ce-ivd spec template

Monoclonal Mouse
Anti-Human
CD44, Phagocytic Glycoprotein-1
Klon DF1485
Nr kat. M 7082
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human CD44, Phagocytic Glycoprotein-1, Klon DF1485, jest
przeznaczone do badań immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje limfocyty, zarówno komórki T jak i B,
monocyty, granulocyty, erytrocyty, komórki nabłonka (1) i komórki tuczne (2) i jest przydatnym narzędziem do
identyfikacji CD44 w tych komórkach oraz ich nowotworowych odpowiednikach. Identyfikacja różnicująca jest
wspomagana przez panel przeciwciał. Interpretację wyników powinien przeprowadzić pracownik uprawniony do
wykonywania takich badań w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Synonimy antygenu
CD44s, receptor III macierzy zewnątrzkomórkowej, gp90 Hermes, cząsteczka adhezyjna (homing-associated
cell adhesion molecule, H-CAM), Pgp-1 (2-4).
Wstęp
CD44 jest transmembranową cząsteczką adhezyjną typu I o masie cząsteczkowej 85-90 kDa. Jest
glikoproteiną z silną O-glikozylacją i 6 potencjalnymi miejscami N-glikozylacji. Część domeny N-końcowej
CD44 wykazuje podobieństwo do części proteoglikanowego rdzenia chrząstki i białek łączących (5). CD44 jest
receptorem hialuronianu na powierzchni komórki sugerującym udział w regulacji interakcji komórki i substratu
komórki oraz migracji komórkowej (3).
Ekspresja CD44 występuje na wielu różnych komórkach. W układzie hematopoetycznym CD44 jest obecne na
monocytach, granulocytach, erytrocytach, komórkach B i dojrzałych komórkach T (1, 2). Poza układem
hematopoetycznym jego ekspresja występuje na komórkach nabłonka, fibroblastach, mięśniach szkieletowych,
istoty białej ośrodkowego układu nerwowego oraz wielu guzach nowotworowych (5, 6).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
dializowany wobec 0,05 mol/L Tris/HCL o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: DF1485. Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysiej IgG mg/L: Patrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
Swoistość
Przeciwciało Anty-CD44, DF1485, zostało włączone do programu Czwartego Międzynarodowego Warsztatu /
Konferencji pod tytułem Ludzkie Antygeny Różnicowania Leukocytów (Fourth International Workshop and
Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens) (1), a badania przeprowadzone przez szereg
laboratoriów potwierdziły reaktywność tego przeciwciała z CD44.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na etykiecie fiolki.
Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować
takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z
badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór
barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że
przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy
Technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Wymagane jest wstępne przygotowanie tkanek za pomocą podwyższonej temperatury
podczas odzyskiwania epitopu. Optymalne wyniki uzyskuje się stosując Dako Target Retrieval Solution, nr kat.
S 1700, natomiast nieco gorsze wyniki uzyskuje się stosując Dako Target Retrieval Solution, citrate pH 6, nr
kat. S 2369 lub Dako Target Retrieval Solution, pH 9, nr kat. S 2368. Natomiast zastosowanie Dako Target
Retrieval Solution, High pH, nr kat. S 3308 lub przygotowanie tkanek przy użyciu Dako Proteinase K, nr kat. S
3020 okazało sie nieskuteczne. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki podczas przygotowania
lub następującej po nim procedury barwienia immunocytochemicznego.
Skrawki zamrożone i przygotowanie komórek: Przeciwciało można stosować do znakowania utrwalonych w
acetonie skrawków zamrożonych.
Procedura barwienia
(108761-002)
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human CD44, Phagocytic Glycoprotein-1, nr kat. M 7082,
można rozcieńczać w zakresie 1:25-1:50 w przypadku stosowania na skrawkach parafinowych ludzkich
migdałków utrwalonych w formalinie, stosując podwyższoną temperaturę podczas odzyskiwania epitopu w
M 7082/PL/MTH/22.03.04 p. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, przez 20 minut oraz inkubację w temperaturze pokojowej z
pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od próbki i
metody przygotowania i powinny być określone przez każde z poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą
ujemną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczona do takiego samego stężenia mysiej IgG1 jak
pierwsze przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona
podczas rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed
użyciem lub rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrolę dodatnią i ujemną
należy wykonać jednocześnie z testem próbki pacjenta.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 oraz K 4006. Zestaw Dako APAAP, nr kat. K 0670, stanowi dobrą alternatywę
dla zamrożonych skrawków i przygotowywania komórek, jeśli pod uwagę brane jest barwienie peroksydazy
endogennej. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu wizualizacji.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują barwienie ograniczone do powierzchni błony komórkowej (6).
Istnieją jednakże doniesienia o wybarwianiu cytoplazmatycznym (4, 7).
Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje około 90% wszystkich limfocytów, zarówno komórki T, jak i B. Ponadto
znakuje monocyty, granulocyty, erytrocyty i komórki nabłonka. Płytki wykazują słabą ekspresję epitopu (1, 6).
Tkanki patologiczne: Wykazano, że przeciwciało znakuje zarówno tkanki zdrowe, jak i tkanki nowotworowe
komórek tucznych (2). Ekspresja CD44 była niższa w przypadku raków niż w przypadku gruczolaków
okrężniczo-odbytniczych i wyrostka. Przeciwciało znakowało 68/71 (97%) gruczolaków okrężniczo-odbytniczych
i 34/39 (87%) gruczolaków wyrostka, natomiast przeciwciało znakowało 109/137 (80%) raków okrężniczoodbytniczych i 19/34 (56%) raków wyrostka (4). Podczas badania obejmującego 49 przypadków raka
okrężniczo-odbytniczego dodatnie znakowanie wykryto w 41% złośliwych tkanek nabłonka w porównaniu do
10% tkanki zdrowej. Ekspresja CD44 w nabłonku była wyższa w przypadku raka odbytu (48%) niż w przypadku
raka okrężnicy (21%) (7).
Piśmiennictwo
1.
Stoll M, Dalchau R, Schmidt RE. N6 Cluster report: CD44. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP,
Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leukocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings
of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York,
Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 619-22.
2.
Horny H-P, Menke DM, Kaiserling E. Neoplastic human tissue mast cells express the adhesion molecule
CD44/HCAM. Virchows Arch 1996;429:91-4.
3.
Aruffo A, Stamenkovic I, Melnick M, Underhill CB, Seed B. CD44 is the principal cell surface receptor for
hyaluronate. Cell 1990;61:1303-13.
4.
Carr NJ, Emory TS, Sobin LH. Epithelial neoplasms of the appendix and colorectum. An analysis of cell
proliferation, apoptosis, and expression of p53, CD44, and bcl-2. Arch Pathol Lab Med. 2002;126:83741.
5.
Stamenkovic I, Amiot M, Pesando JM, Seed B. A lymphocyte molecule implicated in lymph node homing
is a member of the cartilage link protein family. Cell 1989; 56:1057-62.
6.
Dalchau R, Flanagan BF, Allen AK, Daar AS, Fabre JW. Chemical composition and tissue distribution of
the human CD44 glycoprotein. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt RE, Stein H, et al.,
editors. Leukocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th International
Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford
University Press; 1989. p. 622-5.
7.
Khoursheed M, Mathew TC, Makar RR, Sonia L, Abul H, Asfar S, et al. Expression of CD44s in human
colorectal cancer. Pathol Oncol Res. 2002;8:170-4.
Objaśnienia symboli
(108761-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 7082/PL/MTH/22.03.04 p. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17