-Lymphocyte Associated Antigen-4 rec. EG-VEGF Hu Endocrine Gland Vacular Endothelial Growth Factor rec. HuEndoglin Hu Endoglin rec. Endoglin Sf9 Hu Endoglin, Sf9 rec. EGF 21-Leu Hu Epidermal Growth Factor 21-Leu rec. EGF Hu Epidermal Growth Factor rec. CB-1000103 CB-1000104 CB-1000105 CB-1000106 CB-1000107 CB-1000108 CB-1000109 CB-1000110 CB-1000111 CB-1000112 CB-1000113 CB-1000114 CB-1515000 CB-1515001 CB-1515002 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 5 μg 10 μg 2 μg 5 μg 10 μg 5 μg 20 μg 1 mg CB-1515103 CB-1515104 CB-1515105 CB-1515100 CB-1515101 CB-1515102 4 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg CB-1515106 CB-1515107 CB-1515108 10 μg 50 μg 1 mg CB-1515109 CB-1515110 CB-1515111 CB-1516000 CB-1516001 CB-1516002 CB-1516003 CB-1516004 CB-1516005 CB-1101004 CB-1101005 CB-1101006 CB-1101001 CB-1101002 CB-1101003 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 5 μg 10 μg 2 μg 10 μg 100 μg 20 μg 100 μg 1 mg 100 μg 500 μg 1 mg EGF Pichia Hu Epidermal Growth Factor, Pichia rec. EPO-a Fc Hu Erythropoietin-alpha Fc/Chimera rec. EPO-a Hu Erythropoietin-alpha rec. FGF-19 Hu Fibroblast Growth Factor-19 rec. FGF-21 Hu Fibroblast Growth Factor-21 rec. FGF-21 His Hu Fibroblast Growth Factor-21, His Tag rec. FGF-22 Hu Fibroblast Growth Factor-22 rec. FGF-23 Hu Fibroblast Growth Factor-23 rec. FGF-4 FGF-9 Hu Fibroblast Growth Factor-4 rec. Hu Fibroblast Growth Factor-9 rec. FGF-1 Hu Fibroblast Growth Factor-acidic rec. FGF-1 Sf9 Hu Fibroblast Growth Factor-acidic, Sf9, rec. FGF-2 Hu Fibroblast Growth Factor-basic rec. FGF-2 Sf9 Hu Fibroblast Growth Factor-basic, Sf9, rec. Flt3 Hu Flt3-Ligand rec. CB-1101007 CB-1101008 CB-1101009 CB-2015003 CB-2015004 CB-2015005 CB-2015000 CB-2015001 CB-2015002 CB-1102108 CB-1102109 CB-1102110 CB-1102111 CB-1102112 CB-1102113 100 μg 500 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 50 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg CB-1102114 CB-1102115 CB-1102116 CB-1102117 CB-1102118 CB-1102119 CB-1102120 CB-1102121 CB-1102122 CB-1102104 CB-1102105 CB-1102106 CB-1102107 CB-1102010 CB-1102011 CB-1102012 CB-1102013 CB-1102014 CB-1102015 CB-1102024 CB-1102021 CB-1102023 CB-1102026 CB-1102027 CB-1102028 CB-1119000 CB-1119001 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 25 μg 5 μg 20 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg Flt3 Sf9 Hu Flt3-Ligand Sf9 rec. FST Hu Follistatin rec. GDNF Hu Glial-Derived Neurotrophic Factor rec. GMCSF/IL3 Hu gm-csf/IL-3 Fusion Protein (PIXY321) rec. GMCSF Hu Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor rec. GM-CSF His Hu Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor, His Tag rec. Hu Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating GMCSF Pichia Factor, Pichia rec. GMCSF Sf9 Hu Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor, Sf9 rec. GCSF Hu Granulocyte-Colony Stimulating Factor rec. GCSF CHO Hu Granulocyte-Colony Stimulating Factor, CHO rec. GCSF His Hu Granulocyte-Colony Stimulating Factor, His Tag rec. GDF5 Hu Growth and Differentiation factor 5 rec. CB-1119002 CB-1119003 CB-1119004 CB-1119005 CB-1119100 CB-1119101 CB-1119102 CB-1116001 CB-1116002 CB-1116003 CB-2110004 CB-2110005 CB-2110006 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg CB-2110000 CB-2110002 CB-2110003 2 μg 10 μg 1 mg CB-2110007 CB-2110008 CB-2110009 5 μg 20 μg 1 mg CB-2110010 CB-2110011 CB-2110012 2 μg 10 μg 1 mg CB-2110013 CB-2110014 CB-2110015 2 μg 10 μg 1 mg CB-2110100 CB-2110101 CB-2110102 CB-2110103 CB-2110104 CB-2110105 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg CB-2110106 CB-2110107 CB-2110108 CB-2120200 CB-2120201 CB-2120202 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg GHBP Hu Growth Hormone Binding Protein rec. HGH Hu Growth Hormone rec. HGF Sf9 Hu Hepatocyte Growth Factor rec. HGF CHO Hu Hepatocyte Growth Factor, CHO, rec. IGFBP-1 Hu Insulin Like Growth Factor Binding Protein-1 rec. IGFBP-3 Hu Insulin Like Growth Factor Binding Protein-3 rec. IGFBP-5 Hu Insulin Like Growth Factor Binding Protein-5 rec. IGFBP-6 Hu Insulin Like Growth Factor Binding Protein-6 rec. IGF1 des1-3 Hu Insulin Like Growth Factor-1 Des (1-3) rec. IGF-1 Hu Insulin Like Growth Factor-1 rec. IGF-2 Hu Insulin Like Growth Factor-2 rec. Insulin Hu Insulin rec. IRF-1 Hu Interferon Regulatory Factor-1 rec. IRF-3 Hu Interferon Regulatory Factor-3 rec. IFN-a 1 Hu Interferon-alpha 1 rec. CB-2120220 CB-2120221 CB-2120222 CB-2120210 CB-2120211 CB-2120212 CB-1108002 CB-1108010 CB-1108100 CB-1108003 CB-1108011 CB-1108101 CB-3000001 CB-3000002 CB-3000003 P-3000005 P-3000025 P-3001000 CB-3000004 CB-3000005 CB-3000006 CB-3000007 CB-3000008 CB-3000009 CB-1104115 CB-1104116 CB-1104117 CB-1104112 CB-1104113 CB-1104114 CB-1104201 CB-1104202 CB-1104203 P-2701002 P-2701001 P-2701000 CB-1121000 CB-1121001 CB-1121002 CB-1121003 CB-1121004 CB-1121005 CB-2120100 100 μg 200 μg 1 mg 100 μg 500 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 25 mg 250 mg 1g 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg IFN-a 1a Hu Interferon-alpha 1a rec. IFN-a 1b Hu Interferon-alpha 1b rec. IFN-a 2a Hu Interferon-alpha 2a rec. IFN-a 2b Hu Interferon-alpha 2b rec. IFN-a 2b Yeast Hu Interferon-alpha 2b Saccharomyces rec. IFN-b 1a Hu Interferon-beta 1a rec. IFN-b 1b Hu Interferon-beta 1b rec. IFN-g His Hu Interferon-gamma His Tag rec. IFN-g Hu Interferon-gamma rec. IL-1a Hu Interleukin-1 alpha rec. IL-1a His Hu Interleukin-1 alpha, His Tag rec. IL-1b Hu Interleukin-1 beta rec. IL-1b His Hu Interleukin-1 beta, His Tag rec. IL-1ra Hu Interleukin-1 receptor antagonist rec. CB-2120101 CB-2120102 CB-2120103 CB-2120104 CB-2120105 CB-2120106 CB-2120107 CB-2120108 CB-2120110 CB-2120112 CB-2120113 CB-2120114 CB-2120115 CB-2120116 CB-2120117 CB-2120118 CB-2120119 P-2360011 P-2360012 P-2360013 CB-2120120 CB-2120121 CB-2120122 CB-2120123 CB-2120124 CB-2120125 P-2060020 P-2060100 P-2061000 CB-2130110 CB-2130111 CB-2130112 CB-2130117 CB-2130118 CB-2130119 CB-2130120 CB-2130121 CB-2130122 CB-2130123 CB-2130124 CB-2130125 CB-2130190 CB-2130192 10 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 10 μg 50 μg IL-1ra His Hu Interleukin-1 receptor antagonist, His Tag rec. IL-10 Hu Interleukin-10 rec. IL-10 CHO Hu Interleukin-10, CHO rec. IL-10 His Hu Interleukin-10, His Tag rec. IL-11 Hu Interleukin-11 rec. IL-12 p35 His Hu Interleukin-12 p35, His Tag rec. IL-12 p40 His Hu Interleukin-12 p40, His Tag rec. IL-12 Hu Interleukin-12 rec. IL-13 Hu Interleukin-13 rec. IL-13 His Hu Interleukin-13, His Tag rec. IL-15 Hu Interleukin-15 rec. IL-15 His Hu Interleukin-15, His Tag rec. IL-16 Hu Interleukin-16 rec. IL-16, His Hu Interleukin-16, His Tag rec. CB-2130193 CB-2130194 CB-2130195 CB-2130196 CB-2131000 CB-2131001 CB-2131002 CB-2131003 CB-2131004 CB-2131005 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg CB-2131006 CB-2131007 CB-2131008 CB-2131100 CB-2131101 CB-2131102 CB-2131203 CB-2131204 CB-2131205 CB-2131206 CB-2131207 CB-2131208 CB-2131200 CB-2131201 CB-2131202 CB-2131300 CB-2131301 CB-2131302 CB-2131303 CB-2131304 CB-2131305 CB-2131500 CB-2131501 CB-2131502 CB-2131503 CB-2131504 CB-2131506 CB-2131600 CB-2131601 CB-2131602 CB-2131603 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg IL-17 Hu Interleukin-17A rec. IL-18 Hu Interleukin-18 rec. IL-19 Hu Interleukin-19 rec. IL-2 Hu Interleukin-2 rec IL-20 Hu Interleukin-20 rec. IL-21 Hu Interleukin-21 rec. IL-22 Hu Interleukin-22 rec. IL-24 Hu Interleukin-24 rec. IL-3 Hu Interleukin-3 rec. IL-3 His Hu Interleukin-3, His Tag rec. IL-3 Sf9 Hu Interleukin-3, Sf9 rec. IL-33 Hu Interleukin-33 rec. IL-4 CHO Hu Interleukin-4 CHO rec. CB-2131604 CB-2131605 CB-2131700 CB-2131701 CB-2131702 CB-2131802 CB-2131801 CB-2131803 CB-2131900 CB-2131901 CB-2131902 CB-2130203 CB-2130202 CB-2130204 CB-2132000 CB-2132001 CB-2132002 CB-2132100 CB-2132101 CB-2132102 CB-2132200 CB-2132201 CB-2132202 CB-2132400 CB-2132401 CB-2132402 CB-2130300 CB-2130301 CB-2130304 CB-2130305 CB-2130306 CB-2130307 CB-2130308 CB-2130309 CB-2130310 CB-2130330 CB-2130331 CB-2130332 CB-2130408 CB-2130409 10 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg IL-4 Hu Interleukin-4 rec. IL-4 His Hu Interleukin-4, His Tag rec. IL-5 Hu Interleukin-5 rec. IL-6 Hu Interleukin-6 rec. IL-6 CHO Hu Interleukin-6, CHO rec. IL-6 His Hu Interleukin-6, His Tag rec. IL-7 Hu Interleukin-7 rec. IL-7 His Hu Interleukin-7, His Tag rec. IL-7 Yeast Hu Interleukin-7, Saccharomyces rec. IL-9 Hu Interleukin-9 rec. KGF Hu Keratinocye Growth Factor rec. KGF-2 Hu Keratinocye Growth Factor-2 rec. CB-2130410 CB-2130405 CB-2130407 CB-2130406 CB-2130411 CB-2130412 CB-2130413 CB-2130500 CB-2130501 CB-2130502 CB-2130600 CB-2130603 CB-2130604 CB-2130605 CB-2130606 CB-2130607 CB-2130608 CB-2130609 CB-2130610 CB-2130703 CB-2130704 CB-2130705 CB-2130706 CB-2130707 CB-2130708 CB-2130709 CB-2130710 CB-2130711 CB-2130900 CB-2130901 CB-2130902 CB-1105000 CB-1105001 CB-1105003 CB-1105004 CB-1105005 CB-1105006 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg Leptin BD Hu Leptin Binding Domain rec. Leptin qA Hu Leptin Quadruple Antagonist rec. Leptin Hu Leptin rec. Leptin tA Hu Leptin Triple Antagonist rec. Leptin His Hu Leptin, His Tag rec. LeukinFeron Hu LeukinFeron LFA-3 Hu Leukocyte Function Associated Antigen-3 Fusion Protein rec. LIF MCSF MIF His-C MIF His-N MIA Midkine CB-1300061 CB-1300062 CB-1300063 CB-1300064 CB-1300065 CB-1300066 CB-1300058 CB-1300059 CB-1300060 CB-1300067 CB-1300068 CB-1300069 CB-1300070 CB-1300071 CB-1300072 CB-1300022 CB-1300023 CB-1300024 CB-1300073 CB-1300074 CB-1300075 Hu Lif rec. CB-1106001 CB-1106002 Hu Macrophage Colony Stimulating Factor rec. CB-1123000 CB-1123001 CB-1123002 Hu Macrophage Migration Inhibitor Factor, His Tag C-Terminus rec. CB-1310000 CB-1310001 CB-1310002 Hu Macrophage Migration Inhibitor Factor, His Tag N-Terminus rec. CB-1310003 CB-1310004 CB-1310005 Hu Melanoma Inhibitory Activity Protein rec. CB-1310006 CB-1310007 CB-1310008 Hu Midkine rec. CB-1310009 CB-1310010 CB-1310011 10 μg 50 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 200 μg 1 mg 5 mg 20 μg 100 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 10000 IU 20000 IU 100000 IU 20 μg 100 μg 1 mg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg Myostatin propetide Hu Myostatin Propeptide rec. Myostatin Hu Myostatin rec. Myostatin His Hu Myostatin, His-Tag rec. b-NGF Hu Nerve Growth Factor beta rec. NRG1 Hu Neuregulin-1/Heregulin-b2 rec. Neuroglubin Hu Neuroglobin rec. NT-3 Hu Neurotrophin-3 rec. NT-4 NOG Hu Neurotrophin-4 rec. Hu Noggin rec. Omentin Hu Omentin rec. OSM Hu Oncostatin-M rec. OPG Hu Osteoprotegerin rec. OPG His Hu Osteoprotegerin, His Tag rec. Periostin Hu Periostin rec. CB-1310015 CB-1310016 CB-1310017 CB-1310012 CB-1310013 CB-1310014 CB-1310018 CB-1310019 CB-1310020 CB-1117001M CB-1117001 CB-1117002 CB-4070010 CB-4070011 CB-4070012 5 μg 25 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg CB-4070013 CB-4070014 CB-4070015 CB-1125030 CB-1125032 CB-1125033 CB-1125041 CB-1126000 CB-1126001 CB-1126002 CB-1310021 CB-1310022 CB-1310023 CB-1310024 CB-1310025 CB-1310026 CB-3100049 CB-3100050 CB-3100051 CB-3100052 CB-3100053 CB-3100054 CB-1300076 CB-1300077 CB-1300078 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 10 μg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg HGH 20kDa Hu Pituitary Growth Hormone 20kDa rec. PLGF-1 Hu Placenta Growth Factor-1 rec. PLGF-2 Hu Placenta Growth Factor-2 rec. HGH Placental Hu Placental Corr Growth Hormone rec. HGH 20kDa Hu Placental Growth Hormone 20kDa rec. PDGF-A Hu Platelet Derived Growth Factor-A rec. PDGF-AA Hu Platelet Derived Growth Factor-AA rec. PDGF-AB Hu Platelet Derived Growth Factor-AB rec. PDGF-B Hu Platelet Derived Growth Factor-B rec. PDGF-BB Hu Platelet Derived Growth Factor-BB rec. PDGF-BB Yeast Hu Platelet Derived Growth Factor-BB, Yeast rec. Pleiotrophin Hu Pleiotrophin rec. Pro-BMP-2 Hu Pro Bone Morphogenetic protein-2 rec. CB-1300079 CB-1300080 CB-1300081 CB-1300082 CB-1300083 CB-1300084 CB-1300085 CB-1300086 CB-1300087 CB-1300088 CB-1300089 CB-1300090 CB-1300091 CB-1300092 CB-1300093 CB-1300094 CB-1300095 CB-1300096 CB-3410009 CB-3410010 CB-3410011 CB-1109300 CB-1109301 CB-1109302 CB-1109197 CB-1109198 CB-1109199 100 μg 200 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg CB-1109200 CB-1109201 CB-1109202 2 μg 10 μg 1 mg CB-1109203 CB-1109204 CB-1109205 CB-1300097 CB-1300098 CB-1300099 CB-1300100 CB-1300101 CB-1300102 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 100 μg PGRN Hu Progranulin rec. Prl Hu Prolactin rec. Prl-R Hu Prolactin Receptor rec. Prl His Hu Prolactin, His Tag rec. Pro-NGF Hu Pro-Nerve Growth Factor rec. RELM-b Hu RELM-beta rec. Resistin Hu Resistin rec. Resistin His Hu Resistin, His Tag rec. sCD4 Hu Soluble CD4 rec. sCD40L Hu soluble CD40 Ligand/TRAP rec. sIL-2R Hu Soluble Iinterleukin-2 Receptor alpha rec. sIL-6R Hu Soluble IL-6 Receptor alpha rec. sRANKL Hu Soluble RANK Ligand rec. sTNFRI Hu Soluble Tumor Necrosis Factor Receptor Inhibitor rec. CB-1300103 CB-1300104 CB-1300105 CB-1300106 CB-1300107 CB-1300108 CB-1300109 CB-1300110 CB-1300111 CB-1300112 CB-1300113 CB-1300114 CB-1117003 CB-1117004 CB-1117005 CB-1300115 CB-1300116 CB-1300117 CB-1300118 CB-1300119 CB-1300120 CB-1300121 CB-1300122 CB-1300123 RE-001 RE-002 RE-003 RE-010 RE-015 RE-020 RE-004 RE-005 RE-006 RE-007 RE-008 RE-009 RE-110 RE-111 RE-112 2 μg 10 μg 100 μg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 5 μg 10 μg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 100 μg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg RE-113 RE-114 RE-115 10 μg 50 μg 1 mg SCF Hu Stem Cell Factor rec. SCF Sf9 Hu Stem Cell Factor, Sf9, rec. TPO Hu Thrombopoietin rec. TPO CHO Hu Thrombopoietin, CHO, rec. TRAIL Hu TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand/Apo2L rec. TGF-b 1 Hu Transforming Growth Factor-Beta 1 rec. TGF-b (644-850) TGF-b 3 rHuTNFR TNF-a TNF-a His TNF-a Mutant TNF-b TNF-b His CB-1110000 CB-1110001 CB-1110002 CB-1110003 CB-1110004 CB-1110005 CB-1127000 CB-1127001 CB-1127002 CB-1127003 CB-1127004 CB-1127005 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg CB-1127100 CB-1127500 CB-1127101 CB-1111131 CB-1111122 CB-1111123 10 μg 50 μg 1 mg 1 mg 5 μg 100 μg Hu Transforming Growth Factor-Beta 3 (644-850) rec. CB-1111155 CB-1111156 CB-1111157 Hu Transforming Growth Factor-Beta 3 rec. CB-1111151 CB-1111153 CB-1111154 Hu Tumor Necrosis Factor Receptor Fusion Protein rec. CB-1111160 CB-1111161 CB-1111162 Hu Tumor Necrosis Factor-alpha rec. CB-1112011 CB-1112012 CB-1112013 Hu Tumor Necrosis Factor-alpha, His Tag rec. CB-1112014 CB-1112015 CB-1112016 Hu Tumor Necrosis Factor-alpha, Mutant rec. CB-1112017 CB-1112018 CB-1112019 Hu Tumor Necrosis Factor-beta rec. CB-1112020 CB-1112021 CB-1112022 Hu Tumor Necrosis Factor-beta, His Tag rec. CB-1112023 CB-1112024 2 μg 5 μg 10 μg 2 μg 10 μg 100 μg 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg VEGF (121) VEGF (121) Sf9 VEGF-His VEGF VEGF-C VEGF CHO VEGF Sf9 VEGF-I Vaspin Visfatin CB-1112025 Hu Vascular Endothelial Growth Factor (121) rec. CB-1114000 CB-1114002 CB-1114003 Hu Vascular Endothelial Growth Factor (121), Sf9, rec. CB-1114004 CB-1114005 CB-1114006 Hu Vascular Endothelial Growth Factor His Tag rec. CB-1114007 CB-1114008 CB-1114009 Hu Vascular Endothelial Growth Factor rec. CB-1114100 CB-1114102 CB-1114103 Hu Vascular Endothelial Growth Factor Related Protein rec. CB-1114010 CB-1114011 CB-1114012 Hu Vascular Endothelial Growth Factor, CHO rec. CB-1114013 CB-1114014 CB-1114015 Hu Vascular Endothelial Growth Factor, Sf9 rec. CB-1114016 CB-1114017 CB-1114018 Hu Vascular Endothelial Growth Inhibitor rec. CB-1114019 CB-1114020 CB-1114021 Hu Vaspin rec. CB-1114200 CB-1114201 CB-1114202 Hu Visfatin rec. CB-1114250 CB-1114251 CB-1114252 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 0.1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 6.1.2. MYSIE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU mIL-9 Murine Interleukin-9 rec. CB-2230901 CB-2230902 10 μg 1 mg CB-2800017 CB-2800018 CB-2800019 CB-2800023 CB-2800024 CB-2800025 CB-2800020 CB-2800021 CB-2800022 CB-1117007 CB-1117008 CB-1117009 CB-2810000 CB-2810001 CB-2810002 CB-1214120 CB-1214121 CB-1214122 CB-1214123 CB-1214124 CB-1214125 CB-1214126 CB-1214127 CB-1214128 CB-2240000 CB-2240001 CB-2240002 2 μg 10 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 100 μg 500 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg CB-1214129 CB-1214130 CB-1214131 P-3860001 P-3860002 P-3860003 CB-2250000 CB-2250001 CB-2250002 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg Murine Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor rec. CB-2210000 CB-2210001 CB-2210002 Murine Granulocyte-Colony Stimulating Factor rec. CB-1200000 CB-1200001 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg mAcrp30 HEK Murine Adiponectin glycosilated, HEK rec. mgAcrp30 Murine Adiponectin rec. Acrp30 Tri Murine Adiponectin Trimeric Form rec. mb-NGF Murine beta Nerve Growth Factor mEndoglin Murine Endoglin rec. mEGF Murine Epidermal Growth Factor rec. mFGF-21 Murine Fibroblast Growth Factor-21 rec. mFGF-21 His Murine Fibroblast Growth Factor-21, His Tag rec. mFGF-9 Murine Fibroblast Growth Factor-9 rec. mFGF-1 Murine Fibroblast Growth Factor-acidic rec. mFGF-2 Murine Fibroblast Growth Factor-basic rec. mFlt3 Murine Flt3-Ligand rec. mGMCSF mGCSF mIGF-1 Murine Insulin Like Growth Factor-1 rec. mIFN-g Murine Interferon-gamma rec. mIL-1a Murine Interleukin-1 alpha rec. mIL-1b Murine Interleukin-1 beta rec. mIL-10 Murine Interleukin-10 rec. mIL-12 Murine Interleukin-12 rec. mIL-13 Murine Interleukin-13 rec. mIL-15 Murine Interleukin-15 rec. mIL-16 Murine Interleukin-16 rec. mIL-17 Murine Interleukin-17 rec. mIL-19 Murine Interleukin-19 rec. mIL-2 Murine Interleukin-2 rec. mIL-20 Murine Interleukin-20 rec. mIL-3 Murine Interleukin-3 rec. CB-1200002 CB-1214141 CB-1214142 CB-1214143 CB-2230030 CB-2230031 CB-2230032 CB-2230110 CB-2230111 CB-2230112 CB-2230120 CB-2230121 CB-2230122 CB-2231000 CB-2231001 CB-2231002 CB-2231200 CB-2231201 CB-2231202 P-3750001 P-3750002 P-3750003 CB-2230150 CB-2230151 CB-2230152 CB-2131607 CB-2131608 CB-2131609 P-3780002 P-3780003 P-3780004 CB-2231900 CB-2231901 CB-2231902 CB-2230220 CB-2230221 CB-2230222 CB-2232010 CB-2232011 CB-2232012 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 0.1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg CB-2230300 CB-2230301 2 μg 10 μg mIL-4 Murine Interleukin-4 rec. mIL-6 Murine Interleukin-6 rec. mIL-7 Murine Interleukin-7 rec. mLeptin Murine Leptin rec. mLeptin tA Murine Leptin Triple Antagonist rec. mMCSF Murine Macrophage Colony Stimulating Factor rec. mPDGF-BB Murine Platelet Derived Growth Factor-BB rec. mPrl Murine Prolactin rec. mRELM-a Murine RELM-alpha rec. mRELM-g Murine RELM-Gamma rec. mResistin Murine Resistin rec. msCD40L Murine soluble CD40 Ligand/TRAP rec. msRANKL Murine Soluble RANK Ligand rec. mSCF Murine Stem Cell Factor rec. CB-2230302 CB-2230403 CB-2230401 CB-2230402 CB-2230600 CB-2230601 CB-2230602 P-3720001 P-3720002 P-3720003 CB-1300124 CB-1300125 CB-1300126 CB-1300127 CB-1300128 CB-1300129 P-4390002 P-4390010 P-4390011 CB-4120002 CB-4120010 CB-4120011 CB-4120012 CB-4120013 CB-4120014 CB-4130000 CB-4130001 CB-4130002 CB-4130003 CB-4130004 CB-4130005 CB-4120015 CB-4120016 CB-4120017 RE-116 RE-117 RE-118 RE-119 RE-120 RE-121 CB-1210000 CB-1210001 CB-1210003 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 200 μg 1 mg 5 mg 20 μg 100 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 250 μg 500 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg mTPO Murine Thrombopoietin rec. mTNF-a Murine Tumor Necrosis Factor-alpha rec. rmVEGF Murine Vascular Endothelial Growth Factor rec. mVEGF Sf9 mVisfatin Murine Vascular Endothelial Growth Factor-Sf9 rec. Murine Visfatin rec. P-3460002 P-3460010 P-3461000 CB1212011M CB-1212011 CB-1212012 CB-1214000 CB-1214001 CB-1214002 CB-1214003 CB-1214004 CB-1214005 CB-1114253 CB-1114254 CB-1114255 2 μg 10 μg 1 mg CB-2420000 CB-2420001 CB-2420002 2 μg 10 μg 1 mg CB-2420003 CB-2420004 CB-2420005 CB-2420006 CB-2420007 CB-2420008 CB-2420009 CB-2420010 CB-2420011 CB-2420012 CB-2420013 CB-2420014 CB-2420031 CB-2420032 CB-2420033 CB-2430119 CB-2430120 CB-2430122 CB-2430123 CB-2430121 2 μg 10 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 6.1.3. SZCZURZE CYTOKINY I CZYNNIKI WZROSTU rAPO-J Rat Apoliprotein-J rec. rGMCSF Rat Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor rec. rGH Rat Growth Hormone rec. rIL-5 Rat IL-5 rec. rIGF-1 Rat Insulin Like Growth Factor-1 rec. rIFN-g Rat Interferon-gamma rec. rIL-1a Rat Interleukin-1 alpha rec. rIL-1b Rat Interleukin-1 beta rec. rIL-10 Rat Interleukin-10 rec. rIL-12 Rat Interleukin-12 rec. rIL-13 Rat Interleukin-13 rec. rIL-15 Rat Interleukin-15 rec. rIL-18 Rat Interleukin-18 rec. rIL-2 Rat Interleukin-2 rec. rIL-3 Rat Interleukin-3 rec. rIL-4 Rat Interleukin-4 rec. rIL-6 Rat Interleukin-6 rec. rLeptin Rat Leptin rec. rLeptin tA Rat Leptin Triple Antagonist rec. rPrl Rat Prolactin rec. rResistin Rat Resistin rec. rSCF Rat Stem Cell Factor rec. CB-2430124 CB-2430125 CB-2430126 CB-2430127 CB-2430128 CB-2430129 CB-2430130 CB-2430131 CB-2430132 CB-2430133 CB-2430134 CB-2430135 CB-2430136 CB-2430137 CB-2430138 CB-2430139 CB-2430140 CB-2430141 CB-2430142 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 0.1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg CB-2430300 CB-2430301 CB-2430302 CB-2430400 CB-2430401 CB-2430402 CB-2430600 CB-2430601 CB-2430602 CB-1300151 CB-1300152 CB-1300153 CB-1300154 CB-1300155 CB-1300156 CB-2440000 CB-2440001 CB-2440002 CB-2440003 CB-2440004 CB-2440005 CB-2450000 CB-2450001 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 200 μg 1 mg 5 mg 20 μg 100 μg 1 mg 250 μg 500 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 2 μg 10 μg rTNF-a Rat Tumor Necrosis Factor-alpha rec. rVEGF Rat Vascular Endothelial Growth Factor rec. rVEGF-C Rat Vascular Endothelial Growth Factor Related Protein rec. Rat Vascular Endothelial Growth Factor-C (152) rVEGF-C (152) rec. CB-2450002 CB-1412010 CB-1412011 CB-1412012 CB-2460000 CB-2460001 CB-2460002 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg CB-2460003 CB-2460004 CB-2460005 2 μg 10 μg 1 mg CB-2460006 CB-2460007 CB-2460008 2 μg 10 μg 1 mg CB-11000050 CB-1300031 CB-1300032 CB-1300033 P-2880001 P-2880002 P-2880003 CB-1300034 CB-1300035 CB-1300036 CB-1300016 CB-1300017 CB-1300018 CB-1300001 CB-1300002 CB-1300003 CB-1300037 CB-1300038 CB-1300039 CB-1300040 CB-1300041 CB-1300042 CB-1300043 CB-1300044 50 μg 5 μg 20 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 25 mg 250 mg 1g 100 μg 200 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 6.1.4. INNE CYTOKINY bECGS bBTC ECGS (from bovine hypothalamus) Bovine Betacellulin rec. bFGF-2 Bovine Fibroblast Growth Factor-basic rec. bGHBP Bovine Growth Hormone Binding Protein rec. bInsulin Bovine Insulin bLeptin Bovine Leptin rec. bPL Bovine Placental Lactogen rec. bPrl-R Bovine Prolactin Soluble Receptor rec. cPL Caprine Placental Lactogen rec. cGH Carprine Growth Hormone rec. chGH Chicken Growth Hormone rec. chLeptin BD Chicken Leptin Binding Domain rec. chLeptin Chicken Leptin rec. dGH Denis Growth Hormone rec. dIGF-1 Denis Insulin Like Growth Factor-1 rec. dLeptin Dog Leptin rec. hLeptin Horse Leptin rec. oGH-A Ovine Growth Hormone Anatagonist rec. oGHBP Ovine Growth Hormone Binding Protein rec. oGH Ovine Growth Hormone rec. oIFN-tau Ovine Interferon-Tau rec. oLeptin qA Ovine Leptin Quadruple Antagonist rec. oLeptin Ovine Leptin rec. CB-1300045 CB-1300046 CB-1300047 CB-1300048 CB-1300049 CB-1300050 CB-1300051 CB-1300007 CB-1300008 CB-1300009 CB-1300004 CB-1300005 CB-1300006 CB-1300052 CB-1300053 CB-1300054 CB-1300055 CB-1300056 CB-1300057 CB-1300010 CB-1300011 CB-1300012 CB-1300013 CB-1300014 CB-1300015 CB-2310003 CB-2310004 CB-2310005 CB-2310006 CB-2310007 CB-2310008 CB-2310000 CB-2310001 CB-2310002 CB-2310009 CB-2310010 CB-2310011 CB-1300145 CB-1300146 CB-1300147 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg CB-1300142 CB-1300143 100 μg 200 μg oLeptin tA Ovine Leptin Triple Antagonist rec. oPL Ovine Placental Lactogen rec. oPrl-A Ovine Prolactin Antagonist rec. roPrl Ovine Prolactin rec. oPrl-R Ovine Prolactin Soluble Receptor rec. pGMCSF Porcine Granulocyte Macrophage-Colony Stimulating Factor rec. pGH Porcine Growth Hormone rec. pHGF Porcine Hepatocyte Promoting Growth Factor pInsulin Porcine Insulin pIFN-g Porcine Interferon-gamma rec. pIL-1a Porcine Interleukin-1 alpha rec. pIL-1b Porcine Interleukin-1 beta rec. pIL-10 Porcine Interleukin-10 rec. pIL-15 Porcine Interleukin-15 rec. CB-1300144 CB-1300148 CB-1300149 CB-1300150 CB-2310012 CB-2310013 CB-2310014 CB-2310018 CB-2310019 CB-2310020 CB-2310015 CB-2310016 CB-2310017 CB-2310021 CB-2310022 CB-2310023 1 mg 20 μg 100 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg CB-2330000 CB-2330001 CB-2330002 CB-2330003 CB-2330004 CB-2330005 CB-1300025 CB-1300026 CB-1300027 CB-1300028 CB-1300029 CB-1300030 CB-2330006 CB-2330007 CB-2330008 CB-2330110 CB-2330111 CB-2330112 CB-2330113 CB-2330114 CB-2330115 CB-2331000 CB-2331001 CB-2331002 CB-2331500 CB-2331501 CB-2331502 2 μg 10 μg 1 mg 100 μg 500 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 25 mg 250 mg 1g 10 μg 50 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg pIL-2 Porcine Interleukin-2 rec. pIL-4 Porcine Interleukin-4 rec. pIL-6 Porcine Interleukin-6 rec. pLeptin Porcine Leptin rec. rpTNF-a Porcine Tumor Necrosis Factor-alpha rec. raGH Rabbit Growth Hormone rec. raLeptin Rabbit Leptin rec. rPrl Rabbit Prolactin rec. raPrl-R Rabbit Prolactin Soluble Receptor rec. CB-2330200 CB-2330201 CB-2330202 CB-2330400 CB-2330401 CB-2330402 CB-2330600 CB-2330601 CB-2330602 CB-1300130 CB-1300131 CB-1300132 CB-1400000 CB-1400001 CB-1400002 CB-1410000 CB-1410001 CB-1410002 CB-1300133 CB-1300134 CB-1300135 CB-1300136 CB-1300137 CB-1300138 CB-1300139 CB-1300140 CB-1300141 2 μg 10 μg 0.1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 0.1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 100 μg 200 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg 10 μg 50 μg 1 mg CB-1232200 CB-1232201 CB-1232202 CB-1232100 CB-1232101 CB-1232102 CB-1232103 CB-1232104 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg 6.2. CHEMOKINY 6.2.1. LUDZKIE CHEMOKINY ENA-78 Hu Epithelial Neutrophil-Activating Protein 78 (CXCL5) rec. Eotaxin Hu Eotaxin (CCL11) rec. Eotaxin His Hu Eotaxin (CCL11), His Tag rec. Exodus-2 Hu Exodus-2 (CCL21) rec. Fractalkine Hu Fractalkine (CX3CL1) rec. GRO-a Hu GRO-alpha (CXCL1) rec. GRO-b Hu GRO-beta/MIP-2 (CXCL2) rec. GRO-g Hu GRO-gamma (CXCL3) rec. HCC-1 Hu HCC-1 (CCL14) rec. I-309 Hu I-309 (CCL10 rec. IL-8 (1-72) Hu Interleuikin-8 (1-72) (CXCL8) rec. IL-8 (1-77) Hu Interleuikin-8 (1-77) (CXCL8) rec. IL-8 (1-77) His Hu Interleuikin-8 (1-77) (CXCL8), His Tag rec. IP-10 Hu IP-10 (CXCL10) rec. IP-10 His Hu IP-10 (CXCL10), His Tag rec. I-TAC Hu I-TAC (CXCL11) rec. I-TAC His Hu I-TAC (CXCL11), His Tag rec. CB-1232105 P-3320001 P-3300002 P-3300003 CB-2350005 CB-2350006 CB-2350007 CB-1232300 CB-1232301 CB-1232302 CB-1232500 CB-1232501 CB-1232502 CB-1232509 CB-1232510 CB-1232511 CB-1232600 CB-1232601 CB-1232602 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg CB-1232700 CB-1232701 CB-1232702 CB-2130805 CB-2130806 CB-2130807 CB-2130808 CB-2130809 CB-2130810 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg CB-2130811 CB-2130812 CB-2130813 CB-1232800 CB-1232801 CB-1232802 CB-1232803 CB-1232804 CB-1232805 P-3340001 P-3340002 P-3340003 CB-1170000 10 μg 50 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg Lymphotactin Hu Lymphotactin (XCL1) rec. MIP-1a MIP-1a His MIP-1b MIP-3b MIP-4 MIG MCP1/MCAF rMCP-2 rMCP-3 MCP-4 NAP-2 PF-4 CB-1170001 CB-1170002 CB-1122000 CB-1122001 CB-1122002 Hu Macrophage Inflammatory protein-1 alpha (CCL3) rec. CB-1107405 CB-1107406 CB-1107407 Hu Macrophage Inflammatory protein-1 alpha (CCL3), His Tag rec. CB-1107408 CB-1107409 CB-1107410 Hu Macrophage Inflammatory protein-1 beta (CCL4) rec. CB-1107417 CB-1107418 CB-1107419 Hu Macrophage Inflammatory protein-3 beta (CCL19) rec. CB-1107420 CB-1107421 CB-1107422 Hu Macrophage Inflammatory protein-4 (CCL18) rec. CB-1107426 CB-1107427 CB-1107428 Hu MIG (CXCL9) rec. P-3330001 P-3330002 P-3330003 Hu Monocyte Chemotactic Protein-1/MCAF (CCL2) rec. CB-1107000 CB-1107001 CB-1107002 Hu Monocyte Chemotactic Protein-2 (CCL8) rec. CB-1407003 CB-1407004 CB-1407005 Hu Monocyte Chemotactic Protein-3 (CCL7) rec. CB-1407006 CB-1407007 CB-1407008 Hu Monocyte Chemotactic Protein-4 (CCL13) rec. CB-1407012 CB-1407013 CB-1407014 Hu Neutrophil Activating Protein-2 (CXCL7) rec. CB-1104300 CB-1104301 CB-1104302 Hu Platelet Factor-4 (CXCL4) CB-1109400 CB-1109401 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg CB-1109402 CB-1118020 CB-1118021 CB-1118022 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg CB-1118004 CB-1118005 CB-1118006 Hu Stromal Cell-Derived Factor-1 beta (CXCL12) rec. CB-1118010 CB-1118011 CB-1118012 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg Rantes Hu Rantes (CCL5) rec. SDF-1a Hu Stromal Cell-Derived Factor-1 alpha (CXCL12) rec. SDF-1b 6.2.2. MYSIE CHEMIKINY mC-10 Murine C-10 (CCL6) rec. mEotaxin Murine Eotaxin (CCL11) rec. mKC Murine GRO/KC (CXCL1) rec. mGRO-b Murine GRO-beta/MIP-2 (CXCL2) rec. mIP-10 Murine IP-10 (CXCL10) rec. mMIP-1 a Murine Macrophage Inflammatory protein-1 alpha (CCL3) rec. mMIP-3 b Murine Macrophage Inflammatory protein-3 beta (CCL19) rec. rmMIG Murine MIG (CXCL9) rec. mMCP-1 Murine Monocyte Chemotactic Protein-1 (CCL2) rec. mMCP-3 Murine Monocyte Chemotactic Protein-3 (CCL7) rec. CB-1232000 CB-1232001 CB-1232002 CB-1232106 CB-1232107 CB-1232108 CB-1232400 CB-1232401 CB-1232402 CB-1232503 CB-1232504 CB-1232505 CB-1232806 CB-1232807 CB-1232808 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 2 μg 1 mg CB-1107411 CB-1107412 CB-1107413 2 μg 10 μg 1 mg CB-1107423 CB-1107424 CB-1107425 CB-1108200 CB-1108201 CB-1108203 CB-2232000 CB-2232001 CB-2232002 CB-1407009 5 μg 20 μg 1 mg 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 2 μg mSDF-1a Murine Stromal Cell-Derived Factor-1 alpha (CXCL12) rec. mSDF-1b Murine Stromal Cell-Derived Factor-1 beta (CXCL12) rec. 6.2.3. Pozostałe cytokiny Skrót Opis pIL-8 (1-72) Porcine Interleuikin-8 (1-72) (CXCL8) rec. rGRO-b rMIP-1a rMCP-1 Rat GRO-beta/MIP-2 (CXCL2) rec. CB-1407010 CB-1407011 10 μg 1 mg CB-1118007 CB-1118008 CB-1118009 2 μg 10 μg 1 mg CB-1118013 CB-1118014 CB-1118015 2 μg 10 μg 1 mg Nr kat. CB-2130814 CB-2130815 CB-2130816 CB-1232506 CB-1232507 CB-1232508 Rozmiar 2 μg 10 μg 1 mg 5 μg 25 μg 1 mg Rat Macrophage Inflammatory protein-1 alpha (CCL3) rec. CB-1107414 CB-1107415 CB-1107416 Rat Monocyte Chemotactic Protein-1 (CCL2) rec. CB-1407000 CB-1407001 CB-1407002 5 μg 20 μg 1 mg 2 μg 10 μg 1 mg 7. BIOLOGIA MOLEKULARNA 7.1.POLIMERAZY 7.1.1..Taq Polimeraza DNA Opis: Polimeraza Taq jest termo-stabilnym kompleksem polimerazy DNA otrzymywana w oryginalym procesie izolacji polimeraz DNA. Bufor do przechowywania i rozcieńczania 20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50% glicerol, 0.5% i 0,5 Nonidet P40 i 0.5% Tween 20. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która włącza 10 nmoli dNTP we frakcję nierozpuszczalną w kwasie w 30 minut w temperaturze 72°C w standardowych warunkach: 25 mM TAPS (tris-(hydrooxymethyl)-methyl-amino-propansulfonic acid, sodium salt) pH 9,3 (w 25°C), 50 mM KCl, 2 mM 50 mM MgCl2, 1 mM -merkaptoetanolu, po 200 µM dATP, dGTP, dTTP, 100 µM dCTP (mieszaniana znakowanego P32 i nieznakowanego), 12.5 µg DNA z aktywowanej spermy łososia, w końcowej objętości 50 µl. Dołaczone bufory (zamiennie bufor pełny lub niepełny) - 10x PCR buffer with MgCl2: Stabilność Enzym ten jest stabilny przez ponad 12 miesięcy, jeśli jest przechowywany w temperaturze 20°C. Enzym ten jest również stabilny przez kilka dni w temperaturze powyżej 20°C. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie była wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg natywnego DNA lambda i 0,22 µg DNA lambda trawionego EcoRI w temperaturze 72°C w obecności 15 - 20 jednostek Taq Polimerazy DNA. Właściwości i zastosowanie: Taq Polimeraza DNA jest termostabilną polimerazą DNA z T. aquaticus o wysokiej czystości z dobrą wiernością i wysoką wydajnością. Taq DNA Polymerase with buffer and MgCl2 2 Taq DNA Polymerase with buffer and MgCl with Phenol red 250 units 250 units MB-30010250 MB-30020250 7.1.2. PANScript Polimeraza DNA Właściwości i zastosowanie • Powtarzalne wyniki • Polimeraza Premium Taq nadaje się do szerokiego zakresu zastosowań • Działanie przy fragmentach do 5Kb • Pozostawia wolny koniec A • Dostępny w postaci gotowej do użycia 2x mieszaniny reakcyjnej (PAN Mix i PAN Mix red) • Rutynowe aplikacje PCR • Produkty odpowiednie do klonowania TA PANScript jest powszechnie wykorzystywany przez biologów molekularnych którzy mogą polegać na jego solidnym działaniu. PANScript jest wysoce oczyszczoną termostabilną polimerazą DNA oferującą bardzo wysoką wydajność dla szerokiego zakresu matryc PCR i jest idealnym wyborem dla większości testów. PanScript zapewnia wysoką wydajność przy minimalnym tle. PANScript posiada aktywność 5 '3 ' egzonukleazy i pozostawia koniec A przez co produkt PCR może zostać wykorzystany do klonowania wektorów TA. PANScript dostarczany jest z 10-krotnym buforem do reakcji opartym na NH4, który zapewnia optymalne warunki dla większości eksperymentów. Dodatkowe MgCl2 pozwala na dostosowanie warunków reakcji do matrycy. Specyfika i wydajność PANScript można dodatkowo poprawić za pomocą dodatku 2x PAN Mate Additive (Nr kat. PAN737041), który jest przeznaczony dla DNA bogatego w GC lub AT, albo dla sekwencji z wysokim poziomem struktur drugorzędowych. PANScript Polimeraza DNA jest oczyszczana z Thermus aquaticus. Warunki przechowywania PANScript może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20°C Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie była wykrywalna po 2 i po 1 godzinie inkubacji dlaodpowiednio - 1 µg natywnego DNA lambda i 0,22 µg DNA lambda trawionego EcoRI w temperaturze 72°C w obecności 15 - 20 jednostek PANScript polimerazy DNA. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która włącza 10 nmoli dNTP we frakcję nierozpuszczalną w kwasie w 30 minut w temperaturze 72°C. PANScript DNA-Polymerase 500 units 1000 units MB-1100500 MB-1101000 7.1.3. PANScript red Polimerazy DNA Opis Właściwości i zastosowanie: • Łatwe rozpoznanie wzrokowe • Bezpośrednie podawanie na żel agarozowy • Równie wysoka wydajność jak w przypadku polimerazy DNA PANScript • Pozostawia wolny koniec A • Dostępny jako gotowa do użycia 2x mieszanina reakcyjna (PAN Mix Red) • Rutynowe testy PCR • Produkt odpowiedni do klonowania TA • Wysoka wydajność Polimeraza DNA PANScript Red jest preparatem z grupy polimeraz DNA PANScript, który zawiera nietoksyczny i nieszkodliwy czerwony barwnik. Barwnik ten umożliwia łatwe i szybkie określenie reakcji w której to został dodany enzym, a także ułatwia potwierdzenia całkowitego wymieszania. Po zakończeniu reakcji, próbki mieszaniny reakcyjnej mogą być bezpośrednio naniesione na żel agarozowy bez potrzeby dodawania dodatkowego buforu do nakładania gdyż mieszanka ma wystarczająco wysoką gęstość aby opadła na dno żelu. Czerwony barwnik migruje w kierunku dodatniej elektrody, zapewniając w ten sposób możliwość monitorowania postępu elektroforezy. Obecność barwnika nie ma wpływu na rutynowe manipulacje enzymatyczne, choć zdarzają się nieliczne wyjątki. W celu uzyskania reakcji o wystarczającej gęstości tak aby umożliwić bezpośrednie aplikowanie próbki na żel, zalecamy używanie min. 1.5 jednostek na 50 µl reakcji. Polimerazę DNA PANScript oczyszczono z Thermus aquaticus. Warunki przechowywania PANScript red może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20 ° C. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie była wykrywalna po 2 i po 1 godzinie inkubacji dlaodpowiednio - 1 µg natywnego DNA lambda i 0,22 µg DNA lambda trawionego EcoRI w temperaturze 72°C w obecności 15 - 20 jednostek PANScript polimerazy DNA. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która włącza 10 nmoli dNTP we frakcję nierozpuszczalną w kwasie w 30 minut w temperaturze 72°C. PANScript red DNAPolymerases 500 units MB-1100600 7.1.4.Polimeraza DNA PANPhusion PANPhusion jest szybką polimerazą mającą zdolność naprawy DNA, pochodzącą z archeobakterii, która twory amplikony o tępych końcach. Jej wysoka termostabilnoś ć w połączeniu z aktywnością polimerazy DNA 5’-3’ i aktywnością egzonukleazy korygującej 3’-5’ powoduje, że PANPhusion jest idealnym enzymem do wszystkich zastosowań PCR. Rzeczywiście PANPhusion charakteryzuje się wspólczynnikiem błedu 4.4 x 10-7, dając 50krotnie większą wierność niż polimeraza DNA z Thermus aquaticus (określone przy użyciu zaadaptowanego testu wierności rpsL, Mo J.Y. i wsp., J. Mol. Biol. 1991; Fuji. S. i wsp., J. Mol. Biol. 1999). Dodatkowo dzięki swojej zwiększonej wydajności PANPhusion wykazuje nie tylko wyższe wskaźniki amplifikacji aż do 66 bp/s (co odpowiada 15s/kb) ale również skutkuje wyższą wydajnością niż większość dostępnych enzymów. Bufor do przechowywania 10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, glicerol i stabilizatory Warunki przechowywania PANPhusion jest przesyłany na lodzie lub suchym lodzie. Wszystkie składniki zestawu powinny być umieszczone w temperaturze -20°C po otrzymaniu przesyłki. Nie zaleca się wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wiąże 10 nmoli dNTP w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72°C. PANPhusion DNA polymerase 7.1.5.Polimerazy DNA PAN Hot Start Opis Właściwości i zastosowanie • Do PCR wymagającego tzw. hot-start • Doskonała wydajność w testach ilościowych • Wygodne przygotowanie w temperaturze pokojowej • Pozostawia fragmenty A 250 units 500 units PAN721098 PAN721099 • Dostępne w gotowej do użycia wersji PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red • Duża przydatność przy testach w czasie rzeczywistym (real-time) • Produkt odpowiedni do klonowania TA PAN Hot Start jest aktywowaną cieplnie, termostabilną polimerazą DNA. Hot Start zapewnia lepszą specyfikę w porównaniu do standardowej polimerazy i eliminuje obecność niespecyficznych fragmentów. PAN Hot Start jest nieaktywny w temperaturze pokojowej, a zatem przed rozpoczęciem reakcji PCR wymaga aktywacji poprzez ogrzanie przez 10 minut. Następnie można prowadzić reakcję według istniejących protokołów postępowania z termostabilną polimerazą DNA. Specyfika i wydajność PAN Hot Start można dodatkowo poprawić za pomocą 2x PAN Mate Additive (Nr kat.PAN737041), który jest przeznaczony do fragmentów DNA bogatych w GC lub AT, lub o wysokim poziomie występowania struktur drugorzędowych. Warunki przechowywania PAN Hot Start może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20°C. Bufory do rozcieńczeń i przechowywania 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 2mM DTT, 50 % Glicerol i stabilizatory Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie były wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg plazmidowego DNA pBR322 i 0.5 µg DNA lambda trawionego HindIII w temperaturze 72°C w obecności 20 jednostek PAN Hot Start Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wiąże 10 nmoli dNTP w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72°C. PAN Hot Start DNA Polymerase 250 units 500 units 5000 units MB-1860250 MB-1860500 MB-1865000 7.1.6. PowerScript DNA-Polymerases short range (Polimeraza DNA PowerScript do krótkich fragmentów DNA) Właściwości i zastosowanie • Idealna do problematycznych matryc, w których zwykła polimeraza Taq DNA nie zdaje egzaminu • Idealna do fragmentów o długości do 5Kb • Większa wierność niż w przypadku Taq • Wysoka wierność PCR • Nadaje się zarówno do klonowania TA jak i tępych końców Polimeraza DNA PowerScript short jest wysokowydajnym kompleksem enzymów zaprojektowanym dla szczególnie trudnych / problematycznych zastosowań wymagających wysokiej wierności PCR, których nie można przeprowadzić przy użyciu zwykłej polimerazy Taq. Polimeraza ta jest zalecana dla krótkich fragmentów DNA genomowego do 3 Kb, lub do 5 Kb w przypadku DNA Lambda. Specyfikacja odczynników 5x Hi-Spec Additive jest dodatkiem wzmacniającym specyfikę. Jeśli to konieczne, ponownie rozpuścić Hi-Spec przez ogrzewanie do 70°C i wytrząsanie (vortex). Bufor 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 2mM DTT, 50 % Glicerol i stabilizatory. Warunki przechowywania Polimeraza DNA PowerScript short może być przechowywana przez 12 miesięcy w temperaturze -20°C. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie były wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg plazmidowego DNA pBR322 i 0.5 µg DNA lambda trawionego HindIII w temperaturze 72°C w obecności 20 jednostek PowerScipt short. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wiąże 10 nmoli dNTP w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72°C. PowerScript DNAPolymerases short range 250 units 500 units PAN721064 PAN721065 7.1.7. PowerScript long DNA Polymerase (Polimeraza do długich fragmentów DNA) Opis Właściwości i zastosowanie • Idealna do problematycznych matryc, w których typowe polimerazy Taq DNA nie zdaję egzaminu • Idealna dla fragmentów o długości 2 - 20 Kb • Większa wierność niż Taq • Dostępna jako gotowa do użytku mieszanina reakcyjna (2x) • Odpowiednia do PCR o wysokiej wierności • Nadaje się zarówno do klonowania TA jak i tępych końców Polimeraza DNA PowerScript long jest wysokowydajnym kompleksem enzymów zaprojektowanym dla szczególnie trudnych / problematycznych matryc wymagających wysokiej wierności PCR, których nie można przeprowadzić przy użyciu zwykłej polimerazy Taq. Polimeraza DNA PowerScript long jest zalecana dla długich fragmentów genomowego DNA: od 2 do 20 Kb lub do 30 Kb fragmentów DNA Lambda. Przy pracy z DNA Lambda, najlepsze wyniki osiąga się w zakresie 2 - 20 Kb. PowerScipt Long jest naszą oryginalną recepturą. Specyfikacja odczynników 5x Hi-Spec Additive jest dodatkiem wzmacniającym specyfikę. Jeśli to konieczne, ponownie rozpuścić Hi-Spec przez ogrzewanie do 70°C i wytrząsanie (vortex). Bufor do przechowywania 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 2mM DTT, 50 % Glicerol i stabilizatory. Warunki przechowywania Polimeraza DNA PowerScript short może być przechowywana przez 12 miesięcy w temperaturze -20°C. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie były wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg plazmidowego DNA pBR322 i 0.5 µg DNA lambda trawionego HindIII w temperaturze 72°C w obecności 20 jednostek PowerScipt short. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wiąże 10 nmoli dNTP w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72°C. PowerScript DNA-Polymerase long range 250 units 500 units MB-1120250 MB-1120500 7.1.8. Polimerazy DNA TrueScript™ Właściwości i zastosowanie • Wysoka wierność w połączeniu z wysoką wydajnością • Amplifikowane fragmenty do 5 Kb • Bardzo wysoka wierność w późniejszym klonowaniu • Klonowanie tępych końców • Zgodny z DHPLC (wolny od detergentów) TrueScript jest termostabilnym enzymem posiadającym działanie 5 '- 3 ' polimerazy DNA i 3 '- 5 ' działanie egzonukleazy korygującej, oferującym wysoką wierność. TrueScript pozostawia produkty PCR o tępych końcach, do długości 5Kb. TrueScript dostarczany jest z 10-krotnym Bufor reakcyjny zawierającym MgSO4, który zapewnia optymalne warunki reakcji końcowej (1,5 mM Mg2+) w większości eksperymentów. W celu uzyskania optymalizacji warunków reakcji, dodatkowo dostarczany jest MgCl2. Specyfika i wydajność TrueScript można dodatkowo poprawić za pomocą 2x PAN Mate Additive (Nr kat. PAN737041), który jest przeznaczony do DNA bogatego w GC lub AT, czy też o wysokim poziomie występowania struktur drugorzędowych. Bufor 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 2mM DTT, 50 % Glicerol i stabilizatory. Warunki przechowywania TrueScript™ może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20°C. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie były wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg plazmidowego DNA pBR322 i 0.5 µg DNA lambda trawionego HindIII w temperaturze 72°C w obecności 20 jednostek Truescript. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wiąże 10 nmoli dNTP w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72°C. TrueScript DNA-Polymerases 250 units 500 units MB-1170250 MB-1170500 7.1.9.Polimerazy DNA PAN Mix Opis Właściwości i zastosowanie • Wygodny, wstępnie wymieszany i zoptymalizowany dwukrotnie stężony roztwór • Zmniejszone ryzyko zanieczyszczenia • Znacznie zmniejsza czas potrzebny na przygotowanie reakcji • Powtarzalność wyników • Bezpośrednia aplikacja na żel • Rutynowe aplikacje PCR • Produkt odpowiedni do klonowania TA • Wysoka wydajność PAN Mix jest kompletną gotową do użycia mieszaniną reakcyjną zawierającą niezwykle stabilną polimerazę Taq DNA. Opracowana została pod kątem reakcji PCR z wielu popularnych matryc genomowych i cDNA; użytkownik musi jedynie przed użyciem dodać wodę, matrycę i startery. PAN Mix znacznie skraca czas potrzebny do przygotowania reakcji i tym samym zmniejsza ryzyko zakażenia. Zapewniona jest większa powtarzalność wyników poprzez zmniejszenie liczby etapów pipetowania które mogą prowadzić do błędów. PAN Mix został zoptymalizowany dla wielu różnych matryc, jednak odatkowo został załączony roztwór 50mM MgCl2 jeżeli byłoby konieczne jeszcze dokładniejsze dostosowanie. Warunki przechowywania PAN Mix może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze -20°C lub do 2 tygodni w temperaturze +4°C. Powinno się unikać cyklicznego powtarzania zamrażania i rozmrażania. Działania powiązane Aktywność endonukleaz i egzonukleaz nie była wykrywalna po 4 godzinach inkubacji 1 µg plazmidowego DNA pBR322 i 0.5 µg DNA lambda trawionego HindIII w temperaturze 72°C w obecności 20 jednostek PAN Mix. Definicja jednostki Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu, która wbudowuje 10 nmoli dNTP w postaci nierozpuszczalnej w kwasie w ciągu 30 minut w temperaturze 72°C. PAN Mix DNA-Polymerases 100 reactions 500 reactions 7.1.10.Polimerazy DNA PAN Mix red Opis Właściwości i zastosowanie • Wygodny, wstępnie wymieszany i zoptymalizowany dwukrotnie stężony roztwór • Zmniejszone ryzyko zanieczyszczenia • Znacznie zmniejsza czas potrzebny na przygotowanie reakcji • Powtarzalność wyników • Bezpośrednia aplikacja na żel • Rutynowe aplikacje PCR • Produkt odpowiedni do klonowania TA • Wysoka wydajność MB-1830100 MB-1830500 PAN Mix red jest kompletną gotową do użycia mieszaniną reakcyjną zawierającą niezwykle stabilną polimerazę Taq DNA. Zawiera dodatkowo obojętny czerwony barwnik, który umożliwia łatwą i bezpośrednią aplikację do żelu. Nie ma potrzeby dodawania buforu do ładowania próbek gdyż mieszanina jest wystarczająco gęsta aby osiąść w żelu. PAN Mix red został opracowany pod kątem reakcji PCR z wielu popularnych matryc genomowych i cDNA; użytkownik musi jedynie przed użyciem dodać wodę, matrycę i startery. Znacznie skraca to czas potrzebny do rozpoczęcia reakcji i zmniejsza ryzyko zakażenia. Zapewniona jest większa powtarzalność wyników poprzez zmniejszenie liczby etapów pipetowania które mogą prowadzić do błędów. PAN Mix Red został zoptymalizowany dla wielu różnych matryc, jednak dodatkowo został załączony roztwór 50mM MgCl2 jeżeli byłoby konieczne jeszcze dokładniejsze dostosowanie. Warunki przechowywania PAN Mix red może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze -20°C lub do 2 tygodni w temperaturze +4°C. Powinno się unikać cyklicznego powtarzania zamrażania i rozmrażania. PAN Mix red DNA-Polymerases 100 reactions 100 reakcji 500 reakcji MB-1800100 MB-1800500 7.1.11.PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red Opis Właściwości i zastosowanie • Równie wysoka specyfika i wydajność jak w przypadku polimerazy PAN Hot Start DNA • Większa specyfika i zredukowane tło • Wygodny, wstępnie wymieszany i zoptymalizowany • Zmniejszone ryzyko zanieczyszczenia • Znacznie zmniejsza czas potrzebny na przygotowanie reakcji • Powtarzalne wyników • Produkt odpowiedni do klonowania TA • Bardzo wysoka specyfika w reakcjach multiplex PAN Hot Mix jest kompletną gotową do użycia dwukrotnie stężoną mieszaniną reakcyjną, która przed użyciem wymaga dodania wody, matrycy i starterów a następnie podgrzania do temperatury 95°C przez 10 minut. 10-cio minutowa aktywacja eliminuje obecność niespecyficznych produktów gdyż enzym nie jest aktywny w niższych temperaturach. PAN Hot Mix Red łączy w sobie wszystkie cechy i zalety PAN Hot Mix i zawiera dodatkowo obojętny, nietoksyczny i nieszkodliwy czerwony barwnik, który umożliwia łatwą i bezpośrednią aplikację próbek bezpośrednio na żel. Nie ma potrzeby dodawania buforu do nanoszenia próbek gdyż mieszanina jest wystarczająco gęsta aby osiąść w żelu, zapewnia również odpowiednie wymieszanie składników. PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red są oparte o naszą polimerazę DNA PAN Hot Start, która pozostawia wolne fragmenty A i która została zoptymalizowana dla wielu różnych matryc. Dodatkowo został załączony roztwór 50mM MgCl2 jeżeli byłoby konieczne jeszcze dokładniejsze dostosowanie. PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red znacznie skraca czas potrzebny do przygotowania reakcji i zmniejsza ryzyko zakażenia. Zapewniona jest większa powtarzalność wyników poprzez zmniejszenie liczby etapów pipetowania które mogą prowadzić do błędów. Warunki przechowywania PAN Hot Mix i PAN Hot Mix red może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze 20°C lub do 2 tygodni w temperaturze +4°C. Powinno się unikać cyklicznego powtarzania zamrażania i rozmrażania. PAN Hot Mix PAN HotMix red 100 reakcji 500 reakcji 100 reakcji 500 reakcji PAN725019 PAN725020 PAN725021 PAN725022 7.2 ENZYMY MODYFIKUJĄCE 7.2.1. PAN Ligation Kit (Zestaw do ligacji) Opis Właściwości i zastosowanie • Znacznie zmniejsza czas potrzebny do klonowania DNA • Szybka 5 do 15 minutowa procedura w temperaturze pokojowej • Wydajna i niezawodna ligacja lepkich i tępych końców DNA • Brak spadku wydajności transformacji • Klonowanie DNA: fragmenty PCR, plazmidowe, kosmidowe, genomowe i wirusowe DNA • Ligacja łączników • Ponowna ligacja zlinearyzowanych plazmidów • Ligacja dwuniciowych nukleotydów w wektory (plazmidowe i fagowe) PAN Ligation jest przeznaczony do wykonywania szybkiej i wydajnej ligacji zarówno lepkich jak i tępych końców DNA w temperaturze pokojowej. PAN Ligation jest ligazą T4 DNA, która została zmutowana w celu poprawy aktywności enzymu i zawiera specjalnie opracowany 4x PAN Ligation Buffer. Enzym katalizuje połączenie dwóch nici DNA pomiędzy końcem 5-fosforanowym a 3 - hydroksylowym sąsiednich grup nukleotydów zarówno tępych jak i lepkich końców. PAN Ligation liguje 99% lepkich końców /HindIII, lub 80% tępych końców /EcoRV w temperaturze pokojowej w 5 minut. 100% ligacki tępych końców można osiągnąć przez wydłużenie czasu ligacji do 15 minut w temperaturze pokojowej. Warunki przechowywania PAN Ligation Kit może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20°C. Należy unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Bufor 10 mM Tris-HCl, pH 7.4, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA oraz 50% gliceryny. Warunki testu Q/C Każda partia PAN Ligation jest testowana pod kątem ligacji w pojedynczy prążek produktów trawienia DNA Labda zarówno przez HindIII jaki i EcoRV. Zligowane DNA jest następnie ponownie cięte aby upewnić się że nie zaszły zmiany we wzorze restrykcji. PAN Ligation Kit 50 reactions 100 reakcji MB-950000 MB-951000 7.2.2. Proteinaza K Opis Właściwości i zastosowanie • Szerokie spektrum proteazy seryny • Aktywna w warunkach denaturujących • Stabilność przy wysokich temperaturach • Dostępna w postaci proszku i stabilizowanego stężonego roztworu • Inaktywacja RNaz i DNaz podczas ekstrakcji kwasów nukleinowych • Modyfikacja białek • Trawienie białek • Określenie lokalizacji enzymu Proteinaza K jest enzymem używanym do trawienia białek w większości technik biologii molekularnej. Enzym ten może być stosowany w 56°C do 4 godzin lub w 37°C przez całonocną inkubację. Proteinaza K jest stabilna, a wraz ze specjalnie opracowanym buforem może być użyta bezpośrednio po wyjęciu z zamrażarki. Zalecenia dotyczące stosowania - Rozpuścić 20 mg/ml w 50 mM Tris-HCl, 2 mM octanu wapnia, pH 8.0 - Proteinaza K może być stosowana w temperaturze 56°C do 4 godzin lub 37°C przez całonocną inkubację. - Proteinaza K posiada optymalne pH 7.5 - 12.0 - Aby usunąć zanieczyszczenia z preparatów kwasu nukleinowego używać w stężeniu roboczym 5 µg/ml Warunki przechowywania Proteinaza K może być przechowywana przez 12 miesięcy w temperaturze -20°C. Zanieczyszczenia: Aktywność RNaz: Nie wykryto aktywności rybonukleaz na MS2RNA po 6-o godzinnej inkubacji w 37°C Aktywność DNaz: Nie wykryto aktywności na pBR322 po 6-o godzinnej inkubacji w 37°C Definicja jednostki: Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu która uwolni 1.0 µmol tyrozyny na minutę w 37°C, pH 7.5 Proteinase K 100 mg MB-4300002 7.3. MARKERY MASY CZĄSTECZKOWEJ 7.3.1.PANLadder™ I Opis Właściwości • 14 prążków od 200 bp do 10 000 bp • Dokładne wyznaczanie ilościowe • Łatwe w identyfikacji • Gotowe do użycia PANLadder™ I to popularny gotowy do użycia marker masy cząsteczkowej, specjalnie zaprojektowany do łatwego ilościowego oznaczania DNA jak i wyznaczania wielkości cząsteczek. Zestaw ten jest gotowy do użycia, co zapewnia oszczędność czasu, Należy go po prostu przenieść z fiolki na żel. PANLadder™ I tworzy wzór 14 równomiernie rozmieszczonych prążków o wielkości od 200 do 10000 bp. Aby umożliwić łatwą identyfikację i orientację prążki o wielkości 1000 i 10000 bp mają najwyższą intensywność. Jeżeli używana jest standardowa objętoś ć 5 µl na jedną ścieżkę (720 ng DNA) każdy prążek odpowiada precyzyjnej ilości DNA. 5x bufor do nakładania próbek jest również dolączony dla Państwa wygody. Pod żadnym pozorm nie należy go używać do rozcieńczania/nakładania drabinki. Warunki przechowywania PANLadder™ może być przechowywany w temperaturze -20 ° C do pierwszego użycia, a następnie w temperaturze +4°C do 6 miesięcy. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. PANLadder I 200 lanes 500 lanes PAN733025 PAN733026 7.3.2.PANLadder™ IV Opis Właściwości • 10 prążków od 100 bp do 1000 bp • Dokładne wyznaczanie ilościowe • Łatwe w identyfikacji • Gotowe do użycia PANLadder™ IV jest gotowym do użycia markerem mas cząsteczkowych, specjalnie zaprojektowanym do łatwego oznaczania ilościowego i ustalania wielkości. Zestaw ten jest gotowy do użycia i należy go po prostu przenieść z fiolki na żel. PANLadder™ IV tworzy wzór 10 równomiernie rozmieszczonych prążków od 100 bp do 1000 bp. Aby umożliwić łatwą identyfikację i orientację prążek o wielkości 1000bp ma najwyższą intensywność. Każdy prążek jest dokładną wielokrotnością 100bp. Jeżeli używana jest standardowa objętoś ć 5 µl na jedną ścieżkę (580 ng DNA) każdy prążek odpowiada precyzyjnej ilości DNA. 5x bufor do nakładania próbek jest również dolączony dla Państwa wygody. Pod żadnym pozorm nie należy go używać do rozcieńczania/nakładania drabinki. Warunki przechowywania PANLadder™ IV może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze -20°C lub do 12 miesięcy w temperaturze +4°C. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Zaleca się wymieszanie na worteksie przed użyciem. PANLadder IV 200 lanes 500 lanes PAN733029 PAN733030 7.3.3. PANLadder™ V Właściwości • 12 prążków od 25 bp do 500 bp • Dokładne wyznaczanie ilościowe • Łatwe w identyfikacji • Gotowe do użycia PANLadder™ V jest gotowym do użycia markerem mas cząsteczkowych, specjalnie zaprojektowanym do łatwego oznaczania ilościowego i ustalania wielkości fragmentów DNA. Jest on przeznaczony specjalnie dla krótkich fragmentów, takich jak oligonukleotydy apoptotycznego DNA. Zestaw ten jest gotowy do użycia co pozwala na zaoszczędzenie czasu. Należy go po prostu przenieść z fiolki na żel. PANLadder™ V tworzy wzór 12 równomiernie rozmieszczonych prążków od 25 pb do 500 pb. Aby umożliwić łatwą identyfikację i orientację prążki o wielkości 100 i 200 bp mają najwyższą intensywność. Jeżeli używana jest standardowa objętoś ć 5 µl na jedną ścieżkę (960 ng DNA) każdy prążek odpowiada precyzyjnej ilości DNA. 5x bufor do nakładania próbek jest również dolączony dla Państwa wygody. Pod żadnym pozorm nie należy go używać do rozcieńczania/nakładania drabinki. Warunki przechowywania PANLadder™ V może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze -20°C lub do 12 miesięcy w temperaturze +4°C. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Zaleca się wymieszanie na wytrząsarce (vortex) przed użyciem. PANLadder V 200 lanes 500 lanes PAN733031 PAN733032 7.3.4.PANLadder™ VI Właściwości • 10 prążków od 10,090 bp do 48,500 bp • Dokładne wyznaczanie ilościowe • Łatwe w identyfikacji i orientacji • Gotowe do użycia • Tylko do elektroforezy pulsacyjnej PANLadder™ VI jest gotowym do użycia markerem masy cząsteczkowej, specjalnie zaprojektowanym do łatwego oznaczania ilościowego i oznaczania wielkości. Konieczne jest zastosowanie elektroforezy pulsacyjnej dla jak najlepszego rozdzielenia fragmentów od 29950bp do 48500bp. Zestaw ten jest gotowy do użycia i zapewnia oszczędność czasu. Należy go po prostu przenieść z fiolki na żel. PANLadder™ VI tworzy wzór 10 równomiernie rozmieszczonych prążków od 10,090 bp do 48,500 bp. Jeżeli używana jest standardowa objętość 10 µl na jedną ścieżkę (922 ng DNA) każdy prążek odpowiada precyzyjnej ilości DNA. Aby umożliwić łatwą identyfikację i orientację prążek o wielkości 38420 ma najwyższą intensywność. 5x bufor do nakładania próbek jest również dolączony dla Państwa wygody. Pod żadnym pozorem nie należy używać go do rozcieńczania/nakładania drabinki. Warunki przechowywania PANLadder™ VI może być przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze -20°C lub do 12 miesięcy w temperaturze +4°C. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Zaleca się wymieszanie na wytrząsarce (vortex) przed użyciem. PANLadder VI 200 lanes 500 lanes PAN733033 PAN733034 7.4.ODCZYNNIKI DO BIOLOGII MOLEKULARNEJ 7.4.1.PAN DNA Clean Opis Właściwości i zastosowanie • Bezkolumnowe oczyszczanie produktów PCR • Odzysk do 98% po PCR • Ekonomiczna, prosta i szybka metoda • Produkty nadają się natychmiast do dalszych procesów • Usuwa startery, dimery starterów, dNTP i enzymy restrykcyjne • Do oczyszczania lub zatężania DNA lub dsRNA PAN DNA Clean jest nowatorskim, niedrogim rozwiązaniem, które zapewnia bezkolumnowy sposób oczyszczania kwasu nukleinowego. Umożliwia łatwą i szybką procedurę oczyszczania. PAN DNA Clean może być stosowany do oczyszczania lub zatężania DNA lub dsRNA z produktów reakcji PCR lub trawienia enzymatycznego. Metoda ta jest łatwa i łączy wygodę, szybkość i doskonały odzysk. Prosta, wygodna i bezkolumnowa metoda PAN DNA Clean usuwa białka (takie jak enzymy restrykcyjne, polimerazy itp.) startery, dimery starterów i dNTP. Bardzo prosta metoda użytkowania pozwala na wytrącania kwasów nukleinowych 75 bp bez potrzeby używania rozpuszczalników organicznych czy kosztownych kolumn. W przeciwieństwie do wielu metod opartych na oczyszczaniu kolumnowym, PAN DNA clean maksymalizuje odzysk z roztworów kwasów nukleinowych niezależnie od ich stężenia. PAN DNA Clean oczyszcza kwasy nukleinowe bez wykorzystywania soli chaotropowych (co często przyczynia się do denaturacji dupleksów DNA). PAN DNA Clean umożliwia użytkownikowi ponowne zawieszenie oczyszczonego kwasu nukleinowego w dowolnym buforze o dowolnej objętości pozwalając tym samym na dostosowanie procesu oczyszczania do potrzeb eksperymentu. Optymalizacja odzysku kwasów nukleinowych PAN DNA Clean został zaprojektowany aby zmaksymalizować odzysk kwasu nukleinowego po oczyszczeniu, zapewniając nawet do 98% odzysku oryginalnej próbki do dalszych procesów, takich jak klonowanie czy sekwencjonowanie. PAN DNA Clean wykazuje dużą uniwersalność, osiągając niezrównany poziom odzysku, niezależnie od ilości kwasów nukleinowych i stężenia. Warunki przechowywania PAN DNA Clean może być przechowywany w temperaturze pokojowej przez 12 miesięcy. Nie zamrażać. Unikać ekspozycji na światło. PAN DNA Clean 1 x 5ml 2 x 12,5 ml PAN737042 PAN737046 7.4.2.PAN Dye Enhancer Właściwości • Redukcja kosztów sekwencjonowania • Gotowy do użycia • Nie wymaga optymalizacji • Auto-sekwencjonowanie plazmidów i matryc PCR PAN Dye Enhancer zmniejsza koszty związane z auto - sekwencjonowaniem poprzez zmniejszenie ilości znakowanego terminatora potrzebnego w reakcji. Reakcje autosekwencjonowania mogą pozostawić do 80% niewykorzystanego znakowanych terminatorów, które zwykle wymagają usunięcia przed sekwencjonowaniem. PAN Dye Enhancer działa zapewniając optymalne warunki buforu, co pozwala nawet na 5-krotne rozcieńczenie znakowanego terminatore bez straty jakości sekwencjonowania. PAN Dye Enhancer nadaje się do sekwencjonowanie plazmidów i matryc PCR i nie wymaga optymalizacji. W przypadku niektórych matryc może być konieczne dostosowanie współczynnika rozcieńczenia. Warunki przechowywania PAN Dye Enhancer może być przechowywany przez 6 miesięcy w temperaturze -20°C. PAN Dye Enhancer ≈ 250 templates ≈ 500 templates MB-9600000 MB-9610000 7.4.3.X-Gal Opis Właściwości i zastosowanie • Bardzo czyste, 99,5% (oczyszczanie przez TLC) • Intensywny niebieski osad po hydrolizie • Niebieskie / Białe systemy klonowania • Immunoblotting • Testy Immunocytochemiczne • Podłoża do mikrobiologii i hodowli komórkowych 5-bromo-4-chloro-3-indolyl -D-galactopyranozyd (X-GAL) jest chromogennym substratem galaktozydazy, który tworzy intensywnie niebieski osad. Może być używany w biologii molekularnej do wykrywania produktów genu gal, a także w mikrobiologii, gdzie jest używany do wykrywania mikroorganizmów które wykazują aktywność -galaktozydazy (zazwyczaj bakterii coli). Może być łączony z R-substratami do rozróżnienia dwóch gatunków organizmów na tej samej płytce. X-GAL jest rozpuszczalny w N, N-dimetyloformamidzie. Warunki przechowywania X-GAL może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze -20°C. Przechowywać chroniąc przed światłem. X-Gal 1g MB-10071000 7.4.4.IPTG Opis Właściwości i zastosowanie • Indukuje aktywność operonu laktozowego E. coli •> 99,6% (za pomocą HPLC) • Dostępne w postaci proszku i stabilizowanego stężonego roztworu • Klasyfikacja na podstawie koloru (niebieski / biały) • Indukcja operonu laktozowego dla ekspresji białka • W obecności IPTG następuje wysoka ekspresja genów kontrolowanych przez sekwencje promotorowe / operatorowe lac lub tac. Isopropyl-b-D-thiogalactopyranoside (IPTG) jest analogiem chemicznym galaktozy, który nie może być hydrolizowany przez enzym -galaktozydazę. W związku z tym indukuje on aktywność operonu laktozowego E. coli przez wiązanie i hamowanie represora lac nie ulegając jednocześnie degradacji. Geny kontrolowane przez sekwencje promotorowe / operatorowe lac lub tac wykazują wysoką ekspresję w obecności IPTG. Warunki przechowywania Chronić przed światłem. IPTG może być przechowywany przez 12 miesięcy w temperaturze 20°C. IPTG 5g MB-10080005 7.4.5.Agaroza (molecular grade) Opis • Wolna od DNaz i RNaz • Doskonała wartość i przejrzystość • Wysoka wytrzymałość żelu • elektroforeza DNA / RNA • Idealna do rozdzielania kwasów nukleinowych o szerokim zakresie rozmiarów, zwłaszcza dla dużych fragmentów (> 10 Kb) Agaroza (wolna od DNaz i RNaz) jest wyjątkowo czystym proszkiem agarozowym o wysokiej jakości (molecular biology grade, który był szczegółowo badany pod kątem skażenia RNazą. Agaroza zapewnia wysoką rozdzielczość DNA i RNA podczas elektroforezy oraz powtarzalne wyniki w róznych partiach produktu. Warunki przechowywania Chłodne, suche miejsce. Specyfikacja analityczna: 7.5. DODATKI I BUFORY 7.5.1.Bufor MgCl2 Opis 50 mM MgCl2 jest dogodnym stężeniem w większości eksperymentów w biologii molekularnej. Używać 1 µl na 50 µl reakcji aby uzyskać 1 mM stężenie końcowe Mg2+. Warunki przechowywania 50 mM roztwór MgCl2 należy przechowywać w temperaturze -20°C. Należy unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Skład 50 mM MgCl2 w wodzie, wolne od DNaz i Rnaz. MgCl2 bufor 3 x 1,2 ml MB-9120001 7.5.2.Bufor KCl (10x) Opis 10x bufor KCl zapewnia niezawodną pracę z 15 mM MgCl2, który jest odpowiedni dla większości zastosowań. To czyni go idealnym buforem do większości eksperymentów. Warunki przechowywania Bufory reakcyjne 10x KCl powinny być przechowywane w temperaturze -20°C. Należy unikać wielokrotnych cykli zamrażania i rozmrażania. Skład 500 mM KCl, 100 mM Tris-CI (pH 8.8 w temperaturze 25°C), 15 mM MgCl2, 1% Triton X-100 15 mM. KCI bufor (10x) 3 x 1,2 ml MB-9150001 7.5.3.Dodatek HiSpec Additive Opis Właściwości i zastosowanie • Eliminuje rozmazanie tła i fałszywe prążki • Poprawia specyfikę • Kompatybilny ze wszystkimi dostępnymi polimerazami DNA • Idealny do trudnych matrycy • Poprawa specyfikę każdej polimerazy DNA w reakcji enzymatycznej Dodatek HiSpec Additive jest popularnym związkiem mających na celu wyeliminowanie niepożądanych produktów ubocznych, takich jak rozmazywanie się tła i fałszywe prążki podczas amplifikacji DNA. Hi-Spec Additive idealnie nadaje się do trudnych matryc zawierających regiony bogate w GC w czy też powtarzające się sekwencje. Warunki przechowywania HiSpec Additive może być przechowywany przez 6 miesięcy w temperaturze -20°C HiSpec additive 3 x 1,2 ml PAN737032 7.5.4.Dodatek PAN Mate Additive Opis Właściwości i zastosowanie • Znacznie poprawia wydajność i specyfikę • Zgodność ze wszystkimi dostępnymi termostabilnymi polimerazami DNA • Idealny do trudnych matryc • Zmniejsza rozmazywanie i tło • Do reakcji polimerazy DNA gdzie specyficzność jest krytyczna • Poprawia wydajność i specyfikę każdej z termostabilnych polimeraz DNA PAN Mate jest specjalnym dodatkiem (2x) do stosowania w reakcjach gdzie biorą udział termostabilne polimerazy DNA i jest przeznaczony do znacznej poprawy specyfiki reakcji. PAN Mate zapewnia zoptymalizowany skład odczynników, i nadaje się idealnie do trudnych matrycy z regionami DNA bogatymi w GC lub AT, powtarzające się sekwencje lub sekwencje z wysokim poziomem struktur drugorzędowych. PAN Mate umożliwia polimerazom DNA i oligonukleotydom na większy dostęp do DNA matrycowego. PAN Mate nie zawiera magnezu, dNTPs, lub składników buforu. W niektórych przypadkach może być konieczna optymalizacja stężenia magnezu. Uwaga: PAN Mate nie powinien być stosowany w połączeniu z innymi dodatkami do reakcji polimerazy. PAN Mate jest zmienioną wersją dodatku PAN 5x HiSpec Additive (PAN737032). Warunki przechowywania PAN Mate Additive może być przechowywany przez 6 miesięcy w temperaturze -20°C. PAN Mate Additive 1 x 1,2 ml 7.6.NUKLEOTYDY 7.6.1.dNTP Sets (Zestawy dNTP) Opis Właściwości i zastosowanie • Ultra-czysty: > 99% trójfosforanów (przez HPLC) • Wydłużony okres trwałości - 24 miesiące w temperaturze -20°C • Wolne od inhibitorów PCR • Wolne od DNaz, RNaz i Nickaz • Wyprodukowane przez Bioline w specjalnie wybudowanym laboratorium Nadaje się do wielu zastosowań, takich jak: • Standardowe i długiozakresowe PCR • Synteza cDNA • qPCR PAN737041 • Mikromacierze • Sekwencjonowanie DNA • DHPLC • Znakowanie Zestaw gotowych do użycia roztworów dNTP składający się z 4 oddzielnych 100mM roztworów dATP, dGTP, dCTP i dTTP, przy pH 7.5, dostarczane jako sole litu w oczyszczonej wodzie. Do stosowania w reakcji polimeryzacji DNA, znakowania i sekwencjonowania. Jakość PCR na której można polegać. Wszystkie dNTP dostarczane są jako sole litu w wodzie oczyszczonej przy pH 7.5. Sole litu mają większą odporność na wielokrotne zamrażanie i rozmrażanie niż sole sodu. Rozwory te pozostają sterylne przez cały okres przechowywania ze względu na działanie bakteriostatyczne litu. Warunki przechowywania Zestaw dNTP Sets może być przechowywany przez 24 miesięcy w temperaturze -20°C. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Do długotrwałego użytkowania zaleca się rozporcjowanie na mniejsze próbki. dNTP set (dA, dC, dG, and dT) 100 mM 100 mM 100 mM 4 x 250 μl 4 x (4 x 250 μl) 4 x (20 x 250 μl) PAN739025 PAN739026 PAN739027 7.6.2.dNTP Mix (mieszanina deoksyrybonukleotydów) • Wygodny zoptymalizowany zestaw • Ultra-czysty: > 99% trójfosforanow (przez HPLC) • dłuższy okres trwałości - 24 miesiące w temperaturze -20°C • Wolne od inhibitorów PCR • Wolne od DNaz, RNaz i Nickaz • Wyprodukowane przez Bioline w specjalnie wybudowanym laboratorium Nadaje się do wielu zastosowań, takich jak: • Standardowe i długozakresowe PCR • Synteza cDNA • qPCR • Sekwencjonowanie DNA • Mikromacierze • DHPLC • Znakowanie Gotowa do użycia mieszanina dNTP Mix (molecular grade) zawierająca dATP, dCTP, dGTP i dTTP w postaci soli litu w oczyszczonej wodzie przy pH 7.5. Mieszanka jest zaprojektowana aby zminimalizować nakład pracy i oszczędzić czas jak również zmniejszyć ryzyko zanieczyszczeń. Do użytku w reakcji polimeryzacji DNA, sekwencjonowania i znakowaniu DNA. Jakość PCR na której można polegać. Wszystkie dNTP dostarczane są jako sole litu w wodzie oczyszczonej przy pH 7.5. Sole litu mają większą odporność na wielokrotne zamrażania i rozmrażania niż sole sodu. Rozwory te pozostają sterylne przez cały okres trwałości ze względu na działanie bakteriostatyczne litu. Warunki przechowywania dNTP Mix może być przechowywany przez 24 miesięcy w temperaturze -20°C. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Do długotrwałego użytkowania zaleca się rozporcjowanie na mniejsze próbki. dNTPMix (dA + dC + dG + dT) 20 μmol 50 μmol 250 μmol 40 mM 100 mM 100 mM 500 μl 500 μl 4 x 500 μl PAN739043 PAN739028 PAN739029 7.6.3. dNTPs (Deoksyrybonukleotydy) Opis Właściwości i zastosowanie •Czystość > 99%, oczyszczane na drodze HPLC • Przedłużony okres trwałości - 24 miesiące w temperaturze -20°C • Wolne od inhibitorów PCR • Wolne od DNaz, RNaz i Nickaz • Wyprodukowane przez Bioline w specjalnie wybudowanym laboratorium Nadaje się do wielu zastosowań, takich jak: • Standardowe i długozakresowe PCR • Synteza cDNA • qPCR • Sekwencjonowanie DNA • Mutageneza • Genotypowanie • DHPLC • Znakowanie Ultra-czyste dNTP są enzymatycznie syntetyzowane z surowców najwyższej jakości w specjalnie w tym celu wybudowanych pomieszczeniach. Proces produkcji eliminuje zanieczyszczenia i swoiste inhibitory PCR takie jak zmodyfikowane nukleotydy, tetrafosforany i pirofosforany, które często obserwuje się w innych dostępnych na rynku dNTP. dNTP oczyszczane są chromatograficznie (HPLC) osiągając czystość co najmniej 99%. Wszystkie dNTP dostarczane są jako sole litu w wodzie oczyszczonej przy pH 7.5. Sole litu mają większą odporność na wielokrotne zamrażanie i rozmrażanie niż sole sodu, pozostają sterylne przez cały okres ważności ze względu na działanie bakteriostatyczne litu. Przechowywanie i stabilność dATP mogą być przechowywane przez 24 miesięcy w temperaturze -20°C lub -70°C. Unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Do długotrwałego użytkowania zaleca się rozporcjowanie na mniejsze próbki. dATP dCTP dGTP dTTP 100 mM as 1 x 250 μl 100 mM as 1 x 250 μl 100 mM as 1 x 250 μl 100 mM as 1 x 250 μl 25 μmole 25 μmole 25 μmole 25 μmole PAN739036 PAN739038 PAN739037 PAN739039 8. MATERIAŁY LABORATORYJNE 8.1.DETEKCJA MYKOLPLAZMY Zanieczyszczenie linii komórkowych przez mykoplazmę jest poważnym problem. W przewlekłej infekcji funkcjonowanie hodowli komórkowej osłabione jest na wiele sposobów. Zakłócany jest metabolizm komórek, wzrost, ich immunologiczna i biochemiczna charakterystyka jak również żywotność. Może to mieć istotny wpływ na koszty i wiąże się ze stratą czasu laboratoriów. Zakażenie hodowli komórkowych przez mykoplazmę nie może zostać wykryte wizualnie lub pod mikroskopem. Dlatego też niezbędne jest przeprowadzanie regularnych badań w hodowlach komórkowych. RIDASCREEN® jest testem immunofluorescencyjnym do detekcji zakażeń mykoplazmą. Zawiera wysoce specyficzne przeciwciała monoklonalne rozpoznające na szeroki zakres mykoplazm, w tym na gatunki Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. fermentans i M. salivarium, które są obecne w 96% wszystkich zakażeń hodowli komórkowych. RIDASCREEN® jest szybkim i czułym testem pozwalającym na wykrywanie mykoplazmy. Czułość swą zawdzięcza zastosowaniu znakowanego przeciwciała FITC. Wszystkie reagenty są gotowego użycia i pozwalają na dwie metody badania: • Znakowanie jednostopniowe (znakowanie-przemycie-obserwacja) Do wykonywania szybkich testów hodowli podejrzanych o zakażenie. • Znakowanie dwustopniowe (znakowanie-przemycie - znakowanie-przemycie- obserwacja) Dla hodowli komórkowych o niepewnym lub lekko pozytywnym wyniku początkowym. Po pierwszym etapie wprowadza się przeciwciało anty-MAK znakowane FITC i inkubuje przez następnych 20 minut w temperaturze pokojowej. Wyniki Żółto-zielona fluorescencja na obrzeżach lub pomiędzy czerwono zabarwionymi komórkami. DNA-RNA-Hybridisation PCR (in-house) ELISA DNA-Marking (direct) RIDASCREEN Mycoplasma IFA ® 100% 100% 65,50% 93,10% 100% 100% 100% 100% 92,30% 92,30% Porównanie dwóch róznych metod detekcji mikoplazmy w hodowli komórkowej Detekcja mikoplazmy- ZALETY • Gotowe odczynniki • Zawiera barwnik komórek • Butelka dozująca odczynnik • Dołączona próba kontrolna • Szybkie wykonanie testu • Szybki wynik • Bezpieczny • Czuły • Niezawodny 8.1.1.RIDASCREEN ®, Mycoplasma IFA * • Nowy test immunofluorescencji. • Nowa metoda wykrywania mykoplazmy - wykrywanie w hodowlach komórkowych, przy użyciu przeciwciał monoklonalnych. Mycoplasma-detection for 20 tests Mycoplasma-detection for 50 tests 1x 1x R-4203 R-4202 8.2. ŚRODKI ODKAŻAJĄCE Barrycidal 36 spray bottle Barrycidal 36 dispenser bottle Barrycidal 36 spray bottle Barrycidal 36 can Barrycidal 36 can Dispenser box 50 ml 500 ml 1L 5L 10 L 100 cloths 360050 360400 361000 365000 360000 360101 Barrydin can 5L 465000 Desinpure can 10 L 660000 Spray head for 500 ml bottles Spray head for 1 L bottles Dosage pump for 500 ml bottles 700500 701000 710500 Wall-mounted dispenser for 500 ml bottle E24 (short handle) ELS24 (long handle) Dosage pump for cans Tap for cans 720500 720501 730010 740010 8.2.1.Barrycidal 36 Opis Roztwór gotowy do użycia Barrycidal® 36 jest nowoczesnym środkiem dezynfekującym, który spełnia najnowsze standardy techniczne. Posiada szeroki zakres zastosowania i może być wykorzystany w wielu aspektach codziennego życia. Z nowym składem wszystkie etapy dezynfekcji i higieny są wyeliminowane. Charakterystyka Środek dezynfekujący Barrycidal® 36 jest gotowym do użycia roztworem, nadającym się do profilaktyki zakażeń szpitalnych we wszystkich obszarach szpitali, jak również do dezynfekcji w przemyśle spożywczym, mlecznym, produkcji napojów itp. Barrycidal 36 jest mieszaniną wyselekcjonowanych związków azotu organicznego. Jest skuteczny w stosunku do całego spektrum bakterii, drożdży, grzybów i wirusów. Barrycidal® 36 nie zawiera aldehydów, pochodnych fenolowych, chloru czy nadtlenków. Szczególne zalety środka dezynfekującego Barrycidal • Bez alkoholu • Nie powoduje alergii • Nie zaliczany do trucizn • Eliminuje zapachy i nieprzyjemną woń • Biologicznie degradowalny • Dobra kompatybilność z wszystkimi materiałami • Nie podrażnia skóry i błony śluzowej • Działa szybko i z długotrwałymi efektami • Nie plami • Duże spektrum działania - bakterie, drożdże, grzyby i wirusy (m.in. zapalenia wątroby typu B, HIV, rotawirusy) • Nie zawiera rtęci, formaldehydu, pochodnych fenolu, chloru lub nadtlenków Wskazania i zastosowanie Czyszczenie i dezynfekcja wszystkich rodzajów powierzchni i przedmiotów w jednym etapie, szczególnie w obszarach wrażliwych na przykre zapachy jak również do dezynfekcji rąk. • Przychodnie, szpitale • Baseny i łaźnie publiczne, sauny • Opieka zdrowotna • Gabinety kosmetyczne, solaria • Laboratoria, inkubatory, wirówki • Przemysł spożywczy • Obiekty użyteczności publicznej • Karetki pogotowia • Szkoły, przedszkola • Przytułki • Gabinety weterynaryjne, schroniska dla zwierząt • Do dezynfekcji stóp • Profilaktyka grzybicy stóp • Do dezynfekcji obuwia Dawkowanie Dezynfekcja powierzchni (profilaktyka zakażeń w szpitalach i przychodniach, bakteriobójczo, grzybobójczo): • nierozcieńczony/60 min • HBV / HIV: nierozcieńczony/30 min • profilaktyka grzybicy stóp nierozcieńczony/15 min Zastosowanie Dezynfekcja powierzchni • Dawkowanie: nierozcieńczony/60 min • Spray do dezynfekcji: Powierzchnie powinny być całkowicie mokre przez rozpylanie w celu dezynfekcji. Pozostawić do wyschnięcia, bez spłukiwania, z wyjątkiem powierzchni, które stykają się z żywnością. Skład 100g zawiera: 0.0975 g n-Octyl-dimethyl-benzylammoniumchlorid 0.0300 g Benzethoniumchlorid 0.0025 g Methylbenzethoniumchlorid Z dodatkiem innych substancji czyszczących i dezynfekujących takich jak propandiol i trietynolamina. Własności fizykochemiczne Wygląd: przejrzysty, bezbarwny roztwór pH (20°C): 8.0 ± 0.5 gęstoś ć (20°C): 1.046 ± 0.020 stabilnoś ć: 5 lat Opakowania: 50 ml zraszacz 500 ml okrągła butelka 1000 ml zraszacz 5L 10 L Klasyfikowany jako substancja nietoksyczna i nietrująca BAG E1227/T73512 (Swiss) DGHM-listed (Germany) OEGHMP-listed (Austria) 8.2.2. Desipure C-100 Opis Koncentrat do dezynfekcji o właściwościach intensywnie czyszczących Charakterystyka Desipure C-100 jest skoncentrowanym środkiem dezynfekcyjnym o intensywnych właściwościach czyszczących, stosowanym do dezynfekcji powierzchni i czyszczenia we wszystkich oddziałach szpitalnych przed a także do dezynfekcji w przemyśle spożywczym, w kuchniach, gospodarstwach domowych itp. Desipure C-100 zawiera jako substancję powierzchniowo czynną aktywne związki organiczne azotu. Jest skuteczny przeciwko całemu spektrum bakterii (w tym Salmonella) oraz drożdżom i grzybom. Desipure C-100 nie zawiera aldehydów, zwłaszcza formaldehydów, pochodnych fenolowych, chloru i nadtlenków. Wskazania Czyszczenie i dezynfekcja wszystkich rodzajów powierzchni i przedmiotów w jednym etapie, szczególnie w obszarach wrażliwych na nieprzyjemny zapach. Skład 100g Desipure C-100 zawiera • 9,8g N,N-Didecyl-N-methyl-poly(oxyethy)ammoniumpropionate • 12.0 g pochodnych glikolu Własnosci fizykochemiczne Wygląd: przejrzysty, żółtawy roztwór pH (20°C): 7.0 ± 1.0 gęstoś ć (20°C): 0.995 stabilnoś ć: 5 lat Mikrobiologia Bakteriobójczy Grzybobójczy Unieszkodliwianie wirusów (HBV, HIV, Rotawirusy) Dawkowanie Dezynfekcja powierzchni w profilaktyce zakażeń szpitalnych 1,0% / 1h 0,5% / 4h Stosowanie - dezynfekcja powierzchni • Dezynfekcja przez przecieranie powierzchni • Aparaty dozujące • Maszyny czyszczące • Rozpylanie przy użyciu odpowiedniego sprzętu Opakowania Pojemnik 10 L Pompka dozująca do opakowania 10L Kran do opakowania 10 L Zalety • Neutralny zapach • Unieszkodliwianie wirusów • Biodegradowalny • Szerokie spektrum działania • Ekonomiczny • Bardzo szybka dezynfekcja powierzchni • Wolny od aldehydów i formaldehydu • Czyszczenie jednoetapowe 8.2.3.Barrydin Opis Koncentrat do dezynfekcji aparatury - wolny od aldehydów i fenoli Charakterystyka Barrydin jest nowym środkiem dezynfekującym opracowanym w oparciu o czwartorzędowe związki amonowe, pochodne guanidyny i alcylpoliaminy. Nie zawiera aldehydów, zwłaszcza formaldehydów, pochodnych fenolowych, chloru, alkoholu i tym podobnych. Charakteryzuje się szerokim spektrum, krótkim czasem kontaktu, doskonałą aktywnością czyszczącą, neutralnym zapachem i brakiem właściwości żrących. Nie powoduje utrwalania białek ze względu na brak zawartości aldehydów. Zakres zastosowania Krótkoterminowe dezynfekcje i czyszczenia jednoetapowe. Czyszczenie i dezynfekcja wszystkich rodzajów narzędzi chirurgicznych we wszystkich oddziałach klinicznych i medycznych włącznie z instrumentami do chirurgii mikroinwazyjnej (MIS), materiałów do anestezji i endoskopów. Barrydin zawiera inhibitor korozji i jest wolny od aldehydów i fenoli. Skład 100g Barrydin zawiera: 3.75g Cocospropylendiaminguanidindiacetat 5.63g Didecyloxyethylmethylammoniumpropionat Własnosci fizykochemiczne Wygląd: przejrzysty, niebieskozielony roztwór pH (20°C): koncentrat: 9.7 2% roztwór wodny: 10.4 przewodność elektrolityczna koncentratu: 10 mS x cm-1 gęstość (20°C): 0.995 Mikrobiologia: • Działanie bakteriobójcze (w tym TbB, Mycobacterium terrae) i grzybobójcze • Inaktywacja wirusów (HBV, HIV, adenowirusy, papowawirusy, wirus polio) • Sporobójczy Dozowanie Dezynfekcja narzędzi (w tym z prątków gruźlicy - M. tuberculosis) 1.0% / 60 min 2.0% / 30 min Dezynfekcja krótkotrwała: 3.0% / 15 min HBV/HIV: 1.0% / 60 min - 2.0% / 15 min Adenowirusy 2.0% / 60 min - 4.0% / 30 min Papowawirusy 1.0% / 60 min - 2.0% / 30 min Wirus Polio 50°C: 1.0% / 10 min Zastosowanie Przygotować rozcieńczenie robocze w odpowiednim stężeniu! Dezynfekcja instrumentów: Umieścić narzędzia do dezynfekcji w roztworze roboczym, tak aby były całkowicie pokryte. Jeśli to możliwe przykryć pojemnik. Po określonym czasie kontaktu spłukać dokładnie bieżącą wodą i pozostawić do wyschnięcia. Nadaje się do aparatów ultradźwiękowych. Opakowanie 5L Zalety • Czyszczenie jednoetapowe • Ekonomiczny • Krótkotrwała dezynfekcja • Nie zawierający aldehydów i fenoli • Bardzo niskie stężenie • Bardzo szeroki zakres działania • Dobra kompatybilność dla wszystkich narzędzi.