Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin Clone MNF116
Transkrypt
Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin Clone MNF116
Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin Clone MNF116 Nr kat. M 0821 Wydanie 18.12.2002 Przeznaczenie Do badań diagnostycznych in vitro. Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin, Clone MNF 116, jest przeznaczone do badań immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje tkanki nabłonkowe, od jednowarstwowego nabłonka gruczołowego po płaski nabłonek wielowarstwowy; stanowi ono użyteczne narzędzie w diagnostyce zdrowych i nowotworowych komórek pochodzenia nabłonkowego (1, 2). Identyfikacja różnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu przeciwciał. Interpretację powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog, na podstawie historii choroby pacjenta oraz innych testów diagnostycznych. Wstęp Cytokeratyny (CK) należą do włókien pośrednich tworzących cytoszkielet praktycznie wszystkich komórek eukariotycznych. W przeciwieństwie do innych włókien pośrednich, cytokeratyny zbudowane są z bardzo złożonej, wielogenowej rodziny polipeptydów o masie cząsteczkowej od 40 do 68 kDa. Cytokeratyny ogólnie uważa się za najważniejsze markery różnicowania nabłonka. Dotychczas w różnych nabłonkach występujących u człowieka odkryto 20 różnych polipeptydów cytokeratynowych (3). CK można podzielić na 2 podrodziny: kwaśny typ A (klasa I) oraz obojętno-zasadowy typ B (klasa II). Odczynnik dostarczony Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant kultury komórek dializowany względem 0,05 mol/L Tris-HCl o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3. Klon: MNF 116. Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie mysiej IgG: patrz informacja podana na etykiecie fiolki. Immunogen Nieoczyszczony ekstrakt komórek śledziony pobranych od myszy gołej z wszczepionymi komórkami MCF-7 (linia komórkowa ludzkiego raka sutka). Swoistość Przeciwciało jest skierowanym przeciwko keratynom odczynnikiem o szerokim spektrum działania, reagującym z keratynami o średniej i niskiej masie cząsteczkowej. Dlatego też w badaniach metodą immunoblottingu przeciwciało znakuje wiele dyskretnych pasm z przedziału od 40 do 58 kDa, odpowiadających cytokeratynom 5, 6, 8, 17 i prawdopodobnie 19. Jak wykazano metodami immunochemicznymi, przeciwciało wchodzi w reakcje krzyżowe z białkowym ekwiwalentem cytokeratyny u krów (4), myszy (5), królików (6) i szczurów. Środki ostrożności 1. Do stosowania przez wyszkolony personel. 2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji. 3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, należy stosować prawidłowe procedury postępowania. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8C. Nie używać po upływie daty ważności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem Pomocy Technicznej naszej firmy. Przygotowanie próbek Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować do znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Niezbędne jest wstępne przygotowanie tkanek przez nadtrawienie trypsyną (1, 7), pepsyną (2) lub proteinazą K bądź odsłonięcie epitopu w podwyższonej temperaturze. W przypadku odsłaniania epitopu w podwyższonej temperaturze optymalne wyniki uzyskuje się przy użyciu Dako Target Retrieval Solution o wysokim pH, nr kat. S 3308 lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA o pH 9,0. Nieco gorsze wyniki daje stosowanie Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, lub 10 mmol/L buforu cytrynianowego o pH 6,0. Ani podczas przygotowania tkanek, ani w trakcie następującej po nim procedury barwienia immunocytochemicznego nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkankowych. Skrawki zamrożone i preparaty komórkowe: Przeciwciało można stosować do znakowania zamrożonych wycinków tkanek w sposób przedstawiony dla Dako EPOS-Conjugate, nr kat. U 7022 (8). Procedura barwienia (108006-002) Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin, nr kat. M 0821, można rozcieńczać w proporcjach 1:50–1:100 w przypadku jego stosowania na skrawkach ludzkiego migdałka utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie przy 20-minutowym cyklu odsłaniania epitopu w podwyższonej temperaturze w 10 mmol/L buforze Tris i 1 mmol/L EDTA o pH 9,0 oraz 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej z pierwszym przeciwciałem. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od próbki oraz metody przygotowania i powinny być określone przez poszczególne laboratoria. Zalecaną kontrolą ujemną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczona do takiego samego stężenia mysiej IgG jak pierwsze przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona podczas rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed użyciem lub rozcieńczyć w M 0821/PL/HEW/18.12.02 s. 1/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrolę dodatnią i ujemną należy wykonać jednocześnie z testem próbki pacjenta. Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 oraz K 4006. Zestaw Dako APAAP, nr kat. K 0670, stanowi dobrą alternatywę dla zamrożonych skrawków i preparatów komórkowych, jeśli pod uwagę brane jest barwienie endogenną peroksydazą. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego zestawu wizualizacji. Automatyzacja: Przeciwciało nadaje się do barwienia immunocytochemicznego przy użyciu platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer. Charakterystyka działania Komórki znakowane przeciwciałem wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia. Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje wiele różnych typów nabłonka, np. jednowarstwowy nabłonek przewodów żółciowych i trzustkowych, proksymalnych i dystalnych kanalików nerkowych, nabłonek śluzówki tarczycy, gruczołów przytarczycznych, żołądka, pęcherzyka żółciowego, jelita cienkiego i grubego, jak również hepatocyty (1). Nabłonkowa wyściółka sieci jajnika, nadjajników, jajowodów i powierzchni jajników również wykazuje reakcję na przeciwciało (7). W obrębie wielowarstwowym nabłonka płaskiego skóry przeciwciało znakuje warstwę podstawną, jak również zewnętrzną pochewkę mieszka włosowego nabłonka pęcherzykowatego oraz warstwę podstawną gruczołów i przewodów łojowych, zewnątrzwydzielniczych i apokrynowych (2). Dodatni wynik reakcji z przeciwciałem MNF 116 daje także niepłaski nabłonek wielowarstwowy przełyku i zewnętrznej powierzchni szyjki macicy (1). Przeciwciało znakuje również nabłonek przejściowy (dróg moczowych) oraz inne złożone typy naskórka, np. przewodów i gronek sutka, gruczołów wewnątrzszyjkowych, prostaty, najądrza, oskrzeli, a także przewodów i gronek ślinianek. Komórki tkanki mezenchymatycznej z reguły nie wykazują reakcji na przeciwciało; obserwowano jednak słabe, ogniskowe barwienie komórek mięśni gładkich. Przeciwciało nie znakuje śródbłonka, mięśni szkieletowych, chrząstek i tkanek limfatycznych (1). Tkanki patologiczne: Wśród nowotworów pochodzenia nabłonkowego przeciwciało znakowało: wszystkie 4 przypadki raka jelita grubego, wszystkie 3 przypadki raka żołądka, wszystkie 4 przypadki raka sutka, wszystkie 3 przypadki raka prostaty, wszystkie 3 przypadki raka nerek, 3 z 4 przypadków raka wątrobowokomórkowego, wszystkie 3 przypadki raka komórek przejściowych, 2 z 3 przypadków rakowiaka wyrostka robaczkowego, a ponadto oba przypadki potworniaków, oba przypadki gruczolaka wielopostaciowego (elementy nabłonkowe) i wszystkie 14 przypadków raka komórek płaskich nabłonka, w tym 6 pochodzenia naskórkowego, 3 pochodzenia szyjkowego oraz 5 pochodzenia oskrzelowego (1). Ponadto dodatnią reakcję na przeciwciało obserwowano we wszystkich 16 przypadkach różnego typu guzów i nowotworów z komórek mięśniowo-nabłonkowych w tkankach miękkich (9). Przeciwciało znakuje także komórki międzybłoniaka, a także komórki mikroprzerzutów niedrobnokomórkowego raka płuc w węzłach chłonnych (10). Nowotwory pochodzenia nienabłonkowego, np. czerniaki, chłoniaki, łagodne i złośliwe guzy włókniste histiocytowe, mięśniaki gładkie, tłuszczakomięsaki, mięsaki Ewinga, naczyniakowłókniaki, atypowe włókniakożółtaki, ziarniakożółtaki młodzieńcze, naczyniaki krwionośne, guzy komórek ziarnistych, śluzaki mieszków włosowych, histiocytowe guzy nabłonkowe oraz włókniakomięsaki skóry nie są znakowane przez przeciwciało. Jednakże w 1 z 6 przypadków (1) oraz 1 z 2 przypadków (2) mięsaka gładkokomórkowego przeciwciało wykazywało słabą reaktywność ogniskową. Piśmiennictwo 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Goddard MJ, Wilson B, Grant JW. Comparison of commercially available cytokeratin antibodies in normal and neoplastic adult epithelial and non-epithelial tissues. J Clin Pathol 1991; 44:660–3. Prieto VG, Lugo J, McNutt NS. Intermediate- and low-molecular-weight keratin detection with the monoclonal antibody MNF 116. An immunohistochemical study on 232 paraffin-embedded cutaneous lesions. J Cutan Pathol 1996; 23:234–41. Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. In: Hermann, Harris, editors. Subcellular Biochemistry. Volume 31, New York: Plenum Press; 1998. p. 205–62. Berkovitz BKB, Whatling R, Barrett AW, Omar SS. The structure of bovine periodontal ligament with special reference to the epithelial cell rests. J Periodontol 1997; 68:905–13. Lee I, Yu E, Ikehara S. Thymic epithelial cells of severe combined immunodeficiency (SCID) mice. J Korean Med Sci 1994; 9:35–41. Millar TJ, Herok G, Koutavas H, Martin DK, Anderton PJ. Immunohistochemical and histochemical characterisation of epithelial cells of rabbit lacrimal glands in tissue sections and cell cultures. Tissue Cell 1996; 28:301–12. Woolnough E, Russo L, Khan MS, Heatley MK. An immunohistochemical study of the rete ovarii and epoophoron. Pathology 2000; 32:77–83. Richter T, Nährig J, Komminoth P, Kowolik J, Werner M. Protocol for ultrarapid immunostaining of frozen sections. J Clin Pathol 1999; 52:461–3. Kilpatrick SE, Hitchcock MG, Kraus MD, Calonje E, Fletcher CDM. Mixed tumors and myoepitheliomas of soft tissue. A clinicopathologic study of 19 cases with a unifying concept. Am J Surg Pathol 1997; 21:13–22. Nicholson AG, Graham ANJ, Pezzella F, Agneta G, Goldstraw P, Pastorino U. Does the use of immunohistochemistry to identify micrometastases provide useful information in the staging of nodenegative non-small cell lung carcinomas? Lung Cancer 1997; 18:231–40. Objaśnienia symboli (108006-002) Numer katalogowy Temperatura przechowywania Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Numer serii Sprawdzić w instrukcji stosowania Zużyć przed Producent M 0821/PL/HEW/18.12.02 s. 2/2 Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17