cobas® TaqScreen MPX Test, version 2.0

Transkrypt

cobas® TaqScreen MPX Test, version 2.0
for use on the cobas s 201 system
DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO.
cobas® TaqScreen MPX, v2.0 Test
cobas® TaqScreen MPX Control Kit, v2.0
®
cobas TaqScreen Wash Reagent
MPX v2.0
96 Tests
P/N: 05969492 190
MPX CTL v2.0
6 Sets
P/N: 05965411 190
TS WR
5.1 L
P/N: 04404220 190
Do badania próbek pobranych od nieżyjących dawców przy użyciu testu cobas® TaqScreen MPX
wersja 2.0 oprócz wyżej wymienionych zestawów wymagany jest od użytkownika następujący zestaw:
cobas® TaqScreen Cadaveric Specimen Diluent Kit
CADV SPEC DIL 96 Tests
P/N: 05002125 190
ZASTOSOWANIE
Test cobas® TaqScreen MPX, wersja 2.0 (v2.0) do użytku z systemem cobas s 201 jest jakościowym
testem in vitro służącym do bezpośredniej detekcji RNA ludzkiego wirusa niedoboru odporności typu 1
(HIV-1) grupy M, RNA wirusa HIV-1 grupy O, RNA ludzkiego wirusa niedoboru odporności typu 2 (HIV-2),
RNA wirusa zapalenia wątroby typu C (HCV) i DNA wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) w ludzkim
osoczu.
Test ten służy do wykonywania badań przesiewowych próbek od dawców, wykrywając RNA wirusów
HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV oraz DNA wirusa HBV w próbkach osocza od pojedynczych
dawców krwi, w tym dawców krwi pełnej, składników krwi (erytrocytów, płytek krwi i osocza) i od
pozostałych żywych dawców. Test ten jest przeznaczony również do wykonywania badań
przesiewowych u dawców narządów i tkanek, gdy próbki są uzyskiwane od dawcy z bijącym sercem
oraz próbek krwi organów i tkanek od nieżyjących dawców (gdy serce nie bije).
Osocze od wszystkich dawców może być badane przesiewowo w formie pojedynczych próbek.
W przypadku pobrań pełnej krwi i składników krwi próbki osocza mogą być badane pojedynczo lub
w pulach składających się z takich samych objętości pojedynczych próbek w połączeniu z testami
serologicznymi wykrywającymi wirusy HIV, HCV i HBV.
W przypadku pojedynczych próbek w wynikach podawane jest jednocześnie wykrycie i rozróżnienie
wirusów HIV, HCV lub HBV.
Test ten nie jest przeznaczony do stosowania jako pomoc w rozpoznawaniu zakażenia wirusami HIV,
HCV czy HBV.
PODSUMOWANIE ORAZ OPIS TESTU
Głównym problemem w transfuzjach krwi i składników krwi jest możliwość przeniesienia zakażenia
wirusowego, szczególnie ludzkiego wirusa niedoboru odporności typu 1 (HIV-1) i typu 2 (HIV-2), wirusa
zapalenia wątroby typu C (HCV) oraz wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV). Czynniki te są
przenoszone przede wszystkim przez ekspozycję na zakażoną krew lub produkty uzyskiwane z krwi
i osocza, ekspozycję na określone tkanki lub płyny ustrojowe, przez kontakt seksualny lub od zakażonej
matki na noworodka.
Część Informacje na temat wersji dokumentu znajduje się na końcu tego dokumentu.
06327052001-02PL
1
Doc Rev. 2.0
Wirus HIV-1 jest rozpowszechniony na całym świecie, a całkowitą liczbę osób zakażonych szacuje się
na 1,1% (0,56% w Ameryce Północnej i 0,25% w Europie Zachodniej). U osób zakażonych wirusem
HIV-1 może wystąpić krótka, początkowo ostra, grypopodobna choroba związana z wysokimi poziomami
wiremii we krwi obwodowej w ciągu 3–6 tygodni od zakażenia1. Obecnie na świecie występują trzy
główne grupy genetyczne wirusa HIV-1: grupa M (główna), grupa N (nie-M, nie-O) i grupa O (poboczna).
Grupa M jest wyraźnie dominująca i jest podzielona na 9 podtypów, a także kilka krążących postaci
rekombinowanych (CRF)2.
Wirus HIV-2 został wyizolowany po raz pierwszy w 1986 roku od pacjentów z Afryki Zachodniej. Zarówno
wirus HIV-1, jak i HIV-2 mają te same drogi przenoszenia i wiążą się z podobnymi zakażeniami
oportunistycznymi i zespołem nabytego niedoboru odporności (AIDS)3. Częstość zakażenia wirusem
HIV-2 w niektórych państwach afrykańskich sięga więcej niż 1%, a wirus HIV-2 jest coraz poważniejszym
problemem w niektórych częściach Europy i Indii4.
Wirus HCV jest uważany za główny czynnik etiologiczny odpowiedzialny za 90%–95% przypadków
5,6
potransfuzyjnego zapalenia wątroby nie-A i nie-B . Wirus HCV występuje na całym świecie, ale
częstość jego występowania nie jest dobrze znana, ponieważ zakażenie jest na ogół bezobjawowe.
Jednakże zgłaszana częstość zakażenia waha się w granicach 0,5–2,0% w Europie Zachodniej i sięga
prawie 20% w Egipcie.
Ponad 2 miliardy żyjących obecnie ludzi uległo zakażeniu wirusem HBV w pewnym momencie swojego
życia. Zakażenie przewlekłe utrzymuje się u około 350 milionów osób na całym świecie i stają się oni
nosicielami wirusa7-11. Trzy czwarte ludności świata mieszka w regionach o wysokim poziomie częstości
zakażeń. Każdego roku odnotowuje się ponad 4 miliony przypadków ostrego klinicznie zakażenia
wirusem HBV.
Serologiczne testy przesiewowe znacząco zmniejszyły – ale nie wyeliminowały – ryzyko przeniesienia
zakażeń wirusowych przez transfuzje krwi i produktów krwiopochodnych. Testowanie krwi pełnej
i osocza dawców na obecność wirusa HBV rozpoczęto wraz z wprowadzeniem testów wykrywających
antygen HBs we wczesnych latach siedemdziesiątych XX wieku i przeciwciała anty-HBc w latach
osiemdziesiątych XX wieku. Oprócz badania przesiewowego na obecność wirusa HBV krew i osocze
dawców są rutynowo badane przesiewowo na obecność wirusów HIV-1, HIV-2 i przeciwciał anty-HCV za
pomocą testów immunoenzymatycznych (Enzyme Immunoassay – EIA). Żądanie wyższych standardów
wykrywania czynników zakaźnych we krwi i produktach krwiotwórczych ze strony opinii publicznej
napędzało rozwój technologii opartej na badaniach kwasów nukleinowych (Nucleic Acid Technology –
NAT). W badaniach wykazano, że wykrywanie wirusowych kwasów nukleinowych (RNA wirusa
12-14
, RNA wirusa HCV5,13-16 i DNA wirusa HBV17-20) może jeszcze bardziej zmniejszyć ryzyko
HIV-1
przeniesienia tych czynników w próbkach krwi pobranych w okresie okna serologicznego. Czas trwania
okna został oszacowany na przeciętnie 22 dni, ale w przypadku wirusa HIV-1 może trwać aż
6 miesięcy21. Wraz z wprowadzeniem badań NAT, wykrywających wirusa HIV-1 w minipulach, okres
zakaźności został znacząco skrócony i aktualne ryzyko przeniesienia wirusa HIV-1 jest oceniane
przeciętnie jako 1 przypadek na 2 miliony pobrań13–15. Podobnie wprowadzenie badań NAT
wykrywających RNA wirusa HCV zmniejszyło okres okna serologicznego bez przeciwciał o około
60 dni13–16; obecnie szacowane ryzyko wynosi 1–2 przypadków na 1 milion pobrań. Badania
przesiewowe NAT, wykrywające DNA wirusa HBV, są stosowane coraz powszechniej. Podczas badań w
krajach z niską, średnią i wysoką częstością występowania zakażeń HBV wykazano pierwszeństwo
badań NAT u dawców w oknie serologicznym i u dawców w późnej fazie zakażenia HBV, pokazując
w ten sposób zmniejszenie częstości występowania zakażenia HBV, przeniesionego w wyniku
15,19,20,22,23
.
transfuzji
W celu zwiększenia wydajności badań wielu czynników etiologicznych rozwinięto technologię multipleks
PCR (MPX), wykrywającą jednocześnie wiele wirusów. W technologii MPX PCR w jednej próbówce
reakcyjnej amplifikacji i detekcji przy użyciu licznych par primerów i sond podlega więcej niż jedna
sekwencja docelowa.
06327052001-02PL
2
Doc Rev. 2.0
Test cobas® TaqScreen MPX, wersja 2.0, jest jakościowym testem multipleksowym, który
w pojedynczym teście zakażonej puli lub pojedynczej próbki osocza umożliwia jednoczesną detekcję
i rozróżnianie RNA wirusa HIV, RNA wirusa HCV oraz DNA wirusa HBV lub kontroli wewnętrznej. Test
cobas® TaqScreen MPX v2.0 wykorzystuje ogólną technikę przygotowywania kwasów nukleinowych
®
w urządzeniu COBAS AmpliPrep. RNA wirusa HIV (RNA wirusa HIV-1 grup M i O, RNA wirusa HIV-2),
RNA wirusa HCV i DNA wirusa HBV są amplifikowane, wykrywane i rozróżnianie przy użyciu
zautomatyzowanej techniki PCR w czasie rzeczywistym w analizatorze COBAS® TaqMan®. Test nie
rozróżnia między sobą wirusów HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O i wirusa HIV-2. Niniejszy test wykorzystuje
także kontrolę wewnętrzną w każdym poszczególnym teście w celu monitorowania skuteczności testu,
a także enzym AmpErase do zmniejszenia potencjalnego zanieczyszczenia uprzednio zamplifikowanym
materiałem (amplikonem). Testy rozróżniające wirusy HIV-1 grupy O i HIV-2 nie są dostępne w firmie
Roche.
ZASADY PROCEDURY
Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0, używany w systemie cobas s 201, jest oparty na 4 głównych
procesach:
1. Zautomatyzowane pulowanie/pipetowanie próbki i pipetowanie kontroli w opcjonalnym
urządzeniu pipetującym Hamilton MICROLAB® STAR/STARlet IVD
2. Zautomatyzowane przygotowywanie próbek przy użyciu urządzenia COBAS® AmpliPrep
3. Zautomatyzowana amplifikacja kwasu nukleinowego oraz zautomatyzowaną detekcję
i rozróżnianie produktów reakcji PCR w czasie rzeczywistym przy użyciu analizatora
COBAS® TaqMan®
4. Zautomatyzowane zarządzanie danymi przy użyciu oprogramowania do pulowania
i zarządzania danymi (PDM)
Zautomatyzowane pulowanie i pipetowanie próbki przy użyciu urządzenia pipetującego Hamilton
MICROLAB STAR/STARlet IVD
Opcjonalne urządzenie pipetujące Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD automatyzuje pipetowanie
pul i próbek od pojedynczych dawców, przenoszenie równych objętości próbek do płytek
głębokodołkowych (opcjonalnie) oraz pipetowanie kontroli testu jako część systemu cobas s 201.
System cobas s 201 jest używany do badania pul dawców i badań rozstrzygających pul reaktywnych
w celu identyfikacji reaktywnych próbek od pojedynczych dawców. System cobas s 201 służy do
przetwarzania próbek w partiach. Partię definiuje się jako zbiór próbek i kontroli, które są pipetowane,
ekstrahowane, amplifikowane i wykrywane łącznie. Po zakończeniu pipetowania partii w urządzeniu
pipetującym Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD jest ona przenoszona do urządzenia COBAS®
AmpliPrep w celu przeprowadzenia następnej fazy procesu. Ręcznie pipetowane próbki mogą być
®
ładowane bezpośrednio do urządzenia COBAS AmpliPrep bez wcześniejszego użycia urządzenia
pipetującego Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD.
Uwaga:
W przypadku badania próbek pochodzących od dawców nieżyjących próbkę należy
najpierw ręcznie rozcieńczyć w stosunku 1:5 w rozcieńczalniku do próbek od dawców
nieżyjących cobas® TaqScreen [CADV SPEC DIL] przed pipetowaniem przy użyciu
urządzenia pipetującego Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD.
®
Zautomatyzowane przygotowywanie próbek przy użyciu urządzenia COBAS AmpliPrep
Kwasy nukleinowe z wirusów docelowych i dodanej kontroli wewnętrznej Armored RNA (internal
control – IC) (która służy jako kontrola procesów przygotowywania próbek i amplifikacji/detekcji) są
przetwarzane jednocześnie. Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 zawiera odczynniki do pięciu kolejnych
etapów przeprowadzanych w urządzeniu COBAS® AmpliPrep. Roztwór proteinazy trawi białka, co
ułatwia lizę, inaktywuje nukleazy i ułatwia uwalnianie RNA i DNA z cząstek wirusa. Dodanie odczynnika
lizującego do próbki powoduje poprzez denaturację białek lizę wirusa i inaktywację nukleazy. RNA i DNA
są uwalniane i jednocześnie chronione przed nukleazami. Uwolnione kwasy nukleinowe łączą się
z silikonową powierzchnią dodanych szklanych cząstek magnetycznych. Jest to spowodowane głównie
sumarycznym dodatnim ładunkiem na powierzchni szklanej cząstki i sumarycznym ujemnym ładunkiem
kwasów nukleinowych w chaotropowym stężeniu soli i sile jonowej odczynnika lizującego. Odczynnik
płuczący usuwa niezwiązane substancje i zanieczyszczenia, takie jak zdenaturowane białka, fragmenty
komórek i potencjalne inhibitory reakcji PCR (takie jak hemoglobina itp.) oraz zmniejsza stężenie soli. Za
pomocą buforu do elucji oczyszczone kwasy nukleinowe w podwyższonej temperaturze są odłączane od
szklanych cząstek magnetycznych.
06327052001-02PL
3
Doc Rev. 2.0
Zautomatyzowana amplifikacja kwasu nukleinowego przy użyciu analizatora COBAS® TaqMan®
Po wyizolowaniu oczyszczonych kwasów nukleinowych z ludzkiego osocza podczas zautomatyzowanego przygotowania próbek do amplifikacji, wykrycia i rozróżniania RNA wirusa HIV (wirusa HIV-1
grupy M, wirusa HIV-1 grupy O oraz wirusa HIV-2), RNA wirusa HCV, DNA wirusa HBV oraz
®
RNA kontroli wewnętrznej używa się odczynnika Master Mix (MPX2 MMX) testu cobas TaqScreen
MPX, v2.0. Po zaktywowaniu przez dodanie octanu manganu odczynnik Master Mix testu cobas®
TaqScreen MPX, v2.0 umożliwia odwrotną transkrypcję (dla docelowych RNA), a następnie amplifikację
PCR wysoce konserwatywnych regionów RNA wirusa HIV-1 grupy M i RNA wirusa HIV-1 grupy O oraz
wirusa HIV-2 i wirusa HCV, DNA wirusa HBV i RNA kontroli wewnętrznej przy użyciu specyficznych
starterów. Równoczesnemu wykryciu zamplifikowanego kwasu nukleinowego towarzyszy generowanie
sygnałów fluorescencyjnych z nukleolitycznej degradacji końca 5' sond dla wirusów HIV-1 (grup M i O),
HIV-2, HCV, HBV i kontroli wewnętrznej, także obecnych w odczynniku Master Mix. Używane są cztery
barwniki fluorescencyjne: jednym barwnikiem jest oznakowana sonda kontroli wewnętrznej,
a pozostałymi trzema barwnikami oznakowane są sondy dla wirusów HIV, HCV i HBV, pozwalające na
niezależną identyfikację docelowych wirusów HIV, HCV, HBV i kontroli wewnętrznej. Wszystkie trzy
docelowe wirusy HIV są identyfikowane przy użyciu tego samego barwnika i dlatego nie ma rozróżnienia
pomiędzy nimi.
Odwrotna transkrypcja oraz amplifikacja PCR
Reakcje odwrotnej transkrypcji i amplifikacji przeprowadza się przy użyciu termostabilnego rekombino2+
wanego enzymu, polimerazy DNA Z05D. W obecności jonów manganowych (Mn ) polimeraza DNA
Z05D uzyskuje aktywność odwrotnej transkryptazy i polimerazy DNA. Umożliwia to przeprowadzenie
reakcji odwrotnej transkrypcji i amplifikacji PCR w tej samej mieszaninie reakcyjnej.
Amplifikacji PCR towarzyszy wykorzystanie polimerazy DNA Z05D, która wydłuża przyłączone startery
wzdłuż docelowych matryc celem wytworzenia dwuniciowego DNA (amplikonu). Ten proces powtarza się
w wielu cyklach, a każdy cykl podwaja ilość amplikonu DNA. Amplifikacja zachodzi jedynie w obszarze
docelowego genomu pomiędzy starterami; całość genomu nie ulega amplifikacji.
Amplifikacja wybiórcza
Amplifikację wybiórczą docelowego kwasu nukleinowego z próbki przy użyciu testu cobas® TaqScreen
MPX, v2.0 uzyskuje się dzięki zastosowaniu enzymu AmpErase (uracylo-N-glikozylaza) i trójfosforanu
dezoksyurydyny (dUTP). Enzym AmpErase rozpoznaje i katalizuje rozkład nici DNA zawierających
dezoksyurydynę24, ale nie łańcuchów DNA zawierających dezoksytymidynę ani RNA zawierającego
rybourydynę25,26. Dezoksyurydyna nie występuje w naturalnym DNA, ale jest zawsze obecna
w amplikonie z uwagi na zastosowanie w odczynniku MPX2 Master Mix trójfosforanu dezoksyurydyny
jako jednego z dNTP; dlatego wyłącznie amplikon zawiera dezoksyurydynę. Dezoksyurydyna warunkuje
wrażliwość zanieczyszczającego amplikonu na rozkład przez enzym AmpErase przed amplifikacją
docelowego DNA. Enzym AmpErase rozkłada także wszystkie nieswoiste produkty reakcji powstałe po
wstępnej aktywacji odczynnika testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 Master Mix przez jony manganu.
Enzym AmpErase, zawarty w odczynniku MPX2 Master Mix, katalizuje rozkład DNA zawierającego
dezoksyurydynę w miejscu reszt dezoksyurydynowych przez otwarcie łańcucha dezoksyrybozy
w pozycji C1. Podczas ogrzewania w pierwszym cyklu termicznym łańcuch amplikonu DNA pęka
w miejscu, gdzie znajduje się dezoksyurydyna, w ten sposób wykluczając dalszą amplifikację DNA.
Enzym AmpErase staje się nieaktywny przez dłuższy czas po wystawieniu na działanie temperatury
powyżej 55°C, dlatego nie niszczy docelowego amplikonu utworzonego w wyniku reakcji PCR.
06327052001-02PL
4
Doc Rev. 2.0
Zautomatyzowana detekcja produktów reakcji PCR w czasie rzeczywistym przy użyciu
analizatora COBAS® TaqMan®
Podczas amplifikacji PCR wysoka temperatura podczas kolejnych etapów reakcji denaturuje amplikon
docelowy i kontroli wewnętrznej do jednoniciowego DNA. Sondy wykrywające specyficzne oligonukleotydy hybrydyzują z jednoniciową formą zamplifikowanego DNA. W ten sposób amplifikacja,
hybrydyzacja i detekcja zachodzą równocześnie.
Detekcja produktów reakcji PCR27,28
Odczynnik testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 Master Mix zawiera sondy wykrywające, specyficzne dla
kwasów nukleinowych wirusów HIV-1 (grup M i O), HIV-2, HCV, HBV lub kontroli wewnętrznej. Sondy
wykrywające wirusy HIV, HCV, HBV i kontrolę wewnętrzną są oznaczone: 1) jednym z czterech barwników
fluorescencyjnych, które działają jako barwniki reporterowe; 2) drugim barwnikiem, który funkcjonuje jako
wygaszacz. Trzy specyficzne barwniki reporterowe są związane z sondami specyficznymi dla wirusów HIV,
HCV i HBV, a fluorescencję, której są źródłem, mierzy się przy określonych długościach fal. Czwarty
barwnik reporterowy jest związany z sondą specyficzną dla kontroli wewnętrznej, a fluorescencję, której jest
źródłem, mierzy się przy innej długości fali. We wszystkich sondach używa się wygaszacza tego samego
typu. System ten umożliwia jednoczesną detekcję i rozróżnianie wszystkich zamplifikowanych docelowych
wirusów HIV, HCV, HBV i kontroli wewnętrznej przy czterech długościach fal.
Zanim rozpocznie się amplifikacja PCR, sondy są nienaruszone, a fluorescencja barwnika reporterowego
jest wytłumiona bliskością wygaszacza, na zasadzie efektu przenoszenia energii typu Förstera. Podczas
amplifikacji PCR sondy hybrydyzują z specyficznymi jednoniciowymi sekwencjami DNA i są rozszczepiane
przez nukleazową aktywność 5' do 3' polimerazy DNA Z05D w tym samym czasie, kiedy występuje
amplifikacja. Kiedy barwnik reporterowy i wygaszacz zostaną rozdzielone przez to rozszczepienie,
ujawnia się aktywność fluorescencyjna barwnika reporterowego. Z każdym cyklem PCR generowana jest
zwiększająca się ilość rozszczepionych sond i równocześnie wzrasta sumaryczny sygnał barwnika
reporterowego.
Wykryciu i rozróżnianiu w czasie rzeczywistym produktów PCR towarzyszy pomiar fluorescencji
uwolnionych barwników reporterowych reprezentujących docelowe wirusy i kontrolę wewnętrzną.
Zautomatyzowane zarządzanie danymi przy użyciu oprogramowania PDM
Oprogramowanie Roche PDM pozwala użytkownikowi przeglądać wyniki i nimi zarządzać. Oprogramowanie Roche PDM kwalifikuje wyniki testu dla wszystkich oznaczeń jako niereaktywne, reaktywne lub
błędne. Oprócz odbierania i analizowania wyników PCR oprogramowanie Roche PDM pozwala
użytkownikowi drukować raporty, wyszukiwać wyniki, akceptować wyniki dawców i – opcjonalnie –
przesyłać dane do sieci LIS.
06327052001-02PL
5
Doc Rev. 2.0
MATERIAŁY DOSTARCZONE PRZEZ ROCHE
Do detekcji RNA wirusów HIV-1 (grup M i O), HIV-2 i HCV oraz DNA wirusa HBV w próbkach osocza
wymagane są trzy zestawy: 1) test cobas® TaqScreen MPX, v2.0; 2) zestaw kontroli cobas®
TaqScreen MPX, v2.0; 3) odczynnik płuczący cobas® TaqScreen. Karty charakterystyki substancji
niebezpiecznych (Material Safety Data Sheets – MSDS) są dostępne na żądanie w miejscowym
przedstawicielstwie firmy Roche.
cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0
(P/N: 05969492 190)
MPX v2.0
96 testów
MPX2 CS1
(Kaseta zawierająca szklane cząsteczki magnetyczne do oznaczeń MPX)
MPX2 CS2
(Kaseta z odczynnikiem lizującym do oznaczeń MPX)
MPX2 CS3
(Kaseta wieloodczynnikowa do oznaczeń MPX)
MPX2 CS4
(Kaseta odczynników swoistych dla testu do oznaczeń MPX)
®
cobas TaqScreen MPX Control Kit, v2.0
Zestaw kontroli cobas® TaqScreen MPX, v2.0
(P/N: 05965411 190)
6 zestawów
MPX CTL v2.0
MPX M(+)C, v2.0
(Kontrola dodatnia multipleksowa cobas® TaqScreen MPX, v2.0)
(Kontrola dodatnia HIV-1 M)
(Kontrola dodatnia HBV)
(Kontrola dodatnia HCV)
MPX O(+)C, v2.0
(Kontrola dodatnia cobas® TaqScreen MPX HIV-1 O, v2.0)
MPX 2(+)C, v2.0
(Kontrola dodatnia cobas® TaqScreen MPX HIV-2, v2.0)
MPX (–) C, v2.0
(Kontrola ujemna cobas® TaqScreen MPX, v2.0)
cobas® TaqScreen Wash Reagent
Odczynnik płuczący cobas® TaqScreen
(P/N: 04404220 190)
TS WR
5,1 l
TS WR
(Odczynnik płuczący cobas® TaqScreen)
Uwaga: Do wykrywania RNA wirusa HIV-1 grupy M, RNA wirusa HIV-1 grupy O, RNA wirusa HIV-2,
RNA wirusa HCV i DNA wirusa HBV w próbkach pobranych od nieżyjących dawców
oprócz wyżej wymienionych zestawów wymagany i dostarczany jest następujący
zestaw: rozcieńczalnik do próbek od dawców nieżyjących cobas® TaqScreen.
Rozcieńczalnik do próbek od dawców nieżyjących
cobas® TaqScreen
(P/N: 05002125 190)
CADV SPEC DIL
96 testów
CADV SPEC DIL
(Rozcieńczalnik do próbek od dawców nieżyjących cobas® TaqScreen)
06327052001-02PL
6
Doc Rev. 2.0
INNE MATERIAŁY WYMAGANE, LECZ SPRZEDAWANE OSOBNO (można nabyć w firmie Roche)
Ten test musi być przeprowadzany w systemie cobas s 201. System cobas s 201 musi być zainstalowany przez przedstawiciela serwisu firmy Roche Diagnostics i używany jako pełna konfiguracja systemu.
Pojedynczych elementów systemu cobas s 201 nie można używać jako samodzielnych urządzeń, nie
można też zastępować innych elementów. System cobas s 201 wykorzystuje elementy wymienione
poniżej. Aby uzyskać dodatkowe informacje, należy zapoznać się kartą informacyjną produktu.
Urządzenia i oprogramowanie systemu cobas s 201
•
Urządzenie pipetujące Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD, stacja robocza
i oprogramowanie Pooling Manager (opcjonalne)
•
Urządzenie COBAS® AmpliPrep
•
Analizator COBAS® TaqMan®
•
Stacja dokująca (opcjonalna)
•
Stacja danych z oprogramowaniem AMPLILINK
•
Serwer Roche PDM, stacja robocza i oprogramowanie Data Manager
•
Plik definicji testu dla testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0
•
Plik konfiguracyjny cobas s 201 do użytku z oprogramowaniem AMPLILINK serii 3.3
Statywy i materiały jednorazowe
•
Statywy na próbki COBAS® AmpliPrep (SK24) (P/N: 28122172001)
•
Statywy na jednostki SPU COBAS® AmpliPrep (P/N: 05471664001)
•
Statywy na odczynniki COBAS® AmpliPrep (P/N: 28122199001)
•
Jednostki przetwarzania próbki (SPU): (P/N: 03755525001)
•
Probówki wejściowe na próbki (probówki S) z klipsami z kodem kreskowym
(P/N: 03137040001)
•
Statywy z końcówkami K (P/N: 03287343001)
•
Opakowanie zawierające probówki K 12 x 96 (P/N: 03137082001)
•
Nośnik K COBAS® TaqMan® (P/N: 28150397001)
•
Końcówki CO-RE o dużej pojemności (1000 µl) z filtrem (P/N: 04639642001)
•
Płytki głębokodołkowe, oznaczone etykietami z kodami kreskowymi (P/N: 04639634001)
•
Maty zamykające płytki głębokodołkowe (P/N: 04789288001)
•
Nośnik na próbki na 24 probówki testowe (P/N: 04639502001)
•
Nośnik na próbki na 32 probówki testowe (P/N: 04639529001)
•
Nośnik do końcówek (P/N: 04639545001)
•
Nośnik do płytek głębokodołkowych (P/N: 04639553001)
•
Nośnik na statywy SK24 (P/N: 04639600001)
•
Zestaw aerozolu dezynfekującego Hamilton (P/N: 06254250001)
•
Zestaw detergentu Hamilton MICROLAB (P/N: 06254268001)
•
Rękawice jednorazowe bezpudrowe
06327052001-02PL
7
Doc Rev. 2.0
ODCZYNNIKI
cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0
(P/N: 05969492 190)
MPX v2.0
MPX2 CS1
MGP
(Szklane cząstki magnetyczne)
Szklane cząstki magnetyczne
93% izopropanolu
Xi
96 testów
2 x 48 testów
2 x 7,0 ml
93% (udział wagowy) izopropanolu
Produkt drażniący
F
93% (udział wagowy) izopropanolu
Produkt wysoce łatwopalny
MPX2 CS2
LYS
(Odczynnik lizujący)
Cytrynian sodu dwuwodny
42,5% tiocyjanianu guanidyny
< 14% polidokanolu
0,9% ditiotreitolu
Xn
2 x 48 testów
2 x 78 ml
42,5% (udział wagowy) tiocyjanianu guanidyny
Produkt szkodliwy
MPX2 CS3
Pase
(Roztwór proteinazy)
Bufor TRIS
< 0,05% EDTA
Chlorek wapnia
Octan wapnia
≤ 7,8% proteinazy
Glicerol
Xn
2 x 48 testów
2 x 3,8 ml
≤ 7,8% (wag.) proteinazy
Produkt szkodliwy
EB
(Bufor do elucji)
Bufor TRIS
EDTA
0,09% azydku sodu
< 0,002% poli-rA RNA (syntetycznego)
06327052001-02PL
2 x 7,0 ml
8
Doc Rev. 2.0
MPX2 CS4
MPX v2.0 MMX-R1
(Odczynnik MPX v2.0 Master Mix 1)
Octan potasu
Octan manganu
Glicerol
14,4% dimetylosulfotlenku
0,08% azydku sodu
Kwas octowy
2 x 48 testów
2 x 3,0 ml
MPX MMX-R2, v2.0
(Odczynnik MPX Master Mix 2, v2.0)
Bufor trycynowy
Chlorek potasu
Wodorotlenek potasu
6% dimetylosulfotlenku
Glicerol
EDTA
Tween 20
Igepal CA630
< 0,12% dATP, dGTP, dCTP, dUTP
< 0,01% roztworu starterów sensownych i antysensownych dla wirusów
HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV, HBV oraz starterów
kontroli wewnętrznej
< 0,01% roztworu znakowanych barwnikiem fluorescencyjnym sond dla
wirusów HIV-1, HIV-2, HCV i HBV
< 0,01% roztworu znakowanych barwnikiem fluorescencyjnym sond dla
kontroli wewnętrznej
< 0,01% aptameru oligonukleotydowego
< 0,01% polimerazy DNA Z05D (bakteryjnej)
< 0,01% enzymu AmpErase (uracylo-N-glikozylazy) (bakteryjnej)
0,09% azydku sodu
2 x 2,5 ml
MPX IC, v2.0
(Kontrola wewnętrzna MPX, v2.0)
Bufor TRIS
≤ 0,002% poli-rA RNA (syntetycznego)
EDTA
0,05% azydku sodu
< 0,001% niezakaźnego, syntetycznego RNA dla kontroli wewnętrznej,
opłaszczonego białkiem kapsydowym bakteriofaga MS2
2 x 8,0 ml
06327052001-02PL
9
Doc Rev. 2.0
cobas® TaqScreen MPX Control Kit, v2.0
Zestaw kontroli cobas® TaqScreen MPX, v2.0
(P/N: 05965411 190)
MPX CTL v2.0
MPX M(+)C, v2.0
(Kontrola dodatnia multipleksowa cobas® TaqScreen MPX, v2.0)
< 0,001% niezakaźnego, syntetycznego RNA wirusa HIV-1 grupy M, opłaszczonego
białkiem kapsydowym bakteriofaga MS2
< 0,001% niezakaźnego, syntetycznego DNA wirusa HBV, opłaszczonego białkiem
kapsydowym bakteriofaga Lambda
< 0,001% niezakaźnego, syntetycznego RNA wirusa HCV dla kontroli wewnętrznej,
opłaszczonego białkiem kapsydowym bakteriofaga MS2
Ujemne osocze ludzkie niereaktywne w licencjonowanych testach na obecność
przeciwciał przeciwko wirusowi HCV, przeciwciał przeciwko wirusom HIV-1/2
i antygenów HBs, HBc i HIV p24; RNA wirusa HIV-1, RNA wirusa HIV-2, RNA
wirusa HCV oraz DNA wirusa HBV, niewykrywalne przy użyciu metod PCR
®
0,1% substancji konserwującej ProClin 300
Xi
(3:1) mieszanina 5-chloro-2-metylo-4-izotiazolino-3-onu
i 2-metylo-4-izotiazolino-3-onu
6 zestawów
6 x 1,6 ml
Produkt drażniący
R43: Może powodować uczulenie w kontakcie ze skórą.
S24: Unikać zanieczyszczenia skóry.
S37: Nosić odpowiednie rękawice ochronne.
MPX O(+)C, v2.0
®
(Kontrola dodatnia cobas TaqScreen MPX HIV-1 O, v2.0)
< 0,001% niezakaźnego, syntetycznego RNA wirusa HIV-1 grupy O, opłaszczonego
białkiem kapsydowym bakteriofaga MS2
przeciwciał przeciwko wirusowi HCV, przeciwciał przeciwko wirusom
HIV-1/2 i antygenów HBs, HBc i HIV p24; RNA wirusa HIV-1, RNA wirusa HIV-2,
RNA wirusa HCV oraz DNA wirusa HBV, niewykrywalne przy użyciu metod PCR
0,1% substancji konserwującej ProClin® 300
Xi
6 x 1,6 ml
Produkt drażniący
06327052001-02PL
10
Doc Rev. 2.0
MPX 2(+)C, v2.0
®
(Kontrola dodatnia cobas TaqScreen MPX HIV-2, v2.0)
< 0,001% niezakaźnego, syntetycznego RNA HIV-2, opłaszczonego białkiem
kapsydowym bakteriofaga MS2
i antygenów HBs, HBc i HIV p24; RNA wirusa HIV-1, RNA wirusa HIV-2, RNA
wirusa HCV oraz DNA wirusa HBV, niewykrywalne przy użyciu metod PCR
Xi
6 x 1,6 ml
Produkt drażniący
MPX (–) C, v2.0
(Kontrola ujemna cobas® TaqScreen MPX, v2.0)
i antygenów HBs, HBc i HIV p24; RNA wirusa HIV-1, RNA wirusa HIV-2,
RNA wirusa HCV oraz DNA wirusa HBV, niewykrywalne przy użyciu metod
PCR
Xi
6 x 1,6 ml
Produkt drażniący
cobas® TaqScreen Wash Reagent
Odczynnik płuczący cobas® TaqScreen
(P/N: 04404220 190)
TS WR
5,1 l
TS WR
(Odczynnik płuczący cobas® TaqScreen)
Cytrynian sodu dwuwodny
0,1% metylparabenu – środka konserwującego
Rozcieńczalnik do próbek od dawców nieżyjących
®
cobas TaqScreen
(P/N: 05002125 190)
CADV SPEC DIL
CADV SPEC DIL
(Rozcieńczalnik do próbek od dawców nieżyjących cobas® TaqScreen)
EDTA
06327052001-02PL
11
96 testów
4 x 100 ml
Doc Rev. 2.0
WYMAGANIA DOTYCZĄCE PRZECHOWYWANIA I UŻYTKOWANIA
A. Przez temperaturę pokojową rozumie się temperaturę od 15 do 30°C.
B. Nie zamrażać odczynników ani kontroli.
C. Kasety MPX2 CS1, MPX2 CS2, MPX2 CS3 i MPX2 CS4 należy przechowywać w temperaturze od
2 do 8°C. Odczynniki te, jeśli są nieużywane, są stabilne aż do upływu podanej daty ważności.
D. Po pierwszym użyciu odczynniki zachowują stabilność przez 20 dni w temperaturze od 2 do 8°C lub do
upływu daty ważności, zależnie od tego, co nastąpi wcześniej.
E. Odczynników można używać w nie więcej niż 5 cyklach pracy urządzenia i w sumie przez
maksymalnie 40 godzin pracy urządzenia COBAS® AmpliPrep. Pomiędzy kolejnymi cyklami pracy
odczynniki należy przechowywać w temperaturze od 2 do 8°C. Oprogramowanie AMPLILINK
monitoruje łączną liczbę godzin pracy kaset z odczynnikami w urządzeniu COBAS® AmpliPrep
i uniemożliwia wykorzystanie kaset po osiągnięciu łącznie 40 godzin.
F. Odczynniki są stabilne przez łącznie 24 godziny ciągłej pracy w urządzeniu COBAS® AmpliPrep.
Oprogramowanie AMPLILINK nie monitoruje liczby godzin ciągłej pracy kaset odczynników
w urządzeniu COBAS® AmpliPrep ani liczby cykli pracy urządzenia z kasetami. Za usunięcie kaset
z odczynnikami po 24 godzinach ciągłej pracy lub wykonaniu 5 cykli pracy urządzenia
odpowiedzialny jest użytkownik.
G. Przechowywać kontrole MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0, MPX 2(+)C, v2.0 i MPX (–) C, v2.0
w temperaturze od 2 do 8°C. Kontrole są stabilne aż do upłynięcia wskazanej daty ważności. Po
otwarciu niewykorzystane do badania odczynniki należy wyrzucić.
H. Odczynnik TS WR należy przechowywać w temperaturze od 15°C do 30°C. Nieotwarty odczynnik
TS WR pozostaje stabilny aż do upływu podanej daty ważności. Po otwarciu odczynnik zachowuje
stabilność przez 30 dni w temperaturze od 15 do 30°C lub do upływu daty ważności, zależnie od
tego, co nastąpi wcześniej.
I.
Przechowywać nieotwarty odczynnik CADV SPEC DIL w temperaturze od 15 do 30°C. Nieotwarty
odczynnik CADV SPEC DIL pozostaje stabilny aż do upływu podanej daty ważności. Po otwarciu
odczynnik zachowuje stabilność przez 30 dni w temperaturze 2–8°C lub do upływu daty ważności,
zależnie od tego, co nastąpi wcześniej.
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
DO STOSOWANIA W DIAGNOSTYCE IN VITRO.
A. Próbki mogą być zakaźne. Przy wykonywaniu badania należy przestrzegać ogólnych środków
ostrożności29,30. Procedurę tę powinien wykonywać wyłącznie personel biegły w stosowaniu testu
cobas® TaqScreen MPX, v2.0 i przeszkolony w postępowaniu z materiałem zakaźnym. Dokładnie
oczyścić i odkazić wszystkie laboratoryjne powierzchnie robocze świeżo przygotowanym roztworem
10% podchlorynu sodu w wodzie destylowanej lub dejonizowanej (rozcieńczony wybielacz).
Następnie przetrzeć powierzchnię 70-procentowym etanolem.
B. UWAGA: Odczynniki MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0, MPX 2(+)C, v2.0 i MPX (–) C, v2.0
zawierają osocze pozyskane z ludzkiej krwi. Materiał źródłowy był testowany i nie wykazywał
obecności przeciwciał przeciwko wirusom HIV-1/2 i HCV, antygenom HIV p24 i HBs ani
przeciwciał przeciwko antygenowi HBc. Materiał źródłowy był testowany przy użyciu testu
cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Badanie ujemnego osocza ludzkiego przy zastosowaniu metod
PCR nie wykazało obecności RNA wirusa HIV-1 (grup M i O), RNA wirusa HIV-2, RNA wirusa
HCV ani DNA wirusa HBV. Żadna ze znanych metod badania nie może zaoferować całkowitej
pewności, że produkty otrzymane z ludzkiej krwi nie będą przenosić czynników zakaźnych.
Wszystkie materiały pochodzące z krwi ludzkiej należy uważać za potencjalnie zakaźne
i postępować z nimi z zastosowaniem ogólnych środków ostrożności. W przypadku wylania
materiału natychmiast zdezynfekować świeżo przygotowanym roztworem rozcieńczonego
wybielacza lub postępować zgodnie z procedurami przyjętymi w danym ośrodku.
06327052001-02PL
12
Doc Rev. 2.0
C. Stosować rutynowe laboratoryjne środki ostrożności. Nie należy pipetować za pomocą ust. Nie jeść,
nie pić ani nie palić w obszarach roboczych. Podczas obchodzenia się z próbkami i odczynnikami
zestawu należy nosić ochronne, jednorazowe rękawice, fartuchy laboratoryjne oraz osłonę oczu. Po
zakończeniu pracy z próbkami i odczynnikami z zestawów należy dokładnie umyć ręce.
D. Odczynniki EB, MPX v2.0 MMX-R1, MPX MMX-R2, v2.0 i MPX IC, v2.0 zawierają jako środek
konserwujący azydek sodu. Do przenoszenia odczynnika nie stosować metalowych rurek. Jeśli
roztwory zawierające związki azydkowe są usuwane do kanalizacji, należy je rozcieńczyć i spłukać
obfitą ilością bieżącej wody. Te środki ostrożności są zalecane w celu uniknięcia odkładania się
złogów w metalowych rurach, co może spowodować zagrożenie wybuchem.
E. Wykazano, że heparyna hamuje PCR. Nie należy stosować osocza heparynizowanego do tej
procedury.
F. Zaleca się używanie jałowych jednorazowych pipet oraz końcówek pipet wolnych od nukleazy. Jeżeli
w trakcie obchodzenia się i przygotowywania próbek nie uda się zapobiec kontaminacji między
próbkami, może dojść do wystąpienia wyników fałszywie dodatnich.
G. Aby uzyskać optymalną skuteczność testu, należy stosować tylko dostarczone lub wymienione
potrzebne materiały jednorazowego użytku.
H. Aby uniknąć kontaminacji krzyżowej próbek lub kontroli, z wszystkimi materiałami zawierającymi
próbki lub kontrole należy postępować zgodnie z zasadami dobrej praktyki laboratoryjnej.
I.
Przed użyciem należy ocenić wzrokowo każdą kasetę z odczynnikami, probówkę z kontrolą
i odczynnik płuczący, aby upewnić się, że nie ma choćby najmniejszego wycieku. W razie
wystąpienia wycieku nie wolno używać tego materiału do badań.
J.
Wyrzucać wszystkie materiały, które przypadkowo weszły w kontakt z próbkami i odczynnikami,
zgodnie z krajowymi, federalnymi, stanowymi i lokalnymi przepisami.
K. Nie używać testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0, zestawu kontrolnego cobas® TaqScreen MPX, v2.0,
odczynnika płuczącego cobas® TaqScreen ani rozcieńczalnika do próbek od dawców nieżyjących
cobas® TaqScreen po upływie daty ważności. Nie zamieniać, nie mieszać ani nie łączyć
odczynników z różnych zestawów lub z różnych serii. Nie umieszczać mieszanych serii odczynników
®
w urządzeniu COBAS AmpliPrep.
L. Karty charakterystyki substancji niebezpiecznych (Material Safety Data Sheets – MSDS) są
dostępne na żądanie w miejscowym przedstawicielstwie firmy Roche.
M. Nie dopuścić do kontaktu odczynników ze skórą, oczami i błonami śluzowymi. Jeżeli dojdzie do
kontaktu, natychmiast spłukać dużą objętością wody; w przeciwnym razie mogą powstać
oparzenia. Jeżeli dojdzie do rozlania wymienionych odczynników, przed wytarciem należy
rozcieńczyć je wodą. Nie wolno dopuścić do kontaktu odczynnika LYS, zawierającego
tiocyjanian guanidyny, z roztworem podchlorynu sodu (wybielaczem). Połączenie to może
skutkować wytworzeniem silnie trującego gazu.
N. Ściśle przestrzegać podanych procedur i wytycznych w celu zapewnienia prawidłowego wykonania
testu. Wszelkie odchylenia od procedur i wytycznych mogą mieć wpływ na optymalną skuteczność
testu.
O. Należy unikać użycia nadmiernie zhemolizowanych próbek pochodzących od dawców żyjących.
P. Zanieczyszczenie próbek osocza krwinkami czerwonymi (> 2,5%) może zahamować test cobas®
TaqScreen MPX, v2.0.
Q. W żadnej fazie testu nie używać składników z uszkodzonymi etykietami z kodem kreskowym.
R. Przechowywać wszystkie próbki w określonych temperaturach. Stosowanie nieprawidłowo
przechowywanych próbek może wpływać na skuteczność testu. Szczegółowe instrukcje, patrz punkt
POBIERANIE, PRZECHOWYWANIE I PULOWANIE PRÓBEK. Niektóre izolaty wirusa HCV mogą
być wrażliwe na temperaturę. Należy ograniczyć narażenie próbki na podwyższoną temperaturę.
06327052001-02PL
13
Doc Rev. 2.0
PRZYGOTOWANIE KONTROLI I ODCZYNNIKÓW
A. Przed załadowaniem do urządzenia pipetującego Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD
ogrzewać zestaw kontroli cobas® TaqScreen MPX, v2.0 do temperatury pokojowej przez 30 minut.
Ogrzewać odczynniki do testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w urządzeniu COBAS® AmpliPrep
przez 30 minut przed użyciem.
POBIERANIE, PRZECHOWYWANIE I PULOWANIE PRÓBEK
UWAGA: Ze wszystkimi próbkami należy obchodzić się jak z czynnikami zakaźnymi.
Próbki pochodzące od dawców żyjących
A. Do testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 można używać próbek osocza pobranych na EDTA, CPD,
CPDA1, CP2D, 4-procentowy cytrynian sodu i do probówek do otrzymywania nierozcieńczonego
osocza (PPT). Należy przestrzegać instrukcji producenta probówek zbiorczych na próbki.
Podwyższona temperatura ma wpływ na stabilność próbek.
Temperatura (°C)
Antykoagulant EDTA
Krew
pełna
Osocze
Dni po pobraniu
B. Krew pobrana na antykoagulanty EDTA, CPD, CPDA1 lub CP2D może być przed oddzieleniem
osocza od komórek przechowywana do 72 godzin w temperaturze od 2 do 30°C, a następnie do
48 godzin w temperaturze od 2 do 8°C. W celu przechowywania dłuższego niż pięć dni oddzielić
osocze od krwinek czerwonych przez wirowanie i usunięcie oddzielonego osocza od krwinek
czerwonych przed przechowywaniem. Po oddzieleniu osocze można przechowywać w temperaturze
od 2 do 8°C do siedmiu dni, a następnie do 30 dni w temperaturze ≤ –18°C. Osocze z dodatkiem
EDTA może być zamrażane i rozmrażane najwyżej trzy (3) razy.
Temperatura (°C)
Antykogulanty EDTA, CPD, CP2D, CPDA1
Krew
pełna
Osocze
Dni po pobraniu
06327052001-02PL
14
Doc Rev. 2.0
C. Krew pobraną do probówek Vacutainer PPT firmy Becton Dickinson można przed oddzieleniem
osocza przechowywać do 72 godzin w temperaturze od 2 do 30°C. W celu przechowywania dłuższego
niż 5 dni, oddzielone za pomocą żelu osocze w probówkach PPT może być przechowywane
w temperaturze od 2 do 8°C przez dodatkowe siedem dni.
Temperatura (°C)
Probówki do otrzymywania
nierozcieńczonego osocza (PPT)
Krew
pełna
Osocze
Dni po pobraniu
D. Osocze z aferezy pobrane na 4% cytrynian sodu można przechowywać do 48 godzin w temperaturze
od 2 do 25°C. Następnie osocze z aferezy można przechowywać do 21 dni w temperaturze od 2 do 8°C.
E. Następujące wskazówki dotyczące objętości osocza oparte są na pipetowaniu z plastikowych
probówek 13 x 100 mm zawierających materiał od dawców w urządzeniu pipetującym Hamilton
MICROLAB STAR/STARlet IVD. Wymienione objętości dotyczą osocza powyżej upakowanych
krwinek czerwonych i są używane podczas pracy z testem cobas® TaqScreen MPX, v2.0.
Typ puli
Pula główna*
Pula powtórzona
Pula do rozdziału
Minimalna objętość osocza
3 ml
1,5 ml
2 ml
*Obejmuje tworzenie płytek głębokodołkowych
F. Nie zamrażać krwi pełnej.
G. Osocze w zakrytych płytkach głębokodołkowych może być przechowywane w temperaturze od 2 do
8°C przez najwyżej siedem dni. Ewentualnie osocze w zakrytych płytkach głębokodołkowych można
przechowywać w temperaturze ≤ –18°C do 7 dni.
H. Przed użyciem ogrzać pulę próbek lub próbki od pojedynczych dawców do temperatury pokojowej.
I.
Inne warunki pobierania i przechowywania musi zweryfikować użytkownik. Jeśli próbki mają być
przesyłane, należy je opakować i oznaczyć zgodnie z odpowiednimi federalnymi i międzynarodowymi przepisami dotyczącymi transportu próbek i czynników etiologicznych31.
J.
Jeżeli w trakcie obchodzenia się i przygotowywania próbek nie ma odpowiedniej kontroli
kontaminacji między próbkami, może dojść do wystąpienia fałszywie dodatnich wyników.
Próbki pochodzące od dawców nieżyjących
A. Próbki pochodzące od dawców nieżyjących w kolorze od słomkowego do różowego są klasyfikowane jako umiarkowanie zhemolizowane, a próbki w kolorze od czerwonego do ciemnoczerwonego
lub w kolorze brązowym są klasyfikowane jako próbki silnie zhemolizowane.
B. Próbki pochodzące od dawców nieżyjących pobrane do probówek z antykoagulantem EDTA lub
probówek z surowicą mogą być stosowane z testem cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Należy
przestrzegać instrukcji producenta probówek. Podwyższona temperatura ma wpływ na stabilność
próbek.
06327052001-02PL
15
Doc Rev. 2.0
C. Krew pobrana od dawców nieżyjących na antykoagulant EDTA może być przed oddzieleniem
osocza od krwinek czerwonych przechowywana do 24 godzin w temperaturze od 2 do 30°C,
a następnie do 24 godzin w temperaturze od 2 do 25°C. W celu przechowywania dłuższego niż
48 godzin oddzielić osocze od krwinek czerwonych przez wirowanie i usunięcie oddzielonego
osocza od krwinek czerwonych przed przechowywaniem. Po oddzieleniu osocze można
przechowywać w temp. 2–8°C przez dodatkowe osiem dni. Osocze można również przechowywać
w temperaturze ≤ –18°C do 30 dni po oddzieleniu od krwinek czerwonych. Pochodzące od dawców
nieżyjących osocze z dodatkiem EDTA może być zamrażane i rozmrażane najwyżej trzy (3) razy.
Antykoagulant EDTA dla dawcy
nieżyjącego lub surowica
25°C
20
Krew pełna
Temperatura (°C)
30°C
30
10
2-8°C
Osocze/Surowica
0
0
1 2
3
4 5
6
7 8
9 10 11 12 13 14 15
Dni po pobraniu
D. Krew pobrana od dawców nieżyjących jako surowica może być przed oddzieleniem od komórek
przechowywana do 24 godzin w temperaturze od 2 do 30°C, a następnie do 24 godzin
w temperaturze od 2 do 25°C. W celu przechowywania dłuższego niż 48 godzin oddzielić surowicę
od skrzepu przez wirowanie i usunięcie oddzielonej surowicy od skrzepu przed przechowywaniem.
Po oddzieleniu od skrzepu surowicę można przechowywać w temp. 2–8°C przez dodatkowe osiem
dni. Surowicę można również przechowywać w temperaturze ≤ –18°C do 30 dni po oddzieleniu od
skrzepu. Pochodząca od dawców nieżyjących surowicę może być zamrażana i rozmrażana najwyżej
trzy (3) razy.
E. Krew pobrana od dawców nieżyjących pobrana do probówek PPT może być przed oddzieleniem
osocza przez wirowanie przechowywana do 24 godzin w temperaturze od 2 do 30°C, a następnie do
24 godzin w temperaturze od 2 do 25°C. W celu przechowywania dłuższego niż 48 godzin,
oddzielone za pomocą żelu osocze w probówkach PPT może być przechowywane w temperaturze
od 2 do 8°C przez dodatkowe osiem dni.
F. Próbki od dawców nieżyjących rozcieńczone w stosunku 1:5 rozcieńczalnikiem do próbek od
dawców nieżyjących cobas® TaqScreen można przechowywać najwyżej 7 dni w temperaturze od
2 do 8°C, a po ponownym wymieszaniu (przez nabranie i wypuszczenie roztworu pipetą cztery (4)
razy w każdej probówce) można je badać przy użyciu testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0.
G. Nie badano przechowywania próbek pochodzących od dawców nieżyjących rozcieńczonych
w stosunku 1:5 za pomocą rozcieńczalnika do próbek od dawców nieżyjących cobas®
TaqScreen w temperaturze ≤ –18°C.
H. Jeśli próbki mają być przesyłane, należy je opakować i oznaczyć zgodnie z odpowiednimi
federalnymi i międzynarodowymi przepisami dotyczącymi transportu próbek i czynników
etiologicznych31.
I.
Jeżeli w trakcie obchodzenia się i przygotowywania próbek nie ma odpowiedniej kontroli
kontaminacji między próbkami, może dojść do wystąpienia fałszywie dodatnich wyników.
06327052001-02PL
16
Doc Rev. 2.0
PULOWANIE I PIPETOWANIE PRÓBEK
A. System cobas s 201 wykorzystuje możliwości pipetowania i pulowania urządzenia pipetującego
Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD. Urządzenie pipetujące Hamilton MICROLAB STAR/
STARlet IVD przeprowadza skanowanie kodów kreskowych i zabiegi pulowania próbek celem
wytworzenia pul.
B. System cobas s 201 może być zainstalowany bez urządzenia pipetującego Hamilton MICROLAB
STAR/STARlet IVD, wymagając ręcznego wprowadzania identyfikatorów kodów kreskowych.
Instrukcje można znaleźć w Podręczniku użytkownika systemu cobas s 201.
C. Jeśli test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 wykryje pule reaktywne, urządzenie pipetujące Hamilton
MICROLAB STAR/STARlet IVD może być użyte do pipetowania pojedynczych próbek albo z płytek
głębokodołkowych, albo z oryginalnych probówek na próbki do badań wtórnych.
UWAGI PROCEDURALNE
A.
Wyposażenie
1. Przygotować system cobas s 201 do użytku zgodnie z instrukcjami w Podręczniku
użytkownika systemu cobas s 201.
2. Aby zapewnić prawidłowe działanie urządzenia, należy wykonywać zalecane czynności
konserwacyjne.
B.
Odczynniki
®
®
1. Ogrzewać odczynniki do testu cobas TaqScreen MPX, v2.0 w urządzeniu COBAS
AmpliPrep przez 30 minut przed użyciem. Przed użyciem zestaw kontroli cobas® TaqScreen
®
MPX, v2.0 i odczynnik płuczący cobas muszą uzyskać temperaturę pokojową. Informacje na
temat warunków przechowywania można znaleźć w rozdziale „Wymagania dotyczące
przechowywania i użytkowania”.
2. Każdy zestaw testowy cobas® TaqScreen MPX, v2.0 zawiera ilość materiału wystarczającą do
wykonania łącznie 96 oznaczeń, które zaleca się przeprowadzać w partiach składających się
z maksymalnie 24 testów na statyw SK24. Z każdą partią lub statywem SK24 musi być
przetwarzane jedno powtórzenie kontroli ujemnej (MPX (–) C, v2.0) i po jednym powtórzeniu
każdej z kontroli dodatnich (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 i MPX 2(+)C, v2.0).
3. Każdy zestaw rozcieńczalników do próbek od dawców nieżyjących cobas® TaqScreen MPX
zawiera ilość materiału wystarczającą do przetworzenia łącznie 96 testów, które zaleca
się przeprowadzać w seriach składających się z maksymalnie 24 testów na statyw SK24.
Z każdą partią lub statywem SK24 musi być przetwarzane jedno powtórzenie kontroli ujemnej
(MPX (–) C, v2.0) i po jednym powtórzeniu każdej z kontroli dodatnich (MPX M(+)C, v2.0,
MPX O(+)C, v2.0 i MPX 2(+)C, v2.0). Kontrole są przetwarzane w taki sam sposób jak próbki
pochodzące od dawców żyjących i nieżyjących za pomocą testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0.
4. Wszystkie kontrole służą wyłącznie do jednorazowego użytku.
5. System zapobiegnie użyciu odczynników, które przekroczyły dozwolone użycie w urządzeniu
COBAS® AmpliPrep (łącznie ponad 40 godzin lub 20 dni od pierwszego użycia), odczynników,
których data ważności upłynęła lub zmieszanych kaset z zestawu kaset poprzednio używanych
w systemie.
C.
Przetwarzanie próbek
1. Podczas pracy z próbkami i kontrolami należy unikać kontaminacji rękawiczek.
2. Należy uważać, aby nie dopuścić do zanieczyszczenia próbek i kontroli MPX (–) C, v2.0
kontrolami dodatnimi.
06327052001-02PL
17
Doc Rev. 2.0
D.
Identyfikacja pojedynczych wirusów docelowych
Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 jednocześnie wykrywa i rozróżnia docelowe wirusy HIV, HCV
i HBV. Trzy docelowe wirusy HIV (wirusy HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O i HIV-2) nie są rozróżniane
pomiędzy sobą.
INSTRUKCJA UŻYTKOWANIA
System cobas s 201 obejmuje cztery główne procesy: pipetowanie próbek i kontroli w opcjonalnym
urządzeniu pipetującym Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD, przygotowywanie próbek
w urządzeniu COBAS® AmpliPrep przy użyciu testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0, amplifikację/detekcję
w analizatorze COBAS® TaqMan® i zarządzanie danymi.
Każdy zestaw testowy cobas® TaqScreen MPX, v2.0 zawiera osiem kaset: dwie kasety MPX2 CS1 ze
szklanymi cząstkami magnetycznymi, dwie kasety MPX2 CS2 z odczynnikiem lizującym, dwie kasety
MPX2 CS3 z roztworem proteinazy i buforem do elucji oraz dwie kasety MPX2 CS4 z kontrolą
wewnętrzną MPX, v2.0, a także odczynniki MPX Master Mix 1, v2.0 i MPX Master Mix 2, v2.0. Ten
®
zestaw testowy jest używany łącznie z zestawem kontroli cobas TaqScreen MPX, v2.0 i odczynnikiem
płuczącym cobas® TaqScreen i do przetwarzania próbek pochodzących od dawców nieżyjących
z zestawem rozcieńczalnika do próbek od dawców nieżyjących cobas® TaqScreen.
Uwaga:
Nie należy otwierać kaset.
Uwaga:
Nie łączyć odczynników z różnych serii ani z różnych butelek z tej samej serii.
Uwaga:
Nie mieszać ze sobą odczynników (w tym również kaset) pochodzących z różnych
zestawów. Nie umieszczać mieszanych serii odczynników w urządzeniu COBAS®
AmpliPrep.
Uwaga:
Nie oddzielać probówek kontrolnych od adapterów (plastikowy uchwyt probówek
kontrolnych).
Należy wykonywać wszystkie wymagane czynności konserwacyjne, zgodnie z opisem podanym
w Podręczniku użytkownika systemu cobas s 201.
Dokładne instrukcje użytkowania można znaleźć w Podręczniku użytkownika systemu cobas s 201.
Ważne jest, aby użytkownik postępował zgodnie z instrukcjami podanymi w Podręczniku użytkownika
systemu cobas s 201 w celu zapewnienia odpowiedniej skuteczności oznaczenia.
A.
Pipetowanie kontroli i próbek przy użyciu urządzenia pipetującego Hamilton MICROLAB
STAR/STARlet IVD
Uwaga:
Podczas przygotowywania próbek i kontroli unikać zanieczyszczenia rękawic.
Uwaga:
Wymieszać kontrole, trzykrotnie delikatnie je odwracając i nie dopuszczając do
powstania pęcherzyków powietrza.
Uwaga:
W przypadku badania próbek pochodzących od dawców nieżyjących użycie płytki
z głębokimi dołkami zostało wyłączone podczas instalacji systemu cobas s 201.
A1. Wykonaj procedury startowe w urządzeniu pipetującym Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD,
a następnie uruchom zgodnie z instrukcjami na ekranie program Roche PDM Pooling Wizard.
A2. Uważaj, aby nie uszkodzić identyfikacyjnego kodu kreskowego na adapterach probówek na próbki
i probówek kontrolnych. W razie uszkodzenia system nie będzie mógł rozpoznać próbek ani kontroli.
A3. Odkręć probówki kontrolne i włóż próbki, materiały eksploatacyjne i kontrole do urządzenia
pipetującego Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD. Po włożeniu próbek, materiałów
eksploatacyjnych i odczynników kontrolnych urządzenie przenosi odczynniki kontrolne i próbki do
probówek S. Próbki i kontrole zachowują stabilność do 6 godzin w otwartych probówkach i przez
dodatkowe 6 godzin w probówkach S.
06327052001-02PL
18
Doc Rev. 2.0
A4. W przypadku próbek pochodzących od pojedynczych dawców nieżyjących przenieś pipetą 2000 µl
rozcieńczalnika CADV SPEC DIL do odpowiednio oznaczonych probówek 13 x 100 mm, dodaj
500 µl próbki pochodzącej od dawcy nieżyjącego do każdej pojedynczej probówki i wymieszaj
każdą próbkę, nabierając i wypuszczając roztwór pipetą cztery (4) razy. Podczas procedury
rozcieńczania ręcznego należy zachować prawidłową identyfikację próbek. Następnie włóż
rozcieńczone próbki pochodzące od dawców nieżyjących, materiały eksploatacyjne i kontrole do
urządzenia pipetującego Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD. Po włożeniu rozcieńczonych
próbek od dawców nieżyjących, materiałów eksploatacyjnych i odczynników kontrolnych
urządzenie przenosi kontrole i rozcieńczone próbki do probówek S. Rozcieńczone próbki
pochodzące od dawców nieżyjących i kontrole MPX v2.0 zachowują stabilność do 6 godzin
w otwartych probówkach i przez dodatkowe 6 godzin w probówkach S.
A5. Po zakończeniu pipetowania przejrzyj alarmy i wydrukuj raport(y) pulowania. Sprawdź pule i dołki
płytki głębokodołkowej. Unieważnij pule i/lub dołki, jeśli zaobserwujesz zanieczyszczenie krwinkami
czerwonymi lub jeśli objętości są różne.
®
A6. Zamknij zatyczkami probówki S i przenieś statyw (statywy) SK24 do urządzenia COBAS
AmpliPrep w celu wykonania ekstrakcji kwasów nukleinowych. Po przeniesieniu do urządzenia
COBAS® AmpliPrep wszystkie wirusy docelowe i kontrole zachowują stabilność w probówkach S
do 6 godzin.
A7. Zamknij i przechowaj płytki głębokodołkowe (jeśli płytki zostały utworzone podczas cyklu
pipetowania). Wszystkie wirusy docelowe zachowują stabilność w płytkach z głębokimi dołkami
przez 7 dni, w temperaturze od 2 do 8°C, lub przez 7 dni w temperaturze ≤ –18°C.
A8. Wyjmij i przechowuj probówki zawierające materiał od dawców. Warunki przechowywania podane
są w rozdziale „Pobieranie, przechowywanie i pulowanie próbek”.
A9. Wyjmij i wyrzuć probówki kontrolne. (Probówki kontrolne służą wyłącznie do jednorazowego
użytku.)
B.
®
Przygotowywanie i ładowanie odczynników do testu cobas TaqScreen MPX, v2.0
Uwaga:
Uważaj, aby nie uszkodzić etykiet kaset. Czytnik kodów kreskowych w urządzeniu
COBAS® AmpliPrep automatycznie odczytuje kod kreskowy na etykiecie każdej z kaset,
kiedy statywy z odczynnikami są ładowane do urządzenia.
®
B1. Przed przetworzeniem pierwszej próbki ogrzewaj odczynniki przez 30 minut w urządzeniu COBAS
AmpliPrep. Nie jest wymagane żadne inne przygotowywanie odczynników.
B2. Przed rozpoczęciem należy włożyć odpowiednią liczbę kaset, dostosowaną do całkowitej liczby
próbek, które będą przetwarzane podczas ciągłej pracy urządzenia COBAS® AmpliPrep. Każda
kaseta zawiera ilość odczynników wystarczającą do przeprowadzenia 48 testów. Informacje na
temat wkładania odczynników do pracy ciągłej można znaleźć w Podręczniku użytkownika systemu
cobas s 201.
B3. Umieść kasetę MPX2 CS1 w statywie na odczynniki, upewniając się, że kod kreskowy kasety
znajduje się w jednej linii z kodem kreskowym statywu, umieszczonym po prawej stronie statywu.
Kasety MPX2 CS1 należy umieścić razem w osobnym statywie na odczynniki, oddzielnie od innych
kaset.
B4. Włóż statyw na odczynniki zawierający odczynnik MPX2 CS1 na pozycję A. Nie umieszczać
mieszanych serii odczynników w urządzeniu.
B5. Umieść po jednym zestawie kaset MPX2 CS2, MPX2 CS3 i MPX2 CS4 na każdą kasetę MPX2 CS1
do statywu na odczynnik (odczynniki), upewniając się, że kody kreskowe kasety są zgodne z kodem
kreskowym statywu, umieszczonym po prawej stronie statywu.
B6. Włóż statyw (statywy) na odczynniki w pozycje statywu B, C, D lub E.
B7. Diody na pasku stanu urządzenia COBAS® AmpliPrep staną się zielone, gdy wszystkie wymagane
składniki zestawu zostaną włożone i rozpoznane przez system.
06327052001-02PL
19
Doc Rev. 2.0
C.
Ekstrakcja kwasów nukleinowych z napipetowanych próbek i kontroli
Uwaga:
Należy przeprowadzić następujące etapy na czystej powierzchni stołu.
C1. Usuń opakowanie z pakietu jednostek przetwarzania próbki (SPU), pozostawiając nietkniętą taśmę
i plastikową pokrywę.
C2. Trzymając statyw SPU z dużą etykietą skierowaną do użytkownika, wsuń pakiet SPU równo
z prawą stroną statywu SPU.
C3. Usuń taśmę i plastikową pokrywę z SPU znajdujących się w statywie. Upewnij się, że wszystkie
SPU są wciśnięte, wyrównane i dokładnie umieszczone w statywie. Uniesione SPU mogą
spowodować uszkodzenie urządzenia. Nie naciskaj na końcówkę S w SPU.
C4. Załaduj wypełnione jednostkami SPU statywy SPU do urządzenia COBAS® AmpliPrep w pozycje J,
K lub L, aż zostaną dosunięte do końca i rozpoznane. Jednocześnie w urządzeniu może znajdować
się do 72 SPU. Włóż co najmniej wymaganą do testu liczbę SPU, a jeśli to potrzebne, włóż ich
więcej.
C5. Usuń opakowanie celofanowe z zapakowanych przez producenta statywów z probówkami K
i końcówkami K, uważając przy tym, aby nie przewrócić statywów. Upewnij się, że wszystkie są
prawidłowo osadzone.
C6. Wsuń co najmniej wymaganą liczbę statywów z probówkami K i końcówkami M, N, lub O i K
®
w pozycje M, N, O lub P urządzenia COBAS AmpliPrep.
C7. Włóż statywy SK24, zawierające próbki napipetowane za pomocą urządzenia pipetującego
Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD, do urządzenia COBAS® AmpliPrep w pozycje F, G i H.
Wsuń statyw, aż się zablokuje. Sprawdź okno Sample stanu systemu, aby się upewnić, że
wszystkie próbki w każdym statywie zostały rozróżnione.
C8. Sprawdź oprogramowanie AMPLILINK, aby się upewnić, że do wymaganego przygotowania
próbek włożone są odpowiednie ilości odczynników i materiałów eksploatacyjnych.
C9. Należy nacisnąć przycisk Start w oprogramowaniu AMPLILINK, aby rozpocząć procedurę
przygotowania próbek przez urządzenie COBAS® AmpliPrep.
D.
Amplifikacja i detekcja
Uwaga:
Roboczy odczynnik Master Mix z dodanymi przetworzonymi próbkami zawartymi
w statywie SK24 ma ograniczoną stabilność. Analizator COBAS® TaqMan® musi być
gotowy do akceptowania próbek, gdy tylko urządzenie COBAS® AmpliPrep ukończy
procedurę przygotowania próbek.
®
®
D1. Przenieś statyw SK24, zawierający przetworzone próbki, do analizatora COBAS TaqMan .
Całkowicie wypełniony statyw SK24 musi być przeniesiony w ciągu 1 godziny od zakończenia
®
®
przygotowania próbek w tym statywie. Analizator COBAS TaqMan automatycznie rozpocznie
amplifikację i detekcję. Partia zawierająca 24 próbki nieprzeniesione w ciągu 1 godziny będzie
nieważna. Częściowo wypełnione statywy SK24 nieprzeniesione w ciągu 1 godziny mogą dać
ważną partię. Oprogramowanie AMPLILINK monitoruje dopuszczalny czas pomiędzy dodaniem
odczynnika Master Mix a rozpoczęciem amplifikacji/detekcji w każdej próbce i unieważnia cały
statyw, jeśli pierwsza przetworzona próbka przekroczy limit czasu.
D2. Po zakończeniu amplifikacji i detekcji w analizatorze COBAS® TaqMan® analizowane probówki
K są automatycznie wyrzucane do pojemnika na odpady.
D3. Wyniki są automatycznie akceptowane i przenoszone do oprogramowania PDM.
E.
Przeglądanie i drukowanie wyników
E1. Zaloguj się do stacji roboczej Roche Data Manager.
E2. Odszukaj nieprzeglądane partie w zakładce „Review Batches” w stacji roboczej Data Manager.
E3. Przejrzyj alarmy, podświetlając partię, a następnie klikając „Next”.
06327052001-02PL
20
Doc Rev. 2.0
E4. Przejrzyj wyniki kontroli w zakładce „Controls Review”. Kryteria ważności kontroli można znaleźć
w rozdziale „Kontrola jakości”.
E5. Przejrzyj wyniki puli w zakładce „Pools Review” dla wybranej partii. Jeśli to konieczne, użytkownik
może ręcznie unieważnić pule ujemne. Próbki od dawców z nieważnych pul należy przebadać
ponownie.
E6. Przejrzyj i wydrukuj dawców w zakładce „Donor Review” dla wybranej partii.
E7. Wydrukuj raporty i w razie potrzeby prześlij je do Laboratoryjnego Systemu Informacji (LIS).
KONTROLA JAKOŚCI
1. Z każdą partią musi być przetwarzane jedno powtórzenie kontroli ujemnej (MPX (–) C, v2.0) oraz po
jednym powtórzeniu każdej z trzech kontroli dodatnich (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0
i MPX 2(+)C, v2.0).
2. Stan partii. Stan partii jest opisany jako „Complete, Valid”, gdy kontrole partii są ważne. Jeśli któraś
z kontroli w partii jest nieważna, cała partia jest nieważna i należy ją powtórzyć. Unieważnienie
wyników na podstawie błędów kontroli jest przeprowadzane automatycznie przez oprogramowanie
PDM.
a. Kontrola ujemna
Aby partia była ważna, kontrola ujemna (MPX (–) C, v2.0) musi być ważna. Aby kontrola ujemna
była ważna, interpretowany wynik musi być niereaktywny, a dołączona kontrola wewnętrzna
musi być ważna. Jeśli interpretowany wynik dla kontroli ujemnej jest nieważny, cała partia jest
nieważna.
b. Kontrole dodatnie
Aby partia była ważna, 3 kontrole dodatnie (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 i MPX 2(+)C, v2.0)
muszą być ważne. Aby 3 kontrole dodatnie były ważne, interpretowany wynik każdej kontroli
dodatniej musi być reaktywny, a dołączona kontrola wewnętrzna musi być ważna. Jeśli
interpretowany wynik dla jakiejkolwiek kontroli dodatniej jest nieważny, cała partia jest nieważna.
3. Kontrola wewnętrzna dla próbek od dawców
a. Aby próbka od dawcy miała ważny niereaktywny (–) wynik testu, dołączona kontrola wewnętrzna
musi być ważna; w innym przypadku ujemny wynik jest nieważny i trzeba ponownie zbadać
próbkę dawcy.
b. Aby próbka od dawcy miała ważny reaktywny wynik testu, dołączona kontrola wewnętrzna musi
być albo ważna, albo nieważna.
06327052001-02PL
21
Doc Rev. 2.0
WYNIKI
1. Wyniki próbek są ważne tylko wówczas, gdy zawierająca je partia jest ważna. Kryteria kontroli
jakości można znaleźć w rozdziale „Kontrola jakości”. Dla każdej próbki mierzone są cztery
parametry: jeden dla każdego docelowego wirusa, drugi dla kontroli wewnętrznej.
2. Ostateczne wyniki testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 dla dawcy są przedstawiane przez
oprogramowanie PDM następująco:
Stan dawcy
Completed Non-Reactive
Accepted Non-Reactive
Completed Reactive
Accepted Reactive
Completed Unresolved
Accepted Unresolved
Interpretacja
Wynik końcowy każdego docelowego wirusa został określony
i wszystkie wirusy docelowe są niereaktywne.
Wynik Completed Non-Reactive został zaakceptowany.
Wynik końcowy każdego docelowego wirusa został określony
i co najmniej jeden wirus docelowy jest reaktywny.
Wynik Completed Reactive został zaakceptowany.
Termin ważności upłynął, zanim wynik został zaakceptowany,
i żaden z wyników nie był reaktywny.
Wynik Completed Unresolved został zaakceptowany.
Powtarzanie w przypadku pojedynczych próbek
Probówki zawierające materiał od dawców z końcowym wynikiem nieważnym dla jednego z wirusów
docelowych wymagają powtórzenia testu, bez względu na końcowe wyniki dla innych wirusów
docelowych. Jednak użytkownik ma możliwość wyboru przycisku „Force Unresolve”, aby zakończyć
przebieg pracy dla dawcy. Funkcja „Force Unresolve” przypisuje stan „Accepted Unresolved” dawcom
niemającym wyniku końcowego reaktywnego pod kątem jakiegokolwiek wirusa docelowego, lub
przypisuje stan „Accepted Reactive” dawcom, u których wynik był reaktywny pod kątem jednego albo
więcej wirusów docelowych.
Wtórny test puli
Probówki dawców w puli zawierającej wiele próbek z końcowym wynikiem nieważnym dla jednego
z wirusów docelowych wymagają powtórzenia testu, jeśli wyniki dla innych wirusów docelowych są
niereaktywne lub nieważne.
W przypadku gdy pula zawierająca wiele próbek zostanie oznaczona jako reaktywna ze względu na
jeden lub więcej wirusów docelowych, system cobas s 201 przydzieli wszystkim dawcom z tej puli
żądanie wykonania wtórnego testu puli. Te próbki dawców są pipetowane za pomocą urządzenia
pipetującego Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD (zarówno z płytek głębokodołkowych, jak i
z pierwotnych probówek zawierających materiał od dawców) i dzielone na pule z mniejszą liczbą dawców
lub z pojedynczymi dawcami, a następnie badane za pomocą testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 jako
element procesu rozdziału, który ma za zadanie zidentyfikowanie poszczególnych reaktywnych próbek
od poszczególnych dawców. Dokładne instrukcje na temat przeprowadzania testów rozstrzygających
można znaleźć w Podręczniku użytkownika systemu cobas s 201.
Jeżeli wynik dla subpuli zawierającej wiele próbek będzie niereaktywny dla wszystkich docelowych
wirusów, poszczególne próbki (próbka) są oznaczane jako „Completed” z końcowym wynikiem
niereaktywnym.
06327052001-02PL
22
Doc Rev. 2.0
OGRANICZENIA METODY
1. Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 zaprojektowano wyłącznie do użytku z zestawem kontroli cobas®
TaqScreen MPX, v2.0, odczynnikiem płuczącym cobas® TaqScreen i systemem cobas s 201.
2. W przypadku testowania próbek pochodzących od dawców nieżyjących test cobas® TaqScreen
MPX, v2.0 został oceniony tylko do użytku z zestawem rozcieńczalników do próbek od dawców
nieżyjących cobas® TaqScreen, zestawem kontrolnym cobas® TaqScreen MPX v2.0, odczynnikiem
płuczącym cobas® TaqScreen i systemem cobas s 201.
3. Wykazano, że heparyna hamuje PCR. Nie należy stosować osocza heparynizowanego do tej
procedury.
4. Wiarygodne wyniki są zależne od zachowania odpowiednich procedur pobierania próbek oraz
transportu.
5. Do zautomatyzowanego przygotowywania pul osocza do testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 wolno
używać wyłącznie urządzenia pipetującego Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD. Należy
przestrzegać instrukcji sprzętowych i środków ostrożności podanych w Podręczniku użytkownika
systemu cobas s 201 i Podręczniku użytkownika urządzenia pipetującego Hamilton MICROLAB
STAR/STARlet IVD.
6. Detekcja RNA wirusa HIV-1 grupy M, RNA wirusa HIV-1 grupy O, RNA wirusa HIV-2, RNA wirusa
HCV i DNA wirusa HBV zależy od liczby cząstek wirusa obecnych w próbce; mogą na nie mieć
wpływ metody pobierania próbek, czynniki związane z pacjentem (tj. wiek, występowanie objawów)
i/lub faza zakażenia oraz wielkość puli.
7. Mutacje w obrębie wysoce konserwatywnych regionów genomu wirusowego, z którym wiążą się
startery i/lub sondy używane w teście cobas® TaqScreen MPX, v2.0, chociaż rzadkie, mogą
spowodować niewykrycie wirusa.
8. Z uwagi na różnice pomiędzy technologiami zaleca się, aby przed zmianą stosowanych metod
użytkownik przeprowadził w laboratorium badanie korelacji stosowanych metod w celu określenia
jakościowych różnic występujących pomiędzy nimi. Użytkownicy powinni postępować zgodnie
z własnymi określonymi zasadami/procedurami.
CHARAKTERYSTYKA SKUTECZNOŚCI
Próbki pochodzące od dawców żyjących
Powtarzalność
Powtarzalność testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 z wykorzystaniem systemu cobas s 201 została
określona przez testowanie 3 paneli łącznie opracowanych wirusów HIV-1 grupy M, HCV i HBV oraz
pojedynczo opracowanych wirusów HIV-1 grupy O i HIV-2 w stężeniach ok. 0,5 x, 1 x i 3 x granica
wykrywalności (Limit Of Detection – LOD) testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 dla każdego wirusa.
Badanie przeprowadzono przy użyciu 3 serii zestawów testowych cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Około
sześćdziesiąt powtórzeń każdego z 3 paneli przebadano przy użyciu każdej serii zestawów odczynników.
Wszystkie ważne powtarzalne wyniki oceniono, obliczając procent wyników reaktywnych testu dla
każdego elementu panelu według serii zestawu.
Badanie to wykazało spójną skuteczność testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 niezależnie od serii
zestawów przy 0,5 x, 1 x i 3 x granica wykrywalności (tabela 1). Odsetek nieważnych partii w teście cobas®
TaqScreen MPX, v2.0 wyniósł 0,25%, a odsetek nieważnych pojedynczych próbek wyniósł 0,22%.
06327052001-02PL
23
Doc Rev. 2.0
Tabela 1
Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 — powtarzalne wyniki
przy 0,5 x, 1 x i 3 x granica wykrywalności
Wirus
Stężenie
Ujemny
0
HIV-1 grupa M
0,5 x LOD
HIV-1 grupa O
0,5 x LOD
HIV-2
0,5 x LOD
HCV
0,5 x LOD
HBV
0,5 x LOD
HIV-1 grupa M
1 x LOD
HIV-1 grupa O
1 x LOD
HIV-2
1 x LOD
HCV
1 x LOD
HBV
1 x LOD
HIV-1 grupa M
3 x LOD
HIV-1 grupa O
3 x LOD
HIV-2
3 x LOD
HCV
3 x LOD
HBV
3 x LOD
06327052001-02PL
Seria
zestawu
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
24
Wyniki dodatnie wg
serii odczynnika
0,0% (0/64)
0,0% (0/62)
0,0% (0/64)
80,0% (48/60)
78,3% (47/60)
82,5% (52/63)
76,7% (46/60)
74,1% (40/54)
93,4% (57/61)
81,0% (51/63)
83,6% (51/61)
85,0% (51/60)
85,0% (51/60)
81,7% (49/60)
92,1% (58/63)
71,7% (43/60)
86,7% (52/60)
82,5% (52/63)
93,3% (56/60)
96,7% (58/60)
96,8% (61/63)
93,3% (56/60)
96,3% (52/54)
98,4% (61/62)
92,1% (58/63)
90,2% (55/61)
96,7% (58/60)
96,7% (58/60)
98,3% (59/60)
98,4% (62/63)
96,7% (58/60)
98,3% (59/60)
96,8% (61/63)
100% (60/60)
100% (60/60)
100% (60/60)
100% (60/60)
100% (54/54)
100% (61/61)
100% (63/63)
100% (61/61)
100% (60/60)
100% (60/60)
100% (60/60)
100% (63/63)
100% (60/60)
100% (60/60)
100% (60/60)
Doc Rev. 2.0
Czułość analityczna — międzynarodowe standardy WHO/standardy firmy Roche/standard CBER
Granice wykrywalności RNA wirusa HIV-1 grupy M, RNA wirusa HIV-1 grupy O, RNA wirusa HIV-2, RNA
wirusa HCV i DNA wirusa HBV w teście cobas® TaqScreen MPX, v2.0 określono przy użyciu następujących standardów: DRUGIEGO MIĘDZYNARODOWEGO STANDARDU WHO dla RNA wirusa HIV-1,
DRUGIEGO MIĘDZYNARODOWEGO STANDARDU (kod NIBSC 97/650)37, MIĘDZYNARODOWEGO
STANDARDU WHO DLA DNA WIRUSA ZAPALENIA WĄTROBY TYPU B DO OZNACZEŃ
OPARTYCH NA TECHNOLOGII AMPLIFIKACJI KWASÓW NUKLEINOWYCH (NAT) (kod NIBSC
97/746)32, DRUGIEGO MIĘDZYNARODOWEGO STANDARDU WHO DLA RNA WIRUSA ZAPALENIA
WĄTROBY TYPU C DO OZNACZEŃ OPARTYCH NA TECHNOLOGII AMPLIFIKACJI GENOMOWEJ
(kod NIBSC 96/798)33 i pierwszorzędowych standardów firmy Roche dla wirusów HIV-1 grupy O i HIV-2.
®
Ponadto granica wykrywalności testu cobas TaqScreen MPX, v2.0 dla wirusa HIV-2 została określona
przy użyciu międzynarodowego standardu HIV-2 RNA (NIBSC kod 08/150)39. Nie są aktualnie dostępne
żadne międzynarodowe standardy dla RNA wirusa HIV-1 grupy O. Pierwszorzędowe standardy firmy
Roche dla RNA wirusa HIV-1 grupy O i RNA wirusa HIV-2 są dostępnymi na rynku roztworami
podstawowymi wirusa hodowlanego, P/N 2420 (Boston Biomedica, Inc.) i nr kat. 10-27-000 (Advanced
Biotechnologies, Inc.). Standardy firmy Roche dla wirusa HIV-1 grupy O i wirusa HIV-2 oparto
odpowiednio na panelach CBER HIV-1 Subtype RNA Reference Panel #1 serii 01 i CBER HIV-2 RNA
Lot Release Panel ISD.
W przypadku standardów WHO i firmy Roche 3 niezależne serie rozcieńczeń każdego standardu
wirusowego zostały przygotowane z użyciem spulowanego ludzkiego osocza pobranego na antykoagulant EDTA. Wszystkie serie rozcieńczeń badano przy użyciu 3 różnych serii zestawu testowego
cobas® TaqScreen MPX, v2.0 z około 20 powtórzeniami na serię, co daje w sumie około 180 powtórzeń
na dane stężenie. W przypadku międzynarodowego standardu HIV-2 przetestowano 10 powtórzeń na
serię z 3 niezależnych rozcieńczeń i 3 serie odczynników przy łącznej liczbie 90 powtórzeń na stężenie.
Do oszacowania granicy wykrywalności i dwustronnego, 95-procentowego znacznikowego przedziału
ufności (tabela 2) została użyta analiza PROBIT łącznych danych ze wszystkich powtórzeń badanych dla
każdego wirusa (Tabela 2). Do oszacowania 95-procentowej granicy wykrywalności i 2-stronnego,
95-procentowego znacznikowego przedziału ufności (Tabela 8) została użyta analiza PROBIT wyników
pojedynczych serii dla każdego wirusa.
W tabelach 2–9 podsumowano całkowite wyniki badania czułości analitycznej. Powszechnie stosowane
współczynniki konwersji jednostek międzynarodowych (IU) na kopie wirusów HIV-1 grupy M, HCV i HBV
34
35
36
wynoszą odpowiednio 0,6 , 2,7 i 5,0 .
Tabela 2
Analiza PROBIT dla standardów wirusowych
Oznaczany
składnik
HIV-1
grupa M
HIV-1
grupa O
HIV-2
HIV-2
HCV
HBV
Standard
Drugi
międzynarodowy
standard WHO
Pierwszorzędowy
standard firmy
Roche
Pierwszorzędowy
standard firmy
Roche
Międzynarodowy
standard WHO
Drugi
międzynarodowy
standard WHO
Międzynarodowy
standard WHO
06327052001-02PL
Jednostki
Średnia wartość
Dolna granica
Górna granica
LOD w
95-procentowego
95-procentowego
95-procentowym
przedziału
przedziału ufności
przedziale ufności
ufności
IU/ml
50,3
43,3
59,9
kopie/ml
18,3
13,0
31,7
kopie/ml
57,4
49,7
68,1
IU/ml
7,9
5,6
13,8
IU/ml
6,8
5,8
8,3
IU/ml
2,3
2,0
2,8
25
Doc Rev. 2.0
Tabela 3
Podsumowanie czułości analitycznej:
międzynarodowy standard WHO dla wirusa HIV-1 (97/650)
Stężenie
RNA wirusa HIV-1
grupy M
(IU/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
Dolny zakres
95-procentowego
(jednostronny)
100,00
75,00
50,00
25,00
12,50
7,50
2,50
180
179
175
147
118
65
23
180
183
183
183
183
183
183
100,0%
97,8%
95,6%
80,3%
64,5%
35,5%
12,6%
98,4%
95,1%
92,3%
74,9%
58,2%
29,6%
8,7%
Tabela 4
pierwszorzędowy standard firmy Roche dla wirusa HIV-1 grupy O
Stężenie
RNA wirusa HIV-1
grupy O (kopie/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
Dolny zakres
95-procentowego
(jednostronny)
54,00
36,00
18,00
9,00
5,50
1,75
175
175
169
143
99
45
175
175
176
175
177
175
100,0%
100,0%
96,0%
81,7%
55,9%
25,7%
98,3%
98,3%
92,7%
76,2%
49,5%
20,3%
Tabela 5
pierwszorzędowy standard firmy Roche dla wirusa HIV-2
Stężenie
RNA wirusa HIV-2
(kopie/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
Dolny zakres
95-procentowego
(jednostronny)
184,00
123,00
91,50
61,00
31,00
18,50
6,00
184
183
182
171
153
131
52
184
184
182
184
184
185
185
100,0%
99,5%
100,0%
92,9%
83,2%
70,8%
28,1%
98,4%
97,4%
98,4%
89,0%
77,9%
64,8%
22,7%
06327052001-02PL
26
Doc Rev. 2.0
Tabela 6
międzynarodowy standard dla wirusa HIV-2 (08/150)
Stężenie
RNA wirusa HIV-2
(IU/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
Dolny zakres
95-procentowego
(jednostronny)
17,50
12,30
7,00
3,50
2,10
0,70
90
89
86
68
36
13
90
90
90
90
90
90
100,0%
98,9%
95,6%
75,6%
40,0%
14,4%
96,7%
94,8%
90,1%
67,0%
31,3%
8,8%
Tabela 7
międzynarodowy standard WHO dla wirusa HCV (96/798)
Stężenie
RNA wirusa HCV
(IU/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
Dolny zakres
95-procentowego
(jednostronny)
32,00
25,00
16,00
8,00
4,00
2,50
1,00
180
182
183
179
158
127
79
180
183
183
183
183
183
183
100,0%
99,5%
100,0%
97,8%
86,3%
69,4%
43,2%
98,4%
97,4%
98,4%
95,1%
81,4%
63,3%
37,0%
Tabela 8
międzynarodowy standard WHO dla wirusa HBV (97/746)
Stężenie
DNA wirusa HBV
(IU/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
Dolny zakres
95-procentowego
(jednostronny)
6,00
5,00
3,00
1,50
1,00
0,50
0,25
180
183
178
155
147
92
53
180
183
183
183
183
183
183
100,0%
100,0%
97,3%
84,7%
80,3%
50,3%
29,0%
98,4%
98,4%
94,3%
79,6%
74,9%
44,0%
23,5%
06327052001-02PL
27
Doc Rev. 2.0
Tabela 9
Granice wykrywalności dla pojedynczych serii odczynników
Seria
odczynników
nr 1
Jednostki
Najniższe
zaobserwowane
stężenie
z 95 procentową
reaktywnością
Granica
wykrywania
95% PROBIT
Dolna
granica 95procentowego
przedziału
ufności
Górna
przedziału
ufności
HIV-1 grupa M
HIV-1 grupa O
HIV-2*
HIV-2*
HCV
HBV
IU/ml
kopie/ml
kopie/ml
IU/ml
IU/ml
IU/ml
100
36
91,5
12,3
8
3
58,6
21,7
56,6
8,0
7,2
2,9
45,8
16,7
45,1
6,0
5,5
2,3
80,0
31,2
76,7
12,4
10,8
4,1
Seria
odczynników
nr 2
Jednostki
Najniższe
zaobserwowane
stężenie
z 95-procentową
reaktywnością
Granica
wykrywania
95% PROBIT
Dolna
przedziału
ufności
Górna
przedziału
ufności
HIV-1 grupa M
HIV-1 grupa O
HIV-2*
HIV-2*
HCV
HBV
IU/ml
kopie/ml
kopie/ml
IU/ml
IU/ml
IU/ml
50
18
91,5
7
8
3
48,3
19,0
63,2
8,9
7,0
2,0
29,1
14,6
50,0
6,5
5,4
1,6
127,5
27,6
86,1
14,4
10,1
2,9
Seria
odczynników
nr 3
Jednostki
Najniższe
zaobserwowane
stężenie
z 95-procentową
reaktywnością
Granica
wykrywania
95% PROBIT
Dolna
przedziału
ufności
Górna
przedziału
ufności
HIV-1 grupa M
HIV-1 grupa O
HIV-2*
HIV-2*
HCV
HBV
IU/ml
kopie/ml
kopie/ml
IU/ml
IU/ml
IU/ml
50
18
61
7
8
3
41,6
14,3
51,7
6,8
6,2
2,0
33,1
8,6
40,3
5,1
4,1
1,6
56,2
50,3
72,9
10,5
15,2
2,8
* Dane dotyczące wirusa HIV-2 przy użyciu standardu firmy Roche przedstawiono w kopiach/ml. Dane
dotyczące wirusa HIV-2 przy użyciu standardu międzynarodowego 08/150 przedstawiono w IU/ml.
06327052001-02PL
28
Doc Rev. 2.0
Czułość i wyłączność względem genotypu/podtypu
Skuteczność testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 została określona na podtypach wirusów HIV-1
grupy M, HIV-1 grupy O oraz HIV-1 grupy N i na genotypach wirusów HCV i HBV.
HIV-1 grupa M
Łącznie 69 próbek klinicznych wirusa HIV-1 grupy M i 28 izolatów hodowlanych wirusa HIV-1 grupy M
o znanym podtypie (10 o podtypie A, 5 rekombinantów o podtypie AE, 10 rekombinantów o podtypie AG,
10 o podtypie B, 1 o podtypie B/D, 10 o podtypie C, 10 o podtypie D, 9 o podtypie E, 10 o podtypie F,
10 o podtypie G, 10 o podtypie G/BG, 1 o podtypie H i 1 o podtypie J) oszacowano przy użyciu testu
COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HIV-1, v2.0 i rozcieńczono normalnym ludzkim osoczem
pozbawionym wirusa do stężenia 3 x i 1 x granica wykrywalności testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 dla
®
wirusa HIV-1 grupy M, a 7 lub więcej powtórzeń każdego podtypu przebadano za pomocą testu cobas
TaqScreen MPX, v2.0. We wszystkich 69 próbkach klinicznych i 28 izolatach hodowlanych dokonano
wykrycia zarówno przy stężeniu 3 x, jak i 1 x granica wykrywalności.
Tabela 10
Próbki i hodowle izolatów HIV-1 grupa M
Podtyp
Próbki kliniczne
Supernatanty
hodowli
Pełne izolaty
Odsetek
wykrytych
przy 3 x LOD
Odsetek
wykrytych
przy 1 x LOD
A
7
3
10
96% (74/77)
83% (64/77)
AE
5
0
5
86% (36/42)
69% (29/42)
AG
10
0
10
99% (69/70)
94% (66/70)
B
8
2
10
100% (70/70)
87% (61/70)
100% (24/24)
B/D
1
0
1
100% (24/24)
C
5
5
10
99% (69/70)
86% (60/70)
D
7
3
10
100% (74/74)
90% (67/74)
E
1
8
9
100% (63/63)
97% (61/63)
F
7
3
10
100% (70/70)
94% (66/70)
G
8
2
10
100% (70/70)
96% (67/70)
G/BG
10
0
10
100% (70/70)
96% (67/70)
H
0
1
1
100% (24/24)
100% (24/24)
J
0
1
1
100% (24/24)
96% (23/24)
06327052001-02PL
29
Doc Rev. 2.0
HIV-1 grupa O i HIV-1 grupa N
Łącznie przebadano 9 izolatów hodowlanych wirusa HIV-1 grupy O i 1 izolat hodowlany wirusa HIV-1
grupy N. Dla sześciu izolatów wirusa HIV-1 grupy O zostały przebadane 3 powtórzenia dla każdego
izolatu i w 6 spośród 6 izolatów wykryto 10 cząstek/ml. W przypadku pozostałych 3 izolatów wirusa
HIV-1 grupy O przygotowano rozcieńczenia logarytmiczne w prawidłowym osoczu ludzkim
z ujemnymi wynikami badań wirusowych i wszystkie izolaty wykrywano za pomocą testu cobas®
TaqScreen MPX, v2.0 we wszystkich rozcieńczeniach do 1 x 10–7. Izolat hodowlany wirusa
®
®
®
HIV-1 grupy N został oszacowany przy użyciu testu COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1, v2.0,
następnie rozcieńczony prawidłowym osoczem ludzkim z ujemnymi wynikami badań wirusowych do
stężenia 3 x i 1 x granica wykrywalności testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 dla wirusa HIV-1 grupy M,
®
a 24 powtórzenia przebadano przy użyciu testu cobas TaqScreen MPX, v2.0. Izolat został wykryty przy
stężeniu 3 x i 1 x granica wykrywalności.
Tabela 11
Izolaty wirusów HIV-1 grupy N i grupy O
Podtyp
Supernatanty
hodowli
Odsetek wykrytych
przy 3 x LOD
Odsetek wykrytych
przy 1 x LOD
HIV-1 (N)
1
100% (24/24)
100% (24/24)
Podtyp
Supernatanty
hodowli
Odsetek wykrytych
przy 100 cząstkach/ml
Odsetek wykrytych
przy 10 cząstkach/ml
HIV-1 grupa O
6
88,8% (16/18)
83,3% (15/18)
HIV-2
Zbadano jeden izolat hodowlany wirusa HIV-2 podtyp A oraz jeden wirusa HIV-2 podtyp B. Izolat
hodowlany wirusa HIV-2 podtyp A został rozcieńczony w pulowanym osoczu ludzkim z ujemnymi
wynikami badań wirusowych i wykrywany w 100% przy 91,5 kopiach/ml (~12,9 IU/ml po konwersji na
jednostki międzynarodowe WHO) oraz wykrywany już przy 6 kopiach/ml (~0,85 IU/ml po konwersji na
jednostki międzynarodowe WHO). Rozcieńczenia logarytmiczne wirusa HIV-2 podtyp B przygoto–
wano w prawidłowym osoczu ludzkim z ujemnymi wynikami badań wirusowych i 3 z 3 powtórzeń
każdego rozcieńczenia wykrywano za pomocą testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 we wszystkich
rozcieńczeniach do 1 x 10–5. Dla tego badania nie były dostępne próbki kliniczne.
HCV
Łącznie 95 próbek klinicznych wirusa HCV o znanym genotypie (10 o genotypie 1a, 10 o genotypie 1b,
1 o genotypie 2, 7 o genotypie 2a, 10 o genotypie 2b, 7 o genotypie 2a/c, 10 o genotypie 3a, 6 o genotypie 4,
4 o genotypie 4a, 1 o genotypie 4c, 2 o genotypie 4acd, 1 o genotypie 4d, 1 o genotypie 4p, 1 o genotypie 4q, 10 o genotypie 5a, 10 o genotypie 6, 3 o genotypie 6a/b oraz 1 o genotypie 6d) zostało
oszacowanych za pomocą testu COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HCV, następnie rozcieńczone
normalnym ludzkim osoczem pozbawionym wirusa do stężenia 3 x i 1 x granica wykrywalności testu
cobas® TaqScreen MPX, v2.0 dla wirusa HCV, a 7 lub więcej kopii każdego genotypu przebadano przy
użyciu testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0. We wszystkich 95 próbkach dokonano wykrycia zarówno
przy stężeniu 3 x, jak i 1 x granica wykrywalności.
Łącznie 3 transkrypty wyprodukowane z dodatkowych izolatów wirusa HCV (2 o genotypie 4 i 1 o genotypie 6a) były oszacowane przy użyciu spektrofotometru, następnie rozcieńczone w buforze
pozbawionym RNazy do stężenia ok. 3 x granica wykrywalności i wykryte przy użyciu testu cobas®
TaqScreen MPX, v2.0. Wszystkie 3 zostały wykryte przy stężeniu ok. 3 x granica wykrywalności.
06327052001-02PL
30
Doc Rev. 2.0
Tabela 12
Próbki z HCV
Odsetek wykrytych Odsetek wykrytych
przy 3 x LOD
przy 1 x LOD
Genotyp
Próbki kliniczne
Transkrypty
1a
10
0
100% (70/70)
1b
10
0
100% (77/77)
84% (65/77)
2
1
0
100% (24/24)
100% (24/24)
91% (64/70)
2a
7
0
100% (49/49)
100% (49/49)
2b
10
0
100% (70/70)
100% (70/70)
2a/c
7
0
98% (48/49)
88% (43/49)
3a
10
0
100% (70/70)
99% (69/70)
4
6
0
100% (52/52)
100% (52/52)
4a
4
0
100% (28/28)
100% (28/28)
4c
1
0
100% (24/24)
100% (24/24)
4acd
2
0
100% (24/24)
100% (24/24)
4d
1
0
100% (24/24)
100% (24/24)
4p
1
0
100% (24/24)
100% (24/24)
4q
1
0
100% (24/24)
96% (23/24)
5a
10
0
100% (70/70)
99% (69/70)
87% (61/70)
6
10
0
100% (70/70)
6a/b
3
0
100% (24/24)
83% (20/24)
6c
1
0
98% (47/48)
85% (41/48)
HCV 13 (Gt 4)
0
1
75% (3/4)
NT
HCV 96-2 (Gt 4)
0
1
100% (4/4)
NT
381144-182 (Gt 6a)
0
1
75% (3/4)
NT
06327052001-02PL
31
Doc Rev. 2.0
HBV
Łącznie 58 próbek klinicznych wirusa HBV (10 o genotypie A, 6 o genotypie B, 10 o genotypie C,
10 o genotypie D, 10 o genotypie E, 3 o genotypie F, 2 o genotypie G, 2 o genotypie H i 5 mutacji
przedrdzeniowych) zostało oszacowanych za pomocą testu COBAS® TaqMan HBV do użytku
z zestawem High Pure System, następnie rozcieńczone normalnym ludzkim osoczem pozbawionym
wirusa do stężenia 3 x i 1 x granica wykrywalności testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 dla wirusa
HBV, a 7 lub więcej powtórzeń każdego genotypu przebadano przy użyciu testu cobas® TaqScreen
®
MPX, v2.0. Próbki wirusa HBV z mutacją przedrdzeniową oszacowano za pomocą testu COBAS
AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HBV. We wszystkich 58 próbkach dokonano wykrycia zarówno przy
stężeniu 3x, jak i 1x granica wykrywalności.
Tabela 13
Próbki z HBV
Odsetek wykrytych
przy 3 x LOD
Odsetek wykrytych
przy 1 x LOD
10
91% (64/70)
83% (58/70)
6
100% (59/59)
76% (63/83)
C*
10
70% (86/122)
54% (79/146)
D
10
92% (71/77)
73% (56/77)
E
10
96% (67/70)
96% (67/70)
F
3
90% (43/48)
65% (31/48)
G
2
100% (24/24)
96% (23/24)
H
2
100% (24/24)
92% (22/24)
Mutacje
przedrdzeniowe
5
100% (35/35)
94% (32/35)
Genotyp
Próbki kliniczne
A
B
* 1 izolat wirusa HBV o genotypie C był reaktywny w 71% (15/21) i 100% (21/21),
gdy badano go przy stężeniu odpowiednio 6 x i 9 x granica wykrywalności.
Panele serokonwersji
Skuteczność testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w czasie serokonwersji została określona dla wirusów
HIV-1 grupy M, HCV i HBV przy użyciu 32 dostępnych na rynku paneli serokonwersji. Panele
serokonwersji dla wirusa HIV-1 grupy O oraz wirusa HIV-2 są niedostępne.
Panele serokonwersji dla wirusa HIV-1
Dziesięć dostępnych na rynku paneli serokonwersji zebranych od dawców poddanych plazmaferezie,
którzy przeszli serokonwersję z wytworzeniem przeciwciał przeciwko wirusowi HIV, przebadano za pomocą
testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Każdą próbkę testowano w stanie nierozcieńczonym i rozcieńczoną
w proporcji 1:6, aby symulować badanie w pulach dawców. Wyniki testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0
porównano z wynikami otrzymanymi za pomocą oznaczeń Abbott PRISM® HIV O Plus, Abbott PRISM
anti-HIV 1/2 i testem cobas® TaqScreen MPX.
Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w próbkach nierozcieńczonych wykrył RNA wirusa HIV przed
wykryciem przeciwciał przeciwko HIV w oznaczeniu Abbott PRISM HIV O Plus lub Abbott PRISM antiHIV 1/2 w 10 z 10 paneli średnio o 13,2 dnia wcześniej dla każdego z paneli. Test cobas® TaqScreen
MPX, v2.0 w próbkach nierozcieńczonych wykrył RNA wirusa HIV w tym samym elemencie panelu co
w przypadku wykrycia RNA wirusa HIV przy użyciu testu cobas® TaqScreen MPX w 5 z 10 paneli,
średnio o 5 dni wcześniej w 1 z 10 paneli i średnio o 4 dni później w 4 z 10 paneli.
06327052001-02PL
32
Doc Rev. 2.0
Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w 6-krotnie rozcieńczonych próbkach wykrył RNA wirusa HIV przed
wykryciem przeciwciał przeciwko HIV w oznaczeniu Abbott PRISM HIV O Plus lub Abbott PRISM
anti-HIV 1/2 w 10 z 10 paneli średnio o 13,4 dnia wcześniej dla każdego z paneli. Test cobas® TaqScreen
MPX, v2.0 w 6-krotnie rozcieńczonych próbkach wykrył RNA wirusa HIV w tym samym elemencie panelu
co w przypadku wykrycia RNA wirusa HIV przy użyciu testu cobas® TaqScreen MPX w 7 z 10 paneli,
wcześniej o średnio 3 dni w 1 z 10 paneli i później o średnio 3 dni w 2 z 10 paneli.
Panele, które były konsekwentnie reaktywne w teście cobas® TaqScreen MPX, v2.0, zaczynając od
pierwszego pobrania, zostały wykluczone z ostatecznych oszacowań dla minimalnej, średniej
i maksymalnej liczby dni wcześniejszego wykrycia niż w przypadku detekcji przeciwciał przeciwko HIV.
Tabela 14
Skuteczność testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0
w panelach serokonwersji dla wirusa HIV
Liczba dni od wykrycia poprzedzającego wykrycie przeciwciał przeciwko
wirusom HIV-1/2 lub wykrycie RNA wirusa HIV
Panele
serokonwersji
dla
wirusa HIV
Abbott PRISM HIV O Plus: Abbott PRISM anti-HIV 1/2:
nierozcieńczony
nierozcieńczony
Test cobas® TaqScreen
MPX: nierozcieńczony
i rozcieńczony
w stosunku 1:6
Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0
Nierozcieńczony
1:6
Nierozcieńczony
1:6
Nierozcieńczony
1
14
9
14
9
5
1:6
0
2
14
14
14
14
0
–2
3
12
12
12
12
–2
0
4
14
14
14
14
0
0
5
11
11
11
11
–3
–4
6*
14
14
14
14
–7*
0
7
9
9
9
9
0
0
8
14
14
14
14
0
0
9
15
15
15
15
0
3
10
15
22
15
22
4
0
Minimalnie
9
9
9
9
–7
–4
Średnio
13,2
13,4
13,2
13,4
–1,1
–0,3
Maksymalnie
22
22
22
22
5
3
* Równoczesne zakażenie wirusem HBV zostało wykryte w próbkach nierozcieńczonych i rozcieńczonych w stosunku 1:6 przy użyciu testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w tych samych
elementach panelu co w teście cobas® TaqScreen MPX, który wykazywał reaktywność „HIV”
w badaniu NAT. Dwa pozostałe panele wykazywały okresową reaktywność względem wirusa HBV, ale
nie miały wpływu na datę wykrycia wirusa HIV w badaniu NAT.
Panele serokonwersji dla wirusa HCV
Dwanaście dostępnych na rynku paneli serokonwersji zebranych od dawców poddanych plazmaferezie,
którzy przeszli serokonwersję z wytworzeniem przeciwciał przeciwko wirusowi HCV, przebadano za
pomocą testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Każdą próbkę testowano w stanie nierozcieńczonym i rozcieńczoną w proporcji 1:6, aby symulować badanie w pulach dawców. Wyniki testu cobas® TaqScreen
MPX, v2.0 porównano z wynikami otrzymanymi za pomocą oznaczeń Abbott PRISM® HCV, ORTHO®
HCV Version 3.0 ELISA Test System i testu cobas® TaqScreen MPX.
06327052001-02PL
33
Doc Rev. 2.0
Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w próbkach nierozcieńczonych wykrył RNA wirusa HCV przed
wykryciem przeciwciał przeciwko HCV w oznaczeniu Abbott PRISM HCV lub ORTHO HCV Version 3.0
ELISA Test System w 12 z 12 paneli średnio o 29,5 dni wcześniej dla każdego z paneli. Test
cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w próbkach nierozcieńczonych wykrył RNA wirusa HCV w tym samym
®
elemencie panelu co w przypadku wykrycia RNA wirusa HCV przy użyciu testu cobas TaqScreen MPX
w 12 z 12 paneli.
Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w 6-krotnie rozcieńczonych próbkach wykrył RNA wirusa HCV przed
wykryciem przeciwciał przeciwko HCV w oznaczeniu Abbott PRISM HCV lub ORTHO HCV Version 3.0
ELISA Test System w 12 z 12 paneli średnio o 29,5 dni wcześniej dla każdego z paneli. Test cobas®
TaqScreen MPX, v2.0 w 6-krotnie rozcieńczonych próbkach wykrył RNA wirusa HCV w tym samym
elemencie panelu co w przypadku wykrycia RNA wirusa HCV przy użyciu testu cobas® TaqScreen MPX
w 12 z 12 paneli.
pierwszego pobrania, zostały wykluczone z ostatecznych oszacowań dla minimalnej, średniej
i maksymalnej liczby dni wcześniejszego wykrycia niż w przypadku detekcji przeciwciał przeciwko HCV.
Tabela 15
®
Skuteczność testu cobas TaqScreen MPX, v2.0
w panelach serokonwersji dla wirusa HCV
Liczba dni od wykrycia poprzedzającego wykrycie przeciwciał przeciwko
wirusowi HCV lub wykrycie RNA wirusa HCV
Panele
serokonwersji
dla
wirusa HCV
Uwagi
i rozcieńczony
w stosunku 1:6
ORTHO HCV Version 3.0
ELISA Test System:
nierozcieńczone
Abbott PRISM HCV:
nierozcieńczone
Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0
Nierozcieńczony
1:6
Nierozcieńczony
1:6
1
A, B
12
12
23
23
0
0
2
A, B
30
30
32
32
0
0
23
23
23
23
0
0
3
A.
B.
Nierozcieńczony
1:6
4
A, B
25
25
25
25
0
0
5
A, B
28
28
28
28
0
0
6
A, B
4
4
4
4
0
0
7
A, B
11
11
11
11
0
0
8
A, B
24
24
24
24
0
0
9
A, B
7
7
18
18
0
0
10
33
33
33
33
0
0
11
32
32
32
32
0
0
12
30
30
30
30
0
0
Minimalnie
23
23
23
23
0
0
Średnio
29,5
29,5
29,5
29,5
0
0
Maksymalnie
33
33
33
33
0
0
®
Wynik testu cobas TaqScreen MPX, v2.0 dla nierozcieńczonych próbek był reaktywny podczas pierwszego pobrania
serii nierozcieńczonych próbek; został pominięty w obliczeniach końcowych.
®
Wynik testu cobas TaqScreen MPX, v2.0 dla rozcieńczonych próbek w stosunku 1:6 był reaktywny podczas pierwszego
pobrania serii nierozcieńczonych próbek; został pominięty w obliczeniach końcowych.
06327052001-02PL
34
Doc Rev. 2.0
Panele serokonwersji dla wirusa HBV
Dziesięć dostępnych na rynku paneli serokonwersji zebranych od dawców poddanych plazmaferezie,
którzy przeszli serokonwersję z wytworzeniem przeciwciał przeciwko antygenowi HBs przebadano za
pomocą testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Każdą próbkę testowano w stanie nierozcieńczonym
i rozcieńczoną w proporcji 1:6, aby symulować badanie w pulach dawców. Wyniki testu
cobas® TaqScreen MPX, v2.0 porównano z wynikami otrzymanymi za pomocą oznaczeń Abbott
PRISM® HBsAg, ORTHO® HBsAg ELISA Test System 3 i testu cobas® TaqScreen MPX.
®
Test cobas TaqScreen MPX, v2.0 w nierozcieńczonych próbkach wykrył DNA wirusa HBV przed
wykryciem antygenu HBs za pomocą oznaczenia Abbott PRISM HBsAg średnio o 14,9 dnia wcześniej
w 9 z 10 paneli, a w 1 z 10 paneli w 14 dni po wykryciu antygenu HBs. W porównaniu z oznaczeniem
ORTHO HBsAg ELISA Test System 3, test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w nierozcieńczonych
próbkach wykrył DNA wirusa HBV przed wykryciem antygenu Hbs w 10 z 10 paneli średnio o 21,9 dnia
wcześniej. Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w próbkach nierozcieńczonych wykrył DNA wirusa HBV
®
w tym samym elemencie panelu co w przypadku wykrycia DNA wirusa HBV przy użyciu testu cobas
TaqScreen MPX w 7 z 10 paneli i później o średnio 4,3 dnia w 3 z 10 paneli.
Test cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w 6-krotnie rozcieńczonych próbkach wykrył DNA wirusa HBV przed
wykryciem antygenu HBs za pomocą oznaczenia Abbott PRISM HBsAg średnio o 13,7 dnia wcześniej
w 6 z 10 paneli, w tym samym elemencie panelu w 3 z 10 paneli, a w 1 z 10 paneli – w 14 dni po
wykryciu antygenu HBs. W porównaniu z oznaczeniem ORTHO HBsAg ELISA Test System 3, test
®
cobas TaqScreen MPX, v2.0 w 6-krotnie rozcieńczonych próbkach wykrył DNA wirusa HBV przed wykryciem antygenu Hbs w 10 z 10 paneli średnio o 16,1 dnia wcześniej. Test cobas® TaqScreen MPX,
v2.0 w 6-krotnie rozcieńczonych próbkach wykrył DNA wirusa HBV w tym samym elemencie panelu co
w przypadku wykrycia DNA wirusa HBV przy użyciu testu cobas® TaqScreen MPX w 6 z 10 paneli,
wcześniej o średnio 8 dni w 3 z 10 paneli i później o średnio 10 dni w 1 z 10 paneli.
pierwszego pobrania, zostały wykluczone z ostatecznych oszacowań dla minimalnej, średniej i maksymalnej liczby dni wykrycia wcześniejszego niż w przypadku wykrycia antygenu HBs.
Tabela 16
®
Skuteczność testu cobas TaqScreen MPX, v2.0 w panelach serokonwersji dla wirusa HBV
Panele
serokonwersji
dla
wirusa HBV
Liczba dni od wykrycia poprzedzającego
wykrycie antygenu HBs lub wykrycie DNA wirusa HBV
ORTHO
HBsAg ELISA
Abbott PRISM HBsAg:
Uwagi
nierozcieńczone
Test System 3:
i rozcieńczony
nierozcieńczone
w stosunku 1:6
®
Test cobas TaqScreen MPX, v2.0
Nierozcieńczony 1:6 Nierozcieńczony
1:6
Nierozcieńczony 1:6
1
2
3
4
3
12
8
–14
0
12
0
–14
25
19
19
14
22
19
11
14
0
0
–2
0
4
0
–10
0
22
7
20
11
28
33
13
0
8
11
14
24
22
23
20
11
30
40
13
16
8
11
16
31
0
0
–7
0
–4
0
13
0
0
0
7
0
Minimalnie
–14
–14
11
8
–7
–10
Średnio
Maksymalnie
15
33
6,8
24
21,9
40
16,1
31
–1,6
0
1,4
13
5
6
7
8
9
10
A.
A
A
®
Wynik testu cobas TaqScreen MPX, v2.0 dla nierozcieńczonych próbek był reaktywny podczas pierwszego pobrania
serii nierozcieńczonych próbek; został pominięty w obliczeniach końcowych.
06327052001-02PL
35
Doc Rev. 2.0
Swoistość analityczna – mikroorganizmy potencjalnie dające reakcję krzyżową i zaburzające
oznaczenie
Swoistość analityczna testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 została oceniona przez badanie panelu
20 mikroorganizmów w liczbie 106 cząstek, kopii lub PFU/ml, w tym 13 izolatów wirusowych, 6 szczepów
bakteryjnych i 1 izolatu drożdży. Mikroorganizmy dodano do normalnego, pozbawionego wirusów
ludzkiego osocza i testowano z oraz bez wirusa HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV
dodanego w stężeniu 3 x granica wykrywalności testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 dla każdego wirusa.
®
Wyniki niereaktywne otrzymano za pomocą testu cobas TaqScreen MPX, v2.0 dla wszystkich
próbek mikroorganizmów bez dodanych wirusów HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub
HBV, z wyjątkiem jednej próbki, która była wstępnie reaktywna, lecz w powtórnych badaniach
okazała się niereaktywna.
Badane mikroorganizmy nie dają reakcji krzyżowej w teście cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Wyniki
reaktywne otrzymano dla wszystkich próbek mikroorganizmów z dodanym wirusem HIV-1 grupy M,
HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV. Badane mikroorganizmy nie wpływają na działanie testu cobas®
TaqScreen MPX, v2.0.
Tabela 17
Badane mikroorganizmy
Analityczna specyficzność – badane mikroorganizmy
Adenowirus 5
Ludzki wirus herpes 6 A
Candida albicans
Wirus cytomegalii
Ludzki wirus T-limfotropowy, typ I
Propionibacterium acnes
Wirus Epsteina-Barr
Wirus grypy typu A
Staphylococcus epidermidis
Wirus ospy wietrznej-półpaśca Wirus gorączki Zachodniego Nilu
Staphylococcus haemolyticus
Escherichia coli
Wirus opryszczki pospolitej
Wirus gorączki Denga, typ 1,
typu 1
szczep hawajski
Wirus Chikungunya
Streptococcus viridans
Wirus opryszczki pospolitej
typu 2
Wirus zapalenia wątroby
typu G
Staphylococcus aureus
Swoistość analityczna – inne stany chorobowe
Próbki osocza z każdej z następujących kategorii chorób (ludzki cytomegalowirus, wirus Epsteina-Barr,
wirus opryszczki pospolitej typu I, wirus opryszczki pospolitej typu 2, ludzki wirus T-limfotropowy typu I,
ludzki wirus T-limfotropowy typu II, ludzki wirus T-limfotropowy typu I/II, wirus zapalenia wątroby typu A,
wirus Zachodniego Nilu, parwowirus B19) zostały przetestowane z oraz bez wirusa HIV-1 grupy M, HIV-1
grupy O, HIV-2, HCV lub HBV dodanego w stężeniu 3 x granica wykrywalności testu cobas® TaqScreen
MPX, v2.0 dla każdego wirusa. Za pomocą testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 otrzymano niereaktywne
wyniki dla wszystkich stanów chorobowych zawartych w próbkach bez dodanego wirusa HIV-1 grupy M,
HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV. Za pomocą testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 otrzymano
reaktywne wyniki dla wszystkich stanów chorobowych zawartych w próbkach z dodanym wirusem HIV-1
grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV, z wyjątkiem 1 z 6 próbek wirusa HTLV 1/2, której wynik
dla wirusa HCV był niereaktywny. Wyżej wymienione stany chorobowe nie wpłynęły na czułość ani
swoistość testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0.
06327052001-02PL
36
Doc Rev. 2.0
Substancje potencjalnie wpływające na wynik testu
Endogenne substancje wpływające na wynik testu
Próbki osocza z nieprawidłowo wysokim poziomem trójglicerydów (do wartości 3300 mg/dl), hemoglobiny
(do wartości 500 mg/dl), niezwiązanej bilirubiny (do 50 mg/dl), albuminy (do 9,6 g/dl) oraz ludzkiego DNA
(do 0,4 mg/dl) zostały przetestowane z lub bez wirusa HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV i HBV
dodanego w stężeniu 3 x granica wykrywalności testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 dla każdego
wirusa. Wyżej wymienione substancje nie wpłynęły na czułość ani swoistość testu cobas® TaqScreen
MPX, v2.0.
Próbki osocza z krwinkami czerwonymi w nieprawidłowo wysokim stężeniu (do 10% obj.) zostały
przetestowane z oraz bez wirusa HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV dodanego
®
w stężeniu 3 x granica wykrywalności testu cobas TaqScreen MPX, v2.0 dla każdego wirusa. Osocze
z krwinkami czerwonymi dodanymi do 2,5% (obj.) nie wpłynęło na czułość ani swoistość detekcji wirusów
w teście cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Osocze z krwinkami czerwonymi dodanymi do 5,0% (obj.)
®
zmniejszyło czułość testu cobas TaqScreen MPX, v2.0 w detekcji wirusa HCV. Osocze z czerwonymi
krwinkami dodanymi do 7,5% (obj.) wpłynęło na czułość testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w detekcji
wirusów HBV i HCV. Wykrycie wirusów docelowych HIV wynosiło 97% w osoczu z krwinkami
czerwonymi dodanymi do 10% objętości. Gdy wirusy docelowe były obecne przy wartości 3 x granica
wykrywalności, czułość testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w detekcji kontroli wewnętrznej (IC) nie
uległa zmniejszeniu w osoczu z krwinkami czerwonymi dodanymi do 1,0% (obj.). Przy braku wirusów
docelowych czułość testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w detekcji kontroli wewnętrznej (IC) nie uległa
zmniejszeniu w osoczu z czerwonymi krwinkami dodanymi do 2,5% (obj.). Kontrola wewnętrzna (IC)
monitoruje wszystkie etapy procesu badania (przygotowanie próbki, amplifikację i detekcję) i nie zawodzi
w warunkach, które mogą mieć wpływ na skuteczność testu.
Substancje egzogenne wpływające na wynik testu
Normalne ludzkie próbki osocza, zawierające nieprawidłowo wysokie stężenie acetaminofenu
(1324 µmol/l), kwasu acetylosalicylowego (3,62 mmol/l), kwasu askorbinowego (342 µmol/l), atorwastatyny
(600 µg/l), fluoksetyny (11,2 µmol/l), ibuprofenu (2425 µmol/l), loratadyny (0,78 µmol/l), nadololu
(3,88 µmol/l), naproksenu (2170 µmol/l), paroksetyny (3,04 µmol/l), chlorowodorku fenylefryny (491 µmol/l)
i sertraliny (1,96 µmol/l) z oraz bez wirusa HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV dodanego
w stężeniu 3 x granica wykrywalności przebadano testem cobas® TaqScreen MPX, v2.0 pod kątem
każdego wirusa. Wyżej wymienione substancje egzogenne nie wpłynęły na czułość ani swoistość testu
®
cobas TaqScreen MPX, v2.0.
PRÓBKI POCHODZĄCE OD DAWCÓW NIEŻYJĄCYCH
Powtarzalność
Do dwudziestu próbek osocza z EDTA, pochodzących od pojedynczych dawców nieżyjących, dodano
jeden z wirusów HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV, używając drugorzędowych
standardów firmy Roche dla wirusa HIV-1 grupy M i HCV, pierwszorzędowych standardów firmy Roche
dla wirusa HIV-1 grupy O i HIV-2 i międzynarodowego standardu WHO dla wirusa HBV (NIBSC 97/746)
do stężenia końcowego wynoszącego w przybliżeniu 3 x granica wykrywania, odpowiednio dla każdego
wirusa i stopnia hemolizy dla każdej próbki. Pierwszorzędowe standardy firmy Roche dla RNA wirusa
HIV-1 grupy O i RNA wirusa HIV-2 są dostępnymi na rynku roztworami podstawowymi wirusa
hodowlanego, P/N 2420 (Boston Biomedica, Inc.) i nr kat. 10-27-000 (Advanced Biotechnologies, Inc.).
Standardy firmy Roche dla wirusa HIV-1 grupy O i wirusa HIV-2 oparto odpowiednio na panelach CBER
HIV-1 Subtype RNA Reference Panel #1 serii O1 i CBER HIV-2 RNA Lot Release Panel ISD. Nie są
aktualnie dostępne żadne międzynarodowe standardy dla RNA wirusa HIV-1 grupy O. Drugorzędowy
standard firmy Roche dla RNA wirusa HIV-1 grupy M to dostępny na rynku podstawowy wirus hodowlany
(HIV-1 LAV 8E5, PN 227 Boston Biomedica, Inc.) oparty na międzynarodowym standardzie nr 1 WHO
dla RNA wirusa HIV-1 NAT (NIBSC 97/650)37. Drugorzędowy standard firmy Roche dla wirusa HCV
został przygotowany w firmie Roche z dostępnej na rynku próbki klinicznej (Millennium Biotech Inc., Ft.
Lauderdale, FL) i jest oparty na międzynarodowym standardzie nr 2 WHO dla HCV RNA NAT
(NIBSC 96/798)33.
06327052001-02PL
37
Doc Rev. 2.0
Wirusy HIV-1 grupa M, HCV i HBV zostały opracowane łącznie, a wirusy HIV-1 grupa O i HIV-2 zostały
opracowane pojedynczo. Użyto 15 umiarkowanie zhemolizowanych i 5 silnie zhemolizowanych próbek
pochodzących od dawców nieżyjących. Ponadto do dwudziestu próbek osocza z EDTA pochodzących
od dawców żyjących dodano te same standardy do poziomu wynoszącego w przybliżeniu 3 x granica
wykrywania. Próbki pochodzące od dawców nieżyjących rozcieńczono w stosunku 1:5 za pomocą
rozcieńczalnika do próbek od dawców nieżyjących cobas® TaqScreen i przebadano, stosując procedurę
badania próbek pochodzących od dawców nieżyjących. Próbki pochodzące od dawców żyjących
rozcieńczono w stosunku 1:6 za pomocą osocza bez EDTA przy użyciu urządzenia pipetującego
Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD, jako część procedury testowania próbek pochodzących od
dawców żyjących w celu oceny pul z 6 próbek. Badanie przeprowadzono przy użyciu trzech serii
odczynników i dwóch par operator-urządzenie.
Wszystkie ważne dane dotyczące powtarzalności zostały przeanalizowane przez porównanie częstości
wyników reaktywnych próbek od dawców żyjących oraz dawców nieżyjących po dodaniu wirusów HIV-1
grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV lub HBV między seriami zestawów (tabela 18) i parami operatorurządzenie (tabela 19). Dokładna wartość p testu 2-stronnego została obliczona dla testu istotności
statystycznej różnicy między proporcjami reaktywności obserwowanej w przypadku próbek
pochodzących od dawców nieżyjących i żyjących. Nie zaobserwowano istotnych różnic. Dokładne
wartości p testu 2-stronnego przekraczające 0,05 nie były uznawane za istotne statystycznie.
Tabela 18
Porównanie wyników próbek pochodzących od dawców nieżyjących
oraz żyjących według serii odczynnika
Docelowy
wirus
Typ
dawcy
Dawca
nieżyjący
Dawca
żyjący
Dawca
nieżyjący
HIV-1
grupa O* Dawca
żyjący
Dawca
nieżyjący
HIV-2
Dawca
żyjący
Dawca
nieżyjący
HBV
Dawca
żyjący
Dawca
nieżyjący
HCV
Dawca
żyjący
HIV-1
grupa M
Seria nr 1
Seria nr 2
Seria nr 3
Całkowita
częstość
wyników
reaktywnych
39/40 97,5%
40/40 100%
39/40 97,5% 118/120 98,3%
40/40 100%
40/40 100%
40/40 100%
40/40 100%
39/40 97,5% 39/40 97,5% 118/120 98,3%
40/40 100%
40/40 100%
Wartość p testu
2-stronnego
próbek od
dawców
żyjących
w porównaniu
z próbkami
od dawców
nieżyjących
według wirusa
docelowego
0,2
120/120 100%
0,2
40/40 100%
120/120 100%
39/40 97,5% 39/40 97,5%
40/40 100%
118/120 98,3%
40/40 100%
40/40 100%
40/40 100%
120/120 100%
40/40 100%
40/40 100%
40/40 100%
120/120 100%
40/40 100%
40/40 100%
40/40 100%
120/120 100%
40/40 100%
40/40 100%
40/40 100%
120/120 100%
40/40 100%
40/40 100%
40/40 100%
120/120 100%
0,2
1,0
1,0
*Użyto 3 różnych serii ze względu na ponowne badanie dodatkowych 5 silnie zhemolizowanych próbek
wirusa HIV-1 grupy O.
06327052001-02PL
38
Doc Rev. 2.0
Tabela 19
Porównanie wyników próbek pochodzących od dawców nieżyjących
oraz żyjących według pary operator-urządzenie
Docelowy
wirus
HIV-1
grupa M
HIV-1
grupa O
HIV-2
HBV
HCV
Typ
próbki
Dawca
nieżyjący
Dawca
żyjący
Dawca
nieżyjący
Dawca
żyjący
Dawca
nieżyjący
Dawca
żyjący
Dawca
nieżyjący
Dawca
żyjący
Dawca
nieżyjący
Dawca
żyjący
Urządzenieoperator 2
Całkowita
częstość
wyników
reaktywnych
58/60 96,7%
60/60 100%
118/120 98,3%
60/60 100%
60/60 100%
120/120 100%
58/60 96,7%
60/60 100%
118/120 98,3%
60/60 100%
60/60 100%
120/120 100%
58/60 96,7%
60/60 100%
118/120 98,3%
60/60 100%
60/60 100%
120/120 100%
60/60 100%
60/60 100%
120/120 100%
60/60 100%
60/60 100%
120/120 100%
60/60 100%
60/60 100%
120/120 100%
60/60 100%
60/60 100%
120/120 100%
Urządzenieoperator 1
Wartość p testu
2-stronnego próbek od
dawców żyjących w
porównaniu z próbkami
od dawców nieżyjących
według wirusa
docelowego
0,2
0,2
0,2
1,0
1,0
Czułość analityczna w przypadku dawców nieżyjących
Badanie ograniczającego rozcieńczenia testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 w przypadku wirusów
docelowych HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, HCV i HBV w próbkach pochodzących od dawców
nieżyjących oceniono przy użyciu następujących standardów: Pierwszorzędowe standardy firmy
Roche dla wirusów HIV-1 grupy O i HIV-2, drugorzędowe standardy firmy Roche dla wirusów HIV-1
grupy M, HBV i HCV. Drugorzędowy standard firmy Roche dla DNA wirusa HBV to dostępny na
rynku podstawowy wirus hodowlany (Eurohep HBV DNA Standard No. 1 genotype A [adw2]) oparty
na międzynarodowym standardzie WHO dla DNA wirusa HBV NAT (NIBSC 97/746)32. Wirusy HIV-1
grupa M, HCV i HBV zostały opracowane łącznie, a wirusy HIV-1 grupa O i HIV-2 zostały
opracowane pojedynczo.
Dla każdego celu przygotowano siedmiu członków panelu przez rozcieńczenie standardów wirusowych
HIV-1 grupy M, HCV i HBV, HIV-1 grupy O lub HIV-2 do trzech unikalnych umiarkowanie zhemolizowanych pul z EDTA pochodzących od dawców nieżyjących badanych przy użyciu trzech serii testu
cobas® TaqScreen MPX, v2.0, i dwóch unikatowych silnie zhemolizowanych pul z EDTA pochodzących
od dawców nieżyjących badanych przy użyciu jednej serii testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0.
Umiarkowanie zhemolizowane pule obejmowały pule pojedynczych próbek z ujemnymi wynikami badań
wirusowych pochodzących od dawców nieżyjących wykazujących zabarwienie słomkowe do różowego.
Silnie zhemolizowane pule obejmowały pule pojedynczych próbek z ujemnymi wynikami badań
wirusowych pochodzących od dawców nieżyjących wykazujących zabarwienie czerwone do brązowego.
Wyniki podsumowano w tabeli 20.
06327052001-02PL
39
Doc Rev. 2.0
Tabela 20
Podsumowanie czułości analitycznej dla wirusa HIV-1 grupy M
w umiarkowanie zhemolizowanej macierzy pochodzącej od dawców nieżyjących
Stężenie
wirusa HIV-1
grupy M
(IU/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
750
500
375
250
125
75
25
61
58
60
58
47
42
19
63
63
63
64
64
64
63
96,8%
92,1%
95,2%
90,6%
73,4%
65,6%
30,2%
Dolny zakres
95-procentowego
przedziału
ufności
(jednostronny)
90,3%
84,0%
88,2%
82,3%
62,9%
54,7%
20,7%
Tabela 21
Podsumowanie czułości analitycznej dla wirusa HIV-1 grupy M
w silnie zhemolizowanej macierzy pochodzącej od dawców nieżyjących
Stężenie
wirusa HIV-1
grupy M
(IU/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
750
500
375
250
125
75
25
40
40
38
40
25
20
14
40
40
40
40
40
41
43
100,0%
100,0%
95,0%
100,0%
62,5%
48,8%
32,6%
Dolny zakres
95-procentowego
przedziału
ufności
(jednostronny)
92,8%
92,8%
85,1%
92,8%
48,3%
35,1%
20,9%
Tabela 22
Podsumowanie czułości analitycznej dla wirusa HCV
Stężenie
wirusa HCV
(IU/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
120
80
60
40
20
12
4
62
58
61
52
41
22
9
63
63
63
63
64
63
63
98,4%
92,1%
96,8%
82,5%
64,1%
34,9%
14,3%
06327052001-02PL
40
Dolny zakres
95-procentowego
przedziału
ufności
(jednostronny)
92,7%
84,0%
90,3%
72,8%
53,1%
25,0%
7,7%
Doc Rev. 2.0
Tabela 23
Podsumowanie czułości analitycznej dla wirusa HCV
Stężenie
wirusa HCV
(IU/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
120
80
60
40
20
12
4
40
39
39
37
21
17
5
40
40
41
40
40
40
40
100,0%
97,5%
95,1%
92,5%
52,5%
42,5%
12,5%
Dolny zakres
95-procentowego
przedziału
ufności
(jednostronny)
92,8%
88,7%
85,4%
81,7%
38,5%
29,2%
5,1%
Tabela 24
Podsumowanie czułości analitycznej dla wirusa HBV
Stężenie
wirusa HBV
(IU/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
60
40
30
20
10
6
2
63
62
60
52
33
23
12
63
63
63
64
64
63
63
100,0%
98,4%
95,2%
81,3%
51,6%
36,5%
19,0%
Dolny zakres
95-procentowego
przedziału
ufności
(jednostronny)
95,4%
92,7%
88,2%
71,4%
40,6%
26,4%
11,4%
Tabela 25
Podsumowanie czułości analitycznej dla wirusa HBV
Stężenie
wirusa HBV
(IU/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
150
100
75
50
25
15
5
40
40
41
39
33
21
13
40
40
41
40
40
41
43
100,0%
100,0%
100,0%
97,5%
82,5%
51,2%
30,2%
06327052001-02PL
41
Dolny zakres
95-procentowego
przedziału
ufności
(jednostronny)
92,8%
92,8%
93,0%
88,7%
69,6%
37,4%
18,9%
Doc Rev. 2.0
Tabela 26
Podsumowanie czułości analitycznej dla wirusa HIV-1 grupy O
Stężenie
wirusa HIV-1
grupy O
(kopie/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
360
240
180
120
60
36
12
60
60
64
61
54
56
29
63
63
64
63
63
63
63
95,2%
95,2%
100,0%
96,8%
85,7%
88,9%
46,0%
Dolny zakres
95-procentowego
przedziału
ufności
(jednostronny)
88,2%
88,2%
95,4%
90,3%
76,4%
80,1%
35,2%
Tabela 27
Podsumowanie czułości analitycznej dla wirusa HIV-1 grupy O
Stężenie
wirusa HIV-1
grupy O
(kopie/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
360
240
180
120
60
36
12
40
36
38
36
37
34
8
40
40
40
40
40
40
40
100,0%
90,0%
95,0%
90,0%
92,5%
85,0%
20,0%
Dolny zakres
95-procentowego
przedziału
ufności
(jednostronny)
92,8%
78,6%
85,1%
78,6%
81,7%
72,5%
10,4%
Tabela 28
Podsumowanie czułości analitycznej dla wirusa HIV-2
Stężenie
wirusa HIV-2
(kopie/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
600
400
300
200
100
60
20
62
63
58
60
34
28
12
62
64
63
63
63
63
63
100,0%
98,4%
92,1%
95,2%
54,0%
44,4%
19,0%
06327052001-02PL
42
Dolny zakres
95-procentowego
przedziału
ufności
(jednostronny)
95,3%
92,8%
84,0%
88,2%
42,9%
33,7%
11,4%
Doc Rev. 2.0
Tabela 29
Podsumowanie czułości analitycznej dla wirusa HIV-2
Stężenie
wirusa HIV-2
(kopie/ml)
Liczba
wyników
dodatnich
Liczba
pojedynczych
badań
%
wyników
dodatnich
600
400
300
200
100
60
20
43
38
38
38
27
17
10
43
39
40
40
40
40
40
100,0%
97,4%
95,0%
95,0%
67,5%
42,5%
25,0%
Dolny zakres
95-procentowego
przedziału
ufności
(jednostronny)
93,3%
88,4%
85,1%
85,1%
53,4%
29,2%
14,2%
Czułość przy użyciu próbek klinicznych
HIV-1 grupy M, HCV, HBV
Sześćdziesiąt wybranych losowo próbek osocza z EDTA, pochodzących od dawców nieżyjących,
ujemnych dla HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O, HIV-2, RNA HCV i DNA HBV oraz sklasyfikowanych jako
umiarkowanie zhemolizowane (kolor od słomkowego do różowego) lub silnie zhemolizowane (kolor od
czerwonego do brązowego) podzielono równo na 5 mieszanych grup próbek klinicznych, obejmujących
12 próbek na grupę. Do każdej próbki pochodzącej od dawcy nieżyjącego w grupie dodano trzy
niepowtarzalne próbki zawierające wirusa, po jednej z wirusem HIV-1 grupy M, HCV oraz HBV, tzn.
zakażone jednym wirusem próbki kliniczne od dawcy żyjącego o znanym mianie do stężenia końcowego
wynoszącego w przybliżeniu trzykrotność granicy wykrywalności (3 x LOD) dla odpowiedniego wirusa
i stopnia hemolizy. Każda próbka pochodząca od dawcy nieżyjącego została ręcznie rozcieńczona
w stosunku 1:5 za pomocą rozcieńczalnika do próbek od dawców nieżyjących cobas® TaqScreen
i przebadana stosując procedurę badania próbek pochodzących od dawców nieżyjących. W badaniu tym
użyto trzech serii odczynników, a każdą grupę podzielono między serie w celu uzyskania łącznie
20 próbek na serię zestawu odczynnika na wirus docelowy. Częstość wyników reaktywnych wynosiła
93,3% (95% przedział ufności: 84,07–97,38%) dla wirusa HIV-1 grupy M i 100% (95% przedział ufności:
®
94–100%) dla wirusów HCV i HBV z testem cobas TaqScreen MPX, v2.0. Podsumowanie wyników
tych testów przedstawiono w Tabeli 30.
HIV-1 grupa O, HIV-2
W przypadku wirusów docelowych HIV-1 grupy O i HIV-2 użyto pierwszorzędowych standardów firmy
Roche w celu dodania do próbek osocza z EDTA pochodzących od dawców nieżyjących w stężeniu
wynoszącym w przybliżeniu 3 x LOD dla odpowiedniego wirusa i stopnia hemolizy (próbka umiarkowanie
zhemolizowana lub próbka silnie zhemolizowana). W rezultacie te wirusy docelowe stanowiły tylko jedną
grupę mieszaną. Każda próbka pochodząca od dawcy nieżyjącego została ręcznie rozcieńczona
i przebadana stosując procedurę badania próbek pochodzących od dawców nieżyjących. W badaniu tym
użyto trzech serii odczynników, a każdą grupę podzielono między serie w celu uzyskania łącznie
12 próbek na serię zestawu odczynnika na wirus docelowy. W przypadku dwunastu przebadanych
próbek dla wirusów HIV-1 grupy O i HIV-2, częstość wyników reaktywnych wynosiła 91,7%
(95% przedział ufności: 61,5–99,8%) z testem cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Podsumowanie wyników
tych testów przedstawiono w tabeli 30.
Dokładna wartość p testu 2-stronnego została obliczona dla testu istotności statystycznej różnicy
między proporcjami reaktywności obserwowanej dla każdego celu i teoretycznej reaktywności 95%.
06327052001-02PL
43
Doc Rev. 2.0
Tabela 30
®
Podsumowanie wyników czułości dla testu cobas TaqScreen MPX, v2.0
dla próbek pochodzących od dawców nieżyjących umiarkowanie zhemolizowanych (MH)
i silnie zhemolizowanych (HH)
Seria
odczynnika
Seria nr 1
Seria nr 2
Seria nr 3
Czułość
Stopień
hemolizy
grupa M
HIV-1
grupa O
HIV-2
HBV
HCV
MH
13/14
4/4
3/3
14/14
14/14
HH
6/6
NT
1/1
6/6
6/6
Razem
19/20
4/4
4/4
20/20
20/20
MH
14/15
3/3
3/3
15/15
15/15
HH
5/5
1/1
1/1
5/5
5/5
Razem
19/20
4/4
4/4
20/20
20/20
MH
15/16
3/4
3/4
16/16
16/16
HH
3/4
NT
NT
4/4
4/4
Razem
18/20
3/4
3/4
20/20
20/20
Procent
reaktywności
95%
przedział
ufności
Wartość
p testu
2-stronnego
HIV-1
93,3%*
91,7%*
91,7%*
100%
100%
84,07% –
97,38%
61,5% –
99,8%
61,5% –
99,8%
94,0 –
100%
94,0 –
100%
0,8
0,8
0,8
0,9
0,9
* Całkowita czułość wobec wirusa HIV pochodzącego od dawców nieżyjących wynosi
78/84, 92,9%.
NT oznacza, że wirus nie był testowany przy wykazanym poziomie hemolizy. Całkowita
wartość dla wirusów HIV-1 grupy O i HIV-2 została zachowana we wszystkich 12 próbkach.
06327052001-02PL
44
Doc Rev. 2.0
Swoistość
Osocze od dawcy nieżyjącego
Sześćdziesiąt próbek osocza pochodzących od pojedynczych seroujemnych dawców żyjących
(w stanie przedśmiertnym), i sześćdziesiąt (39 umiarkowanie zhemolizowanych i 21 silnie zhemolizowanych) próbek osocza z EDTA pochodzących od dawców nieżyjących podzielono na trzy grupy
i każdą grupę próbek przebadano przy użyciu jednej z trzech serii zestawów testu cobas®
TaqScreen MPX v2.0. Próbki pochodzące od dawców nieżyjących zostały ręcznie rozcieńczone
i przebadane przy użyciu procedury badania próbek od dawców nieżyjących.
Zarówno w przypadku próbek od dawców żyjących, jak i nieżyjących przy użyciu trzech zestawów
przebadano sześćdziesiąt ważnych powtórzeń. Jedna z próbek od dawcy żyjącego była wstępnie
reaktywna dla wirusa HCV. Badanie potwierdzające przy użyciu testu cobas® TaqScreen MPX Test
było niereaktywne, a próbka została zachowana w analizie. Dokładna wartość p testu 2-stronnego
została obliczona dla testu istotności statystycznej różnicy między proporcjami braku reaktywności
obserwowanej w przypadku próbek pochodzących od dawców nieżyjących i żyjących. Podsumowanie wyników badania swoistości przedstawiono w tabeli 31.
Tabela 31
®
Podsumowanie wyników badania swoistości testu cobas TaqScreen MPX, v2.0
wobec próbek pochodzących od dawców nieżyjących
Seria
odczynnika
Próbki pochodzące od dawców
nieżyjących
(rozcieńczone w stosunku 1:5 za
pomocą rozcieńczalnika do
próbek od dawców nieżyjących
cobas® TaqScreen)
Liczba
Liczba wyników
ważnych
niereaktywnych
wyników
Próbki pochodzące od dawców
żyjących (nierozcieńczone)
Liczba
ważnych
wyników
Liczba wyników
niereaktywnych
Seria nr 1
20
20
20
20
Seria nr 2
20
20
20
19
Seria nr 3
20
20
20
20
Razem
60
60
60
59
Swoistość
Wartość p
testu
2-stronnego
100%
98,3%
0,5
Surowica od dawcy nieżyjącego
Sześćdziesiąt pojedynczych próbek surowicy (46 umiarkowanie zhemolizowanych i 14 silnie
zhemolizowanych) pochodzących od dawców nieżyjących podzielono na trzy grupy i każdą grupę
próbek przebadano przy użyciu jednej z trzech serii zestawów testu cobas® TaqScreen MPX v2.0.
Próbki pochodzące od dawców nieżyjących zostały ręcznie rozcieńczone w stosunku 1:5 za pomocą
rozcieńczalnika do próbek od dawców nieżyjących cobas® TaqScreen i przebadane przy użyciu
procedury badania próbek od dawców nieżyjących. Wszystkie wyniki były niereaktywne dla
100% swoistości w próbkach surowicy pochodzących od dawców nieżyjących.
06327052001-02PL
45
Doc Rev. 2.0
Korelacja dla próbek od dawców nieżyjących pomiędzy testami cobas® TaqScreen MPX i cobas®
TaqScreen MPX, v2.0
Wydajność testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 i testu cobas® TaqScreen MPX oceniano przy użyciu
50 umiarkowanie zhemolizowanych i 10 silnie zhemolizowanych próbek pobranego na EDTA osocza
pochodzącego od osób nieżyjących z dodanym standardem pierwszorzędowym lub drugorzędowym
(opisane wcześniej) do stężenia końcowego około trzy razy przekraczającego granicę wykrywania
(3X LOD) dla każdego odpowiedniego wirusa, poziomu hemolizy i testu. Wirusy HIV-1 grupy M, HCV
i HBV były pojedynczo dodawane do próbek pochodzących od osób nieżyjących w celu badania
z jedną serią odczynnika testu cobas® TaqScreen MPX. Wirusy HIV-1 grupy M, HCV i HBV były
dodawane jednocześnie, a wirusy HIV-1 grupy O i HIV-2 były dodawane pojedynczo do próbek
pochodzących od osób nieżyjących w celu badania z trzema seriami odczynnika testu cobas®
TaqScreen MPX Test, v2.0. Dokładna wartość p testu 2-stronnego była obliczana w celu zbadania
istotności statystycznej różnicy między proporcjami reaktywności obserwowanych dla każdego celu
z testami cobas® TaqScreen MPX i cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Podsumowanie wyników
przedstawiono w Tabeli 32.
Tabela 32
Porównanie czułości testów cobas® TaqScreen MPX i cobas® TaqScreen MPX, v2.0
przy użyciu pojedynczych próbek pochodzących od osób nieżyjących przy ~3X LOD
Test cobas®
TaqScreen MPX
Test cobas®
TaqScreen MPX, v2.0
Wartość p testu
2-stronnego próbek
od dawców nieżyjących
według wirusa docelowego
HIV-1 grupa M
(60/60) 100%
(58/60) 97%
0,5
HIV-1 grupa O
(59/60) 98%
(59/60) 98%
0,5
HIV-2
(57/60) 95%
(59/60) 98%
0,6
HBV
(57/60) 95%
(59/60) 98%
0,5
HCV
(59/60) 98%
(59/60) 98%
1,0
Procent reaktywności
Docel. typ
06327052001-02PL
46
Doc Rev. 2.0
Porównanie surowicy i osocza od osoby nieżyjącej
Równoważność skuteczności testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 podczas badania różnych macierzy
próbek pochodzących od osób nieżyjących oceniano badając dwadzieścia par próbek od osób
nieżyjących, gdzie każdy zestaw zawierał jedną próbkę surowicy od osoby nieżyjącej i jedną próbkę
osocza od osoby nieżyjącej pobranej na K2 EDTA od pojedynczego dawcy. Piętnaście zestawów próbek
było umiarkowanie zhemolizowanych, a pięć było silnie zhemolizowanych. Każda para próbek surowicy
i osocza od dawców nieżyjących była dodawana do ~3X LOD wirusa HIV-1 grupy M, HIV-1 grupy O lub
HIV-2, a następnie opracowywana przed badaniem z ~3X LOD wirusa HBV i ~3X LOD wirusa HCV
(10 powtórzeń na próbkę) z testem cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Dokładna wartość p testu
2-stronnego została obliczona dla testu istotności statystycznej różnicy między proporcjami reaktywności
obserwowanej w przypadku próbek surowicy i osocza pochodzących od dawców nieżyjących.
Podsumowanie wyników badania swoistości przedstawiono w tabeli 33.
Tabela 33
Wyniki obserwowane w przypadku silnie lub umiarkowanie zhemolizowanych próbek surowicy
i osocza pochodzących od osób nieżyjących.
Docel.
typ
Stopień
hemolizy
Wartość p testu
2-stronnego dla
Typ
Liczba
Częstość
Liczba
hemolizy i typu
reaktywnych wyników
próbek od dawców
badań
próbek
reaktywnych
nieżyjących według
wirusa docelowego
HIV-1
grupa M
HIV-1
grupa O
HIV-2
HBV
HCV
Silnie
zhemolizowane
Umiarkowanie
zhemolizowane
Silnie
zhemolizowane
Umiarkowanie
zhemolizowane
Silnie
zhemolizowane
Umiarkowanie
zhemolizowane
Osocze
20
19
95%
Surowica
Osocze
20
100
20
97
100%
97%
Surowica
100
100
100%
Osocze
10
10
100%
Surowica
Osocze
Surowica
10
30
30
9
30
30
90%
100%
100%
Osocze
20
19
95%
Surowica
Osocze
Surowica
20
20
20
20
20
20
100%
100%
100%
0,5
0,09
0,5
1,0
0,5
1,0
Osocze
50
50
100%
Umiarkowanie
zhemolizowane
Surowica
Osocze
Surowica
50
150
150
50
150
150
100%
100%
100%
Silnie
zhemolizowane
Osocze
Surowica
50
50
50
50
100%
100%
1,0
Umiarkowanie
zhemolizowane
Osocze
Surowica
150
150
149
150
99,3%
100%
0,5
Silnie
zhemolizowane
06327052001-02PL
47
1,0
1,0
Doc Rev. 2.0
Skuteczność kliniczna
Korelacja pomiędzy testem cobas® TaqScreen MPX i testem cobas® TaqScreen MPX, v2.0
Skuteczność testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 i testu cobas® TaqScreen MPX oceniano przy użyciu
100 seropozytywnych próbek dla wirusów HIV-1 grupy M, HCV i HBV i około 100 próbek od seronegatywnych dawców. Próbki seropozytywne badano w postaci nierozcieńczonej i rozcieńczone
w stosunku 1:6.
Testy cobas® TaqScreen MPX, v2.0 i cobas® TaqScreen MPX miały równoważną skuteczność
u zdrowych seronegatywnych dawców krwi. Oba testy dały 100 niereaktywnych wyników, co odpowiada
100-procentowej swoistości.
Testy cobas® TaqScreen MPX, v2.0 i cobas® TaqScreen MPX były zgodne w przypadku
297 z 300 próbek podczas badania próbek nierozcieńczonych. Dwie spośród tych próbek uzyskały
zgodne wyniki niereaktywne w obu testach. Trzy spośród 300 próbek były niereaktywne w teście cobas®
TaqScreen MPX, v2.0, ale były reaktywne w teście cobas® TaqScreen MPX. Całkowita zgodność
wyniosła 99,0%.
Tabela 34
Nierozcieńczone próbki seropozytywne
®
Test cobas
TaqScreen
MPX, v2.0
Test cobas®
TaqScreen MPX
+
+
99
99,0%
100
100,0%
96
96,0%
295
98,3%
–
–
1
1,0%
0
0,0%
1
1,0%
2
0,7%
+
–
0
0,0%
0
0,0%
0
0,0%
0
0,0%
–
+
0
0,0%
0
0,0%
3*
3,0%
3
1,0%
100
100,0%
100
100,0%
100
100,0%
Razem
HIV-1
HBV
HCV
Razem
300 100,0%
* Trzy próbki seropozytywne dla wirusa HCV, zbadane w postaci nierozcieńczonej, były niezgodne
w teście MPX v2.0 i teście MPX. Po rozcieńczeniu w stosunku 1:6 wszystkie 3 próbki dawały wyniki
niereaktywne w obu testach, wskazując na niskie miano w tych próbkach.
Testy cobas® TaqScreen MPX, v2.0 i cobas® TaqScreen MPX były zgodne w przypadku 296 spośród
300 próbek podczas badania rozcieńczonych próbek. Dziewięć próbek uzyskało zgodne wyniki
niereaktywne w obu testach. Dwie próbki były reaktywne w teście cobas® TaqScreen MPX, ale były
niereaktywne w teście cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Dwie próbki były reaktywne w teście cobas®
TaqScreen MPX, v2.0, ale były niereaktywne w teście cobas® TaqScreen MPX. Całkowita zgodność
wyniosła 98,7%.
06327052001-02PL
48
Doc Rev. 2.0
Tabela 35
Rozcieńczone próbki seropozytywne
Test cobas®
TaqScreen
MPX, v2.0
Test cobas®
TaqScreen
MPX
+
+
93
93,0%
99
99,0%
95
95%
287
95,7%
–
–
3
3,0%
1
1,0%
5
5,0%
9
3,0%
+
–
2*
2,0%
0
0,0%
0
0,0%
2
0,7%
–
+
2**
2,0%
0
0,0%
0
0,0%
2
0,7%
100
100,0%
100
100,0%
100
100,0%
300
100,0%
Razem
HIV-1
HBV
HCV
Razem
* Dwie próbki zbadane w postaci nierozcieńczonej były reaktywne z testami cobas® TaqScreen MPX,
®
v2.0 i cobas TaqScreen MPX. Po rozcieńczeniu w stosunku 1:6 obie próbki dawały wyniki
niereaktywne w teście MPX, wskazując na niskie miano w tych próbkach.
** Dwie próbki seropozytywne dla wirusa HIV-1 po rozcieńczeniu w stosunku 1:6 dawały w testach
cobas® TaqScreen MPX, v2.0 i cobas® TaqScreen MPX niezgodne wyniki. Obie próbki zbadane
w postaci nierozcieńczonej były reaktywne z testami cobas® TaqScreen MPX, v2.0 i cobas®
TaqScreen MPX. W teście MPX, v2.0 wykazano, że jedna z 2 próbek była współzakażona wirusem
HBV, gdy badanie wykonano w postaci nierozcieńczonej i w rozcieńczeniu w stosunku 1:6.
Obecność wirusa HBV została potwierdzona przez analizę sekwencji. Reaktywność testu
cobas® TaqScreen MPX w tym konkretnym przypadku próbki mogła być spowodowana obecnością
wirusa HBV lub wirusa HIV-1 grupy M albo obu jednocześnie. Druga próbka, badana w postaci
nierozcieńczonej, był reaktywna zarówno w teście cobas® TaqScreen MPX, v2.0, jak i w teście
cobas® TaqScreen MPX, podczas gdy w rozcieńczeniu 1:6 była reaktywna tylko w teście MPX.
Czułość kliniczna w przypadku wirusów HIV, HBV i HCV
Czułość kliniczną testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0 oceniono z użyciem 600 próbek od pacjentów,
które były seropozytywne dla wirusa HIV-1 (200 próbek), HBV (200 próbek) lub HCV (200 próbek).
Czułość kliniczna przy użyciu nierozcieńczonych próbek wyniosła 98,5%, 100% i 97,0% odpowiednio
dla wirusów HIV-1, HBV i HCV.
Tabela 36
Czułość kliniczna w przypadku próbek seropozytywnych
®
Test cobas TaqScreen MPX, v2.0
Próbki
seropozytywne
Liczba przebadanych Liczba reaktywnych
próbek*
próbek
Odsetek
czułości
HIV-1
200
197
HBV
200
200
98,5%
100%
HCV
200
194
97,0%
RAZEM
600
591
98,5%
* Obejmuje 100 próbek na każdy wirus HIV-1, HBV i HCV opisany w tabeli 17.
Dodatkowe 190 próbek seropozytywnych dla wirusa HIV-2 badano przy użyciu testu cobas® TaqScreen
MPX, v2.0. Łącznie 104 ze 190 próbek było reaktywnych przy czułości klinicznej 54,7% w odniesieniu do
testu serologicznego. Spośród 86 niereaktywnych próbek żadna nie była reaktywna przy użyciu
alternatywnej metody ilościowej NAT (test używany wyłącznie w badaniach naukowych, opracowany
przez dr. Florence'a Damonda z Hopital Bichat Claude Bernard).38
Dodatkowe 11 próbek seropozytywnych dla wirusa HIV-1 grupy O po rozcieńczeniu w stosunku
1:6 zbadano za pomocą testu cobas® TaqScreen MPX, v2.0. Próbki były badane po rozcieńczeniu
w stosunku 1:6 ze względu na ograniczoną objętość. Łącznie 8 z 11 próbek było reaktywnych przy
czułości klinicznej 72,7% w odniesieniu do testu serologicznego. 3 próbki niereaktywne wykazywały
wiremię poniżej granicy wykrywania testu Abbott Real Time HIV-1 (<60 kopii/ml) i żadna z tych trzech
próbek nie była reaktywna z testem cobas® TaqScreen MPX.
06327052001-02PL
49
Doc Rev. 2.0
PIŚMIENNICTWO
1. Kahn JO, Walker BD. Current Concepts: acute human immunodeficiency virus type 1 infection. N
Engl J Med. 1998; 339:33-39.
2. McCutchan FE. Global Epidemiology of HIV. Journal of Medical Virology, 78:S7-S12 (2006).
3. Centers for Disease Control and Prevention (www.cdc.gov). Fact Sheet – Human Immunodeficiency
Virus Type 2. October 1998.
4. Reeves JD and Doms WR. Human Immunodeficiency Virus Type 2. Journal of General Virology
(2002), 83:1253-1265.
5. Choo Q-L, Weiner AJ, Overby LR, et al. Hepatitis C virus: the major causative agent of viral non-A,
non-B hepatitis. Br Med Bull. 1990; 46(2):423-441.
6. Alter HJ. Descartes before the horse: I clone, therefore I am: the hepatitis C virus in current
perspective. Ann Intern Med. 1991; 115(8):644-649.
7. Chisari FV, Ferrari C. Viral Hepatitis. In: Nathanson N et al., eds. Viral Pathogenesis, Philadelphia,
Lippincott-Raven, 1997: 745-748.
8. Hollinger FB, Liang TJ. Hepatitis B Virus. In: Knipe DM et al., eds. Fields Virology, 4th ed.
Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins, 2001: 2971-3036.
9. Mahoney FJ, Kane M. Hepatitis B Vaccine. In: Plotkin SA and Orenstein WA, eds. Vaccines, 3rd ed.
Philadelphia, W.B. Saunders Company, 1999: 158-182.
10. Viral Hepatitis Prevention Board. Prevention and Control of Hepatitis B in the Community.
Communicable Disease Series, 1996, 1.
11. World Health Organization. Introduction of Hepatitis B Vaccine into Childhood Immunization Services.
Geneva, WHO, 2001 (unpublished document WHO/V&B/01.31 available on request from
Department of Vaccines and Biologicals, World Health Organization, 1211 Geneva 27, Switzerland).
12. Murthy KK, Henrard DR, Eichberg JW, et al. Redefining the HIV-infectious window period in the
chimpanzee model: evidence to suggest that viral nucleic acid testing can prevent blood-borne
transmission. Transfusion. 1999; 39:688-693.
13. Stramer SL, Glynn SA, Kleinman SH, et al. Detection of HIV-1 and HCV infections among antibodynegative blood donors by nucleic acid-amplification testing. N Engl J Med. 2004; 351:760-768.
14. Busch MP, Glynn SA, Stramer SL, et al. A new strategy for estimating risks of transfusion-transmitted
viral infections based on rates of detection of recently infected donors. Transfusion. 2005; 45:254264.
15. Offergeld R, Faensen D, Ritter S, Hamouda O. Human immunodeficiency virus, hepatitis C and
hepatitis B infections among blood donors in Germany 2000-2002: risk of virus transmission and the
impact of nucleic acid amplification testing. Euro Surveill. 2005; 10(2):8-11.
16. Hitzler WE, Runkel S. Routine HCV PCR screening of blood donations to identify early HCV infection
in blood donors lacking antibodies to HCV. Transfusion. 2001; 41:333-337.
17. Roth WK, Weber M, Petersen D, et al. NAT for HBV and anti-HBc testing increase blood safety.
Transfusion. 2002; 42:869-875.
18. Biswas R, Tabor E, Hsia CC, et al. Comparative sensitivity of HBV NATs and HBsAg assays for
detection of acute HBV infection. Transfusion. 2003; 43:788-798.
19. Minegishi K, Yoshikawa A, Kishimoto S, et al. Superiority of minipool nucleic acid amplification
technology for hepatitis B virus over chemiluminescence immunoassay for hepatitis B surface
antigen screening. Vox Sang. 2003; 84:287-291.
20. Kleinman SH, Strong DM, Tegtmeier GE, et al. Hepatitis B virus (HBV) DNA screening of blood
donations in minipools with the COBAS® AmpliScreen HBV test. Transfusion. 2005; 45:1247-1257.
06327052001-02PL
50
Doc Rev. 2.0
21. Busch MP, Lee LL, Satten GA, et al. Time course of detection of viral and serologic markers
preceding human immunodeficiency type 1 seroconversion: implications for screening blood and
tissue donors. Transfusion. 1995; 35:91-97.
22. Yoshikawa A, Gotanda Y, Itabashi M, et al. Hepatitis B NAT virus-positive blood donors in the early
and late stages of HBV infection: analyses of the window period and kinetics of HBV DNA. Vox Sang.
2005; 88:77-86.
23. Comanor L and Holland P. Hepatitis B virus blood screening: unfinished agendas. Vox Sanguinis
(2006) 91:1-12.
24. Longo MC, Berninger MS, Hartley JL. Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over
contamination in polymerase chain reactions. Gene. 1990; 93:125-128.
25. Savva R, McAuley-Hecht K, Brown T, Pearl L. The structural basis of specific base-excision repair by
uracil-DNA glycosylase. Nature. 1995; 373:487-493.
26. Mol CD, Arvai AS, Slupphaug G, et al. Crystal structure and mutational analysis of human uracilDNA glycosylase: structural basis for specificity and catalysis. Cell. 1995; 80:869-878.
27. Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R. Simultaneous amplification and detection of specific
DNA sequences. Biotechnology (NY). 1992; 10:413-417.
28. Heid CA, Stevens J, Livak JK, Williams PM. Real time quantitative PCR. Genome Res. 1996; 6:986994.
29. Richmond JY, McKinney RW, eds. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS
Publication Number (CDC) 99-8395, 1999.
30. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of Laboratory Workers from
Occupationally Acquired Infections. Approved Guideline-Third Edition. CLSI Document M29-A3.
Wayne, PA:CLSI, 2005.
31. International Air Transport Association, Dangerous Goods Regulations. 41st ed. Quebec, Canada.
2000.
32. Saldanha J, Gerlich W, Lelie N, Dawson P, Heermann K, Heath A & The WHO Collaborative Study
Group: An international collaborative study to establish a World Health Organization international
standard for hepatitis B virus DNA nucleic acid amplification techniques. Vox Sang. 2001; 80: 63-71
33. Saldanha J, Heath A, Aberham C, Albrecht J, Gentili G, Gessner M and Pisani G: WHO
Collaborative Study to Establish a Replacement WHO International Standard for HCV RNA NAT
Assays. WHO/BS/03.1958 Expert Committee on Biological Standardization, Geneva, 17 to 21
February 2003.
34. Palla P, Vatteroni M L, Vacri L, Maggi F and Baicchi U. HIV-1 NAT minipool during pre-conversion
window period: detection of a repeat blood donor. Vox Sanguinis (2006) 90:59-62.
35. Pawlotsky J M. Use and interpretation of virological tests for Hepatitis C. Hepatology (2002) 36:S65S73.
36. Garson J A, Grant P R, Ayliff U et al, Real-time PCR quantitation of hepatitis B virus DNA using
automated sample preparation and murine cytomegalovirus internal control. J. Virol. Methods (2005)
126:207-213.
37. Holmes H et al, WHO ECBS Report, 1999; J. Virol. Meth. (2001) 92:141-150.
38. Damond F, Collin G, Descamps D, et al., Improved Sensitivity of Human Immunodeficiency Virus
Type 2 Subtype B Plasma Viral Load Assay. Journal of Clinical Microbiology, 2005; 43: 42344236.
39. HIV-2 RNA International Standard (NIBSC code 08/150):
http://www.nibsc.ac.uk/products/biological_reference_materials/product_catalogue/detail_page.a
spx?catid=08/150.
06327052001-02PL
51
Doc Rev. 2.0
Informacje dotyczące wersji dokumentu
Doc Rev. 2.0
08/2012
Zastosowanie niniejszego testu zredagowano, aby uwzględnić zestaw
rozcieńczalnika do próbek od dawców nieżyjących cobas® TaqScreen, nowe
informacje dotyczące dawców nieżyjących i zaktualizowane informacje dotyczące
dawców żyjących. W wyniku tego zmodyfikowano następujące części:
• ZASTOSOWANIE
• Zautomatyzowane pulowanie i pipetowanie próbki przy użyciu urządzenia
pipetującego Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD
• MATERIAŁY DOSTARCZONE PRZEZ ROCHE
• ODCZYNNIKI
• WYMAGANIA DOTYCZĄCE PRZECHOWYWANIA I UŻYTKOWANIA
• ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
• POBIERANIE, PRZECHOWYWANIE I PULOWANIE PRÓBEK
• UWAGI PROCEDURALNE
• INSTRUKCJA UŻYTKOWANIA
A. Pipetowanie kontroli i próbek przy użyciu urządzenia pipetującego
Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD
• OGRANICZENIA METODY
• CHARAKTERYSTYKA SKUTECZNOŚCI
Dodano całą część PRÓBKI POCHODZĄCE OD DAWCÓW NIEŻYJĄCYCH
zawierającą Tabele od 18 do 36.
Zaktualizowano wyniki w części CHARAKTERYSTYKA SKUTECZNOŚCI,
Próbki pochodzące od dawców żyjących, aby obejmowały wyniki LOD przy
użyciu standardu WHO HIV-2 i informacji źródłowych standardu drugorzędowego
wirusa HIV-2 podtyp i 2 dodatkowe panele wirusa HCV. Zaktualizowano wyniki
endogennych substancji wpływających na wynik testu.
Część ŚRODKI OSTROŻNOŚCI została zaktualizowana o ostrzeżenia R dotyczące
przechowywania próbki.
Część POBIERANIE, PRZECHOWYWANIE I PULOWANIE PRÓBEK została
zmodyfikowana — w przypadku próbek pochodzących od dawców żyjących
usunięto ACDA jako metodę pobierania i wymagania dotyczące wirowania
z poszczególnych kroków.
Zaktualizowano rozdział INSTRUKCJA UŻYTKOWANIA, wprowadzając
następujące zmiany.
Wsuń co najmniej wymaganą liczbę statywów z probówkami K i końcówkami
M, N, lub O. W przypadku próbek K usunięto pozycję P.
Zredagowano sformułowanie w przypadku partii zawierającej 24 próbki zamiast
partii całkowicie wypełnionego statywu.
Część Skuteczność kliniczna została zaktualizowana o dodatkowe 11 próbek
seropozytywnych dla wirusa HIV-1 grupy O.
Część Urządzenia i oprogramowanie systemu cobas s 201 została
zaktualizowana o opcjonalną stację dokującą.
W całym dokumencie dokonano wyjaśnień.
Zaktualizowano stronę z opisami zharmonizowanych symboli, usunięto numer
telefonu pomocy technicznej w USA.
Dodano numer i ulicę do adresu producenta.
Z informacji patentowej usunięto słowo „badawczy”.
W razie jakichkolwiek pytań prosimy o kontakt z miejscowym przedstawicielstwem
firmy Roche.
06327052001-02PL
52
Doc Rev. 2.0
Wyprodukowano w Szwajcarii
Roche Molecular Systems, Inc.
1080 US Highway 202 South
Branchburg, NJ 08876 USA
Roche Diagnostics (Schweiz) AG
Industriestrasse 7
6343 Rotkreuz, Switzerland
Roche Diagnostics
2, Avenue du Vercors
38240 Meylan, France
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Straße 116
68305 Mannheim, Germany
Distributore in Italia:
Roche Diagnostics S.p.A.
Viale G. B. Stucchi 110
20052 Monza, Milano, Italy
Distributed by
Roche Diagnostics, SL
Avda. Generalitat, 171-173
E-08174 Sant Cugat del Vallès
Barcelona, Spain
Distribuidor em Portugal:
Roche Sistemas de Diagnósticos Lda.
Estrada Nacional, 249-1
2720-413 Amadora, Portugal
Roche Diagnostics
201, boulevard Armand-Frappier
H7V 4A2 Laval, Québec, Canada
(For Technical Assistance call:
Pour toute assistance technique,
appeler le: 1-877 273-3433)
Roche Diagnostica Brasil Ltda.
Av. Engenheiro Billings, 1729
Jaguaré, Building 10
05321-010 São Paulo, SP Brazil
COBAS, COBAS S, TAQMAN, TAQSCREEN, AMPLILINK, AMPERASE i AMPLIPREP są znakami
towarowymi firmy Roche.
ROCHE RESPONSE CENTER jest znakiem serwisowym firmy Roche.
Inne nazwy produktów i znaki towarowe są własnością odpowiednich podmiotów.
Armored RNA jest nazwą opatentowanej technologii, opracowanej przez firmę Ambion, Inc. oraz firmę
Cenetron Diagnostics LLC. Produkt chroniony patentami zarejestrowanymi w USA pod numerami:
5,677,124, 5,919,625 oraz 5,939,262, a także patentami zgłoszonymi w trakcie rejestracji. ARMORED
RNA jest znakiem towarowym należącym do firmy Ambion oraz firmy Cenetron.
Barwniki cyjaninowe zawarte w produkcie są objęte prawami patentowymi firmy GE Healthcare BioSciences Corp. oraz Carnegie Mellon University i udostępniane są firmie Roche na zasadzie licencji
wyłącznie w celu ich włączenia do składników zestawów badawczych oraz zestawów do diagnostyki
in vitro. Wszelkie wykorzystanie takich zestawów do celów innych niż badawcze lub związane
z diagnostyką in vitro wymaga uzyskania podlicencji od firmy GE Healthcare Bio-Sciences Corp.,
Piscataway, New Jersey, USA, oraz Carnegie Mellon University, Pittsburgh, Pensylwania, USA.
© 2012 Roche Molecular Systems, Inc. Wszystkie prawa zastrzeżone.
08/2012
Doc Rev. 2.0
06327052001-02PL
06327052001-02
53
Doc Rev. 2.0
Na etykietach produktów diagnostycznych Roche PCR stosuje się obecnie
następujące oznaczenia.
Oprogramowanie pomocnicze
Wyrób do diagnostyki in vitro
Autoryzowany Przedstawiciel we
Wspólnocie Europejskiej
Dolna granica przypisanego zakresu
Arkusz kodów kreskowych
Producent
Kod partii
Przechowywać z dala od światła
Zagrożenie biologiczne
Wystarcza dla
Numer katalogowy
Przestrzegać zakresu temperatury
SW
Sprawdź w instrukcji obsługi
Plik definicji testów
TDF
Zawartość zestawu
Górna granica przypisanego zakresu
Dystrybucja
Użyć przed
Wyłącznie do oceny działania
w badaniach IVD
Ten produkt spełnia wymogi dyrektywy Wspólnoty Europejskiej 98/79/WE
dotyczącej diagnostycznych urządzeń medycznych do stosowania in vitro.
06327052001-02PL
54
Doc Rev. 2.0

cobas® TaqScreen MPX Test, version 2.0

Transkrypt

Podobne dokumenty

Karta katalogowa PL

Kliknij aby pobrać dokument w formacie PDF - KUPUJ

Kliknij aby pobrać dokument w formacie PDF - KUPUJ

dvr extreme pro 4k wifi

Warunki techniczne

systemy pomiarowe gps / gnss dla gis

werbel MAPEX MPML 4550 (BMB)