GlobalFiler Express PCR Amplification Kit

SKRÓCONA INSTRUKCJA OBSŁUGI
Skrócona instrukcja obsługi GlobalFiler™ PCR
Amplification Kit – PCRSetup
Pub. No. 4482085 Rev. A
Uwaga: Informacje dotyczące bezpieczeństwa i zagrożenia biologicznego można znaleźć w części „Safety” dokumentu GlobalFiler™
PCR Amplification Kit User Guide (Pub. no. 4477604). W przypadku substancji chemicznych należy się zapoznać z odpowiednimi
kartami charakterystyk substancji niebezpiecznych (SDS) i postępować zgodnie z podanymi instrukcjami. Należy nosić
odpowiednią odzież ochronną, okulary i rękawiczki.
■
Ogólne informacje o produkcie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
■
Wymagania wstępne . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
■
Przygotowanie reakcji . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
■
Przeprowadzanie reakcji PCR i elektroforezy kapilarnej . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
■
Ograniczona gwarancja na produkt. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
Ogólne informacje o produkcie
Zestaw Zestaw GlobalFiler™ Kit (200 reaction, Part no. 4476135 lub 1000 reaction Part no. 4482815) to 6-barwnikowa multipleksowa
analiza układów STR amplifikująca 21 autosomalnych loci STR, amelogeninę, 1 locus STR w chromosomie Y oraz 1 locus insercji/delecji
w chromosomie Y (indel Y).
Wymagania wstępne
Przed rozpoczęciem należy umieścić niniejszy dokument w laboratorium, w miejscu przeprowadzania procedur przygotowania
reakcji PCR.
Przygotowanie reakcji
1. Przygotować odczynniki:
a. Rozmrozić mieszaninę Master Mix, dodatek Master Mix Additive i zestaw starterów Primer Set, a następnie mieszać
w wytrząsarce przez 3 sekundy, a przed otwarciem probówek lub butelek szybko odwirować.
b. Przygotować mieszaninę Master Mix (wymagane tylko przed pierwszym użyciem zestawu):
• Dodać następujące ilości dodatku Master Mix Additive do probówki Master Mix:
Zestaw
Ilość dodatku Master Mix Additive
200 reakcji
83 µl
1000 reakcji
413 µl
• Delikatnie odwrócić probówkę Master Mix 10 razy i szybko odwirować.
• Oznaczyć zatyczkę probówki Master Mix symbolem (+), aby wskazać, że dodano dodatek Master Mix Additive.
• Wyrzucić probówkę Master Mix Additive.
WAŻNE! Rozmrożenie jest wymagane tylko przed pierwszym użyciem zestawu. Po pierwszym użyciu odczynniki są
przechowywane w temperaturze od 2 do 8°C, dlatego nie ma potrzeby ich ponownego rozmrażania. Nie należy ponownie
zamrażać odczynników.
2. Obliczyć ilość poszczególnych składników wymaganą do przygotowania reakcji, posługując się poniższą tabelą.
Składnik reakcji
Objętość na reakcję
Master Mix
7,5 µl
Primer Set
2,5 µl
Produkt przeznaczony wyłącznie do celów sądowych lub ustalania ojcostwa.
Uwaga: W obliczeniach należy uwzględnić dodatkowe reakcje, aby zapewnić dodatkową ilość odczynników na wypadek strat
podczas przenoszenia.
3. Przenieść pipetą wymaganą objętość składników do odpowiedniej probówki polipropylenowej.
4. Mieszać mieszaninę reakcyjną w wytrząsarce przez 3 sekundy, a następnie szybko odwirować.
5. Odmierzyć 10 µl mieszaniny reakcyjnej do poszczególnych dołków reakcyjnych płytki reakcyjnej MicroAmp® Optical 96-Well
Reaction Plate.
6. Przygotować próbki DNA w sposób opisany w poniższej tabeli. Łączna objętość składników reakcji powinna
wynosić 25 µl:
Próbka DNA
Sposób przygotowania
Kontrola
negatywna
Dodać 15 µl bufora o niskim TE (10 mM Tris, 0,1 mM EDTA, pH 8,0).
Próbka badana
Kontrola
pozytywna
Rozcieńczyć część badanej próbki DNA buforem o niskim TE, tak aby 1,0 ng całej próbki DNA znalazło się
w ostatecznej objętości 15 µl. Dodać 15 µl rozcieńczonej próbki do mieszaniny reakcyjnej.
Zmieszać 10 µl kontrolnej próbki DNA (0,1 ng/µl) z 5 µl bufora o niskim TE, tak aby otrzymać mieszaninę
w całkowitej objętości 15 µl. (Końcowe stężenie próbki powinno wynosić 0,067 ng/µl.) Dodać 15 µl do mieszaniny
reakcyjnej.
7. Zakleić płytkę folią MicroAmp® Clear Adhesive Film (Part no. 4306311) lub folią MicroAmp® Optical Adhesive Film
(Part no. 4311971).
WAŻNE! Zaleca się zaklejanie płytki folią w celu zapewnienia jednakowego poziomu szczelności zamknięcia wszystkich dołków
i uniknięcia parowania. Nie należy stosować zatyczek, ponieważ może to grozić różnicami w poziomie szczelności zamknięcia
poszczególnych dołków.
WAŻNE! W przypadku stosowania termocyklera 9700 z blokiem srebrnym lub srebrnym powlekanym złotem umieścić na płytce
MicroAmp® Compression Pad (Part no. 4312639) w celu dodatkowego zabezpieczenia przed parowaniem w trakcie obróbki
termicznej. Termocykler Veriti® Thermal Cycler nie wymaga stosowania nakładki kompresyjnej.
8. Wirować płytkę z prędkością 3000 obr./min przez 20 sekund w wirówce laboratoryjnej z uchwytami na płytkę.
Przeprowadzanie reakcji PCR i elektroforezy kapilarnej
Informacje na temat amplifikacji PCR i elektroforezy kapilarnej (Capillary Electrophoresis — CE) znajdują się w dokumencie
GlobalFiler™ PCR Amplification Kit-PCR Amplification and CE Quick Reference Card (Pub. no. 4477593) oraz GlobalFiler™ PCR
Amplification Kit User Guide (Pub. no. 4477604).
Ograniczona gwarancja na produkt
Firma Life Technologies Corporation i/lub jej spółki zależne udzielają gwarancji na produkty zgodnie z zapisami ogólnych
warunków i postanowień dotyczących sprzedaży produktów firmy Life Technologies, które można znaleźć w witrynie internetowej
firmy Life Technologies pod adresem www.lifetechnologies.com/termsandconditions. W razie pytań należy się skontaktować
z firmą Life Technologies pod adresem www.lifetechnologies.com/support.
Translated from English Pub. no. 4477594 Rev. A
Produkt przeznaczony wyłącznie do celów sądowych lub ustalania ojcostwa.
Informacje podane w niniejszej instrukcji mogą ulec zmianie bez powiadomienia.
DISCLAIMER: LIFE TECHNOLOGIES CORPORATION AND/OR ITS AFFILIATE(S) DISCLAIM ALL WARRANTIES WITH RESPECT TO THIS DOCUMENT, EXPRESSED OR IMPLIED, INCLUDING
BUT NOT LIMITED TO THOSE OF MERCHANTABILITY, FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE, OR NON-INFRINGEMENT. TO THE EXTENT ALLOWED BY LAW, IN NO EVENT SHALL LIFE
TECHNOLOGIES AND/OR ITS AFFILIATE(S) BE LIABLE, WHETHER IN CONTRACT, TORT, WARRANTY, OR UNDER ANY STATUTE OR ON ANY OTHER BASIS FOR SPECIAL, INCIDENTAL,
INDIRECT, PUNITIVE, MULTIPLE OR CONSEQUENTIAL DAMAGES IN CONNECTION WITH OR ARISING FROM THIS DOCUMENT, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO THE USE THEREOF.
© 2013 Life Technologies Corporation. All rights reserved. The trademarks mentioned herein are the property of Life Technologies Corporation and/
or its affiliate(s) or their respective owners.
Headquarters
5791 Van Allen Way | Carlsbad, CA 92008 USA | Phone +1 760 603 7200 | Toll Free in USA 800 955 6288
For support visit lifetechnologies.com/support or email [email protected]
lifetechnologies.com
June 2013